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人T细胞免疫球蛋白黏蛋白1基因及其融合蛋白真核表达载体的构建和生物信息学分析
T细胞免疫球蛋白黏蛋白1(TIM-1)基因是目前新发现的TIM基因家族成员之一，初被鉴定为甲型肝炎受体1(HAVCR-1)，是甲型肝炎病毒(HAV)侵入机体必需的，并与HAV结合的受体[1-2]。而后又被鉴定为肾损伤分子1 (KIM-1)，在受损的上皮细胞表面高表达[3]。并且，TIM-1优先表达于人和小鼠的Th2细胞表面，是哮喘、变应性过敏等Th2细胞介导的相关性疾病的一个重要易感基因[1]。其作为T细胞活化的共刺激分子，调节Th2细胞的免疫应答[2，4]。而Fc融合蛋白在科学研究和疾病治疗中有广泛的应用。本研究中，我们旨在构建人TIM-1基因及其Fc融合蛋白真核表达载体，并运用生物信息学方法对TIM-1基因进行系统分析，预测其可能存在的功能，为进一步探讨和阐释TIM-1基因在免疫调控中可能扮演的作用奠定基础。
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协同刺激信号与狼疮性肾炎的免疫治疗
狼疮性肾炎(LN)是影响系统性红斑狼疮(SLE)预后的主要合并症.免疫紊乱是SLE的主要致病原因,而T细胞异常活化引起的B细胞异常的克隆增生、抗自身抗体的产生则是SLE的主要病理生理过程.近年来,伴随分子细胞生物学的进步,SLE及LN患者T细胞异常增生、活化的分子机制得以阐明,相继出现了针对异常的T细胞活化实施免疫调控治疗的方法,开辟了LN治疗的新领域.
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细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤的临床应用进展
肿瘤是机体在多种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增殖，在基因水平上丧失正常调控，与正常组织存在明显异型性差异的新生物，目前尚缺乏特异性根治方法。细胞因子诱导的杀伤（cytokine －induced killer，CIK）细胞是一群由多种细胞因子（ IFN－γ、IL－1、IL－2和anti－CD3）联合诱导的以CD3＋和CD56＋T细胞为主的异质细胞，通过细胞毒性T细胞（ cytotoxic T lymphocyte ，TTL）溶细胞效应和细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用，并能消除术后微小残留病灶，防止癌细胞扩散与肿瘤复发，是一种新型的过继免疫治疗方法中的主要功能细胞［1－2］。本文围绕CIK细胞对呼吸、消化、血液系统肿瘤细胞的抑杀作用、免疫调控及对晚期患者生活质量的新研究进展进行综述。
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间充质干细胞免疫调控及其治疗心血管疾病的研究进展
间充质干细胞（ MSC）自19世纪60年代发现以来因其强大的向多系细胞分化的能力而备受关注，很多研究者对其进行不断的研究，期望可以将其应用于临床治疗多种疾病。MSC来源广泛，不仅仅存在于骨髓中，它几乎存在于所有的组织中，且体外易于增殖。科研人员常用其三系分化能力来证明其干细胞性，在特殊的条件下，MSC可以分化为脂肪细胞，成骨细胞以及软骨细胞。近些年来发现其具有免疫调控能力，极大地增加了科研人员对其的研究热情，其强大的免疫抑制能力使其有望应用于治疗自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（SLE）［1］、结肠炎、克罗恩肠病［2］、移植物抗宿主病（GVHD）［3］以及自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）［4－5］等。临床试验证实，MSC对上述提到的疾病有着显著的治疗效果，但并不是所有情况下都有着令人满意的效果，有时候无明显效果甚至加重原有的疾病。究其原因，综合近些年的研究成果可以看出，MSC不仅仅可以进行免疫抑制，在某些情况下其亦可以增强免疫反应从而加重炎症反应和疾病的进展。
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植物多糖对巨噬细胞免疫调控影响的研究进展
植物多糖（ polysaccharide ）有众多药理作用，主要包括加强或者活化巨噬细胞免疫应答，进而发挥免疫调控、抗肿瘤、创面愈合和其他治疗作用，主要的作用机制是其固有的免疫调节尤其是对巨噬细胞的作用。植物和微生物多糖与大多数的表面受体相关，诱导巨噬细胞发挥与其相似的免疫应答，这表明多糖的结构特点在有机体中是共有的。因此，植物多糖的研究为发现新的治疗药物提供了方向，也为找到具有强大免疫调控作用的佐剂提供了机会。本文对分离自高等植物的多糖对巨噬细胞免疫调控影响的新研究状况作一综述。
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Semaphorins 与骨质疏松的研究进展
信号素（semaphorins，Sema）是一类在神经系统发育过程中发现的神经导向因子［1］。研究发现信号素家族至少含有20个成员，它们发挥着不同的生物学功能，如心脏发生、血管发生［2］、肿瘤的发生、免疫调控［3］等。近年研究发现信号素在骨代谢过程中发挥着重要作用，本文就将信号素在骨质疏松发生过程中对成骨细胞和破骨细胞的作用机制，及其防治骨质疏松的临床价值作如下综述。
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嗜酸粒细胞离子通道与其功能的关系
支气管哮喘(简称哮喘)是一种涉及多种炎性细胞参与的气道慢性炎症疾病,嗜酸粒细胞(EOS)是哮喘发病机制中重要的炎症效应细胞及免疫调控细胞[1].EOS性炎症已被广泛认为是哮喘的基本特征.目前对EOS在肺部的聚集与黏附、各种炎症介质的诱导作用、毒性蛋白的释放及其作用、细胞内调节机制都有比较深入的研究[2].
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小儿止咳颗粒对哮喘大鼠气道炎症的免疫调控作用研究
目的:观察小儿止咳颗粒对哮喘模型大鼠血清与肺泡灌洗液中白三烯C4(LTC-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)的影响,从而探讨其治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制.方法:36只SD雌性大鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,地塞米松组,小儿止咳颗粒低、中、高剂量组,每组6只.除空白对照组外,余组均采用鸡卵白蛋白(OVA)致敏并反复多次激发的方法建立大鼠哮喘模型.从腹腔注射OVA氢氧化铝悬液致敏第15天起行雾化激发,在雾化激发前模型组以10ml/kg生理盐水灌胃,地塞米松组以0.3mg/kg地塞米松溶液灌胃,小儿止咳颗粒低、中、高剂量组分别以12.5g/kg、25g/kg、50g/kg小儿止咳颗粒溶液灌胃.空白对照组以10ml/kg生理盐水灌胃.治疗结束后收集血清及肺泡灌洗液(BALF),运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血清及肺泡灌洗液中LTC-4以及IFN-γ、IL-4、IL-5的含量.结果:①与空白对照组比较,模型组大鼠体重明显下降(P＜0.01);而地塞米松组及小儿止咳颗粒各剂量组大鼠体重均较模型组有显著提升(P＜0.01).②与空白对照组比较,模型组大鼠中血清LTC-4水平显著升高,IFN-γ水平显著降低(均P＜0.01),而血清IL-4与IL-5无明显变化;地塞米松与小儿止咳颗粒各剂量均可降低模型大鼠血清中LTC-4水平(P＜0.01),高剂量组改善程度优于地塞米松组(P＜0.01);高剂量组可明显提升模型大鼠血清中IFN-γ水平,与模型组、地塞米松组比较均有显著性差异(P＜0.01).③与空白对照组比较,模型组大鼠BALF中LTC-4、IL-4与IL-5水平显著升高(P＜0.01),IFN-γ水平显著下降(P＜0.01);地塞米松与小儿止咳颗粒各剂量均可下调LTC-4、IL-4水平(P＜0.05或P＜0.01),小儿止咳颗粒各剂量组均可上调模型大鼠BALF中的INF-γ水平(P＜0.01);地塞米松与小儿止咳颗粒中、高剂量可下调BALF中IL-5水平(P＜0.01).结论:小儿止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘可能是通过下调炎症介质表达,改善免疫紊乱,从而减轻气道炎症而实现的.
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衡炎方对脓毒症患者炎性反应及免疫调控的影响
目的 观察衡炎方对脓毒症患者的炎性反应及免疫调控机制的影响.方法 48例重度脓毒症患者随机分为衡炎方组和对照组.两组均予常规治疗,治疗组在此基础上加用衡炎方.观察两组APACHEⅡ评分、T淋巴细胞计数及细胞因子的变化.结果 与对照组同期比较,衡炎方组治疗后APACHEⅡ评分以及白细胞介素(IL)-6,IL-6/IL-10和肿瘤坏死因子-α均明显下降,而CD+3、CD+4、CD+8均明显增高.结论 衡炎方能减轻脓毒症患者的抗炎反应与促炎反应,维持全身炎症反应综合征,代偿性抗炎反应综合征平衡,改善免疫抑制的作用.
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黄芪多糖对肺气虚模型小鼠免疫功能的影响
目的:研究黄芪多糖(APS)对肺气虚模型小鼠免疫功能的影响.方法:采用烟熏法复制小鼠肺气虚模型.实验分为6组,即空白对照(等容生理盐水)、模型(等容生理盐水)、玉屏风(2.5g·kg-1)与APS高、中、低剂量(600、400、200mg·kg-1)组,灌胃给药,每天1次,连续7d.观察APS对模型小鼠脾、胸腺指数,血清白细胞介素(IL)-1α、IL-2含量,肺组织β-防御素2含量的影响.结果:与模型组比较,APS高、中、低剂量组胸腺指数显著升高(P＜0.05)；APS高、中剂量组IL-1α与APS高剂量组IL-2含量显著增加(P＜0.05);APS高剂量组肺组织β-防御素2含量显著减少(P＜0.05).结论:APS可调控肺气虚所致免疫功能低下,特别是对细胞免疫功能改善作用更为明显.
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Fox基因家族与卵巢疾病的研究进展
Forkhead Box(Fox)转录因子家族在胚胎发育过程中起着关键性的调控作用,这些基因表达的改变与动物的生长发育、免疫调控以及肿瘤的发生密切相关,它的突变也可引起卵巢生理功能的改变、卵巢早衰和卵巢肿瘤的发生.本文将对Forkhead Box(Fox)基因家族与卵巢疾病的关系综述如下.
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人肺来源的间充质干细胞对T淋巴细胞增殖的影响
目的探讨来源于人肺的间充质干细胞(MSCs)是否具有免疫调控能力.方法采用流式细胞术鉴定其免疫表型,用淋巴母细胞转化实验观察其是否具有免疫调控能力.结果①MSCs不表达引起免疫反应的细胞表面分子HLA-DR、CD86、CD80等;②随MSCs细胞量增多,抑制T细胞增殖能力越强.结论人肺来源的间充质干细胞具有免疫调控能力.
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造血功能障碍的修复与重建
正常生理状况下的造血取决于"造血种子"--造血干祖细胞(haemopoietic stem progenitor cell,HSPC)、"造血土壤"--造血微环境(hemopoietic microenvironment,HM)、"造血肥料"--造血生长因子(hemopoietic growth factor,HGF)和"虫子"--造血相关的免疫调控(immunoregulation for hematopoiesis)等诸因素量和质及其相互协调功能的正常.其中某个环节或多个环节异常均可导致造血功能障碍,从而发生各类血细胞数量、质量异常和相应的临床症状.造血功能障碍分为原发性和继发性两大类--原发于造血系统的疾病和继发于疾病治疗相关的并发症以及遭受核爆炸、核恐怖袭击和放射源意外泄漏等突发事件导致的急性放射病.
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中药诱导间充质干细胞向神经细胞分化后的免疫调控作用
目的:探讨多种中药成分体外定向诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并研究分化细胞的免疫调控能力.方法:通过贴壁法分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外扩增培养.多种中药成分定向诱导分化为神经元样细胞.光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(CFAP)的表达.通过单向混合淋巴细胞反应(MLR),观察神经细胞分化的hMSCs对人外周血T淋巴细胞(human peripheral blood lymphocyte,hPBL)免疫调控作用.结果:hMSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增.黄芪,天麻,人参诱导1～3小时后大部分hMSCs转变为神经元样细胞,出现胞体和突起.免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性.混合培养结果显示分化hMSCs抑制hPBLs增殖反应.结论:多种中药成分和中药制剂可在体外诱导hMSCs分化为神经元样细胞,分化hMSCs抑制人淋巴细胞增殖反应,具有免疫词控作用.
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芪胶升白胶囊对正常小鼠及免疫抑制小鼠免疫调控作用的研究
目的:研究芪胶升白胶囊对正常小鼠及免疫抑制小鼠免疫功能的影响,为该药的临床应用及开发提供科学、全面的数据资料.方法:80只小鼠,随机分为对照组,贞芪扶正颗粒4.0g/kg剂量组,芪胶升白胶囊0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg剂量组,环磷酰胺组,环磷酰胺+贞芪扶正颗粒4.0g/kg剂量组,环磷酰胺+芪胶升白胶囊0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg剂量组,分组第1天,后5组腹腔注射环磷酰胺50mg/kg,连续给药4天,制造免疫抑制小鼠模型,对照组及环磷酰胺组的小鼠每天灌胃蒸馏水0.4ml/只,其他各组小鼠每天按上述剂量灌胃0.4ml/只,14天后,碳廓清实验检测小鼠巨噬细胞吞噬功能、MTT法检测小鼠淋巴细胞转化能力、血清溶血素实验测定小鼠血清中溶血素含量,并计算各组小鼠免疫器官指数.结果:与对照组比较,贞芪扶正颗粒组,芪胶升白胶囊0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg剂量组的小鼠的巨噬细胞吞噬功能增强(29.54％、36.36％、45.45％、29.54％)、小鼠血清溶血素含量升高(57.69％、80.77％、76.62％、76.62％);贞芪扶正颗粒组、芪胶升白胶囊1.0g/kg剂量组的小鼠淋巴细胞转化能力提高(126.19％、89.29％);贞芪扶正颗粒组,芪胶升白胶囊各剂量组小鼠脾指数、胸腺指数无显著增加.与环磷酰胺组比较,环磷酰胺+贞芪扶正颗粒组,环磷酰胺+芪胶升白胶囊0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬功能增强(38.89％、30.56％、33.33％、36.11％)、小鼠血清溶血素含量明显升高(213.33％、213.33％、180.00％、186.67％);小鼠淋巴细胞转化能力显著提高(142.42％、266.67％、278.79％、396.97％);环磷酰胺+贞芪扶正颗粒组,环磷酰胺+芪胶升白胶囊2.0g/kg剂量组小鼠胸腺指数显著增加(35.00％、30.00％).结论:一定剂量的芪胶升白胶囊不仅能增强正常小鼠机体的免疫功能,还能明显增强免疫抑制小鼠机体的免疫功能.
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Let-7i靶向抑制SOCS1调控树突状细胞功能
目的 探讨microRNA let-7i调控树突状细胞(DC)功能的作用靶点.方法 分别上调或下调DC中let-7i水平,应用双萤光素酶报告基因系统检测SOCS1是否是let-7i的作用靶点,应用Western blot及免疫荧光检测DC中SOCS1蛋白水平,qRT-PCR检测DC中SOCS1及let-7i基因水平,观察在调控DC功能的过程中,let-7i是否靶向抑制SOCS1表达.结果 let-7i通过转录后抑制的方式靶向调控DC中SOCS1表达.结论 miRNA let-7i靶向抑制SOCS1,进而影响DC的成熟及功能状态.
关键词： miRNA let-7i 树突状细胞 免疫调控 SOCS1 -
人外周血单个核细胞来源CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及功能研究
目的 建立人外周血单个核细胞来源的CD4+CD25+调节性T细胞体外扩增培养方法,研究体外扩增后细胞功能改变.方法 Ficoll-Paque密度梯度分离健康人外周血单个核细胞,免疫磁珠纯化CD4+T细胞,流式分选CD4+CD25+调节性T细胞.用抗人CD3/CD28单抗和IL-2联合刺激CD4+CD25+调节性T细胞,检测其Foxp3、IL-10和TGF-β表达改变.结果 人外周血单个核细胞分离纯化得到纯度98％的CD4+CD25+节性T细胞,Foxp3表达率为95％;使用IL-2加抗CD3/CD28单抗刺激6周后细胞数量可扩增1000倍;扩增后细胞Foxp3的表达和IL-10、TGF-β的分泌均显著降低.结论 本研究成功建立了高纯度大量CD4+CD25+调节性T细胞纯化和体外扩增方法,研究了CD4+CD25+T细胞体外扩增后功能表型的改变.
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人CD83基因转染细胞株的构建及其功能初步研究
目的 构建人CD83全长编码基因转染293细胞,并探讨其对单核细胞的作用.方法 RT-PCR方法 从成熟人树突状细胞(DC)扩增出CD83 cDNA,插入plRES2-EGFP载体,脂质体转染293细胞,筛选出稳定表达目的 基因细胞株;从人外周血单个核细胞(PBMC)中磁珠分选单核细胞,LPS刺激的同时加入293/CD83细胞或293/mock,24 h后检测细胞活化状态以及培养上清中TNF-c水平.结果 经流式细胞术反复检测绿色荧光蛋白(GFP)报告基因及CD83表达水平,筛选获得获得一株稳定表达膜型CD83分子的基因转染细胞株293/CD83;体外实验显示293/CD83可促进LPS刺激的单核细胞活化水平和TNF-c分泌量.结论 成功构建表达人CD83分子的293细胞株,293/CD83对LPS刺激的单核细胞有协同刺激作用.
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人脐血源性MSCs的免疫调节作用
目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.
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人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定
目的 制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性.方法 以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1 000 bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,止向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定.用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性.结果 构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序签定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强.腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性.结论 成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155.
