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温度对快速碱性磷酸酶染色灵敏度的影响
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色对鉴别诊断血液病具有重要价值.萘酚AS-BI磷酸底物法NAP染色孵育仅15min[1,2],为孵育时间短的快速NAP染色方法,其染色温度为室温[1,2],与其他NAP染色方法[3-5]的37℃不同.本文对比分析37℃、30℃、20℃孵育时该染色的积分差异,以确定其适宜温度.
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羟基脲致阴茎溃疡一例
患者,男,46岁.因乏力伴腹胀1个月于2000年1月入院.查体:神志清,一般状况好,浅表淋巴结无肿大,心肺正常,肝肋缘下未及,脾肋缘下3.0 cm,质韧.B超:肝脏正常,脾肋缘下5.0 cm.血常规:Hb 110 g/L,WBC 15×109/L,BPC 382×109/L,可见幼稚粒细胞;骨髓象:增生极度活跃,原始粒细胞0.050,病理性中幼粒细胞0.200,晚幼粒细胞0.250,嗜酸粒细胞0.030,嗜碱粒细胞0.050,碱性磷酸酶染色阴性,Ph染色体(+).初步诊断:慢性粒细胞白血病.入院后给予羟基脲0.5 g,每日3次.第3天时,自诉龟头不适,检查发现龟头、阴茎各有1处溃疡,溃疡面有渗出,作细菌培养2次,均为阴性,用1/5?000高锰酸钾液局部洗浴,每晚1次,15 d后仍未好转,有加重趋势,即停羟基脲观察.15 d后自愈.1个月后再次服用羟基脲,龟头复又糜烂,立即停用羟基脲,15 d后自愈.患者于2000年7月再次服用羟基脲,上诉现象仍出现.
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年龄因素对人类脂肪来源干细胞的影响
背景与目的 脂肪来源间质干细胞(ADMSCs)是一种健康的具有多向分化潜能的来源细胞.其可简单获取,并可应用于多种再生领域.本研究的目的是评估衰老对ADMSCs的影响,探讨与其相关的形态学、衰老特性、生长因子表达和成骨.方法 按不同的年龄组(婴幼儿、成年、老年)获取细胞并培养.利用显微镜检测其形态学特征,利用流式细胞术探查细胞表面标记物.利用实时(real-time)聚合酶链反应测量端粒长度.对比各组间相关成血管和成骨生长因子的表达.通过评估诱导反应及RUNX-2和骨钙蛋白mRNA表达的定量分析,来进一步探索成骨能力.结果 每个供区获取到相同分离比例的间质干细胞,不考虑年龄因素.婴幼儿的脂肪来源于细胞(ADSCs)形态学上表现出瘦长轴状,与老年组相比其端粒长度更长.血管生成因子在婴幼儿组细胞中有更高的表达,而成骨表达在各组间均相似.碱性磷酸酶染色和茜素红染色证实,婴幼儿组干细胞对成骨诱导的反应比老年组更明显,视为与骨相关的基因表达.结论 各年龄组的ADMSCs均是有活性的.与老年组相比,婴幼儿组的来源细胞形态学上表现为梭形,端粒较长,成血管及成骨能力较强.相反,所有年龄组的来源细胞均表现相似的成骨旁分泌能力,因此,我们推断其在成年至老年阶段仍可保持临床适用性.
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小巨核细胞的碱性磷酸酶染色在全血细胞减少患者中的诊断意义
小巨核细胞是一种病态的巨核细胞,可存在多种血液病的骨髓中.我们利用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶染色(APAAP)检测小巨核细胞,通过其阳性率探讨小巨核特别是淋巴样小巨核细胞在MDS及各种全血细胞减少中的诊断意义.
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恙虫病骨髓细胞形态学改变(附10例报告)
恙虫病是由恙虫病立克次体引起的一种急性自然疫源性疾病,一般认为该病外周血白细胞正常或降低。我院1992年6月至1995年12月间共收治恙虫病71例,其中自细胞升高者39例,占54.9%,部分出现异形淋巴细胞、幼粒细胞、核左移及中毒性改变,为观察本病在骨髓细胞形态学方面的改变,我们对其中10例作了骨髓穿刺检查,现报告如下。1 临床资料1.1 一般资料 10例中男性8例,女性2例,年龄8~61岁。入院时体温38.2℃~41.5 C,为弛张热,均伴畏寒、头痛。全身酸痛乏力6例,腰痛4例,10例中均有皮肤特异性焦痂、浅表淋巴结肿大及皮疹。焦痂无痒痛,每例1个,且多位于隐蔽及气味浓重部位,其中腋窝4例,会阴部3例,胸部2例,耳后1例。淋巴结肿大以焦痂附近明显,骨髓穿刺前未行氯霉素治疗。1.2 实验室检查血红蛋白中度减低1例(例7),白细胞计数升高5例,高为36.0×109/L,未见减低者,例2、3、7的外周血淋巴细胞比例及绝对值均明显升高,发现异型淋巴细胞5例,幼粒细胞2例,核左移7例,嗜酸性细胞计数下降1例,血小板计数除例2轻度增高外,其余9例正常。8例中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)之阳性率及积分明显升高,5例血清变形杆菌OXk凝集效价≥1:160。例7高铁血红蛋白还原率11.4%,尿潜血及尿胆原(+),抗人球蛋白(Coombs)试验及酸溶血(Ham)试验阴性。
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三种偶联剂碱性磷酸酶染色的灵敏度比较
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色是血液细胞化学染色常用方法之一.kaplow偶氮偶联法NAP染色具有快速、操作步骤较少[1]、结果稳定等优点,有取代钙-钴法NAP染色的趋势.我们探讨将固蓝RR盐、固蓝BB盐、固蓝B盐分别用于Kaplow偶氮偶联法NAP染色,以了解不同偶联剂染色时的积分(灵敏度)差异,进而有助于选用灵敏的偶联剂及各实验室结果的正确比较.本人未见同样或类似文献报道.
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三种抗凝方法对中性粒细胞碱性磷酸酶染色结果的分析
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)是一种胞内水解酶.测定其活性对于某些血液病的诊断、鉴别诊断和疗效观察有重要价值[1].标准操作程序中要求采集新鲜血液标本直接制备血涂片进行染色[2].目前多数医院已使用抗凝全血标本进行全血细胞计数和细胞形态学检查,对住院病人实验室一般不再去病房采集病人血液标本,但临床上需要为病人测定NAP时,实验室工作人员不得不去病房为病人采集周围血标本,既增加了病人的痛苦,又给实验室工作带来不便,如能利用进行血常规测定的抗凝全血标本制备血涂片,做中性粒细胞碱性磷酸酶染色,则可解决上述问题.为证实抗凝全血标本是否适用于中性粒细胞碱性磷酸酶染色,进行了新鲜血与EDTA抗凝全血、肝素抗凝全血、柠檬酸钠抗凝全血标本的中性粒细胞碱性磷酸酶染色结果的比较.
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ALG(猪)联合FU、CTX预处理进行异基因干细胞移植治疗再生障碍性贫血患者诱发自身免疫性溶血性贫血1例
患者女,17岁,以"皮肤紫斑伴发热、牙跟出血1周"为首发症状于2010年8月20日入院.既往体健,无关节疼痛史,无有害物质及放射线接触史.入院查体:重度贫血貌,全身皮肤黏膜散在紫斑,未见皮肤色素沉着及发育异常,浅表淋巴结不大,巩膜无黄染,口腔多发血泡,咽稍红,扁桃体不大,胸骨无压痛,心肺未见异常,肝脾肋缘下未触及.血常规:WBC 1.7×109/L,淋巴细胞0.82,RBC 4.6×1012/L,HB 126g/L,PLT 141×109/L.网织红细胞0.005;CD55/CD59阴性,糖水试验、酸溶血试验、直接抗人球蛋白试验(DAT)均阴性,输血前抗体筛查反复检查未见异常;LDH正常,T淋巴细胞亚群:CD4+T细胞/淋巴细胞、CD4+T细胞/CD3+ CD8+T细胞均正常.铁蛋白67 ng/mL,中性粒细胞碱性磷酸酶染色阳性.
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毛细胞白血病1例误诊分析
患者男, 73岁.因发现腹部包块5个月,左下腹隐痛5天,于2000年4月 22日入院.患者入院前5个多月无意中发现左下腹一鹅蛋大小包块,未予诊断治疗.入院前1个月因左腹包块行腹部B超检查示脾脏明显增大,也未予治疗.5天前出现不明原因的左下腹隐痛.既往体健,无遗传病史.查体:T36.6℃,P120次/min,Bp18. 0/12.0kPa(1kPa≈7.5mmHg).轻度贫血貌.脾脏重度肿大,AB线10cm,A C线12cm,质坚实、表面光滑、无压痛.肝脏肿大,肝下界位于左肋缘下3cm处,质韧, 腹水征(+).心肺正常.查血:Hb107g/L,WBC15.6×109/L,N0 .22,L0.78,血小板80×109/L.腹部B超示肝、脾肿大,腹水.拟诊: 肝硬化(失代偿期).住院后进行检查,并结合病史和病情观察,认为肝硬化诊断不充分, 不能排除血液系统疾病,即进行骨髓穿刺检查.骨髓像:有核细胞增生活跃,巨核细胞全片未见,血小板片中较少见.淋巴细胞占84.5%,多数似大淋巴细胞样,部分细胞呈毛边状,胞浆边缘不规则,有锯齿样伪足突起.毛细胞(HC)抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性. 据此,本例患者被确诊为多毛细胞白血病(HCL).
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慢性粒细胞白血病急粒变并发成人型Gaucher病1例
患者,男,18岁。1997年7月因乏力、脾巨大在外院诊断为慢性粒细胞白血病,经马利兰等治疗后症状缓解,血象正常出院。1998年10月10日因发热、头昏及牙龈出血收入我院。查体:体温39.1℃,呼吸28次/分,急性病容,皮肤粘膜有散在出血点,全身浅表淋巴结无肿大,巩膜无黄染,胸骨压痛,肝肋下4.0 cm,脾肋下8.0 cm,腹水征(一)。双侧胫骨压痛,股骨X线片:股骨下端骨质疏松,骨皮质变薄。血象:Hb60 g/L,RBC 2.2×1012/L,BPC 48×109/L,分类中原粒+早幼粒占0.48,肝肾功能正常,HBsAg(一)。骨髓增生活跃,原粒+早幼粒占0.66,全片见Gaucher细胞429个,散在或成团分布,片尾较密集,这些细胞体积大,直径约20~50 μm,呈不规则圆形,胞浆丰富,呈浅灰蓝色,波纹状,部分出现分散的、不明显的红色条纹和细小颗粒,核小多偏位,可见双核,染色质浓密或固缩状,偶见核仁1~2个。酸性磷酸酶染色及糖原染色这些细胞都呈阳性反应。经以上检查确诊为慢性粒细胞白血病急粒变并发成人型Gaucher病。给予高三尖杉酯碱+阿糖胞苷(HA)及柔红霉素+阿糖胞苷(DA)化疗及输血等对症支持疗法,病情继续恶化,于入院第52天因脑出血死亡。
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生物钟基因Clock对iPSCs分化作用的研究
目的:研究生物钟基因Clock对干细胞分化成熟过程的影响和机制。方法:我们将携带有Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4的TetO-FUW-OSKM慢病毒转染入小鼠胚胎成纤维细胞( MEF)中,利用PCR、免疫荧光法、碱性磷酸酶染色和拟胚体形成实验鉴定细胞的多能性。通过RNAi技术抑制Clock基因表达,观察Clock基因对iPSCs分化的影响。结果:小鼠MEF在转染后12 d形成典型的小鼠ESC样克隆。 RT-PCR显示iPSCs表达多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4;细胞碱性磷酸酶染色阳性;细胞免疫荧光检测结果显示有Oct4和SSEA1的表达;培养可见拟胚体的形成。因此,我们成功将小鼠MEF重编程为iPSCs。细胞非定向分化实验发现,转染48 h后,对照组克隆边缘不光滑,有伪足伸出,提示iPSCs存在分化;Clock-siRNA组的iPSCs克隆仍保持边缘光滑,极少有伪足伸出,RT-PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表达较对照组升高。结论:生物钟基因Clock可能参与了iPSCs的分化过程。
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两种常用固定剂碱性磷酸酶染色的灵敏度比较
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色对鉴别诊断血液病具有重要价值.该染色常用10%甲醛甲醇或95%乙醇作固定剂[1].两种固定剂分别用于Kaplow偶氮偶联法NAP染色,结果显示两者NAP积分相差甚远,应引起高度重视,以减少误诊误治.
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底物及偶联剂浓度对碱性磷酸酶染色灵敏度的影响
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色对鉴别诊断血液病具有重要价值.Kaplow偶氮偶联法NAP染色具有快速、步骤少、结果稳定等优点.1 mg/ml浓度固蓝RR盐、固蓝BB盐、固蓝B盐分别用于Kaplow偶氮偶联法NAP染色,固蓝RR盐组积分(灵敏度)高[1].本文探讨底物α-磷酸萘酚钠(1-萘磷酸-钠盐)及偶联剂固蓝RR盐的不同浓度对NAP染色灵敏度的影响.
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猪肝细胞分离方法的改良
目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18~20mi n,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损 ,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.