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幕上星形细胞瘤MR征象与肿瘤血管形成的对照研究
目的探讨星形细胞瘤MR征象与肿瘤血管形成的相关性.方法研究68例幕上星形细胞瘤, 术前进行MRI检查及术后病理证实的幕上星形细胞瘤石蜡标本进行免疫组化染色,测定微血管密度(MVD),并测量MR图像上肿瘤大小、坏死、出血、信号均匀度、瘤周水肿范围、增强扫描强化程度及形态.结果 MR图像中,星形细胞瘤坏死、出血、信号不均匀,水肿及强化程度与MVD密切相关,且随肿瘤恶性度增加,MVD值增高(P<0.01).结论星形细胞瘤MR征象与肿瘤血管形成密切相关,MRI能间接反映星形细胞瘤的分子生物学行为.
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免疫组化在脑膜瘤诊断及治疗中的应用
目前,临床上病理医师对脑膜瘤的诊断仍依靠肿瘤所表现出的形态特征来判断其病理亚型,但脑膜瘤细胞不仅具有多种形态及其成分,且各种细胞及其成分之间有移行,部分病理易造成误诊,往往需要借助其他辅助手段。免疫组化技术把传统的病理形态学推向分子水平,这一有力的辅助工具使得许多肿瘤病得以明确诊断。由于不同级别的脑膜瘤具有不同的生物学特性,故免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、指导临床治疗和预后判断等方面产生了重大的影响。本文参考近年来文献报道,阐述免疫组化在脑膜瘤诊治方面的应用,其主要表现在以下几个方面。
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用白细胞共同抗原45去除白细胞对流式细胞仪测定肿瘤细胞干扰的探讨
流式细胞仪( FCM)是通过荧光抗原抗体技术进行细胞测量的先进仪器.穿刺活检术为肺良恶性肿瘤鉴别诊断和标记物检测提供了安全、准确、微创的途径.越来越多的临床研究关注肿瘤相关基因蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用,而蛋白表达水平在肿瘤细胞和正常细胞间存在差异[1-3],以往的工作多以免疫组化技术为手段,但在定量分析方面受到限制;而FCM快速进行多参数测量,特别是在混合细胞中可通过相应标记对细胞进行分类和定量.
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免疫组化技术检测膀胱癌尿脱落细胞角蛋白20的临床价值
非侵入性的尿脱落细胞检查对膀胱癌早期诊断、监测复发及预后判断具有实用性,但受主、客观因素的影响,其敏感性受到一定限制。细胞角蛋白(CK)是一个大家族,其中CK20正用于膀胱癌早期诊断及预后观察的研究。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检查尿标本CK20,目前认为是比常规尿脱落细胞(HE)染色更敏感的方法。但RT-PCR需特殊的仪器设备,价格昂贵。免疫组化技术用于细胞学诊断,可以通过直接观察抗原在细胞中的表达来证实和解决许多在常规染色中难以解决的问题,同时也克服了RT-PCR的不足。我们以免疫组化技术检测尿脱落细胞CK20的表达,报道如下。 一、材料和方法 1.检测对象:(1)肿瘤组:40例膀胱癌为本院泌尿科收治的住院患者。全部病例经病理证实,其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级26例,Ⅱ级、Ⅲ级分别为11及3例。初发30例,复发10例。年龄47~79岁。(2)对照组:全部20例病例均为临床明确诊断的住院患者,其中前列腺增生16例,尿路结石4例。 2.方法:免疫组化法使用链霉素亲生物素过氧化物酶连接法(S-P法)。收集晨尿,离心后取沉渣涂片,固定液(无水乙醇∶冰醋酸=3∶1)固定30 min,3%过氧化氢浸泡10 min,胰酶消化10 min,加一抗CK20单抗30 min,加二抗及S-P复合物各10 min,重氮氨基苯(DAB)显色,苏木素复染,各步之间用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2)洗片,以PBS液代替一抗作阴性对照。结果判断:有棕黄色颗粒着色的细胞为阳性细胞。判断标准,本文分“阳性(+)”“阴性(-)”两级。
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Skp2 mRNA及蛋白在大肠腺瘤组织中的表达
目的:研究细胞S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-asociated protein 2,Skp2)在大肠腺瘤组织中的表达.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测20例管状腺瘤、15例绒毛状腺瘤、18例混合性腺瘤和20例正常黏膜组织中SKq2的表达情况.结果:绒毛状腺瘤和混合性腺瘤Skp2 mRNA的表达水平显著高于正常对照组(0.71±0.34,0.63±0.20vs0.34±0.20,P<0.01),而管状腺瘤Skp2 mRNA的相对含量与正常对照组无显著差异,绒毛状腺瘤和混合性腺瘤Skp2 mRNA的相对含量与管状腺瘤组亦有显著差异(0.71±0.34,0.63±0.20 vs0.43±0.22,P<0.05);但是绒毛状腺瘤和混合性腺瘤间无显著差异.大肠管状腺瘤、绒毛状腺瘤、混合性腺瘤及正常组Skp2蛋白表达阳性率分别为15%(3/20)、46.7%(7/15)、27.8%(5/18)和5.0%(1/20),各组间有显著差异(P<0.05).结论:从基因及蛋白水平证明,skp2的阳性表达与大肠腺瘤的组织学类型有关,可能对大肠腺瘤的发生发展起促进作用.
关键词: 大肠腺瘤 激酶相关蛋白2 逆转录聚合酶链式反应 免疫组化技术 -
大黄对大鼠结肠动力及肠神经系统的影响
目的:探讨长期应用大黄对结肠肌电、肠神经系统的影响.方法:建立大鼠"泻剂结肠"模型,应用电生理、组化及免疫组化技术研究大黄对大鼠结肠动力、ENS多种神经递质及Cajal间质细胞(ICC)的影响.结果:大鼠饲养大黄3 mo后,结肠慢波频率减慢;结肠肌间丛NADPH阳性神经细胞数目增多,AchE阳性神经细胞数目减少;NOS免疫反应性增强,SOM免疫反应性减弱;肌间丛ICC分布不均匀,突起连接杂乱.结论:长期应用大黄对结肠动力和ENS有损害作用,在临床治疗顽固性便秘时应避免长期应用大黄等刺激性泻剂.
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IFN治疗慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞HCV的变化
目的:应用荧光定量反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)及免疫组化技术研究慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)丙型肝炎病毒感染并评价干扰素对外周血单个核细胞中HCV的作用.方法:20例慢性丙型病毒性肝炎患者血浆、PBMC中的HCV RNA含量应用荧光定量RT-PCR检测,应用免疫组化技术检测HCV NS3在PBMC中的表达;荧光定量RT-PCR法检测8例血浆及PBMC均阳性患者接受α-2b干扰素治疗;对照组6例血浆及PBMC荧光定量RT-PCR法检测均阳性,未用干扰素治疗.比较治疗前后用药组与对照组血浆及PBMC中HCV RNA载量变化.应用双侧Wilcoxon秩和检验(wilcoxon 2-sample test),确切概率法(fisher'sexacttest)进行数据分析.结果:20例中荧光定量RT-PCR检出血浆15例、PBMC9例阳性;免疫组化法检出7例PBMC阳性.应用确切概率法分析PBMC感染HCV RNA与血浆中病毒水平无相关性(P=0.319).8例患者接受干扰素治疗后其血浆及PBMC中HCV RNA载量均下降,与治疗前相比有显著性差异(aP=0.0 017,bP=0.0 059);与对照组相比治疗后差异有显著性(cP=0.0 042,dP=0.0 155).结论:PB MC是丙型肝炎病毒肝外复制并表达的场所.PBMC感染HCV RNA病毒载量与血浆病毒水平无关.干扰素对PBMC感染的HCVRNA有清除作用.
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肝细胞癌肝动脉化疗栓塞后PCNA和nm23-H1/NDPK的研究
目的:研究肝细胞癌肝动脉化疗栓塞(TACE)对肝肿瘤增生与转移的影响.方法:1992-07/2000-07不能手术切除的大肝癌经TACE治疗后,肿瘤缩小,而后二期手术切除,本组共施使这类手术72例,根据性别、年龄、既往史、肿瘤大小共计10项指标,与同期未经TACE治疗,直接手术切除的肝癌487例进行配对,有32对进入本课题研究.运用免疫组化技术,对比研究了肝癌细胞中的细胞增生核抗原(PCNA),和nm23-H1基因的表达.结果:肝癌经TACE治疗后PCNA的标记指数升高,PCNA标记指数≤25%、26-50%、51-75%、>75%的对照组分别为75%、14.3%、10.7%、0%,TACE治疗组分别为35.7%、21.4%、28.6%、14.3%,(P<0.01,n=28).nm23-H1基因表达肝癌细胞与细胞核中均存在,但治疗组与对照组无显著差异.结论:肝癌经TACE治疗后残留癌的反应性增生使PCNA标计指数升高,导致TACE治疗肝癌远期疗效不理想,所以肝癌TACE后二期手术很有必要.
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丝裂霉素联合舒林酸对胃癌SGC7901细胞诱导凋亡的研究
目的:研究丝裂霉素与舒林酸合用对人胃腺癌SGC7901细胞的生长抑制、诱导凋亡及凋亡相关基因bcl-2和COX-2基因表达的影响.方法:SGC7901胃癌细胞被分为三个实验组,舒林酸组、丝裂霉素组和舒林酸与丝裂霉素联合组.应用光镜、激光共焦显微镜、MTT法、流式细胞仪和免疫组化技术研究三组药物作用后,胃癌细胞的形态学变化、生长抑制、诱导凋亡和对凋亡相关基因Bcl-2和COX-2表达的影响.结果:药物作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等.药物干预24h,联合组和MMC组对胃癌SGC7901细胞诱导的凋亡率分别为12.0%和7.20%.对细胞的增生抑制以联合组强,MMC次之,舒林酸弱.经MMC作用24 h后,COX-2和Bcl-2蛋白表达增强,而联合组出现COX-2蛋白表达减弱,Bcl-2蛋白亦未出现明显升高.结论:人胃癌SGC7901细胞体外实验中,MMC联合舒林酸使用,可使增生抑制加强.MMC可能由于上调COX-2、Bcl-2蛋白,减弱了自身对SGC7901胃癌细胞的诱导凋亡,MMC联合舒林酸可抑制COX-2、Bcl-2表达,从而提高MMC的抗癌效果.
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塞莱西布体外对人类肝胃癌细胞生长的抑制作用
目的:研究塞莱西布在体外对人类肝癌7721细胞以及胃癌7901细胞的生长抑制作用.方法:两种肿瘤细胞用含不同浓度(0,20,40,80,160和320 pmol/L)的塞莱西布的培养液培养.应用MTT测定法来测定生长抑制率,电镜技术来观察细胞凋亡情况,免疫组化技术来检测细胞内Cox-2蛋白含量.结果:塞莱西布对两种肿瘤细胞均具有生长抑制作用(塞莱西布320 pmol/L时两种肿瘤细胞抑制率分别为49.1%和42.9%),并呈现量-效关系.电镜下可观察到凋亡细胞.免疫组化发现细胞内环氧化酶的含量在处理前后有明显变化.结论:在体外,塞莱西布抑制人类肝癌及胃癌细胞生长,诱导他们产生凋亡,并且该作用与细胞内环氧化酶含量有密切关系.
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胃癌组织血小板衍化内皮细胞生长因子、环氧化酶2的表达与血管生成和细胞凋亡的关系
目的:探讨血小板衍化内皮细胞生长因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)和环氧化酶2(Cox-2)在胃癌组织中的表达及与血管生成和细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组化技术对67例胃癌组织进行PD-ECGF、Cox-2及肿瘤组织微血管密度(microvascular density,MVD)检测,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:PD-ECGF的表达与胃癌淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P<0.05)及组织分型(P<0.05)显著相关,Cox-2的表达与胃癌淋巴结转移(P<0.01)显著相关;二者与MVD(P<0.01)显著正相关,与AI(P<0.01)显著负相关,二者共同表达阳性者MVD显著高于共同表达阴性者(P<0.01),二者共同表达阳性者AI显著低于共同表达阴性者(P<0.01).结论:胃癌组织中PD-ECGF和Cox-2可促进血管生成,抑制胃癌细胞凋亡,二者起协同作用,促进胃癌的增生与转移.
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胰腺癌p53上下游基因Mdm2、p21WAF/CIP1以及p14ARF蛋白的表达及相互作用关系
在肿瘤的形成过程中,有两条通路研究的较为深入,即pRb(p16-pRb-cyclin D1)和p53(ARF-Mdm2-p53-p21WAF/CIP1)通路,由于p53突变在胰腺癌中是一主要事件,我们利用传统的免疫组化技术并结合新兴的组织芯片技术检测p53通路中相关基因:ARF、Mdm2、p53和p21在胰腺癌、癌旁与良性病变组织中的表达情况,以探讨四种蛋白在胰腺癌组织中的改变情况、临床意义及相互作用关系.
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经皮肺穿刺活检有关问题探讨
胸部包括肺、纵隔、胸膜等病灶的穿刺活检是临床常用的诊断手段,适用于肺部孤立和多发病灶的鉴别诊断,纵隔良恶性肿瘤的鉴别诊断,也可取得局部感染病原学资料以确定治疗方案。作为创伤性检查,我们应何时选择何种操作手段?肺穿刺活检的临床价值怎样?其安全性如何?这些问题值得探讨的。 同样是为取得活检组织,临床可选择纤维支气管镜(纤支镜)下活检、经皮肺穿刺和开胸活检。开胸活检容易取得满意组织而明确诊断,但显然创伤大,危险性高,临床少用。选择纤支镜下活检还是经皮肺穿刺,需根据病灶的部位、患者的状况等综合判断。一般外周肺特别是靠近胸壁的病灶宜用经皮肺穿刺,而病灶靠近纵隔或有肺气肿的患者则应首选纤支镜检查,纵隔或肺门淋巴结肿大用经纤支镜淋巴结穿刺(TBNA)或纵隔镜应比经皮穿刺安全可靠。 经皮肺穿刺的穿刺针有抽吸细针和切割针两大类,前者是用负压吸出物作细胞学检查,后者则是切取小段组织作组织病理学检查。近年由于脱落细胞学和免疫组化技术的发展,细针穿刺因其创伤小而安全的优点得到更广泛的应用。特别是靠近大血管等重要脏器或多血管的病灶,以细针穿刺为宜。但细针穿刺由于细胞学检查和标本量的限制,诊断的敏感性要低于切割活检针,特别是对良性病变诊断的敏感性更是低很多(16.7%对81.7%)[1]。
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碱性成纤维细胞生长因子、α-平滑肌肌动蛋白与慢性乙型肝炎肝纤维化的相关性研究
目前,国内对于平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在慢性乙型肝炎肝纤维化形成和发展过程中的作用研究已比较成熟,但对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与肝纤维化的关系,以及bFGF和α-SMA二者之间的对比分析方面报道较少.为此,我们通过免疫组化技术,对111例慢性乙型肝炎患者的肝组织活检标本进行bFGF和α-SMA检测,通过观察二者在肝组织中的表达及定位情况,探讨bFGF及α-SMA在慢性乙型肝炎肝纤维化演变过程和病情进展中的作用及临床意义以及二者之间的相关性.
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转录激活因子ELK-1在持续性心房颤动患者心房肌中表达下调
心房颤动(房颤)是临床上常见的心律紊乱之一,其发病机制尚不甚清楚.目前证实,心房肌的电生理重构和结构重构是房颤发生、发展的基础.近发现,心房肌在房颤状态下的重构是适应性的逆向分化.转录激活因子ETS样蛋白1(ETS-like1,ELK-1)作为ETS家族(命名缘于禽类白血病病毒基因E26)成员之一,在细胞分化调节中起着重要作用[1].因此推测,转录激活因子ELK-1参与调控房颤心房肌的分子和结构重构.本实验采用Westernblot和免疫组化技术,观察了转录激活因子ELK-1在房颤心房肌的表达改变,以验证假设是否成立.
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胃肠间质瘤临床病例解析
1 概述胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)是一个随着临床病理技术发展而在近年来特别是近4年来逐渐成熟的概念.它是一种胃肠道肌层的少见的非上皮性肿瘤,起源于Cajal细胞,是由于c-kit原癌基因编码的c-kit蛋白发生变异而引起的肿瘤,约占胃肠道肿瘤的0.1%~3.0%,以往常诊断为平滑肌源性或神经源性肿瘤.近年来随着电镜、免疫组化技术的应用和对其深入研究,已证实GISTs为非定向分化的肿瘤.大量研究表明,以往诊断的胃肠道平滑肌肿瘤及神经鞘瘤大多数都属于GISTs,近年来(我院)诊断GISTs的患者也因而有越发增多之趋势,但目前GISTs的术前误诊率仍较高.
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肝癌组织微血管密度及其相关因素的实验研究
本研究采用VEGF和FⅧ因子染色的免疫组化技术,观察肝癌组织连续切片中VEGF阳性表达和微血管密度(MVD),以探讨两者与肝癌肿块大小、病灶数目及门脉癌栓等的关系.
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粘附分子CD54、E-钙粘素及CD44在肝内胆管癌中的表达
为探讨粘附分子在肝内胆管癌中表达的意义,本研究采用免疫组化技术对3种粘附分子CD54、E-钙粘素(E-cadherin)及CD44在29例原发性肝内胆管癌中的表达进行了分析.
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膀胱癌MDM2、p53基因表达的临床意义
我们运用点杂交、PCR-SSCP、免疫组化技术(IHC)分别对膀胱移行细胞癌(TCC)组织和配对癌旁组织,以及非TCC正常膀胱粘膜组织中MDM2基因扩增和表达,p53表达和点突变情况进行对比检测,报告如下.
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PTTG和血管生成与原发性胆囊癌的相关性研究
新近发现垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)高表达与多种恶性肿瘤生物学行为、肿瘤血管形成及预后密切相关\.笔者采用免疫组化技术,检测胆囊癌及胆囊炎组织中PTTG的表达情况及其微血管密度(micro vessel density,MVD),并结合患者的临床病理指标,探讨PTTG蛋白表达和血管生成与胆囊癌生物学行为的关系,以及PTTG与肿瘤血管生成的关系和意义.