脑缺血边缘系统细胞凋亡及机制研究

目的:研究急性脑缺血边缘系统bcl-2家族及白介素-1β转化酶(ICE)基因的同期转录变化特征及其与细胞凋亡的关系,并探讨牛磺酸对其影响和可能机制.方法:制做MCAO模型,在立体定向仪引导下行侧脑室给药,监测空白对照组、生理盐水干预组和牛磺酸干预组的脑梗塞容积、颞皮质、海马和下丘脑的凋亡细胞数、bcl-2基因阳性转录细胞数和ICE基因阳性转录细胞数的动态变化.结果:正常脑组织颞皮质、海马和下丘脑3部位的bcl-2基因均有密集转录.空白对照组和生理盐水干预组各部位于再灌注24h,bcl-2基因转录开始下降,急剧下降期位于MCAO后24h～48h.牛磺酸干预组于再灌注24h开始下降,并于以后各时相继续缓慢下降而始终未达低谷.牛磺酸干预组各时相的bcI-2基因阳性转录细胞数显著高于其它两组(P＜0.05).ICE基因的同期转录水平几乎与bcl-2基因转录水平呈反向变化.结论:脑缺血及再灌注时bcl-2基因转录受抑制,而白介素-1β转化酶基因转录上调,牛磺酸有显著减轻这些基因转录、细胞凋亡和缩小脑梗塞容积的作用.

大脑局部急性缺血后热休克蛋白70的免疫组织化学研究

兹刃菘说鞍?0(HSP 70)是一种极敏感和可靠的脑缺血的标志.在正常脑内几乎检测不到HSP 70mRNA或HSP 70蛋白,随着脑缺血时程的增长,HSP 70蛋白的表达与细胞受缺血损伤的程度相关,但随着缺血程度加重,HSP 70基因转录和/或翻译被阻断.

TNFα,LPS,oxLDL和AngⅡ诱导U937细胞PDGF-B基因转录

在动脉粥样硬化等重要血管疾病的发生过程中,内皮细胞与循环血细胞之间的相互作用无疑起着关键的作用.许多致病因素除对内皮细胞直接作用外,还可通过作用于循环血细胞而引起放大效应.血小板源生长因子B链基因(PDGF-B)是普遍存在的促有丝分裂剂,与动脉粥样硬化关系密切.我室前期工作观察到TNF-α等可刺激内皮细胞PDGF-B基因表达.目的:观察心血管疾病相关因素对U937单核细胞中PDGF-B链基因转录的影响及PKC与MAPK通路可能参与的调节作用.方法:培养的U937细胞以200 U/mL TNF,100 ng/mL LPS,100 μg/mL oxLDL及10-6 AgⅡ处理细胞18 h,同时加或不加PKC与MAPK抑制剂,用RT-PCR方法检测PDGF-B链基因的mRNA的表达.结果:200 U/mL TNF, 100 ng/mL LPS, oxLDL及10-6 AgⅡ均可明显诱导PDGF-B链基因的表达,PKC的抑制剂H7(10-6 mol/L)和calphostatin(10-7 mol/L)可明显抑制TNFα,100 μg/mL oxLDL和AgⅡ诱导的PDGF-B基因表达.但是MAPK抑制剂PD098059对上述致病因素诱导PDGF-B链基因表达的抑制作用却不尽相同,表现为:可明显抑制LPS和TNF诱导U937单核细胞PDGF-B基因表达,对oxLDL的诱导作用亦有抑制作用,但对AgⅡ诱导PDGF-B基因表达未见明显抑制效应.结论:(1)致病因素TNFα,LPS,oxLDL和AgⅡ均可诱导U937单核细胞PDGF-B基因表达;(2)PKC通路的激活参与此诱导过程;(3)MAPK通路的激活可能参与部分致病因素的诱导作用.

蛋白激酶C对HMGI调节PDGF-B链基因转录的影响

Bcr/abl嵌合基因表达与慢粒白血病细胞积累

目的和方法:bcr/abl嵌合基因是定位于人9号染色体9q34上的c-abl基因和22号染色体22q11上的bcr基因因t(9:22)易位,使相应断裂的基因发生融合所形成.它是ph染色体的分子基础,在慢粒白血病(CML)发病中起重要作用.Bcr/abl嵌合基因编码具酪氨酸激酶活性的蛋白(P210).这种蛋白与细胞信号传导蛋白相互作用,扰乱细胞信息传递过程,使CML细胞增殖和分化失控.为了探讨bcr/abl嵌合基因表达致慢粒白血病细胞积累的发病机制,设计并合成针对bcr/abl嵌合基因的反义寡脱氧核苷酸(asODN)及硫代反义寡脱氧核苷酸(s-asODN),利用MTT法、[3 H]-TdR掺入技术、TR-PCR技术、免疫组织化学技术、电子显镜技术等观察asODN对K562细胞株形态学、DNA变化、bcr/abl嵌合基因转录和表达、细胞存活、细胞DNA合成等的影响.结果:①各种asODN对CML细胞存活都有显著的抑制作用,其硫代asODN效果好,大抑制率达64.7%.②各种asODN对CML细胞的DNA合成有是显著的抑制作用,其硫代asODN效果好,大抑制率达85.8%.③各种asODN对CML细胞bcr/abl嵌合基因转录有显著的抑制作用, 48 h时,硫代asODN效果好,s-anti-b3a2和s-anti-myb联合用药几乎完全抑制bcr/abl的转录.④各种asODN对CML细胞的P210表达有显著的抑制作用.⑤各种asODN对CML细胞的形态学有显著的影响,电子显微镜发现有大量的凋亡小体出现.⑥DNA电泳显示:asODN对CML细胞作用后胞内DNA有裂解,电泳有细胞凋亡特征的梯形条带出现,其中联合作用的效果明显.结论:bcr/abl嵌合基因不但通过P210蛋白使CML细胞信息传导紊乱,细胞生长失控,而且bcr/abl嵌合基因抑制CML细胞的凋亡,通过抑制bcr/abl嵌合基因的表达既能抑制CML细胞的增殖,也能解除CML细胞凋亡的抑制.

TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响

TNFα主要由巨噬细胞、T细胞和NK细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质.动脉粥样硬化(AS)是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程.AS时TNFα合成增多,且与AS的严重程度成正比.PDGF是以二聚体(AA,BB和AB)形式存在的促分裂剂.其中,PDGF-B链由PDGF-B链基因编码,该基因mRNA在AS血管内皮细胞中表达明显增高.因此,研究在TNFα作用下,血管内皮细胞PDGF-B链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要意义.目的:本实验旨在确定人PDGF-B链基因上TNFα诱导反应元件的位置.方法:用限制性内切酶和PCR等方法对PDGF-B链基因5'上游序列进行定向删切,构建了一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒.以培养的HUVEC和EVC304内皮细胞株为材料,用LipofectaminTM法转染细胞.将构建的质粒pSIS-1758/+43 Luc、pSIS-189/+43 Luc和pSIS-84/+43 Luc分别与内对照质粒pSV-β-Gal共转染培养的内皮细胞,用200 U/mL TNFα分别处理转染内皮细胞18 h,收集细胞裂解物,检测荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性,计算荧光素酶的比活性.结果:在PDGF-B链基因上游序列-1758/+43 bp和-189/+43 bp存在下,TNFα可使转染HUVEC荧光素酶表达量较对照组明显增加,前者对照组为3.43±0.01,TNFα组5.41±0.24,P>0.05 vs control;后者对照组为4.30±0.01,TNFα组7.15±0.88,P>0.01, vs control.而在PDGF-B链基因上游序列-84/+43 bp存在时,转染HUVEC荧光素酶表达量显著降低,对照组1.72±0.55,TNFα组1.90±0.69.两组无明显差异.同种方法转染EVC304内皮细胞株,结果一致.结论:TNFα促进内皮细胞PDGF-B链基因表达依赖该基因上游序列-189/+43 bp的存在,即在-189/+43 bp范围内可能存在TNFα诱导反应的顺式调控元件.

炎性疼痛致大鼠海马CREB结合蛋白的表达变化

目的 探讨完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant,CFA)致大鼠炎性疼痛后海马区CREB结合蛋白(CREB Binding Protein,CBP)的表达变化及意义.方法 大鼠随机分为正常组和实验组,实验组大鼠左侧足底皮下注射CFA和生理盐水混合溶剂100μl,建立炎性疼痛模型,分为注射CFA后6h、1d、3d、7d和14d组.采用Von Frey纤维观察不同时间点大鼠机械缩足阈值(Paw withdrawal threshold,PWT)的变化；采用免疫组化法检测海马CBP的表达变化.结果 足底注射CFA后1 hPWT即下降,并在6h后达到低值,3d后逐渐上调,至14d仍低于基础值.正常组大鼠海马各区均可见CBP大量表达.实验组大鼠两侧海马各区尤其是CAI区和齿状回(Dentate Gyrus,DG)区域CBP的表达随时间点变化呈现出先降低后升高再降低的双相表达趋势,即注射CFA后6h、1d,CBP表达下降,至注射CFA后3d,CBP表达明显上调；7d时CBP表达再次出现下调,持续至14d.结论 CFA能诱导大鼠产生为期2周以上的炎性痛病程；炎性疼痛时海马区CBP的表达呈现出双相性表达趋势,提示海马区的基因表达变化在炎性疼痛的产生和持续过程中起着重要的作用.

雌激素对心血管作用的分子基础

雌激素对女性心血管系统具有明显的保护作用,主要效应都是通过激活雌激素受体(ER),进而影响靶组织的基因表达,从而发挥其生物学作用.ER在心血管系统不同组织中均有分布,通过ER的介导雌激素对血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞功能有不同程度的调节作用.

PDGF-BB和AngⅡ在血管平滑肌细胞增殖增生信号传导中对细胞周期相关基因表达的影响

目的揭示血管平滑肌细胞(VSMC)增生或增殖的信号传导通路的异同具有重要意义.本研究应用DNA芯片技术对增殖增生的VSMC中细胞周期相关基因转录情况进行分析,同时检测了105个相关基因,说明外部促进VSMC增殖或增生的因素引起VSMC增殖或增生的机制.

RANTES基因启动子G-403A多态性与2型糖尿病肾病的关系

据报道,糖尿病(DM)状态化学趋化信号的上调和单核细胞(MO)向肾脏聚集及分化为巨噬细胞(MФ)与糖尿病肾病(DN)发生发展有关[1,2].正常T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白(RANTES)是化学趋化亚族趋化因子,主要作用于MO/MФ及某些T淋巴细胞亚群.RANTES基因缺陷大鼠可减少T细胞和MO向炎症部位的聚集[3].RANTES基因启动子-403位点的G碱基突变为A碱基,影响RANTES基因转录和表达水平,研究发现携带RANTESG-403A的基因型与多种疾病的病情进展有关[4-6].这些发现提示RANTES G-403A多态在炎症过程中起重要作用.我们选择湖南省汉族人为研究对象,探讨RANTES基因启动子G-403A多态性与DN的关系.

细胞核质稳定性的卫士或促细胞凋亡的勇士?--p53基因双重抑癌机理的探讨

近年来,由于先后从人类头颈部肿瘤、肺癌、肠癌恶变的造血干细胞及紫外线照射引起的皮肤癌中分离出突变的p53基因,p53基因从而被归属为抑癌基因.与其它作用专一的癌基因比较,p53基因的抑癌机制牵涉了多方面的作用因而较复杂.p53基因抑制肿瘤生长机制的矛盾焦点,在于其作用点是着重于抑制肿瘤细胞增殖还是促进肿瘤细胞凋亡,亦或二者兼备?围绕此主题本文归纳总结了近4、5年来的研究进展状况.

杀草强对FRTL-5细胞甲状腺激素相关基因转录的影响

目的 观察杀草强对FRTL-5细胞中甲状腺球蛋白基因(tg)、甲状腺过氧化物酶基因(tpo)、钠碘转运体蛋白基因(nis)、促甲状腺激素受体基因(tshr)、甲状腺转录因子基因1(ttf-1)和双链复合蛋白8基因(pax-8)转录的影响,初步探索其干扰甲状腺激素活性的机制.方法 0.001、0.01和0.1 mg/ml杀草强分别处理FRTL-5细胞24 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR观察杀草强对tg、tpo、nis、tshr、pax-8和ttf-1基因转录的影响.结果 杀草强各剂量组使tg基因转录均显著增强;杀草强高剂量组使pax-8和tshr基因转录显著降低,使ttf-1基因转录显著降低;杀草强各剂量组对tpo和nis基因无显著影响.结论 杀草强干扰甲状腺激素活性可能与其对tg,tshr,pax-8和ttf-1基因的影响有关.

STAT1与支气管哮喘

在研究干扰素信号转导机制的过程中发现一种转录因子,可以在外界信号的刺激下激活并直接转入细胞核内引发相应靶基因的转录,因此被称为信号转导子和转录激活子(signal transducers and activators of transcription, STAT)[1] .STATs是由STAT基因编码的,在胞质内以一种潜伏的单体形式存在的蛋白家族,广泛分布于组织和细胞中.在小鼠发育早期,STAT1存在于蜕膜内.STAT1是连接多种细胞膜受体与选择性效应器之间信号转导的主要蛋白质,在细胞因子调节网络中起着重要作用[2].近年来,STAT1在炎症性疾病及免疫性疾病中发挥的重要作用已逐渐引起人们的重视.本文就STAT1的结构、功能及其与支气管哮喘的相关性研究进展作一综述.

双肾双夹肾性高血压大鼠左心室原癌基因c-fos表达的变化

目的:测定双肾双夹(2K2C)肾性高血压大鼠早期,左心室原癌基因c-fos mRNA水平的变化.方法:实验分二组:对照组、2K2C组.术后24 h、36 h、48 h、72 h测动脉血压;提取左心室总RNA,与α-32P标记的c-fos cDNA探针作斑点杂交.结果:在各观察时间点,双肾双夹肾性高血压大鼠左心室c-fos mRNA均呈低水平表达,与对照组差异无显著性.结论:在2K2C肾性高血压早期,随着血压升高,左心室c-fos基因表达无明显改变.

SYBR Green荧光定量PCR检测外源ATP7B对于内源CP基因转录的影响

[目的]应用SYBR Green荧光定量PCR检测在正常BRL细胞中短暂转染人ATP7B cDNA后CP基因的转录情况.[方法]分为空质粒组(转染空质粒Kbpala/Alb)和处理组(转染野生型Kbpala/Alb-ATP7B),分别于转染后0、4、8、12、24、48、72、168 h提取mRNA,逆转录后行SYBR Green荧光PCR检测人ATP7B cDNA及大鼠CP基因的转录情况.SAS11.0统计软件进行数据处理和分析.[结果]人ATP7B cDNA在短暂转染后约48h转录达高峰,可持续至转染后7 d以上;经方差分析,空质粒组转染后各时间点CP基因的转录水平与t=0 h相比较P＞0.05;处理组亦是.[结论]外源ATP7B cDNA的转染及表达对于内源性CP基因的转录无影响.

胰岛素与福辛普利对血管紧张素Ⅱ受体1基因转录影响的实验

[目的]观察长期注射胰岛素(INS)及喂食福辛普利对自发性高血压大鼠(SHR)血压、血浆INS浓度、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度、心肌AngⅡ含量及心肌血管紧张素Ⅱ受体1(AT1-R)基因转录的影响.[方法]32只10周龄SHR随机分为4组,1A组:注射INS(5U@kg-1@d-1),服福辛普利(5mg@kg-1@d-1);2A组:注射蒸馏水(0.05mL@kg-1@d-1),服福辛普利(5mg@kg-1@d-1);1B组:注射INS(5U@kg-1@d-1),服安慰剂(5mg@kg-1@d-1);2B组:注射蒸馏水(0.05mL@kg-1@d-1),服安慰剂(5mg@kg-1@d-1).实验前及实验中每2周测大鼠尾动脉血压,9周后抽血并处死动物取材,测量血浆INS、血浆AngⅡ、心肌AngⅡ含量及心肌AT1RmRNA水平.[结果]注射INS的1A、1B两组血浆INS较注射蒸馏水的2A、2B两组高(P<0.01);1A与1B间及2A与2B组间SHR的血压、心肌AngⅡ含量、心肌AT1-RmRNA比较无显著性差异(P>0.05);用福辛普利的1A、2A两组SHR的血压、心肌AngⅡ含量及心肌AT1-RmRNA水平均较服安慰剂的1B、2B两组低(P<0.05);1A组与2A组血浆AngⅡ浓度比较无显著差异(P>0.05);1B组血浆AngⅡ浓度显著高于2B组(P<0.05).[结论]长期注射INS对SHR血压、心肌AngⅡ含量及心肌AT1-R基因转录水平均无显著影响;而福辛普利不但降低SHR血压,还降低心肌AngⅡ含量,并下调其心肌AT1-R的基因转录.

NF-κB在支气管哮喘中的作用及临床意义

支气管哮喘是一种以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞浸润为特征,同时有多种细胞因子、炎性介质参与的气道变应性炎症.随着细胞生物学与分子生化学的研究进展,许多与气道炎症有关的细胞因子日益受到重视.NF-κB(nuclear factorκ B)是炎症基因转录过程中的调节因子,又称之为转录因子.目前研究认为NF-κB信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡等病理过程.NF-κB活化与支气管哮喘等疾病关系密切[1].抑制NF-κB的激活在支气管哮喘的治疗中有重要的临床意义.

NF-κB在泌尿系肿瘤中的研究进展

核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)又称核转录因子,具有和某些基因上启动子区的固定核苷酸序列结合而启动基因转录的功能.在非激活条件下,NF-κB在大多数细胞类型的细胞浆内与其抑制蛋白IκB家族紧密结合而呈无活性状态.NF-κB在激活后,从细胞质进入细胞核参与调控多种基因的转录.大量研究表明,它可以被多种刺激剂,如TNF-α、IL-1、蛋白激酶C激活剂、脂多糖(LPS)等激活[1-2].NF-κB广泛存在于各种细胞中,通过调控细胞激酶、趋化因子、生长因子、细胞黏附因子及早期反应的蛋白质分子基因的转录而参与炎症和免疫反应、细胞凋亡、细胞增殖分化和迁移等病理生理过程[3].其持续活化可作为多种实体肿瘤的标志,现就其与泌尿系肿瘤关系的研究进展作一综述.

星形胶质细胞在阿尔茨海默病中的作用

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一类病因未明的神经系统变性疾病,它以老年斑(SP),神经元纤维缠结(NFT)和突触丢失为主要病理改变[1-2].在AD患者脑组织中可观察到某些脑区神经细胞的广泛丢失及动脉粥样硬化(AS)弥漫增生,且大多数AS位于损害的周围.AS作为胶质细胞的主要类别,几乎囊括了胶质细胞的所有功能,AD患者AS的激活及其所分泌细胞因子的改变通常比典型的病理改变早十数年.AS活化后产生和释放的神经递质、神经营养因子和毒性代谢产物,在受体、离子通道、抗原传递、基因转录等各级水平全面影响和调节神经元的兴奋性,参与AD的发病过程[3-4].在病理条件下活化的AS对神经细胞既有毒性作用又有保护作用.本文将近年来AS在AD发病中的作用研究进展作一综述.

IKK/IкB/NF-кB信号通路阻断及临床应用

核因子Kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-кB)是一种具有多项转录调节作用的蛋白质,NF-кB信号传导途径参与应激反应和免疫细胞活化、增殖、分化、凋亡及肿瘤形成等相关的400多种基因转录的调控[1].现已证实在多种急慢性炎症性疾病、肿瘤和变态反应性疾病发生过程中发挥重要作用.