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TK基因/9-丙氧鸟苷联合mGM-CSF基因治疗胃癌
目的 观察自杀基因TK对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合mGM-CSF基因,观察免疫反应在增强TK杀伤性中的作用.方法 应用逆转录病毒方法转导自杀基因TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因mGM-CSF.观察TK基因体外对小鼠胃癌615小鼠前胃癌(MFC)细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中将病毒上清注入瘤体内,并结合应用其前药9-丙氧鸟苷(GCV)和mGM-CSF基因,分别观察肿瘤的生长情况.通过病理切片观察肿瘤病理变化;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定40只小鼠mGM-CSF的产量.结果 20%的转TK基因细胞可以杀伤70%～80%以上的肿瘤细胞.体内实验表明TK基因结合GCV可显著杀伤肿瘤,而TK基因本身并无杀伤作用(P＜0.05).联合mGM-CSF后肿瘤体积显著缩小,4只小鼠肿瘤完全消退,与TK/GCV比较差异有非常显著性(P＜0.01).结论 TK基因联合GCV对小鼠胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞.细胞因子基因mGM-CSF可增强TK的抗肿瘤作用.
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人乳腺癌裸鼠移植瘤的体外抗生素诱导基因治疗
目的探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性.方法构建人乳腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型, 制备有感染活性的重组逆转录病毒RevTRE/HSVtk与RevTet-On. 观察体外强力霉素(Dox)诱导, 丙氧鸟苷(GCV)和逆转录病毒作用后移植瘤生长的变化及组织病理改变, 分析其对乳腺癌裸鼠移植瘤的调控性治疗作用.结果乳腺癌裸鼠治疗后,肿瘤体积明显减小,生长受抑,生存周期延长, 组间比较有显著性差异(P＜0.05).瘤体HE染色显示治疗组肿瘤局部有炎性细胞浸润和强嗜酸性细胞.RT-PCR结果显示Dox诱导后瘤体组织HSVtk表达较明显.结论通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞.
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重组逆转录病毒pLNCX2-TH的构建及鉴定
目的:构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLNCX2-TH,建立稳定的PT67产病毒细胞系,并观察其对NIH3T3 细胞的感染效率,为基因调控干细胞分化治疗帕金森病奠定基础.方法:采用基因工程技术,将酪氨酸羟化酶(TH)基因片段克隆至逆转录病毒载体pLNCX2-MCS上,鉴定后用脂质体法转染PT67细胞进行病毒包装、扩增,后通过感染NIH3T3 细胞,测定病毒滴度.结果:酶切、测序结果与TH基因重组逆转录病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1.6×106 pfu/mL,对NIH3T3细胞有较高的感染效率.结论:应用基因工程技术可成功构建重组逆转录病毒pLNCX2-TH,建立PT67产病毒细胞系,为帕金森病的基因治疗创造了条件.
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反义及正义Vim重组逆转录病毒表达载体的构建
目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体,研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用.方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞.结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上清,反义Vim逆转录病毒抑制培养星形细胞的Vim表达.结论重组的反义及正义Vim逆转录病毒可用于进一步的实验研究.
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基因治疗的载体系统及应用
目前的基因载体系统可分为病毒载体和非病毒载体。利用病毒载体介导的基因转移，以其高转染率和良好靶向性成为肿瘤基因治疗中应用广泛的方法。非病毒载体由于其非免疫性和易于生产性而逐渐引起学者瞩目。基因治疗是一种用正常基因取代缺陷基因的治疗，目前主要用于肿瘤治疗，同时在基因治疗造血细胞疾病、心血管疾病、风湿性关节炎方面，已在动物试验中取得一定进展。 1 基因载体系统 本文介绍几种将外源基因引入宿主细胞的转移方法，这些方法可使外源基因短期（数天）或长期（数星期或数年）稳定的表达［1］。通常可将这些方法分为病毒载体介导基因转移和非病毒载体介导基因转移。1.1 病毒载体基因转移 病毒载体是指用目标人类的具有感染性的病毒作为哺乳动物核苷酸的传递系统。病毒的结构基因一般由治疗基因取代。然后，将病毒用包裹细胞包裹，使未被包裹的结构基因转译，形成病毒颗粒。此种安全的病毒颗粒感染宿主细胞后，释放治疗基因。治疗基因可以随机整合进入宿主基因，终宿主细胞可表达治疗基因。基因治疗中常用的病毒载体包括：逆转录病毒(retrovirus),腺病毒(adenovirus),腺相关病毒（adeno-associated-virus,AAV），单纯疱疹病毒(hepes simple virus,HSV),痘苗病毒（vaccinia virus,VV）等载体。
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逆转录病毒载体介导人载脂蛋白与卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因在骨骼肌的异源性共表达
为探讨人载脂蛋白AI和卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因在肌源性细胞中异源共表达的可能性,构建含上述基因和新霉素磷酸转移酶基因的多顺反子重组逆转录病毒载体,以此制备重组病毒颗粒并转染小鼠原代肌母细胞及C2C12肌源性细胞株.酶联免疫吸附法和免疫组织化学检测证实转染后的细胞均具有异源共表达人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇酰基转移酶的能力.经G418筛选则获得稳定转化的C2C12细胞株,60天后仍能有效共表达人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇酰基转移酶.聚合酶链反应法检测显示人载脂蛋白AI cDNA与IRES序列均有效整合于靶细胞基因组中.提示以重组逆转录病毒为载体在体外对肌源性细胞进行遗传修饰,再移植回骨骼肌使之在体内长期高效表达载脂蛋白 AI和卵磷脂胆固醇酰基转移酶,可能是一种值得探讨的通过促进胆固醇逆转运途径来防止或减轻高脂血症和动脉粥样硬化的方法.
关键词： 逆转录病毒 载脂蛋白AI 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 基因治疗 -
DPC4/Smad4基因转染对胰腺癌细胞体外生长的抑制作用
目的 观察抑癌基因DPC4/Smad4对胰腺癌细胞生长的抑制作用.方法 将人全长DPC4/Smad4 cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,分别导入包装细胞GP+E86和PA317,经G418筛选获取阳性抗性克隆.收集病毒上清液,转染至胰腺癌BxPC-3细胞;获稳定表达后,观察其对BxPC-3体外生长的抑制作用.结果 聚合酶链反应扩增证实GP+E86、PA317/pLXSN DPC4+细胞中有外源性DPC4/Smad4基因整合;DPC4基因转染BxPC-3细胞后,可获得稳定表达,并可显著抑制胰腺癌细胞的生长和集落形成,下调癌细胞内VEGF基因的表达.结论 将DPC4/Smad4逆转录病毒载体转染到人源性胰腺癌细胞后,可显著抑制癌细胞的生长及血管形成能力.
关键词： 胰腺肿瘤 DPC4/Smad4 逆转录病毒 基因治疗 -
分泌高滴度重组人糖皮质激素β受体正义和反义cDNA逆转录病毒细胞系的建立
目的:建立分泌重组人糖皮质激素β受体cDNA的逆转录病毒的细胞系.方法:脂质体介导含人糖皮质激素β受体正义和反义全长cDNA的重组逆病毒质粒分别转染包装细胞PA317,经G418筛选抗性克隆.结果:细胞培养上清液的RT-PCR联合序列分析表明G418抗性PA317细胞克隆能稳定合成并分泌相应的重组病毒颗粒;NIH3T3细胞测定的正、反义cDNA重组病毒滴度分别为2×105 CFU/ml和1.8×105 CFU/ml.结论:成功建立了能分别产生重组hGRβ正义和反义cDNA逆转录病毒的高滴度细胞系,为后续研究工作打下坚实基础.
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可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库构建方法的建立及其实验参数的优化
目的 建立可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的构建方法 并优化其实验参数.方法 体外合成可编码随机12肽的DNA片段.将该DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体pQCX-IX-EGFP,连接产物电击转化大肠杆菌,转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库,其间通过大量的实验优化:插入片段与载体的摩尔比、连接反应的条件、连接产物的DNA浓度以及电击转化参数等关键的实验参数.结果 按照本研究所确立的方法 和佳实验参数构建的可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的滴度为2.85×105cfu/mL,成功转化子的比例接近100%,编码随机12肽的DNA序列正确率为83%.结论 成功建立了可表达随机12肤库的逆转录病毒初级文库的构建方法 ,并确定了佳的实验参数,为后续的可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立奠定了良好的基础.
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职业性HIV暴露后预防
自1998年HIV暴露的指导方针公布以后,几种新型的抗逆转录病毒的制剂已得到FDA(食品与药物管理局)认证,并且得到了越来越多的关于暴露后预防(PEP)的使用和安全性的信息.
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TRPV1基因过表达逆转录病毒载体的构建和鉴定
目的 TRPV1基因过表达逆转录病毒载体的构建和鉴定研究.方法 PCR法扩增TRPV1基因的编码序列,克隆到pBaBe-puro载体上.对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析.用磷酸钙法制备pBaBe-puro-TRPV1逆转录病毒,将其感染到U87-MG细胞,经嘌呤酶素筛选阳性克隆后用荧光定量PCR和Western blot法检测TRPV1表达.结果 经DNA测序和酶切鉴定表明,pBaBe-puro-TRPV1表达载体构建成功.pBaBe-puro-TRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后,细胞中TRPV1表达量明显增高.结论 成功构建了人TRPV1基因的pBaBe-puro-TRPV1表达载体.pBaBe-puro-TRPV1能有效上调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达,为应用其研究TRPV1在利多卡因致细胞损伤中的作用奠定了基础.
关键词： 瞬态电压感受器阳离子通道 利多卡因 逆转录病毒 -
重组多顺反子逆转录病毒介导的人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶在肌源性细胞的表达
目的:载脂蛋白AI(apolipoprotein, apoAI)与卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(lecithin:cholesterol acyltransferase, LCAT)作为高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)的主要组分,在胆固醇由周围组织向肝脏的运输、排泄过程即胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport, RCT)过程中起关键作用.近年研究进一步证实,ApoAI与LCAT的转基因动物能纠正由于遗传缺陷所致的低HDL血症并有效抵抗高脂食物引起的致动脉粥硬化(atherosclerosis, As)作用.
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皮肤T细胞淋巴瘤中人类T淋巴细胞白血病病毒的检测
目的:皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)系指原发于皮肤的一类新生物性克隆T细胞淋巴增殖疾病,占皮肤恶性淋巴瘤(CML)80%以上,其临床表现、组织病理、免疫表型等有很明显的异质性.CTCL的病因尚不清楚,可能与病毒感染、遗传、免疫、环境等因素有关,病程一般进行缓慢.有研究提示CTCL的发病与HTLV-I病毒感染有关.HTLV-I是一种人类逆转录病毒,主要导致人类T细胞白血病和淋巴瘤.这类病毒流行于日本和加勒比海地区.上海及周围地区的地理环境和气候环境与日本南方HTLV-I流行区条件相似,因而在上海及周围地区是否也存在HTLV-I流行区问题引起人们关注.方法:通过PCR法,ELISA法,Western blot印迹法,PA凝集反应等方法对上海及周围地区57例无国外生活史的CTCL患者外周血进行HTLV-I前病毒DNA和HTLV-I抗体检测.结果:6例CTCL患者外周血存在HTLV-I前病毒DNA,其中4例患者同时呈现HTLV-I抗体阳性,检测结果显示了良好的匹配性.结论:上海及周围地区存在HTLV-I生存的地理条件.CTCL与HTLV-I有一定的相关性.HTLV-I病毒感染可能是CTCL发病的诱因之一.至于是否存在HTLV-I流行区问题还有待收集更多的病例进行研究.
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Bcl-2基因转染人白血病细胞系(K562)的生物学特性的观察
目的:我们在慢性粒细胞白血病(CML)急变研究中发现CML急变细胞bcl-2基因表达明显高于慢性期,甚至高于其他急性粒细胞白血病(中华血液学杂志,1999,20:27);而CML急变时化疗反应甚差,是目前白血病治疗难题之一.为了进一步阐明Bcl-2基因在CML急变中的作用,我们将bcl-2基因转染人CML细胞系--K562,建立了一株bcl-2基因高表达的细胞株--K562/bcl-2,并对它的生物学特性,特别对抗肿瘤药物的反应进行了研究.方法:Bcl-2cDNA逆转录病毒载体质粒由中国医学科学院肿瘤研究所吴教授惠赠,按常规转染PA317细胞,经筛选、克隆获高病毒滴度细胞--D3.将成对数生长的K562细胞直接加在呈贴壁生长的D3细胞上进行转染,然后取出悬浮细胞在含G418培基中筛选出抗性细胞,即K562/bcl-2细胞.结果:1.BCL-2蛋白表达:K562/bcl-2细胞明显高于未转染的K562细胞,阳性率和阳性指数分别为71%和38%,95和41. 2.细胞形态学:K562/bcl-2细胞有明显聚集成丛现象,核分裂指数低于K562细胞,分别为0.8%和1.4%.3.细胞生长:细胞凋亡率和K562细胞的增殖速度接近,倍增时分别为22 h和22.7 h. 4.FACS检测:K562/bcl-2细胞凋亡率稍低于K562,分别为2.1%和4.8%,细胞周期两者无明显差别.5.核型:均为Ph阳性.6.细胞耐药性观察:通过Ara-C、高三杉脂碱(HHT)和柔红霉素(DNR)对比观察,发现K562/bcl-2细胞对Ara-C和HHT的耐受性明显高于K562细胞,对DNR的耐受性也有所增高.结论:Bcl-2基因转染使K562细胞发生聚集(提示细胞接触性抑制减低),对化疗药物耐受性增加,进一步证明Bcl-2基因高表达与CML急变治疗反应差和预后不良有关,而与细胞增殖周期无明显关系,这就为CML急变的治疗提供了线索.
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逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用
目的和方法:L6565白血病是我国特有的T-S-Z淋巴瘤/白血病系统中的实验系统的瘤株之一,经检测c-myc基因高表达.本文针对c-myc基因构建一个含有小鼠反义c-myc基因片段的逆转录表达载体pGAM,用磷酸钙沉淀法将pGAM导入表达包装细胞PA317,经筛选获得病毒效价5×105 cfu/mL的病毒包装细胞,利用pGAM病毒成功的感染了L6565细胞,得到了G418抗性细胞L6565-as,经PCR分析病毒载体序列稳定地整合到PA317和L6565-as中,能够长期表达.结果:L6565-as和对照细胞光镜下形态均为圆形或椭圆形,细胞大小不一,但L6565as细胞核浆比例比对照细胞小.生长曲线和MTT法显示,L6565-as生长与对照细胞相比,生长明显受到抑制.流式细胞仪检测细胞周期:L6565as细胞G0-G1为45%,PGNsC对照和空白对照细胞分别为26%和29%.软琼脂克隆发现L6565as细胞形成克隆数量明显减少,为30个克隆/5000个细胞,空载病毒和空白对照分别为103和106个克隆/5000个细胞,二者有显著差异(P＜0.001).免疫组化检测L6565as细胞c-myc蛋白表达为弱阳性(+),而对照细胞为强阳性(+++).Northern blot检测发现L6565as细胞c-myc mRNA表达比对照减少.结论:反义c-myc基因抑制了L6565白血病细胞的DNA合成,减缓了细胞的生长速度,并且使细胞恶性程度降低.本研究同时也是对我国T-S-Z系统白血病研究的一种深入.
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Caspase-3 siRNA减少骨髓间充质干细胞稳定株细胞凋亡的实验研究
目的：探讨在体外采用Caspase-3小干扰核糖核酸（siRNA）减少骨髓间充质干细胞（MSC）稳定株细胞凋亡的方法，以构建稳定表达的MSC细胞株。方法使用逆转录病毒包装系统，在293FT细胞中进行包装生产含Caspase-3 siRNA的病毒颗粒，然后转染给大鼠MSC，对转染后的细胞进行筛选并扩增培养得到稳定株细胞。根据逆转录病毒的特性，利用蛋白质印迹法（Western blot）和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-QPCR）对细胞株进行稳定表达的鉴定，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定（TUNEL）法对稳定株细胞和正常MSC进行凋亡检测并进行定位比较。结果与正常细胞比较，MSC稳定株细胞中的Caspase-3蛋白表达量和mRNA含量明显降低；在同样体外环境下，MSC稳定株细胞的凋亡数量比正常细胞明显减少。结论利用逆转录病毒包装系统可得到稳定表达Caspase-3 siRNA的MSC稳定株细胞。MSC 稳定株细胞比正常细胞凋亡明显减少。
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RV-HSV-TKc/GCV治疗脑胶质瘤效果及其影响因素
目的研究应用逆转录病毒介导中国单纯疱疹病毒TK基因治疗系统(RV-HSV-TKc/GCV)治疗脑胶质瘤的可行性及其影响因素.方法通过体外和大鼠实验,观察转TKc细胞在治疗中的量效关系;转基因方式对疗效的影响;基因治疗细胞在瘤内的分布;治疗动物的肿瘤免疫反应.结果①TKc胶质瘤细胞对GCV的敏感浓度＞0.01μg/ml,PLCTKcSN细胞与胶质瘤细胞混合培养120h较混育24h的GCV敏感性高,在GVC有效杀伤范围内,基因治疗细胞与瘤细胞数量比值＞1.0;②3种方式的体内治疗结果表明TKc/GCV具有一定抑制肿瘤生长作用;③接种后第5、10、15天的针道周围可见有大量TK表达阳性细胞,距针道5mm处TK阳性细胞则难以见到,与肿瘤交界的正常脑组织无TK阳性细胞;④治疗后长期生存大鼠5只再次接种瘤细胞28d后剖检,2只未见肿瘤生长,3只有肿瘤生长但明显小于对照组;实验组NK活性和ADCC效应高于对照组.结论在治疗细胞数量足够的前提下TKc/GCV基因治疗系统对大鼠脑胶质瘤有控制生长作用;该系统具有一定调节体内主动免疫效能.治疗细胞的基因转导能力,在瘤内的分布局限性,GCV局部浓度和机体的免疫状态是影响该基因治疗效果的主要因素.
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核心蛋白聚糖对肾间质成纤维细胞特性作用的研究
目的通过基因转染技术,将核心蛋白聚糖(DCN)转染成纤维细胞,观察DCN在成纤维细胞中的表达,及其表达的DCN对肾间质成纤维细胞特性的影响,探索肾脏疾病基因治疗的途径.方法在成功构建重组逆转录病毒载体pL(DCN)SN的基础上,采用LipofectAMINE脂质体介导质粒DNA转染逆转录病毒包装细胞PA317,进行逆转录病毒的包装.以NIH 3T3细胞作为指标靶细胞进行病毒滴度测定.重组逆转录病毒在Polybrene的辅佐下感染正常大鼠肾间质成纤维细胞,并应用G418筛选.所得抗G418细胞克隆FB(LDCNSN)应用PCR和逆转录-PCR分析外源基因的整合和表达.采用Western印迹检测转基因细胞FB(LDCNSN)培养细胞上清液中DCN蛋白的检测.应用四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法和流式细胞仪分别测定细胞增殖和细胞周期,观察DCN对肾间质成纤维细胞增殖和细胞周期的影响.结果重组逆转录病毒载体pL(DCN)SN的质粒DNA经LipofectAMINE介导,转染PA317包装细胞.G418筛选出抗性克隆,扩增.收集含重组逆转录病毒细胞上清液,在Polybrene的辅佐下感染大鼠肾间质成纤维细胞,并获得抗G418的细胞克隆FB(LDCNSN).PCR和逆转录-PCR分析外源基因DCN的整合和表达,电泳可见1.1 kb的条带.Western印迹分析FB(LDCNSN)细胞培养上清液中DCN蛋白质,证实FB(LDCNSN)表达DCN蛋白质,与转染空载体的成纤维细胞FB(LXSN)比较差异有显著性意义.DCN对成纤维细胞的细胞增殖具有一定的抑制作用.TGF-β1(5 ng/m1)对加入FB(LDCNSN)细胞上清液的成纤维细胞无促增殖作用;细胞G0/G1周期比例增加,与未经TGF-β1刺激组比较明显增加(P＜0.01);同时加入转染空载体的FB(LXSN)细胞的细胞上清液与加正常成纤维细胞的细胞上清液结果相似.结论FB(LDCNSN)能表达具有生物活性的DCN.DCN可影响肾间质成纤维细胞的增殖及细胞周期.
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重组逆转录病毒pLNCX2-GDNF转染许旺细胞及其表达
目的利用基因转染技术将胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因转入许旺细胞(SC)以提高其分泌该因子的水平.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法合成GDNFcD-NA片段,以逆转录病毒pLNCX2为载体导入许旺细胞内,并运用RT-PCR、免疫细胞化学染色、ELISA及运动神经元联合培养法检测外源性基因在mRNA和蛋白水平的表达及其产物的活性.结果RT-PCR检测结果示GDNF-SCs表达GDNFmRNA的水平明显优于SCs;免疫细胞化学检测发现CDNF-SCs抗GDNF蛋白染色呈强阳性,正常SCs呈弱阳性;ELISA法检测结果示转染后4周CDNF-SCs分泌GD-NF蛋白的水平升至正常SCs的5.1倍;运动神经元联合培养法结果显示GDNF-SCs分泌的外源性基因产物具有生物学活性.结论GDNF基因转染SC在mRNA和蛋白水平表达GDNF明显优于正常SCs,外源性基因表达产物具有神经生物学活性.
关键词： 许旺细胞 胶质细胞源性神经营养因子 基因转染 逆转录病毒 -
分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用
背景与目的:已有研究表明从人胎盘中提取纯化的人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)对小鼠某些实体肿瘤的生长具有明显的抑制作用.本研究的目的是构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri,并观察其对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用.方法:将合成的小鼠IgG信号肽碱基序列与hRl基因序列连接后,重组到逆转录病毒载体V-pLNCX 上构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri.将PA137细胞用于病毒包装,NIH3T3细胞用于测定病毒滴度.采用RT-PCR和Western blot法检测hRI基因的表达.构建小鼠荷B16黑色素瘤模型,注射V-pLNCX-s-hri,同时用生理盐水、V-pLNCX和V-pLNCX-hri作为对照.用肿瘤组织重和微血管密度来评价V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑素瘤生长的抑制作用.采用ELISA方法测定B16细胞培养上清和小鼠血清中RI含量.结果:V-pLNCX-s-hri对培养的B16细胞的感染效率为38.5%.在感染V-pLNCX-s-hri后的B16细胞中检测到RI mRNA和蛋白的表达.感染后的B16细胞的培养上清中hRl的含量为0.228μg/mL.V-pLNCX-s-hri组小鼠外周血中RI的含量为0.249 μg/mL.明显高于生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组的0.035 μg/mL、0.028 μg/mL和0.169 μg/mL(P值均<0.01).生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组小鼠的瘤组织重分别为(1.90±1.12)g、(1.77±0.21)g和(1.10±0.46)g,显微镜下每10个视野的微血管平均数分别为89±6、87±7和41±8;而V-pLNCX-s-hri组的瘤组织重为(0.82±0.34)g.血管平均数为34±4.V-pLNCX-s-hri组与各对照组相比,其瘤组织重和血管数量的差异都有统计学意义(P值均<0.01).结论:构建的分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri能对B16细胞进行有效的感染,且在感染的B16细胞中分泌性高表达.V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤的生长有明显的抑制作用,且效果优于V-pLNCX-hri.
