首页 > 文献资料
-
百日咳鲍特菌外膜蛋白的致病性与免疫原性
百日咳鲍特菌外膜蛋白是存在于细菌表面的一组功能性蛋白质,包括P69、FhaC和BrkA,其中以P69为重要。P69分子中的RGD-(GGxxP)_5和(PQP)_5两个富含脯氨酸结构区分别具有粘附作用和很强的免疫原性,其抗体具有较强的保护作用,可作为无细胞型百日咳疫苗中的一个重要抗原成分。P69具有多态性,百日咳流行菌株的P69已从P69A转变成以P69B或P69C为主,所引起的抗原性漂移与疫苗预防效果下降有直接关系。FhaC是该菌的一种外膜蛋白,能特异地辅助丝状血凝素分泌;BrkA不仅具有蛋白转运功能,且能抵抗抗体依赖补体介导的细胞毒作用。
-
IL-21增强γδT细胞体外抗肿瘤活性的实验研究
探讨IL-21对人外周血(γδ)T细胞抗肿瘤活性的影响.分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、IL-2或IL-15的RPMI 1640完全培养基中诱导培养(γδ)T细胞.在培养的第10天用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组(γδ)T细胞的纯度及(γδ)T细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测(γδ)T细胞对K562细胞的体外杀伤效应.结果显示,不同细胞因子组诱导10 d后(γδ)T细胞纯度均达到70%以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和ID2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组(γδ)T细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组.以上结果表明,IL-21可通过上调(γδ)T细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性.
-
铜绿假单胞菌外毒素A对淋巴细胞转化的抑制作用
目的探讨铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)对人淋巴细胞转化的抑制作用及抗-PEA血清的中和作用.方法采集健康成年人的静脉血,密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC).采用台盼蓝染色排除法及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法确定PEA对淋巴细胞的非毒性剂量范围.抑制实验分为对照组、4个不同浓度PEA组及抗血清预处理组6个组.非毒性剂量范围内不同浓度的PEA、植物血凝素(PHA)与淋巴细胞37℃、5%CO2共同温育48 h,MTT法测定淋巴细胞转化.结果PEA对淋巴细胞的非毒性剂量范围为0~800 ng/ml.PEA浓度在50~400 ng/ml,对淋巴细胞转化存在显著抑制作用(P<0.05);而抗-PEA血清可完全中和PEA对淋巴细胞转化的抑制作用,与对照组比较差异无显著性(P>0.05).结论非毒性剂量的PEA对淋巴细胞转化存在抑制作用,抗-PEA血清具有保护性中和作用.
-
活性氮介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用离体杀伤肝片吸虫童虫的机制
-
D-氨基半乳糖研究的回顾和展望
D-氨基半乳糖,又称半乳糖胺或软骨糖胺,广泛存在于寡糖、糖蛋白和糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)中.20世纪50年代首次发现其有细胞毒作用,但对其特异性致肝损伤机制尚不清楚.
-
一氧化氮对日本血吸虫童虫细胞毒作用的研究
目的研究一氧化氮(NO)对日本血吸虫童虫的杀伤作用.方法用LPS或LPS+IFN-γ诱导离体的小鼠腹腔巨噬细胞,使其产生NO;加入机械断尾的日本血吸虫童虫,测定48 h内童虫的死亡率.为进一步证实NO对童虫的杀伤作用,用诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制剂LNNA(Nω-nitro-Larginine)抑制NO的产生,与未加抑制剂组比较,观察童虫死亡率的变化.结果LPS或LPS+IFN-γ均能有效诱导巨噬细胞产生NO,2.0×105细胞产生的NO浓度分别为(109.96±3.70)μmol/L和(113.50±7.38)μmol/L,其相应的杀虫率分别达91.07%±2.92%和96.86%±2.36%.加入2 mmol/L的L-NNA后,巨噬细胞的NO产量明显降低,其杀虫率也相应减低.结论巨噬细胞诱生的NO对日本血吸虫童虫具杀伤作用.
-
蛔虫感染期幼虫提取液对人肺上皮细胞的细胞毒作用
蛔虫是危害地域广、感染人数多的病原生物之一,全球蛔虫感染者约14亿,我国感染人数近全国人口的一半,遍及各省[1].蛔虫感染可造成变态反应、肠功能障碍等,并可引起严重并发症.本研究利用人蛔虫感染期幼虫提取液,对体外培养的人肺上皮细胞(A549细胞)进行干预,观察其对A549细胞的细胞毒性作用及其与浓度的关系,探讨蛔虫感染引起宿主病变的发病机制.
-
核转录因子在肝细胞凋亡中的作用研究进展
细胞凋亡在组织的分化、发展和正常平衡的维持中发挥重要作用.同样,肝细胞凋亡在肝脏免疫细胞介导的细胞毒作用、化学药物或毒物作用、病毒性疾病及自身免疫性疾病等病理损害中也具有重要作用.
-
烟酰胺对白细胞介素-1β所致大鼠胰岛细胞损伤的保护
1型糖尿病被认为是一种遗传易感性自身免疫性疾病,由免疫介导损伤胰岛β细胞所致。本实验采用离体培养的新生大鼠胰岛,进一步研究白细胞介素-1β(IL-1β)对胰岛的细胞毒作用及一氧化氮(NO)的介导作用,且从细胞病理进行证实,并探讨烟酰胺(NAA)对胰岛细胞的保护作用及其机制。 一、方法 1.胰岛细胞的分离及培养(胶原酶消化法):选用出生7天的SD大鼠,摘取胰腺,4℃ RPMI1640冲洗2遍,剪碎,加入Ⅴ型胶原酶消化,不锈钢筛滤去组织碎片,收集滤液。将所获胰岛悬浮于含15%胎牛血清的RPMI1640中培养48小时后收集细胞,Ficoll 400不连续密度梯度离心纯化。显微镜下计数分装于24孔培养板中,每孔30个细胞。
-
低浓度顺铂诱导胃癌原代细胞耐药的研究
近年来,5-FU与顺铂(DDP)已成为治疗消化道肿瘤的基本用药.肿瘤对药物的原发性耐药及获得性耐药已成为导致化学治疗失败的主要原因[1].DDP呈浓度依赖性细胞毒作用,但因毒性大且有体内蓄积现象,故应用剂量受到限制.
-
胃癌细胞粒酶B表达与树突状细胞和活化T淋巴细胞浸润程度的关系及临床意义
粒酶B(granzyme B,GrB)是活化的细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞发挥细胞毒作用的主要效应分子,也是其特异标志物,本研究采用免疫组化法,观察胃良/恶性上皮细胞是否表达GrB,同时检测组织中浸润S-100+树突状细胞(DC)和GrB+肿瘤浸润T淋巴细胞(TIL),探讨GrB表达与胃癌生物学行为及局部免疫状态的相互关系.
-
重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对SW480细胞应激反应的影响
近年来,氧活性物质(ROS)对肠屏障功能的影响日益受到重视,ROS的增加可损伤细胞成分,使肠上皮细胞的完整性破坏[1].过氧化氢酶(catalase,CAT)是众多氧活性物质清除剂的一种,它可将H2O2分解为H2O和O2,从而清除H2O2的细胞毒作用.我们在幽门螺杆菌(Hp)致病性研究中,克隆纯化了该菌的过氧化氢酶,意外地发现在我们的表达载体中该酶的活性远高于购自Sigma公司的纯化牛肝过氧化氢酶牛肝-CAT[2].SW480细胞为结肠癌细胞株,可以作为人肠上皮细胞用于实验研究.本文拟通过应用脂质过氧化物(LPS)刺激,观察重组Hp过氧化氢酶(Hp-CAT)和Sigma公司的纯化牛肝-CAT在应激情况下,对肠上皮SW480细胞的影响.
-
阿司匹林对胃癌细胞株细胞凋亡的影响
本研究旨在研究阿司匹林对不同分化程度的胃腺癌细胞株的细胞毒作用及诱导其发生凋亡的作用,为临床应用阿司匹林治疗胃癌提供实验依据.
-
内毒素诱导巨噬细胞iNOS表达与抗肿瘤细胞毒作用的关系
目的:探讨细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达,NO产生与巨噬细胞细胞毒作用的关系;方法:应用RT-PCR、硝酸还原酶法、[3H]TdR掺入法分别观察LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达、NO产生以及巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用.结果:LPS能够诱导iNOS mRNA表达和NO的生成.iNOS特异性抑制剂充分抑制NO生成的同时,显著降低巨噬细胞对HL-60的细胞毒作用,却不影响巨噬细胞对K562细胞的细胞毒作用.结论:NO是激活巨噬细胞参与的非特异性细胞免疫的重要效应分子之一,但在巨噬细胞对不同肿瘤的抑制效应中发挥的作用不尽相同.
-
人外周血γδT细胞CD107a的表达变化与细胞毒活性的关系
目的:探讨人外周血γδT细胞体外诱导过程中CDl07a的表达变化及其与γδT细胞细胞毒活性的关系.方法:分离健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),加入含有IL-2和异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)的培养基,体外诱导γδT细胞.分别在第7、10、14天以流式细胞仪对培养的γδT细胞进行鉴定,并同时检测其CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达.CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤效应.采用SPSS13.0软件进行spearman相关分析.结果:在培养的第7、10、14天,γδTCR阳性细胞分别为(60.31±3.84)%、(66.45±4.25)%、(70.99±4.66)%.CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达在γδT细胞培养第7~10天达到峰值后呈下降趋势,第7天与第0天相比差异有统计学意义[(80.66±4.42)%、(70.11±3.34)%、(94.26±4.25)% vs (69.02±5.04)%、(62.31±4.66)%、(53.62±3.69)%,P<0.05].培养第7天、第10天的γδT细胞对SW-1990细胞杀伤率显著高于第14天的γδT细胞[(58.86±5.12)%、(61.53±4.69)% vs (40.31±4.83)%,P<0.05].γδT细胞CD107a表达与穿孔素、颗粒酶B、其对SW1990细胞杀伤效应显著相关(r=0.853,r=0.785,r=0.839,均P<0.01).结论:人外周血γδT细胞CD107a的表达与其抗肿瘤能力正相关,可能是γδT细胞细胞毒活性的一个标志.
-
HSPgp96体外诱导腹腔巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用
目的:探讨HSPgp96对小鼠PEMφ体外抗肿瘤细胞毒作用的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠PEMφ,随机分为培养液对照组、LPS诱导组、HSPgp96诱导组.应用硝酸还原酶法、MTT法、扫描电镜分别观测PEMφNO的生成、对肝癌细胞H22的细胞毒作用及形态学变化.结果:在HSPgp96的体外诱导下,小鼠PEMφNO的生成量显著增加,对肝癌细胞H22的细胞毒作用明显增强,其效应与LPS相当.结论:HSPgp96可在体外有效激活PEMφ的抗肿瘤细胞毒作用,NO是PEMφ杀瘤机制中的重要效应分子之一.
-
肿瘤抗原负载的树突状细胞对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞体外抗瘤作用的影响
目的:研究肿瘤抗原负载的树突状细胞(DCs)对原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)体外增殖和抗瘤作用的影响.方法:将自体肿瘤细胞匀浆粗提物(Tuly)与原发性肝癌患者外周血来源的DCs共培养以制备肿瘤抗原负载的DC(DC-Tuly),将DC-Tuly与自体TILs在低浓度IL-2(100 U/ml)中共培养,用FCM测定DC-Tuly的表型以及与DC-Tuly混合培养前后的TILs表型,并计数TILs.用LDH法测定TILs的细胞毒作用.ELISA法检测TILs培养上清中IFN-γ和TNF-α的含量.结果:DC-Tuly表面CD1a,CD83,CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子表达水平增高(P<0.05);DC-Tuly明显诱导TILs的增殖(P<0.01)及对自体肝癌细胞的细胞毒作用(P<0.01),CD3+TILs增多(P<0.05),CD4+TILs比例较混合前升高(P<0.01),但仍以CD8+TILs为主.与DC-Tuly混合培养后第1,2天,TILs分泌IFN-γ和TNF-α的量明显提高(P<0.01).结论:负载肿瘤抗原的DCs可促进TILs的增殖,增强TILs的特异性抗肿瘤活性.
-
EBV-LMP2A肽诱导的特异性CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用
目的:探讨HLA限制性EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)表位肽EBV-潜伏膜蛋白2A (EBV-latent membrane protein 2A,EBV-LMP2A)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用.方法:选用南京大学医学院附属肿瘤医院肿瘤中心HLA-A2阳性胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)、人胃腺癌细胞株(AGS)和人EBV阳性胃腺癌细胞株(AGS-EBV),通过改良的体外细胞培养技术用HLA-A2限制性的EBV-LMP2A抗原肽从人PBMC中诱导扩增出特异性CTL,采用四聚体技术和流式细胞术检测抗原肽诱导产生的特异性CTL的含量,通过FITC-PI标记流式术检测EBV-CTL对EBV阳性和EBV阴性的胃癌细胞的体外杀伤作用.结果:经改良的细胞培养技术和抗原肽双重刺激后EBV-LMP2A抗原肽可以诱导产生出高比例的抗原特异性CTL[EBV-LMP2A-356特异性T细胞占CD8+T细胞的(47.1±5.2)%];EBV-CTL对EBV阳性胃癌细胞的体外杀伤作用较EBV阴性的胃癌细胞明显增强[(45.1±9.3)%s(19.4±2.5)%,P<0.05].结论:通过改良的细胞培养技术使用EBV-LMP2A抗原肽能诱导产生高比例的EBV特异性CTL,其对EBV阳性胃癌细胞有较强的特异性杀伤作用.
-
淋巴细胞的伸入运动
伸入运动(emperipolesis)是以白细胞或淋巴细胞出现于其他细胞胞浆内为特征的现象.淋巴细胞(lymphocyte)是分布于血液、淋巴液、淋巴器官及淋巴组织中体积较小的游离细胞,主要存在于外周淋巴器官或组织中.
-
乳腺癌组织中嘧啶核苷磷酸化酶和微血管密度的研究
嘧啶核苷磷酸化酶[1](Pyrimidine nucleoside phosphorylase,简称为PyNPase),是分解嘧啶系列酶的总称,它参与核酸系统的合成。癌细胞增殖旺盛,核酸的合成能很高,通常在肿瘤组织内呈现较高水平的PyNPase活性。5-脱氧氟尿苷(5’-Deoxy-5-fluorouridin,5'-DFUR,商品名氟铁龙)是由Cook等[2]于1979年在寻找一种更有效的嘧啶类抗代谢药的过程中合成的一种5-氟尿嘧啶的前体药。5-DFUR在PyNPase的作用下,转化为具有抗肿瘤活性的5-FU,才对肿瘤细胞产生较强的细胞毒作用。肿瘤生长依赖于血管增生(angiogenesis)。Haraguchi等[3]研究发现PyNPase具有血管生成活性:Toi等[4]报道PyNPase的表达与乳腺癌组织中的微血管密度(Microvessel Density,MVD)显著相关。