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人源抗HER2单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定
在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2 (HER2)和受体趋化因子4(CXCR4)的表达成正相关,由于HER2与CXCR4/CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用,使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点.本研究将HER2单链抗体(ScFv)与鱼精蛋白截短体(tP)融合,以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白,核酸与该融合蛋白结合后,有望实现小分子干扰RNA( siRNA)的靶向递送,对HER2与CXCR4/CXCL-12轴进行RNA干扰(RNAi),为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料.
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血管紧张素转换酶基因多态性与急性呼吸窘迫综合征
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是ICU患者高病死率的主要原因,文献对该病起始和预后的预测因素报道较少.近研究发现人类血管紧张素转换酶(ACE)基因含有多态性,其插入/缺失(I/D)状态能增强/减弱血浆和组织中的ACE活性.在ARDS中不但D等位基因频率高,DD-ACE基因型频率亦高,并且它们与ARDS的死亡率有明显关系.确认这种多态性能帮助我们理解ARDS的发病机制,鉴定易感人群和治疗靶点[1].
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细胞外组蛋白与脓毒症
脓毒症(sepsis)是指微生物入侵机体感染后引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS).国外流行病学调查显示,脓毒症的发病率呈逐年上升的趋势,与1995年相比,2004年脓毒症的发病率和病死率均明显升高口[1].由于脓毒症发病机制复杂,临床救治十分困难,因此对脓毒症的治疗及其发病机制的研究一直是国内外学者关注的焦点.Xu等[2]研究使脓毒症的发病机制及治疗有了新的突破,引入了治疗靶点组蛋白.
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结缔组织生长因子在百草枯致肺纤维化中的作用
目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在百草枯中毒致肺纤维化发生发展中的作用.方法 于南京大学医学院实验室完成实验,48只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为两组,实验组接受单次腹腔注射百草枯(30 mg/kg),对照组注射等量生理盐水.分别在第7、14和28天后取下大鼠左肺,进行HE染色、Masson染色及测定羟脯氨酸含量来检测胶原蛋白的表达,评估肺纤维化发生及严重程度,Western-blot及免疫组化检测CTGF的表达.将MRC-5人肺成纤维细胞暴露于不同浓度的百草枯(50~500μmol/L)3 d,Western-blot观察CTGF表达情况;用不同浓度CTGF处理MRC-5细胞,分别用CCK-8、Transwell技术观察其增殖及迁移,并用Western-blot验证肌成纤维细胞分化.采用SPSS 18.0进行数据统计.结果 PQ给药后2周,肺组织切片显示肺泡壁显著增厚并出现具有成纤维特征的间质细胞的积聚.Masson染色显示胶原沉积成斑片状分布,提示肺纤维化形成.Western-Blot和免疫组化证明实验组大鼠CTGF表达显著上调(P<0.01).同样,不同浓度PQ处理的MRC-5细胞CTGF表达增加(P<0.01),具有剂量依赖性,浓度越高CTGF表达增加.此外,CTGF可促进MRC-5细胞的增殖和迁移(P<0.01),并诱导其分化为肌成纤维细胞.结论 PQ可引起CTGF的表达增加,诱导肺成纤维细胞的增殖、迁移和分化.CTGF可能在PQ诱导的肺纤维化中起重要作用,有望成为潜在的药物靶点.
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miR-20a-3p靶向STAT3调控大鼠脊髓损伤轴突修复
目的 探索Wistar大鼠脊髓损伤后损伤局部微环境发生改变的分子生物学机制,寻找起关键调控作用的微RNA.方法 15只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=12).脊髓损伤组根据取材时间分为4 h、3 d、7 d、14 d四个组,每组3只.使用Microarray 3.0芯片检测脊髓损伤大鼠损伤局部发生改变的微RNA,运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的微RNA,进行靶基因预测.运用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-20a-3p表达.采用Western blotting技术检测信号传导子和转录激活子(STAT)3表达量,并分析各组中靶蛋白与目标微RNA表达变化趋势相关性.在神经元中抑制关键候选微RNA,并使用免疫荧光观察靶蛋白表达与轴突生长的关系.结果 脊髓损伤标本中miR-20a-3p特征性上调明显.生物信息分析结果显示,STAT3可为miR-20a-3p的靶基因,与其趋势相反.细胞实验结果显示,miR-20a-3p抑制组与对照组相比轴突延长.Western blotting结果显示,与对照组相比,miR-20a-3p抑制组STAT3蛋白表达显著上调.结论 脊髓损伤后miR-20a-3p通过调节其序列互补靶基因STAT3表达量来影响神经元轴突的生长.miR-20a-3p上调导致STAT3下调,抑制miR-20a-3p,可促进神经元轴突的再生.
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脑缺血后神经发生与血管生成的联系与作用
近年来,以神经干细胞(neural stem cells,NSC)为方向的研究以促进神经再生为治疗靶点,逐渐成为神经科学研究的热点之一.成年中枢神经系统中存在NSC的主要脑区是侧脑室外侧壁的室下带(subventricular zone,SVZ)和海马齿状回的颗粒下层(subgranuhr zone,SGZ).NSC在一定条件下可增殖分化成神经元和胶质细胞,参与神经功能的修复过程,称为神经发生(neurogenesis).
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超声引导肉毒毒素A颈深部肌群注射治疗颈部局限性肌张力障碍:1例报告
颈部肌张力障碍(cervical dystonia)是一种累及颈部肌群的局灶性肌张力障碍,表现为重复刻板的痉挛性头部动作或持续的强直性头位异常.肉毒毒素局部注射现已成为局限性肌张力障碍的常规治疗方法.但由于部分颈部肌张力障碍患者累及多组肌群,造成复杂的异常动作与姿势,因此正确判断受累肌肉、准确标定治疗靶点是获得疗效的关键.我们自2002年10月应用超声引导进行颈深部肌群肉毒毒素A注射治疗颈部肌张力障碍,现结合典型病例介绍如下.
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c-kit信号在人结直肠黏液性腺癌发生发展中的作用机制研究
结直肠癌是目前危害人类健康较为常见的恶性肿瘤之一;其发病率和致死率分别位居所有恶性肿瘤的第三位和第四位。结直肠黏液性腺癌( colorectal mucinous adenocarcinoma, CRMAC )约占结直肠腺癌的20%;其肿瘤组织内含有大量的细胞外黏液,肿瘤恶性程度高,侵袭及转移能力强,因此,该类型肿瘤患者预后较差。有关CRMAC的发病机制仍未明了。近年来的报道表明受体酪氨酸激酶( RTKs)家族与多种类型的黏液性腺癌的发生发展密切相关。 c-kit属于该家族成员,在与其配体SCF结合后可激活下游的信号通路,进而调节细胞的生物活性。研究证实,高表达c-kit蛋白的结直肠肿瘤增殖和浸润能力均较强,且患者预后很差。据此,我们推测c-kit信号很可能在CRMAC发生发展过程中也起到一定的作用。本研究利用野生型C57 BL小鼠和c-kit功能缺失突变小鼠( Wads-/-),通过腹腔注射AOM及喂食DSS的方法成功建立了CRMAC动物模型,同时利用人结直肠癌细胞系HCT-116,探讨了c-kit信号在CRMAC发生发展过程中的可能调控机制。 AOM+DSS诱导37周后,HE染色、Alcian blue染色和MUC2免疫荧光染色证实所有野生型(15只)和Wads-/-(5只)小鼠均发生了结直肠腺癌,其中约50%的野生型小鼠为CRMAC,而无一例Wads-/-小鼠为CRMAC,且 CRMAC 肿瘤细胞恶性程度更高、穿透基膜浸润至黏膜下层。在野生型小鼠的CRMAC中,c-kit活性及其下游的促黏液分泌因子Math1的表达均较非CRMAC和正常小鼠黏膜上皮显著增高,提示c-kit可能通过上调Math1的表达促进CRMAC的发生。在体、离体实验均表明过表达c-kit还可抑制p53、同时增加cyclin D1的表达进而促进CRMAC细胞的增殖,并且可通过上调ETV4的表达来增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力;反之,运用Imatinib抑制c-kit活性后,肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到明显的抑制。综上,本研究初步证明了c-kit可以促进CRMAC的发生、增殖和侵袭,为该疾病的临床诊疗提供了新的理论依据和治疗靶点。
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拉科酰胺治疗神经病理性疼痛的研究进展
神经病理性疼痛作为一种顽症,严重影响患者的生存质量,医学界一直在寻找更好的治疗药物.基于癫痫和疼痛都有神经元回路的异常活动和异位放电的共同特征,抗癫痈药物在治疗神经病理性疼痛领域一直占有重要地位.以钠通道为疼痛治疗靶点的抗癫痫药物有苯妥英钠、卡马西平、拉莫三嗪、奥卡西平、拉科酰胺等.
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嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的分子遗传学机制研究进展
嗜铬细胞瘤/副神经节瘤(PCC/PGL)是一类少见的神经内分泌肿瘤,其在人类肿瘤中的遗传可能性高,新研究表明60%的PCC/PGL患者与遗传因素有关.PCC/PGL相关的遗传基因包括RET、VHL、NF1、SDHA、SDHB、SDHC、SDHD和SDHAF2等.近年来,一些新的致病基因被陆续发现,使得与其相关的可疑基因多达28种.目前PCC/PGL相关的分子遗传学机制研究取得了重要进展,为理解PCC/PGL的发病机制,寻找新的治疗靶点提供了新的思路,本文系统综述了PCC/PGL的分子遗传学机制.
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急性髓系白血病DNA甲基化及治疗进展
急性髓系白血病( AML)是成人常见的急性白血病类型,主要累及老年人,发病中位年龄为67岁,在年轻人患病率约2~3/100000人,而在70岁以上人群则升至13~15/100000人。AML是一组异质性疾病,根据形态学、白血病细胞免疫组化、细胞免疫表型、细胞遗传学、分子学异常可以将其区分为不同类型。随着对白血病细胞遗传学和分子学研究深入,越来越多的证据显示白血病的预后与白血病的生物学特性相关。近年来随着新的治疗药物的发现,部分类型的AML疗效得到巨大改善(如急性早幼粒细胞白血病),但非早幼粒急性髓细胞白血病生存率仍很低(40%~45%左右),尤其是老年人AML中位生存<1年,寻找新的治疗靶点成为改善AML疗效的关键。
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磷脂酰肌醇蛋白聚糖3异常表达与肿瘤诊断及基因治疗
肿瘤发生发展由原癌基因激活和抑癌基因失活、信号传导通路异常、细胞周期调控因子突变、抗凋亡基因激活、血管形成及对放、化疗的耐药性等多种因素共同作用形成,肿瘤的早期特异诊断与有效治疗极为重要[1-2] .磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican 3,GPC-3)自发现以来,已成为某些肿瘤早期诊断[3-4] 和治疗靶点,本文就GPC-3 与肿瘤诊断及基因治疗的研究进展作一综述.
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微小RNA在皮肤发生和疾病中的作用
基因的表达在DNA、RNA和蛋白水平上受到调控.近二十年来,人们对于RNA介导基因调控的认识日新月异,小分子RNA(small RNAs)在哺乳类动物发育和疾病发生中的调控作用受到广泛关注.微小RNA(microRNAs,miRNAs)是先被发现的调控性小分子RNA,可以是潜在的治疗靶点和诊断的生物标记,是近年来生命科学领域的一个研究热点.
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microRNAs与心血管疾病的研究进展
miRNAs是一类长约19~23个核苷酸、单链、非编码蛋白的小分子RNA,起到对基因表达的负调控作用。研究发现, miRNAs能够特异性地结合靶基因mRNA的3′-非翻译区(un-translated region,UTR),抑制靶基因mRNA的翻译或促进其降解,从而起到在转录后水平的调节作用[1]。1993年,Lee等[2]研究者在秀丽新小杆线虫(Caenorhabditis elegan)中发现了调控胚胎后期发育的基因lin-4,这是第一个报道的miRNA,迄今为止已在多个物种包括动物、植物和病毒中,已经发现并鉴别出上万个miRNA,其中包括约2000条人类miRNA,生物信息学预测miRNA有可能调控着约1/3的人类基因[3-4]。miRNA靶基因的相关预测和研究尚在起步阶段,目前只有小部分miRNA的靶基因及功能得到了初步阐述。这些研究揭示了miRNA具有基因表达调节器作用,在胚胎发育、细胞分化、癌症发生等多个生物学过程中起到重要作用[5-6],尤其在心血管系统发育及其疾病中起着重要的调节作用[7]。因此,对miRNA功能的深入探讨已成为当今心血管疾病研究领域的热点。本文就miRNAs在心脏发育及心脏疾病病理过程中的调控机制,目前的miRNAs的研究策略以及miRNA作为心脏疾病诊断标记物和药物治疗靶点的可能性作一综述(图1)。
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视黄醇结合蛋白4与心血管疾病的研究进展
视黄醇结合蛋白4 (retinol binding protein 4,RBP4)属于视黄醇结合蛋白(RBP)家族中的分泌型RBP,主要由肝细胞和脂肪细胞分泌,在协助视黄醇发挥生理功能中起着不可替代的作用.同时RBP4 作为一种循环性脂肪细胞因子,在许多研究中均发现其于肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征、高血压及动脉粥样硬化中均发挥了重要作用,并有望为相关疾病的发病机制及治疗靶点提供新的线索.本文将对RBP4 的结构功能与其在心血管疾病的相关研究进展进行综述.
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基因治疗在头颈恶性肿瘤的应用
头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma ,HNSCC)是头颈部恶性肿瘤的主要病理类型,约占所有头颈部肿瘤的90%,其发病率在过去20 年内逐渐上升.据美国癌症学会2007 年公布的数据,HNSCC 位居恶性肿瘤发病率的第10 位[1] .传统的治疗方式如手术切除和放(化)疗并未明显延长患者的5 年生存率,肿瘤复发是致死的主要原因,解决这一难题需要探索新的治疗靶点和干预方式.
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脑锌稳态与急性脑损伤关系的研究进展
锌离子是急性脑损伤后导致神经损伤的重要毒性阳离子。脑损伤后,锌离子通过跨突触易位和(或)胞内的锌离子动员大量聚集在突触后神经元。锌离子的易位和动员能导致活性氧簇产生及扰乱代谢酶的活性,终通过自噬、凋亡和坏死等途径导致神经元的损伤。而越来越多的证据显示通过调节细胞内和细胞外锌离子水平能够作为急性脑损伤后重要治疗靶点。
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肥大细胞在肾间质纤维化中作用机制的新进展
在我国,慢性肾脏病的发病率达到10.8%,全国慢性肾脏病患者可达1亿多人[1].探索慢性肾脏病的详细发病机制,寻找治疗靶点,是目前面临的重要任务.几乎各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径和主要的病理基础都是肾间质纤维化.近来随着对肥大细胞的深入研究,发现其除参与过敏反应外,其分泌的活性物质生长因子、蛋白酶类、白三烯类、细胞因子和趋化因子等,在肾间质纤维化中起到重要作用.肾脏疾病时,如原发和继发肾小球肾炎、糖尿病肾病[2]、移植肾脏的排斥反应、马兜铃酸肾病、淀粉样变肾病中[3]、反流性肾病、多囊肾等,肥大细胞数量明显增加,且与纤维化程度、肾小球滤过率进展性下降以及不良的预后密切相关.
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糖尿病慢性并发症的防治展望
随着胰岛素的应用,糖尿病急性并发症所致的死亡率明显下降,但糖尿病慢性并发症发生率却逐年提高,糖尿病及其慢性并发症已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。糖尿病慢性并发症发病机制复杂,明确其发病机制对该组疾病的防治有重要意义。近年来的研究认为miRNAs、Nrf2、遗传因素及表观遗传修饰等可作为糖尿病并发症的治疗靶点。
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心肌梗死后心室重塑的治疗新靶点:免疫细胞中介的炎症反应
心肌梗死是引起全球范围内致死和致残的主要病因之一。心肌梗死后缺血区心肌的功能丧失可通过Laplace定律以心室腔的扩大为代价,维持射血分数;但长时间室壁应力的增加势必引起心室梗死区和非梗死区结构和功能的改变,进而导致心力衰竭出现[1]。目前的临床治疗主要通过早期再灌注治疗减少梗死面积,同时降低左心室负荷,从而改善心肌梗死后的心室重塑。然而抗血小板药物和介入治疗并不能避免心肌梗死后远期不良事件的发生。近年来,越来越多的临床和基础研究证实了免疫系统参与心肌梗死后炎症和组织修复过程。通过研究免疫细胞探索心肌梗死炎症和组织修复的机制已成为目前研究的热点之一,而以其为靶点的治疗则可能成为未来临床治疗的潜在亮点。在此,笔者就心肌梗死后免疫细胞介导的炎症反应及组织修复的进展以及潜在的治疗靶点作一简述。