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双歧杆菌LTA、EPS 对小鼠巨噬细胞活力的影响
脂磷壁酸(LTA)和胞外多糖(EPS)是双歧杆菌的细胞壁表面物质,在抗肿瘤和提高免疫力方面已成为研究热点.据此,本研究采用MTT法、荧光显微镜形态观察及激光扫描共聚焦分子生物学观察法检测LTA和EPS对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫激活能力,并通过脂多糖(LPS)作用组做对照,进一步探讨LTA和EPS提高免疫活性机理及影响程度.
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基质金属蛋白酶9高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响
目的 观察基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase 9,MMP 9)高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,以阐述其在糖尿病足伤口愈合中的可能机制.方法 本研究在中山大学孙逸仙纪念医院内分泌专科实验室完成.大鼠皮肤成纤维细胞与高糖(22 mmol/L)+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)联合孵育建立体外MMP 9高表达细胞模型,另设正糖(5.5 mmol/L)孵育对照组.Realtime PCR、ELISA和明胶酶谱法检测MMP 9 mRNA、蛋白表达量及活性,流式细胞仪检测细胞增殖功能,CCK-8检测细胞活力,ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力.计量数据以均数±标准差(x-±s)表示,两组间均数的比较采用成组t检验,以P ＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞的MMP 9 mRNA、蛋白表达量及活性,分别升高6.05倍、4.12倍和1.58倍(P＜0.01)；与此同时MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例、增殖指数、细胞活力、胶原(羟脯氨酸)分泌量、6h横向迁移率和纵向迁移细胞数,分别下降29.8％、18.1％、23.3％、68.7％、45.0％和21.4％ (P ＜0.01).结论 MMP 9高表达的皮肤成纤维细胞增殖减慢、活力下降、迁移和胶原分泌能力降低,提示MMP 9可能抑制成纤维细胞的生物学行为.
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鱼藤酮对MN9D细胞蛋白磷酸酶2A活力的影响
目的 观察鱼藤酮是否诱导蛋白磷酸酶2A(PP2A)的活力下降,并探讨其机制.方法 小鼠中脑多巴胺能细胞系MN9D细胞分为正常组(正常培养)、对照组(培养液中加入与鱼藤酮组等体积的二甲基亚砜)、鱼藤酮组(培养液中加入不同浓度鱼藤酮培养24 h)和鱼藤酮+C2组(5μmol/L C2-神经酰胺预处理8 h后,50 nmol/L鱼藤酮暴露24 h).MTT法检测细胞活力,Western blotting分析总PP2A水平及酪氨酸磷酸化水平,比色法检测PP2A活性.结果 与对照组相比,鱼藤酮组细胞活力明显下降(P<0.01),PP2A催化亚基酪氨酸磷酸化提高(P<0.01),PP2A活性降低(P<0.05).鱼藤酮+C2组PP2A酪氨酸磷酸化水平较鱼藤酮组明显降低(P<0.01),PP2A活性提高(P<0.05),细胞活力明显提高(P<0.01).结论 鱼藤酮通过提高PP2A催化亚基307位点酪氨酸磷酸化水平,抑制PP2A活性,并可能参与细胞活力下降.可为发现帕金森病药物作用靶点提供参考.
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同体非血管化游离骨移植中骨形成的实验研究
目的 观察非血管化游离骨块在不同离体时间点植入体内后成骨情况.方法 拔除狗前磨牙.口腔黏膜完全愈合后,截除狗长度3.0 cm的尢牙下颌骨段,取不带血管和软组织的全层髂骨,分别在离体40min、120min内植入下颌骨缺损区.术后4、8周取出植骨块,观察移植骨块内细胞活力和新骨形成情况.结果 移植骨同期恢复了下颌骨节段性缺损的连续性.离体40min的游离骨块植入体内后4周和8周时仍为活骨块,可见到大量成活的骨细胞,并有数量不等的岛状软骨形成.离体120min的游离骨块植入体内后4周和8周时为死骨块,其中未见骨细胞成活,部分骨块中见到破骨细胞.结论 非血管化游离髂骨块在较短的离体时间内同体移植可以修复狗长度3.0 cm的下颌骨节段性缺损,在修复过程中可见岛状的软骨形成.新骨形成与游离骨块的离体时间有关.
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NgR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响
视网膜神经节细胞( RGC)轴突形成了视神经,RGC凋亡是糖尿病视网膜病变( DR)的主要病理表现之一。 Nogo蛋白受体( NgR)能抑制神经再生,NgR表达上调是多种致盲性疾病RGC凋亡的主要机制。本研究利用链脲佐菌素诱导了糖尿病大鼠模型,构建了抑制NgR表达的siNgR腺病毒。结果发现,在视网膜NgR仅存在于RGC细胞内,糖尿病大鼠视网膜变薄, RGC数量减少,凋亡增加,突触数量降低, NgR的下游分子ROCK蛋白及NR2 B随着NgR的表达增加而上调。糖尿病大鼠玻璃体内注射重组腺病毒抑制NgR表达之后,能恢复糖尿病大鼠视网膜的病理变化。进一步的离体研究发现, NgR/ROCK信号通路激活能导致RGC胞体缩小,突起萎缩；NgR/NR2 B信号通路激活,能导致RGC细胞活力下降甚至凋亡。因此我们认为,糖尿病状态下,NgR表达上调通过ROCK信号通路影响了视网膜RGC细胞形态,通过NR2B信号通路导致了RGC细胞凋亡,RGC数量和形态的变化影响了视网膜突触数量,这可能是DR视力受损的重要机制之一。
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硫化氢通过抑制自噬保护高糖诱导人腹膜间皮细胞的损伤
目的 探讨硫化氢(H2S)对高糖诱导人腹膜间皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用4.25％ D-葡萄糖(高糖)和10-3 mol/L的外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)处理人腹膜间皮细胞株HMrSV5细胞24 h,MTT比色法检测细胞活力,分光光度法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平.Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达. 结果 与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞活力显著降低(t=4.85,P＜0.05),细胞培养液中LDH水平的显著增加(t=3.49,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3 mol/L)组细胞活力显著增加(t=3.42,P＜0.05)和培养液中LDH水平显著降低(t=4.02,P＜0.05).与对照组比较,高糖组HMrSV5细胞中Beclin-1 (t=4.95,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=5.21,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=5.72,P＜0.05)均显著增加,而p62的表达显著降低(t=4.67,P＜0.05).与高糖组比较,NaHS (10-3mol/L)组Beclin-1(t=4.36,P＜0.05)和LC3-Ⅱ(t=4.19,P＜0.05)的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(t=4.83,P＜0.05)显著性降低,而p62的表达显著增加(t=4.78,P＜0.05).结论 H2S保护了高糖诱导的人腹膜间皮细胞损伤,其机制可能与H2S抑制细胞自噬有关.
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超声介导微泡破裂增强体外基因转染的方法学研究
目的 对超声促进基因转染的方法进行系统的优化研究,初步确定超声介导微泡破裂(UMMD)增强体外基因转染的优参数.方法 选用 Ishikawa、Hela 和 MCF-7 3种细胞系为研究对象,用1 MHz超声仪.超声强度为1.0W/cm2,系统研究不同参数下的细胞活力及两种DNA质粒[红色荧光蛋白质粒(DsRed)和荧光索酶质粒(pCMV-LUC)的基因转染情况,优化UMMD的转染条件(质粒浓度、占空比及辐照时间),分析SonoVue微泡对基因转染的增强作用.结果 基因转染率随着质粒浓度的增加而增高,当质粒浓度达到30 μg/孔时转染率高,两种DNA质粒的佳转染浓度相同.与10%占空比的超声辐照相比,20%占空比的转染率显著提高(P＜0.01).辐照3 min时基因表达率高,但存活率无明显下降(89.03±2.01)%,为佳辐照时间.无超声辐照时,单独应用质粒或微泡十质粒的样本几乎不表达红色荧光蛋白.与单纯超声辐照相比,超声辐照联合SonoVue微泡可显著提高基因转染效率(P＜0.01).结论 UMMD的转染参数影响转染效率和细胞活力,优化的参数有利于促进基因转染.
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护理人员对生物节律认知程度的现况调查
生物节律是人体生理活动的周期性节律,是机体为适应时空环境长期选择和进化的产物[1].由于不同病人所处的生物节律周期和特点不同,其病理变化的时间规律和生理参数值的昼夜分布也不同.所以,人体的生命体征、激素分泌水平、免疫细胞活力及药物作用和疾病发作等均存在着节律变化[2].临床护理中若能根据这些节律变化,针对性的进行观察、治疗和护理,就能更有效地为病人服务.为了解护理人员对生物节律的认知水平,我们进行了现况调查,报告如下.
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诱导HSP70减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧的损伤
目的:观察热休克预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)对肠上皮细胞(IEC-6)缺氧/再给氧损伤的影响,并探讨HSP70的细胞保护作用.方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为正常对照(C)、单纯缺氧/再给氧(H/R)及热休克预处理组(HS+H/R),免疫组化检测缺氧/再给氧后各组细胞HSP70表达程度,MTT法分析细胞活力,并检测细胞LDH漏出,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:与C组及H/R组比较,热休克预处理可明显诱导HSP70的产生(0.93±0.07 vs 0.20±0.04,0.39±0.08,P＜0.01),热休克预处理可显著增加IEC-6细胞缺氧/再给氧处理后细胞活力(0.27±0.04 vs 0.24±0.02,P＜0.05),LDH漏出减少(1021.29±207.06 vs 1419.90±393.07,P＜0.05),细胞凋亡率也明显降低(7.8±1.6% vs 12.3±2.9%,P＜0.05).结论:通过热休克预处理诱导HSP70表达,可明显减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧损伤.防止肠上皮细胞缺氧/再给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一.
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黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞功能的影响
目的 以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察不同浓度黄芪多糖对细胞活力和凋亡以及对胆固醇流出的影响.方法 将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞,用不同浓度黄芪多糖对其干预24 h,XTT法检测细胞活力,Annexin V/PI染色、caspase3活性检测观察细胞凋亡情况.γ计数仪检测胆固醇流出.结果 黄芪多糖呈剂量依赖性(10～100 μg/ml)诱导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡,抑制细胞活力;促进胆固醇流出.结论 黄芪多糖可影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活力,诱导凋亡,促进胆固醇流出.
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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究
目的：探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移的机制。
方法：利用D-4F预孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMCs），而后给予氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导；采用CCK8细胞活力试剂盒检测VSMCs的增殖；利用transwell迁移小室和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移；采用活性氧探针测定活性氧簇（ROS）的释放；利用western blot检测PI3K/Akt信号通路的激活和血红素加氧酶-1（HO-1）的蛋白表达。使用PI3K/Akt抑制剂、HO-1抑制剂及RNAi下调HO-1的表达，检测D-4F拮抗ox-LDL诱导VSMCs增殖和迁移的机制。 -
激动Nrf 2对氧化应激所致血管平滑肌细胞损伤的影响
目的：探讨激动Nrf2对氧化应激诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）损伤的影响。
方法：原代培养大鼠VSMCs，随机分为4组：对照组、氧化损伤组、Nrf2激动剂组、Nrf2干扰慢病毒组。Western blot检测Nrf2蛋白表达变化，MTT法检测各组细胞活力，Hoechst 33342法及Annexin V/FITC法检测各组细胞凋亡情况。 -
脂多糖对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞生长的影响——对建立支架内再狭窄炎症细胞模型的探索
目的 探讨不同浓度脂多糖(LPS)作用不同时间对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)生长的影响,分析其应用于HCASMC的无毒性反应浓度范围,为开展介入术后再狭窄相关研究建立HCASMC炎症活化模型提供实验数据支持.方法 体外培养的HCASMC 3~5代,加入96孔细胞培养板,用噻唑蓝比色实验(MTT法)检测不同浓度(0μg/ml,0.01μg/ml,0.1μg/ml,0.5μg/ml,1μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,100μg/ml)LPS在不同作用时间(24 h,46 h,72 h)下对HCASMC活力影响,酶标仪492 nm处测定各组A值,细胞活力=(实验组A值-调零孔A值)/对照组A值.结果 LPS在低于100μg/ml浓度范围内,干预HCASMC时间短于48 h未出现细胞毒性,多表现为促细胞增殖效应,而干预时间大于48 h则显现出较为明显的细胞毒性,且细胞活力随LPS浓度的增大而减低;干预72 h后LPS浓度在0~0.01μg/ml范围内有促增殖作用,0.1~0.5μg/ml浓度则产生轻微的细胞抑制作用,但细胞毒性不明显,在1~100μg/ml浓度下HCASMC毒性反应逐渐出现,且HCASMC活力随LPS浓度的升高而减低.同一浓度水平的LPS随着作用时间延长,HCASMC的细胞活力逐步下降,且作用时间越长下降越明显.结论LPS在浓度0.1μg/ml以下未出现明显的细胞毒性,其中LPS浓度0.01μg/ml干预24 h,人冠状动脉平滑肌细胞增殖显著,可作为建立炎症诱导人冠状动脉平滑肌细胞活化模型的佳条件.
关键词： 脂多糖 人冠状动脉平滑肌细胞 细胞活力 细胞毒性 -
微小RNA-92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用
目的探讨微小RNA（microRNA，miR）92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），脂质体转染miR?92a抑制剂或阴性对照，采用5 mmol/L正常浓度葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖刺激HUVECs 48 h后，分为4组：空白组（5 mmol/L葡萄糖），高糖组（30 mmol/L葡萄糖），阴性对照+高糖组（转染阴性对照+30 mmol/L葡萄糖处理），miR?92a抑制剂+高糖组（转染miR?92a抑制剂+30 mmol/L葡萄糖处理）。处理后，用荧光实时定量PCR法分析miR?92a水平，Hoechst染色观察细胞核改变，MTS观察HUVECs活力，Western blotting检测caspase?3和cleaved caspase?3蛋白表达。2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果高糖组（30 mmol/L）HUVECs与空白对照组相比，miR?92a水平增加31%（1.31±0.37比1，t=1.93，P<0.05）。细胞数目减少，排列不规则，轮廓模糊。细胞核染色质浓缩凝集、边缘化，凋亡小体增加。细胞活力下降19%（81%±2%比1，t=-29.85，P<0.01），cleaved caspase?3/caspase?3增加24%（0.31±0.07比0.25±0.02， t=2.18，P<0.05）。miR?92a抑制剂+高糖组HUVECs与高糖组相比，形态损伤减轻，凋亡小体减少，细胞活力增加9%（88%±11%比81%±2%，t=1.82，P<0.05），cleaved caspase?3/caspase?3减少26%（0.23±0.03比0.31±0.07，t=-2.65，P<0.05）。结论 miR?92a抑制剂可缓解高糖诱导的内皮细胞形态损伤、活力抑制，减少caspase?3激活。miR?92a具有成为防治糖尿病血管并发症靶点的临床价值。
关键词： 内皮细胞 微小RNAs 高糖 细胞活力 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
白藜芦醇对糖尿病肾病氧化应激反应的影响
白藜芦醇是一种存在于植物的天然多酚类化合物,存在于常见的药用植物中,如决明、藜芦、虎杖等,先在水果和植物中被发现,特别是在葡萄和葡萄酒中多见,具有广泛的生物学活性和极大的临床应用潜力[1].早期大多关于白藜芦醇的研究主要集中在其保护心血管、抗肿瘤方面,后来研究发现其有增强细胞活力、抗氧化清除自由基、改善胰岛素抵抗、抗炎等作用,目前已有相关研究证明白藜芦醇在糖尿病中亦发挥作用.本文就白藜芦醇的生物学性质及其改善糖尿病早期肾病氧化应激方面作一综述.
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心肌细胞活力评估与临床决策
对心肌活力的研究虽有30余年的历史,但迄今仍缺乏应有的重视.2006年闭塞动脉开通试验(OAT)出乎意料的研究结果才真正引发了学者们对心肌活力问题的思考[1].
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放射性核素骨显像在临床骨科的新进展
近年来,随着显像设备的进步和骨显像检查技术的提高,放射性核素骨显像的适应证进一步的扩展.除在诊断和鉴别诊断骨的良、恶性病变能力上进一步增强外,在骨科疾病的早期诊断上具有更重要价值,能在影像学诊断之前检测出成骨细胞活力的改变,为骨肿瘤、骨愈合、骨髓炎、应力性骨折、关节炎等疾病的早期诊断提供了有价值的临床依据,也使骨显像在核医学和综合影像学领域的地位进一步的巩固和提高.
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静脉输入参芪扶正注射液致腹痛1例
参芪扶正注射液以党参、黄芪为原料，黄芪可诱生干扰素，增强自然杀伤细胞活力，调节机体的细胞免疫和体液免疫，抑制某些病毒的DNA复制。党参中含有多种氨基酸及多糖，能增强网状内皮系统的吞噬功能，能改善心功能，具有抗凝、降低血小板黏附率，并有较强的抗氧自由基作用。适应证为“益气扶正。用于肺脾气虚引起的神疲乏力，少气懒言，自汗眩晕等治疗”。其在临床上多用于治疗心脏疾病，如冠心病、心绞痛、肺心病、心力衰竭等；以及用于辅助肿瘤治疗，可改善免疫功能，保护造血系统并具有增效减毒作用。随着临床上应用日趋广泛，其不良反应报道也日益增多。现将1例静脉滴注参芪扶正注射液致腹痛报告如下。
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不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性比较
目的:比较不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性,找出适合作为种子细胞冻存的兔髓核细胞代次.方法:取3～4月龄新西兰大白兔10只,麻醉后在严格无菌条件下分离胸腰椎间盘(T1/2～L7/S1)髓核细胞,体外传代培养,分别取一、二、三、四、五代细胞冻存2～3个月后复苏,取一代未冻存细胞作为对照组(A组,n=10);一、二、三、四、五代冻存后复苏的细胞作为实验组(分别为B、C、D、E、F组,各组n=10),在相同条件下培养2周,培养第2天时采用台盼蓝染色测定细胞成活率;培养第2d、5d、10d、14d时采用MTT法检测细胞生长活性,采用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖(PG)含量;培养第14d时采用阿利新兰染色法测定糖胺聚糖(GAG)合成总量,用RT-PCR法检测各组细胞Ⅱ型胶原基因的表达情况.检测细胞浓度均为1x10(5)个/ml.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果:培养第2d时B、C组细胞成活率接近A组(P>0.05);D、E、F三组细胞成活率明显低于A、B、C组(P<0.05).不同时间点各组细胞均有不同程度的增殖,A、B、C、D四组生长趋势较接近.A、B、C三组相同时间点生长活性比较差异无统计学意义(P>0.05),D组与同一时间点A组比较有显著性差异(P<0.05),E组第10d和第14d以及F组各时间点间比较差异无显著性(P>0.05);A、B、C三组各时间点的PG含量及GAG含量高于相应时间点D、E、F组(P<0.05);A、B、C三组的Ⅱ型胶原基因表达量高于D、E组(P<0.05),明显高于F组(P<0.01).结论:不同代次兔髓核细胞冻存后生物学特性不同,第一、二代细胞冻存后能较好保持髓核细胞特性,可作为种子细胞进行低温保存.
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渗透压负荷对兔椎间盘器官培养模型的影响
目的:建立一种可用于体外研究椎间盘退变的椎间盘器官培养模型,探讨渗透压负荷对模型椎间盘细胞活力和代谢的影响.方法:4～6月龄新西兰大白兔10只,均分为两组,处死后立即手术切取胸腰段椎间盘,每只9个,分别在等渗(300mOsm/kg,等渗组)或高渗(410mOsm/kg,高渗组)培养基中进行整体器官培养,在培养前和培养后第7、14、21、28天,利用Mitotracker Green荧光探针、组织化学和生物化学方法评估两组椎间盘髓核细胞的活力、结构的完整性以及蛋白多糖含量的变化.结果:取材后培养前椎间盘髓核细胞的荧光强度为11503±402,在体外培养过程中,高渗组第14天荧光强度为9202±907,与培养前比较差异有显著性意义(P＜0.05),第7、21和28天分别为10504±710、10860±711、10713±953,与培养前相比较无显著性差异(P＞0.05);等渗组第7、14、21、28天分别为11350±351、11207±385、10914±300、10862±229,与培养前比较无显著性差异(P＞0.05);两组在第7、21和28天时无显著性意义(P＞0.05).在培养过程中,两组椎间盘髓核和纤维环的组织结构能够基本保持完整,髓核蛋白多糖含量在培养第7天高渗组和等渗组分别为3.33±0.28m/100mg和2.83±0.25m/100mg,均较培养前(5.03±0.37m/100mg)明显降低(P＜0.01),第14、21、28天时与第7天相比下降不明显(P＞0.05).两组相同时间点的差异无显著性意义(P＞0.05).结论:椎间盘器官培养模型可以在等渗或高渗环境中有效维持兔椎间盘结构的完整性和髓核细胞的活力至少4周.
