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应用分子伴侣共表达系统表达结核分枝杆菌编码蛋白
目的 研究共同表达分子伴侣能否提高结核分枝杆菌编码基因的表达效率及被表达蛋白的生物活性.方法 将携带有结核分枝杆菌编码基因的表达质粒Rv3790::pET16b、Rv3791::pET16b与能够同时表达3个分子伴侣DnaK、DnaJ和GrpE的质粒pkJE7共同在大肠埃希菌BL21(DE3)表达,之后对所获得的蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印记分析(Western Blot)检测蛋白产量,并分析蛋白的活性.以Rv3790::pET16b、Rv3791::pET16b单独在BL21(DE3)内的表达作为对照.结果 与分子伴侣共表达的结核分枝杆菌编码基因相对于目的基因单独表达时获得较多的可溶性蛋白,较少的包涵体和蛋白降解;共表达的蛋白也具有相对较好的活性.结论 共同表达分子伴侣能够提高某些结核分枝杆菌编码蛋白的表达效率和生物活性.
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p63、calponin和SMM-HC联合标记在乳腺增生性病变中表达的比较
在乳腺良性增生性疾病中,腺体周围肌上皮存在,而恶性病变出现浸润时肌上皮消失.因此乳腺肌上皮细胞是否存在对鉴别良、恶性病变具有重要的鉴别诊断价值.以前认为肌动蛋白异构体是乳腺肌上皮细胞较好的标记物,后又发现肌动蛋白结合蛋白(calponin)和平滑肌球蛋白重链(SMM-HC)的特异性优于肌动蛋白异构体,但仍未解决平滑肌细胞和肌纤维母细胞共同表达的问题.近年来,p63蛋白的应用解决了以上抗体交叉后反应的问题,使得一些构象复杂的乳腺上皮性病变易于诊断.本文应用p63、calponin和SMM-HC 3种抗体联合标记,对41例乳腺良、恶性病变进行比较,探讨3种抗体联合应用在乳腺疾病诊断中的意义.
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九干扰素及其临床应用(续)十其他Ⅰ型干扰素
1 干扰素-δ(interferon delta,IFN-δ)干扰素-δ(interferon delta,IFN-δ)是8~12 d孕期(在子宫植床期)的猪孕体的滋养外胚叶与干扰素-δ共同表达的1型干扰素蛋白质.
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胃癌细胞中P-糖蛋白和P53蛋白检测的意义
目的:检测多药耐药基因产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和P53蛋白在胃癌细胞中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化法,对66例胃癌标本进行检测.结果:在未接受化疗胃癌患者的癌组织,P-gp和P53表达分别为34.5%和40.1%,P-gp表达与癌细胞分化程度有关(P<0.05),P53表达与淋巴结转移有关(P<0.01).P-g1p和P53共同表达阳性者18例,共同表达阴性者24例,呈协同表达,二者间有显著差异(P<0.05).结论:对胃癌术后标本进行P-gp和P53蛋白检测,揭示患者原发性耐药,指导临床治疗方案的制定,从而使化疗个体化.
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胃癌组织血小板衍化内皮细胞生长因子、环氧化酶2的表达与血管生成和细胞凋亡的关系
目的:探讨血小板衍化内皮细胞生长因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)和环氧化酶2(Cox-2)在胃癌组织中的表达及与血管生成和细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组化技术对67例胃癌组织进行PD-ECGF、Cox-2及肿瘤组织微血管密度(microvascular density,MVD)检测,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:PD-ECGF的表达与胃癌淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P<0.05)及组织分型(P<0.05)显著相关,Cox-2的表达与胃癌淋巴结转移(P<0.01)显著相关;二者与MVD(P<0.01)显著正相关,与AI(P<0.01)显著负相关,二者共同表达阳性者MVD显著高于共同表达阴性者(P<0.01),二者共同表达阳性者AI显著低于共同表达阴性者(P<0.01).结论:胃癌组织中PD-ECGF和Cox-2可促进血管生成,抑制胃癌细胞凋亡,二者起协同作用,促进胃癌的增生与转移.
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脐血免疫功能研究进展
免疫系统是机体重要的防御系统,免疫功能低下与多种疾病的发生发展密切相关,故一直是基础医学和临床医学的研究重点.由于在新生儿时期免疫系统并未完全发育成熟,故其功能与儿童及成人有较大差别.近年来,有关新生儿脐血免疫功能的研究取得了很大进展,现对此作一综述.一、脐血的T淋巴细胞亚群脐血的T淋巴细胞数及亚群与成人和儿童有明显不同.早期应用单克隆抗体技术研究人类T淋巴细胞发育,发现随着T淋巴细胞成熟其表面抗原呈规律性表达,功能也随之变化.根据其表型,把T淋巴细胞的发育分为胸腺内和外周血两个阶段.胸腺内的发育分为三个时期,早期胸腺细胞(Ⅰ期)表达T9、T10抗原;普通胸腺细胞(Ⅱ期)丢失T9,获得T6,保留T10,共同表达T4和T8;成熟胸腺细胞(Ⅲ期)则T6消失,获得成熟T淋巴细胞抗原T3,并开始分化为T3+T4+T10+和T3+T8+T10+两个不同功能的细胞群,然后T10丢失进入外周血成为T3+T34+和T3+T8+两个成熟的T淋巴细胞亚群.脐血T3+细胞数较成人外周血少,T6+细胞占10%~15%,T10+细胞数则高达50%以上;成人外周血几乎无T6+细胞,T10+细胞《10%,T4+和T8+细胞的总和基本上等于T3+细胞数.Rabian-herzog等[1]研究表明,脐血淋巴细胞多属幼稚细胞或为处于抑制状态的淋巴细胞.表现为脐血T淋巴细胞白细胞介素2(IL-2)受体及HLA-DR表达明显
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新生儿淋巴细胞功能研究进展
近年来,有关新生儿淋巴细胞免疫功能的研究取得了很大进展,现对此作一综述。 一、 T淋巴细胞亚群及细胞因子 新生儿脐血淋巴细胞绝对数及其亚群与成人及儿童有明显不同。D′Arena等[1]研究发现,脐血淋巴细胞绝对数明显多于成人,但T细胞表型不成熟,T淋巴细胞亚群百分率与成人比较有明显差别,分别是:CD+3细胞(59.9±12.0)%与(74.9±4.6)%;CD-3CD+16和(或)CD+56(NK)细胞为(23.8±10.1)%与(10.8±5.3)%,CD+3CD+16和(或)CD+56细胞毒T细胞为(0.3±0.3)%与(10.7±4.1)%。足月儿脐血尚含有CD+3CD+25和CD3HLADR+活性T细胞。大多数脐血T细胞共同表达CD45RA幼稚抗原,而成人外周血T细胞则含有数量较多的CD45RO+记忆细胞。Murphy等[2]的研究表明,脐血单核细胞表达低荧光强度的CD14(CDdim14)细胞水平明显低于成人,脐血CDdim14 细胞表达人类白细胞抗原的百分率也明显低于成人;而高荧光强度的CD14(CDbright14)细胞表达CD36(OKM5 )的能力却高于成人。表明脐血单核细胞表达特异性抗原的能力与成人不同,脐血中“抑制”或“幼稚”T淋巴细胞占绝对多数。
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肿瘤细胞表面血小板免疫相关抗原的表达及其意义
血小板与肿瘤细胞通过各自膜表面表达的糖蛋白受体及其配基的连接作用相互激活以影响肿瘤细胞的转移过程,但在这方面的研究较少.我们曾用CD41、CD61、CD42a、CD42b、CD62、CD63、CD31、CD9、TSP、CD36等血小板单克隆抗体检测11种人癌细胞系,发现它们共同表达CD9、CD42a、TSP、CD63,人胃癌细胞系MGC803还同时表达CD36[1].我们拟对上述肿瘤细胞表面表达的血小板免疫相关抗原的意义进行讨论.
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Ptch2基因结构及功能分析
Ptch2基因位于人类1号染色体短臂1p33-34区,其外显子具有两种编码转录方式,编码蛋白是Hh蛋白的受体和Smo活性的负调控因子,在胚胎发育中Ptch2多与Shh在上皮共同表达,Ptch2还是肿瘤抑制因子,其基因变异与神经纤维瘤病1型,痣样基底细胞癌综合征及生殖细胞肿瘤等相关.
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脑膜瘤中雄激素受体研究进展
脑膜瘤是惟一女性多见的中枢神经系统肿瘤,在颅内及椎管内其男女发病比例分别为1:2.5和1:9,而且主要见于高生殖活性期(30~50岁).Cushing等在1938年就描述了脑膜瘤患者在妊娠时症状加重.其他学者也证实,脑膜瘤患者在妊娠和月经周期黄体期生长加快,临床症状明显.这些资料表明脑膜瘤对性激素敏感,是性激素的靶组织,部分脑膜瘤具有激素依赖性.近年来研究表明脑膜瘤中存在雄激素受体(AR)表达,AR在脑膜瘤中与孕激素受体(PR)共同表达,且呈正相关[1].随着AR在多种肿瘤如乳腺癌、前列腺癌中的作用被证实[2,3],人们对脑膜瘤的AR也有了更深一步的研究.
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基因突变致β细胞KATP通道超敏感性可致新生鼠严重糖尿病
β细胞中葡萄糖升高致ATP/ADP比值升高,从而关闭K通道导致细胞去极化,Ca2+内流使胰岛素分泌而降低血糖。因而人们推测基因突变致β细胞中KATP通道对ATP/ADP升高的敏感性降低,继而胰岛素分泌不足而致糖尿病。 方法与设计构建突变KATP基因质粒重组子,分别为Kir 6.2亚单位N端2-30缺失(Kir 6.2[△N2-30])及Kir 6.2亚单位N端2-30缺失合并185点突变(Kir 6.2[△N2-30,K185Q])。将两种突变基因于C端与绿荧光蛋白(GTP)融合(以利于检测),使其与KATP磺脲类受体1亚单位DNA共同表达形成功能性KATP。将构建质粒注入C57B16*CBA鼠卵中,使其在胰岛素启动子1控制下于胰岛β细胞中表达。培养基因突变小鼠。 结果在60只新生鼠中未检测到1只携有Kir 6.2[△N2-30,K185Q]基因,而检测到5只携带Kir 6.2[△N2-30]基因。将这5只鼠与CD-1系鼠繁殖建立5种转基因鼠系。结果5种鼠系中有4系原代鼠均血糖正常且发育正常,而其所有F1代鼠均有严重高血糖、低胰岛素血症、血D-3-羟丁酸水平显著升高,且大多于5 d内死亡,或者体重显著降低而需胰岛素维持。另外1系F1代小鼠同样携带Kir 6.2[△N2-30]基因,但研究发现其胰岛中受累β细胞非常少,因而其血糖正常。同时,研究还发现所有小鼠胰岛的形态、胰岛素的定位,β细胞的分布均正常。 结论研究证实KATP通道的高敏感性,也即对ATP/ADP升高的反应性降低可以抑制胰岛素的分泌,导致严重糖尿病发生。
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消化系统肿瘤治疗以环氧合酶-2和5-脂氧合酶双通路作为靶点的研究进展
花生四烯酸(arachidonic acid,AA)主要通过环氧合酶(cyclooxygenase,COX),脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)通路代谢.研究表明,COX和LOX在多种人类肿瘤中呈高表达.其中,COX-2和5-LOX在某些肿瘤中还出现共同表达,其代谢产物在肿瘤的发生发展过程中起重要作用.
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表皮生长因子受体家族EGFR、c-erbB-2和c-erbB-3在大肠肿瘤中的表达
目的:探讨表皮生长因子受体家族EGFR、c-erbB-2和c-erbB-3三种蛋白的共同表达与大肠良恶性肿瘤的关系.方法:选取病理检查证实的大肠息肉、大肠腺瘤和大肠腺癌共151例,采用免疫组化ENVISION技术分别对所选取的标本进行EGFR、c-erbB-2和c-erbB-3检测,并对结果进行统计学分析.结果:增生性息肉组EGFR、c-erbB-2和c-erbB-3三者单一表达或三者均不表达的比率较高(42.86%和35.71%),二者和三者共同表达的比率低(19.05%和2.38%);腺瘤与腺癌组均出现较高的二者和三者同时表达的比率,而三者共同表达在腺癌组中的比率明显高于息肉组和腺瘤组(P<0.01).大肠息肉中,c-erbB-2单一表达率较高(28.57%);腺瘤和腺癌中分别有一种蛋白不出现单一表达,为c-erbB-3和c-erbB-2;在大肠息肉和腺瘤中,均未出现有c-erbB-3与EGFR的共同表达.结论:在不同类型的大肠肿瘤中,EGFR家族蛋白的表达或共同表达具有不同特点;在大肠癌的发生发展中,三种蛋白在信号传导过程中呈共同表达.
关键词: 表皮生长因子受体家族 共同表达 大肠肿瘤 -
肺硬化性血管瘤的病理分析
目的 探讨肺硬化性血管瘤的临床病理特点.方法 回顾性分析16例经手术切除的肺硬化性血管瘤的临床病理学资料和免疫组化标记物的表达情况.结果 16例肺硬化性血管瘤男女之比为0.1:1,平均年龄50.9岁.患者通常无症状.影像学为一孤立的境界清楚的高密度结节,单侧发生,右肺略多于左肺,位于肺周边部.镜下瘤组织形态多样,主要有四种基本结构和两种细胞:(1)乳头状结构;(2)实性细胞区;(3)肺泡内出血;(4)硬化性变化.此四种结构以不同比例混和存在.实性细胞区内的圆形或多角形细胞、乳头表面衬覆的立方细胞.免疫组化标记两种细胞均共同表达TTF-1和EMA.结论 肺硬化性血管瘤多见于女性.通常无症状,影像学为一孤立的境界清楚的高密度结节.病理学有其特征性表现.免疫组化检测对其诊断和搭别诊断有帮助.
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表皮生长因子受体和环氧化酶-2在前列腺癌中的共同表达和意义
目的:探讨表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和环氧化酶-2(Cyclooxyge-nase-2,COX-2)在前列腺癌(Prostate cancer,PCa)中的共同表达和临床意义.方法:采用免疫组织化学法(SP)测定48例PCa中EGFR和COX-2阳性表达情况,按免疫组织化学结果分为EGFR(-)COX-2(-)、EGFR(-)COX-2(+)、EGFR(+)COX-2(-)和EGFR(+)COX-2(+)四组,分析它们表达与临床病理和预后的关系.结果:EGFR、COX-2阳性在PCa中为34例(70.8%)、21例(45.8%),两者的表达在PCa中无相关性(r=0.04,P=0.80),EGFR和COX-2共同表达有16例(33.3%),和Gleason评分、PSA水平有关(P<0.05),5年复发率83.1%,显著高于EGFR(+)COX-2(-)(27.8%)、EGFR(-)COX 2(+)(16.7%)和EGFR(-)COX-2(-)(12.5%)(P<0.05);13例转移PCa中有10例为EGFR(+)COX-2(+)(62.5%),显著高于其他三组(P<0.05).结论:EGFR和COX-2在PCa中表达无相关性,但其共同表达可以作为判断PCa预后的重要标志.
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长链非编码RNA在2种乳腺癌耐药性细胞中的表达分析和功能预测
目的:发掘在乳腺癌耐药性细胞中表达错调的长链非编码RNA( long noncoding RNA, lncRNA)。方法:对敏感和耐药性乳腺癌细胞中的lncRNA表达分别进行芯片检测。检测后结果经生物信息统计学分析对lncRNA进行归类和功能网络预测。结果:与敏感细胞相比,他莫昔芬和曲妥珠单抗耐药细胞中表达上调和下调的lncRNA分别为2107、611、1154和2141种,其中在2种耐药细胞株中共同表达错调的有93种。对共同表达上调的69种lncRNA的功能预测发现2种与在乳腺癌耐药性中发挥作用的蛋白编码基因或microRNA相关,2种参与有丝分裂节点或DNA损伤引发的细胞死亡。结论:本研究发现大量在他莫昔芬与曲妥珠单抗耐药细胞中异常表达的lncRNAs,但同时在2种细胞中异常表达的数量极少,提示lncRNAs在肿瘤药物耐药性中具有较强特异性。本研究还通过生物信息学分析,建立了一种新型的基于功能预测的靶基因筛选方法。
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肿瘤相关胰蛋白酶抑制因子
TATI首次是从卵巢癌患者尿中分离出来的[1],在粘(乳糜)蛋白状的卵巢癌组织中,TATI是一种高浓度的多肽产物,但在其他几种肿瘤中也见表达;它与早期描述的胰腺分泌型胰蛋白抑制物(PSTI)是完全相同的[2],TSTI又称Kazal抑制剂[3].临床上,TATI主要用来监测粘蛋白状卵巢癌病人,但在很多类型的肿瘤中,TATI血清浓度也见升高;有卵巢癌、膀胱癌、肾癌中,TATI是一种预后不良的标记物.这些发现可用TATI和TAT共同表达来解释,TAT被认为参与肿瘤相关蛋白酶串联,与肿瘤侵袭性有关[4].
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细胞色素P450 1A2的转基因细胞及其应用
1引言细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、杂环胺、黄曲霉素B1等许多类化合物.转CYP1A2的各种细胞系的建立为研究CYP1A2的功能提供了新的工具.到目前为止,已经建立的细胞系有细菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞.近,CYP1A2和其他微粒体电子转运系统如NADPH-细胞色素P450还原酶共同表达成功,提高了异源性CYP1A2的代谢能力.另外,为了重建杂环胺的完全代谢活化系统,建立了同时表达CYP1A2和二相酶(phase Ⅱ enzyme)N-乙酰转移酶的细胞系.各种永生的细胞系已经在毒理学试验领域内取得发展.下面按不同的细胞系说明它们的应用.