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潜伏膜蛋白1基因特异性沉默对EB病毒阳性胃上皮细胞影响的初步研究
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是重要的DNA肿瘤病毒.潜伏膜蛋白1(1atent membrane protein 1,LMPl)编码基因是EBV永生化基因中惟一能够转化体外培养的人和啮齿类动物细胞并使之具有致瘤性的基因.
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等位基因特异性多重聚合酶链反应技术对载脂蛋白E基因多态性检测的评价
载脂蛋白E(apolipoproteinE,apoE)是血浆主要载脂蛋白之一,具有明显的遗传多态性,3种常见的等位基因(ε2、ε3、ε4)分别编码3种主要异构体(E2、E3、E4),产生6种不同的基因型(ε2/ε2、ε2/ε3、ε2/ε4、ε3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4).apoE基因多态性不仅是心血管疾病的一种重要易患因素,而且与Alzheimer病密切相关.目前国内外检测apoE基因多态性的方法很多,因而快速简便的检测方法也就成为研究中关注的焦点.等位基因特异性多重聚合酶链反应(PCR)技术(multi-ARMS)是利用TaqDNA聚合酶对引物3′端核苷酸的特异性,在不同的反应体系中分别加入与待检测位点野生型、突变体相配的一对引物,通过扩增产物的有无来判定该位点是否突变.
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真性红细胞增多症20例患者JAK2 V617F基因突变分析
真性红细胞增多症(PV)是一种较少见的造血干细胞水平异常克隆性疾病,迄今对其确切的发病机制尚不十分清楚,国际真性红细胞增多症研究小组(PVSG)和WHO等对PV的各种诊断标准仍是排他性的,且缺少像慢性粒细胞性白血病(CML)一样的BCR/ABL融合基因特异性标志.近,有学者报道[1-6],在BCR/ABL阴性骨髓增殖性疾病(MPD)患者中存在JAK2基因突变--JAK2 V617F.本研究对20例PV患者进行JAK2 V617F检测分析,并初步探讨其临床意义.
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cFLIP基因表达与胃癌的关系研究
目的:探讨cFLIP基因在胃癌组织中表达状况及其与胃癌发生发展的关系.方法:采用免疫组化法检测cFLIP short/long基因在48例胃癌、48例肠化胃黏膜及42例慢性胃炎黏膜中的表达,并经计算机图像分析,计算阳性细胞百分率.统计采用方差分析.结果:cFLIPshort/long基因全部表达于胃癌组织,部分表达于肠化胃黏膜及慢性胃炎黏膜.胃癌组织中cFLIP基因表达强度(强阳性占70.8%)显著高于肠化胃黏膜(P<0.01)及慢性胃炎黏膜(P<0.01),且与胃癌浸润深度(P<0.05),胃癌TNM分期(P<0.05)显著相关.而肠化胃黏膜与慢性胃炎中cFLIP基因表达差异无显著性(P>0.05).结论:cFLIPshort/long基因特异性高表达于胃癌组织且在胃癌转化过程中是一较晚期事件,与胃癌的发生及浸润转移密切相关.
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β2肾上腺素受体遗传多态性与血清总IgE关系的研究
人类β2肾上腺素受体(β2AR)基因位于染色体5q31[1,2].目前已检测出该基因编码区存在着9个突变位点(遗传多态性)[3],其中4个可导致氨基酸序列改变,16位点的精氨酸(Arg)突变为甘氨酸(Gly),27位点的谷胺酰胺(Gln)突变为谷氨酸(Glu)的频率较高.国外学者已发现,Gln27型β2AR与血清总IgE增高相关[4 ].我们以聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交法(PCR-ASO)对59例哮喘患者的β2AR 16和27位点遗传多态性进行检测,并测定其血清总IgE,以探讨我国汉族哮喘人群β2AR遗传多态性与血清总IgE关系.
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GRK4基因多态A486V与原发性高血压关联研究
我们采用等位基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中国江苏南通地区326例健康人和342例高血压患者的GRK4基因多态位点A486V进行基因分型,探讨GRK4基因多态与原发性高血压的相关性.
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应用不接触分离技术防止结直肠癌手术中癌细胞门静脉播散的临床研究
我们应用突变等位基因特异性扩增法(MASA)[1],对不接触分离技术和传统手术门静脉血中癌细胞的播散情况进行前瞻性对照研究,以期从基因水平评估不接触分离技术对结直肠癌手术中癌细胞门静脉播散的影响及其应用价值.
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重组凋亡素基因特异性诱导卵巢癌细胞凋亡的体外研究
卵巢癌是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一,其死亡率位居妇科恶性肿瘤之首[1].随着分子生物学的发展,卵巢癌的治疗性研究已进入到基因水平.研究发现,利用合适的载体将鸡贫血病毒(chicken anemia virus, CAV)的凋亡素基因(即VP3基因)导入靶细胞,能特异性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无影响,提示凋亡素基因是用于恶性肿瘤基因治疗的一个理想的目的基因[2,3].迄今为止,国内外尚未有凋亡素基因对卵巢癌细胞影响的报道.
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高分辨率熔解曲线分析技术在快速产前诊断β地中海贫血中的应用
β地中海贫血(β地贫)是世界范围内常见的单基因疾病之一[1],是由β珠蛋白(hemoglobin beta,HBB)基因突变导致HBB合成障碍而引起的一种溶血性贫血,呈常染色体隐性遗传.我国长江以南地区为β地贫高发区,其中广西、广东和海南的发病率高,至今已发现有200多种β地贫基因突变[2],其中CDs41-42 -TCTT、IVS2-654C>T、-28A>G、CD17A>T及CDs71-72+A位点突变占所有突变类型的90%以上[3-4].重型β地贫患儿出生后需要定期输血治疗,除非实施造血干细胞移植成功,大部分患儿将于青少年期夭折.由于目前对该病尚无理想的根治方法,因此,通过产前诊断阻止重型β地贫患儿出生是首选的预防措施.目前,国内外检测β地贫基因突变的方法主要有等位基因特异性PCR( ARMS)、反向点杂交(RDB)、变性高效液相色谱( DHPLC)等[5-8].高分辨率熔解(high resolution melting,HRM)曲线分析技术是一种高效稳定的PCR技术,不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,存PCR反应结束后直接进行HRM即可完成对样品的突变筛查和基因型分析.本研究探讨HRM分析技术在快速产前诊断β地贫中的应用价值.
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小儿支气管哮喘与血小板活化因子乙酰水解酶的相关性研究
为探讨血浆血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与我国哮喘儿童的相关性及其多态性与血浆PAF-AH酶活性的关系,我们于2001年10月至2003年3月,应用等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)技术,对哮喘发作期儿童PAF-AH第9外显子上G994-T基因位点的突变进行了检测,同时应用酶水解底物显色法检测血浆PAF-AH活性.现报告如下.
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加替沙星的抗感染作用
加替沙星(gatifloxacin,AM-1155,CG5501)是一种新型广谱8-甲氧氟喹诺酮抗菌药.其作用机制与其它抗菌药物完全不同,对已对β内酰胺类药物产生耐药性的流感杆菌、葡萄球菌、淋球菌、肺炎链球菌等仍具有抗菌活性.加替沙星有抑制螺旋酶的作用,由等位基因特异性地通过8-甲氧基团产生抑制和杀灭细菌活性,对耐喹诺酮的细菌也有效,与非喹诺酮类药物无交叉耐药.加替沙星以DNA螺旋酶(DNA gyrase)为靶酶,主要与α螺旋单位结合构成螺旋酶-DNA复制而起一杀菌作用.该药口服易吸收,静注与口服具有等效性.此外,它对衣原体、支原体、分歧杆菌和厌氧菌等也有强大的杀灭作用,临床应用广泛.现将国外临床应用情况介绍如下.
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β2肾上腺素受体遗传多态性与夜间哮喘的相关性研究
人类β2肾上腺素受体(β2AR)基因位于染色体5q31.目前已检测出该基因编码区存在着9个突变位点(遗传多态性),其中4 个可导致氨基酸序列的改变,从而使编码的第46、79、100、491位氨基酸分别发生Arg16→Gly、Gln27→Glu、Val34→Met、Thr164→Ile的改变[1].夜间哮喘是哮喘的一种特殊类型,其夜间症状及气道阻塞加重,对其发生机制尚不清楚.但已了解到夜间哮喘其夜间β2AR下调,而非夜间哮喘者患者和正常人无此下调[2].而在定位诱变和重组表达研究中已发现,β2AR16位点上的Arg突变为Gly具有增强激动剂所促发的受体下调作用[3].于是人们推测:Gly16与夜间哮喘的β2AR下调可能有关.为了探讨这一问题,本研究利用聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交法(PCR-ASO),从分子水平对夜间哮喘和非夜间哮喘的β2AR16和27位的遗传多态性进行分析,并探讨这一多态性与夜间哮喘的关系.
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遗传代谢及内分泌疾病诊治进展
现将国内1999~2000年儿科遗传代谢和内分泌疾病方面的诊治进展简述于下.1 遗传代谢性疾病遗传代谢病生化改变的研究、致病基因突变的研究、染色体病畸变检测新技术等为临床提供了更为准确、有效的早期诊断和防治的新方法,例如采用高效液相色谱法(HPLC)分析法从苯丙氨酸血症中检出四氢生物喋呤(BH4)缺乏型苯丙酮尿症(PKU)[Δ](见叶军文)(角码[Δ]所示为"全国儿科内分泌、遗传性疾病2000年昆明学术会议资料汇编”,下同--编者注);采用气相色谱/质谱仪(GC/MS)对原因不明的精神-运动发育迟缓患儿进行代谢病筛查,检出10余种遗传代谢性疾病[Δ](见许克铭文);运用基因检测技术(PCR-SSCP、PCR-TGGE、DNA测序等),对肝豆状核变性ATP7B基因及家族性高胆固醇血症LDL受体基因,进行全编码区检测,发现了我国的新突变类型[Δ](见刘晓青和王冬青文);摸索出软骨发育不全FGFR3基因突变的新的基因检测手段--等位基因特异性PCR[Δ](见倪继红文);对戈谢病基因型和表型的研究,找出了不同基因型的临床表型特征[Δ](见施惠平文);间期荧光原位杂交13/21α卫星探针快速诊断唐氏综合征[1].
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等位基因特异性PCR检测人线粒体DNA11778突变位点及其临床意义
11778位点突变与Leber氏遗传性视神经萎缩疾病(Leber' s hereditary optic neuropathy, LHON)的发生密切相关[1]。本文报道应用等位基因特异性PCR方法检测该突变位点的结果并探讨其临床意义。
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小干扰RNA与RNA干扰
RNA分子参与生物体许多基本的细胞生理活动,其功能之多远未搞清楚。继核酶、肽粒酸、反义RNA等之后,近年来有关小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)及其所致的RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象又成为研究的热点。siRNA是双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)被RNaseⅢ家族中的核酸酶DICER降解后产生的长21~25核苷酸的小片段,具有5′-磷酸、3′-羟基和1~2个核苷酸的3′-粘性末端。所谓RNAi就是siRNA引起的生物体内同源基因特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应的mRNA特异结合,使靶RNA降解从而阻止mRNA的表达。RNAi现象首先在转基因植物中发现,当时称为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post-transcriptional gene sileneing,PTGS);后来证明在真菌等真核生物中也存在,称为消除(quelling);在线虫和果蝇中则称为RNA干扰。研究表明,这3种现象有共同的转录后基因沉默机制,都是外源性dsRNA被加工成siRNA,然后识别与切割相应mRNA的过程。长度>30核苷酸的外源性dsRNA可在细胞内被核酸酶DICER切割成长21~25个核苷酸的正义和反义RNA链,即siRNA。反义siRNA可与同源单链mRNA特异结合,作为RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)的引物,引导RISC切割相应的靶RNA。……
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结直肠癌缺陷基因201密码子点突变与大肠癌生物学特性研究
目的探讨结直肠癌缺陷(deleted in colorectal carcinoma, DCC)基因201密码子(codon 201)点突变与大肠癌生物学特性的关系.方法采用等位基因特异性(allele-specific)PCR扩增技术结合限制性片段长度多肽性(restricted fragment lenght polymorphism, RFLP)检测40例正常人大肠粘膜、35例大肠癌组织及相应癌旁正常粘膜的201密码子突变情况.结果大肠癌组织及癌旁正常粘膜201密码子突变率分别为71%(25/35)和60%(21/35),两者差异无显著意义.但与正常对照组33%(13/40)相比,显著增高(χ2=5.6963,P<0.025).伴淋巴结转移组和Ducks C、D群明显高于无淋巴结转移组和Dukes A、B期,而与患者性别、年龄、癌的分级、分型等因素无关.结论 DCC基因201密码子突变是大肠癌发生中的早期基因事件,且与其转移能力的加强密切相关.
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长QT综合征的分子生物学治疗
细胞学、分子生物学、遗传学和心血管病联合研究的大贡献是产生了LQTS基因特异性的治疗方案.目前已发现LQTS已发现7种类型,第1~7型的致病基因分别为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、Ankyrin-B、KCNE1、KCNE2和KCNJ2(表1).
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急性淋巴细胞白血病染色体和特异癌基因98例分析
目的 探讨急性淋巴细胞白血病的染色体和特异基因的变化.方法 对急性淋巴细胞性白血病患者,在无菌条件下抽取0.3 ml骨髓液,培养24小时的制备染色体标本,应用G显带或R显带技术,镜下观察每份少分析20个中期分裂细胞.结果 98例急性淋巴细胞白细胞病中50例为正常核型,占51%,48例为异常核型,占49%.数目异常的34例中,其中超二倍体27例,亚二倍体7例,结构异常14例.结构异常组中,8例为t(9;22),占57%.发现结构异常组生存概率明显低于正常核型组(P<0.05),而超二倍体组(≥68条染色体的约三倍体除外)与正常核型组则无明显性差异(P<0.05).结论 从分子水平上检测BCR-ABL和SIL-TAL-1融合基因则为ALL诊断提供特异的分子标志,因此,染色体检查和分子遗传学方法相结合,对于ALL的诊断、治疗和预后都具有重要意义.
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基因芯片检测技术与基因测序技术在遗传性耳聋产前诊断中的联合应用
耳聋是常见的出生缺陷之一[1]。60%的先天性耳聋伴有一定程度的遗传性因素[2]。利用常规听力物理筛查手段并不能够解决日益增多的迟发性、渐进性和药物敏感性耳聋的诊断及干预治疗[3]。基因检测技术能够准确定位致病基因突变位点,了解疾病形成机理,有针对性地干预治疗和预防疾病发生。对于中国人群耳聋致病基因特异性研究[4]表明, GJB2、GJB3、SLC26A4( PDS)、12s rRNA是主要的耳聋致病基因。本研究在遗传性耳聋产前诊断中联合应用基因芯片检测技术与基因测序技术,现将结果报告如下。