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面粉中的“隐形杀手”-呕吐毒素
“国以民为本，民以食为天，食以面为先”，中国美食文化博大精深，魅力无处不在。“面”作为古老的食物之一，至今仍受到无数人的追捧，尤其是北方地区，更是将面作为主食—一日三餐，面为之主。想必大家一定知道面粉，这是人们日常生活必不可少的一部分。但是，食品药品监管部门食品安全监督抽检时发现个别小麦粉产品脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，简称“DON”）超过标准限量值，引起大家的关注。何为DON，有何危害，如何检测呢？
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性研究进展
霉菌毒素是各种霉菌在适当的温度、湿度和基质中产生的高毒性代谢产物.曲霉、青霉和镰刀菌是产生毒素的主要霉菌.至今人们已知道大约有300种不同的霉菌毒素,但仅有少数被认为与畜禽疾病有关系.霉菌毒素的大量摄入,经常会引起急性中毒表现,然而少量摄取,则产生非异性的临床表现,例如,食物摄取量降低、生长不良、增重缓慢、死亡率增加、免疫抑制等.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人外周血单核细胞增殖及肿瘤坏死因子-α分泌的影响
为探讨我国恶性肿瘤高发区居民饮食中的优势污染霉菌毒素-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人体免疫机能的影响,分别以流式细胞光度术(FCM)、细胞计数、甲基噻唑基四唑(MTT)比色、双抗体夹心ELISA方法对DON作用后人外周血单核细胞(HPBM)增殖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌情况进行了研究.FCM检测结果表明,HPBM经PHA预刺激48h后,低浓度DON(50～500ng/ml)处理6h的细胞增殖指数(PI)较对照组明显降低(19.80%～26.01%∶37.84%);而高浓度DON(1000～2000ng/ml)处理24h的细胞PI值则显著高于对照组(35.74%～34.37%∶22.85%).细胞计数和MTT比色法结果显示,在PHA存在的情况下,DON可抑制HPBM的增殖.双抗体夹心ELISA法检测结果显示,500和1000ng/ml的DON可明显降低HPBM TNF-α分泌(P<0.01).研究结果表明,根据作用时间和作用浓度不同及有无PHA刺激,DON对HPBM增殖的影响有所不同,但主要表现为对细胞增殖的抑制作用,并抑制TNF-α的分泌,从而对机体免疫机能造成负面影响.
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DON对体外培养胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响及其可能机制.方法 体外培养的胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823细胞经100、500、1 000μg/L DON处理72h,以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况及其量效关系,流式细胞术、免疫细胞化学和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 FCM定量检测结果表明,DON各处理组细胞凋亡率均高于时照组,且均随DON浓度升高凋亡率相应增加,具有明显量效关系(SGC-7901:r=0.660,P<0.05,n=4;BGC-823:r=0.750,P<0.01,n=4).FCM、免疫细胞化学和Western blot结果显示,DON处理后SGC-7901、BGC-823细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降.结论 DON可剂量依赖地诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达有关.
关键词： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 SGC-7901细胞 BGC-823细胞 细胞凋亡 胃癌 -
Caco-2细胞模型的建立及其在真菌毒素吸收率研究中的应用
目的 构建Caco-2单层细胞转运5种毒素的吸收率模型并验证.方法 以Caco-2细胞系为工具,以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、黄曲霉毒素B1(AFB1)、AFB2、黄曲霉毒素G1(AFG1)和AFG2为研究对象,通过对转运介质溶液中毒素的初始浓度、温度、pH值、抑制剂存在与否等实验条件的优化,构建Caco-2细胞转运DON和4种黄曲霉毒素的生理模型并进行验证.结果 DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2透过Caco-2单层细胞的量和表观渗透系数(Papp)随着体系溶液中pH的升高有下降趋势.AFB1在pH 7.4～7.5溶液中的Papp值高,AFB2、AFG1、AFG2及DON在pH 7.0～7.1溶液中的Papp值高.随着体系温度的升高,DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2的透膜能力均有所增加.无论体系中AFB1、AFG1及AFG2浓度低或高,均在60 min时透过率达到平台期并维持稳定;而AFB2及DON从高浓度到低浓度均在120 min时透过率达到平台期并维持稳定.结论 所建5种毒素Caco-2单层细胞模型灵敏、稳定、可靠、有效.
关键词： Caco-2细胞模型 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 黄曲霉毒素 吸收率 风险评估 -
镰刀菌毒素与黄曲霉毒素的联合毒性研究--AFB1和DON的RDS实验
为了解黄曲霉毒素(AFB1)与镰刀菌毒素的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对DNA损伤修复的影响,用化学物质诱导的细胞增殖的变化实验,(replicative DNA synthesis, RDS)实验进行研究.结果表明:AFB1和DON均可诱导细胞分化的S期DNA的合成,并且二者间存在交互作用.结果提示:AFB1与DON在肿瘤的发生中既以遗传毒性物质的形式发挥作用,又以非遗传毒性物质的形式共同发挥作用.
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T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇全抗原的合成及鉴定
目的 分别合成T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的全抗原.方法 采用琥珀酸酐法对分子结构进行修饰,产生易反应的官能团,并与载体蛋白偶联,从而具备免疫条件,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及偶联蛋白的分子量,用商品化的T-2和DON免疫试剂盒与偶联物进行棋盘滴定验证.结果 T-2和DON的全抗原及BSA的分子量分别为67641.6、66680.4、66297.7,偶联物与免疫试剂盒中T-2和DON的抗体均呈阳性反应.结论 合成的T-2、DON全抗原为相应抗体的制备和免疫学方法的建立奠定了基础.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对BeWo细胞炎症与凋亡相关基因表达的影响
目的 观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)暴露对人胎盘绒毛癌细胞(BeWo细胞)炎症与凋亡相关基因表达的影响.方法 将BeWo细胞进行培养和相应剂量(0 ～ 750 nmol/L) DON暴露,ELISA法检测人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平,qPCR法检测基因白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、环氧酶(Cox)-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3和B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl的表达水平.结果 与空白对照组相比,50 nmol/L DON暴露组炎症和凋亡相关基因的表达呈显著性改变,即炎症相关基因IL-6、TNF-α和Cox-2在3、12和24 h时表达均显著上调(P＜0.01),而IL-8仅在暴露24 h时显著上调(P＜0.01),而凋亡相关基因Caspase-3在3、12和24 h时表达均显著低于对照组(P＜0.01),而Bcl-xl的表达在暴露24 h时显著高于对照组(P＜0.01).结论 BeWo细胞DON暴露时炎症反应增强,凋亡被抑制,推测以上结果可能是DON胚胎发育毒性的潜在分子机制之一.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇分析方法的现状
旨在综述脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的分析方法,比较各自的优、缺点.DON的分析涉及从基质中提取、净化、分离和终的检测等环节,分析效果包括回收率、低检出限、时间、费用、对设备的要求和方法学上的简易程度.
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常见镰刀菌素与细胞凋亡的研究进展
某些常见镰刀菌素如伏马菌素B1、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、镰刀菌烯酮-X可以诱导多种细胞发生凋亡,如肝细胞、肾细胞、胃肠细胞、免疫细胞和传代细胞.这些镰刀菌素诱导细胞凋亡的机制较为复杂,可能与神经鞘氨醇、某些基因如P21、蛋白激酶、CAMP信号系统、细胞内Ca2+水平等许多因素有关.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠成骨细胞Pax1表达的影响
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠成骨细胞骨骼发育相关基因Pax1表达的影响.方法 麻醉后取胎鼠的顶骨,采用改良的组织块培养法体外培养小鼠成骨细胞,碱性磷酸酶法鉴定成骨细胞,将浓度为100、200、500、1000和1500mg/L的DON分别作用于对数生长期的成骨细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测DON对成骨细胞增殖的作用.半定量RT-PCR和Western blotting检测不同剂量DON对体外培养小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达的影响.结果 培养的细胞鉴定为成骨细胞,不同浓度DON能降低小鼠成骨细胞的增殖速度,并可增加小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达,随着DON浓度增加,小鼠成骨细胞Pax1基因表达增多越显著.结论 DON促进小鼠成骨细胞Pax1基因的表达,进而影响骨骼的发育.
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2013年中国小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染调查
目的 了解2013年中国小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的污染状况.方法 从中国28个省(自治区、直辖市)的流通环节,以随机抽样的方式采集定型包装或散装小麦粉样品,用高效液相色谱法测定其DON含量,并对结果进行分析、评估.结果 共检测5678份小麦粉,DON检出率为58.74％,超标率为4.60％,平均含量为317 μg/kg,含量范围0～ 56.1 mg/kg.结论 2013年中国小麦粉中DON污染比较普遍,但超标率并不高;各地区污染程度不同,总体上华东、西南和西北地区超标率相对较高,与当地温湿度条件相关;2013年污染水平与2010年和2011年基本一致,但低于2012年监测结果.
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上海市居民小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰衍生物的暴露评估
目的 了解上海市居民经小麦粉摄入的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其乙酰衍生物3-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-Ac-DON)和15-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-Ac-DON)的暴露总量.方法 利用高效液相色谱-串联质谱法对2011～2013年上海市售小麦粉中DON、3-Ac-DON、15-Ac-DON的含量分别进行检测,计算三者的总量.并结合上海市居民小麦粉摄入数据,以该化合物组的暂定每日大耐受摄入量(PMTDI)1 μg/(kg BW·d)为参考,对上海市居民经小麦粉摄入的DON及其乙酰衍生物的暴露总量分别进行点评估和概率评估.结果 (1)点评估显示,对于受到DON及其乙酰衍生物不同水平污染(均数、P50、P75、P90和P95)的小麦粉,人群在小麦粉均数和P50摄入水平时,毒素暴露总量皆低于PMTDI(占其18％～83％),而在小麦粉P95摄入水平时,毒素暴露总量皆高于PMTDI(为其1.08 ～ 2.55倍).(2)概率评估显示,总人群、小麦粉食用人群和＜15岁人群通过小麦粉摄入的DON及其乙酰衍生物的暴露总量低于PMTDI概率分别为89.99％、87.00％和76.55％.结论 随着小麦粉摄入量的增高,上海市居民的DON及其乙酰衍生物的暴露风险增高;多数人摄入小麦粉是安全的,但有10.01％的人群处于风险状态,其中＜15岁人群是DON及其乙酰衍生物暴露的高危人群.
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面粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的研制
目的 目前国内尚缺乏用于质量控制的镰刀菌毒素类生物标准物质,通过研制面粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇化合物的标准物质,期望填补该方面的空缺.方法 选择满足JJG 1006-94《一级标准物质》候选物筛选原则和要求的面粉样品作为研制对象,经均质、分装、灭菌后,以同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定脱氧雪腐镰刀茵烯醇含量,经均匀性和稳定性试验后,采用8家实验室联合定值的方法对面粉基质中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量进行定值及不确定度分析.结果 随机抽取16袋样品作均匀性检验,分析结果经F检验,统计量F＜F(α=0.05)的临界值,样品均匀性良好.在室温25℃放置一年、44℃放置14天后分别进行了检测,考察其稳定性,测试结果显示特征值在考察时间范围内无明显变化.采用同位素稀释-液相色谱-串联质谱法,与国内8家权威机构实验室进行协同定值,研制得到脱氧雪腐镰刀茵烯醇特征值为(2 366±187)μg/kg.结论 本研究提出了面粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的研制,为镰刀菌毒素类化合物检测提供质控参考和能力评价依据.
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河北地区谷物及谷物制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物污染水平调查与分析
目的 为了解河北地区谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其衍生物污染状况,对河北地区31份婴幼儿谷类辅食、112份燕麦及其制品和293份小麦粉中DON及其衍生物污染状况进行研究.方法 采用液相色谱-串联质谱法进行检测.结果 婴幼儿谷类辅食检出率为93.5％ (29/31),燕麦及其制品检出率为8.9％(10/112),小麦粉样品检出率为99.7％ (292/293).结论 检测数据表明,含有小麦粉的婴幼儿谷物辅食及燕麦制品污染较为严重,且小麦粉样品中DON的阳性检出率为99.7％,由此可见,小麦粉很容易受DON污染.在此次检测的436份样品中,阳性样品大值为878.4 μg/kg,所有样品DON含量均低于我国谷物食品中的限量标准,由于我国缺乏婴幼儿辅食中DON的限量规定,其污染状况值得引起关注.
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食品中污染物的中国国家标准及国际法典标准对比(一)化学污染物(综述)
世贸组织(WTO)的<卫生和植物卫生措施应用协定>(SPS协定)指出,其成员国应将本国食品安全标准与CAC制定的食品法典相协调.CAC制定的标准、准则在保护消费者健康和保证国际食品贸易的公平性方面有重要作用,它是解决国际食品贸易争端的标尺.由于我国已加入世贸组织,协调我国食品卫生标准与国际食品法典(CAC)标准的形势越来越紧迫.CAC的污染物标准是由其分委员会食品添加剂和污染物法典委员会(CCFAC)制定的,CCFAC 在制定污染物标准时以FAO/WHO食品添加剂专家委员会(JECFA)提供的污染物评价资料为依据.CCFAC首先根据污染物对人类健康的危害程度及对贸易的影响程度列出JECFA的优先评价名单,JECFA根据污染物的毒理学资料、人群暴露量资料和各国的污染水平等,确定名单中污染物的摄入量限量,对有蓄积毒性的污染物制定出暂定可耐受的每周摄入量(PTWI)或暂定的每日大耐受摄入量(PMTDI).CCFAC根据这些资料制定相关标准,并征求各国的意见,通过一定的程序(共8步)终由CAC大会通过决定成为法典标准.CAC对污染物的规定与我国类似,在<食品中污染物和毒素的通用标准>(Codex Stan 193)和一些产品标准中均涉及到有关污染物指标.目前CAC标准Codex Stan 193中设定了限量值的污染物有16种:铅、砷、镉、汞、铜、锡、铁、硒、硝酸盐、亚硝酸盐、氯乙烯单体、丙烯腈、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、展青霉素、棕曲霉毒素.上述16种污染物对在我国的食品卫生标准中均有限量规定,但我国棕曲霉毒素只有检验方法,没有规定限量值.除此之外我国的食品卫生标准中还有下列指标在法典标准中未作规定:铝、铬、氟、稀土、N-亚硝基化合物、多氯联苯、3-氯-1,2-丙二醇(3- MCPD)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、游离棉酚、组胺.
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镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇对心肌细胞Ca2+通道的阻滞作用
目的观察镰刀菌毒素单端孢霉烯族化合物脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对培养心肌细胞Ca2+通道单通道电活动的影响.方法取新生1～2日龄Wistar大鼠,分离心肌细胞,培养基为80%DMEM与20%小牛血清,于37℃,在含5%CO2与95%空气的培养箱内进行培养,于培养24～48h期间进行实验记录.采用贴附式膜片钳技术,记录心肌细胞B、L、T三型Ca2+通道单通道电活动为加入毒素前对照,然后向培养基中加入1 mg·ml-1DON,以观察DON对心肌细胞Ca2+通道单通道电活动的影响.结果DON浓度为1 mg·ml-1时,心肌细胞B,L,T三型Ca2+通道均受到明显的阻滞.其阻滞作用表现在使B、L、T三型Ca2+通道的开放时间分别缩短47.3%,42.1%和17.1%,关闭时间分别延长283.3%,92.8%和40.7%,使通道的开放概率分别下降77.8%,71.1%和42.8%.而对流过B,L,T三型Ca2+通道的Ba2+流幅值均无明显影响.结论DON能抑制大鼠培养心肌细胞的Ca2+通道.
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维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响
目的 探讨维生素C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响.方法 采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量VC预处理后,DON对HPBMC凋亡及相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察VC预处理对DON引起的增殖抑制作用的影响.结果 FCM检测结果表明,终浓度为2000μg/L的DON可诱导体外培养的HPBMC凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25 μmol/L VC预处理可明显抑制DON诱导的体外培养HPBMC凋亡(22.39±1.05)%,P＜0.05,而100 μmol/L VC预处理则可明显增高DON诱导的HPBMC凋亡(36.07±2.92)%,P＜0.05.Western blotting分析结果表明,25 μmol/L VC预处理可明显降低DON诱导的HPBMC Bax和caspase-3蛋白高表达,同时使DON抑制的Bcl-2蛋白表达明显升高.100 μmol/L VC预处理可明显促进DON诱导的Bax和Caspase-3蛋白的高表达,但对DON抑制的Bcl-2表达无明显影响.不同剂量VC(25 μmol/L和100 μmol/L)预处理均可降低DON对HPBMC增殖的抑制作用(P＜0.05),但不同剂量VC之间没有显著差异.结论 25μmol/L VC预处理可一定程度地抑制DON诱导的HPBMC凋亡及凋亡相关基因的异常表达,而100 μmol/L VC则促进DON诱导的HPBMC凋亡.不同剂量VC预处理可以明显降低DON对HPBMC的增殖抑制作用.
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中国居民小麦粉和玉米制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮暴露水平评估
目的 分析中国小麦粉和玉米制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的污染水平,以及人群DON和ZEN的暴露情况.方法 于2009年,按照分层整群随机抽样原则,选取中国13个省份44个市(区、县)的107个超市或市场为采样点,分别采集小麦粉和玉米制品样品292、347份.采用超高效液相色谱-串联质谱法方法检测样品中DON和ZEN污染水平.结合2002年“中国居民营养与健康状况调查”的3 ～13、≥14岁的68 959名调查对象的数据,采用有放回地随机抽样方法以及蒙特卡罗(Monte Carlo)法得到调查对象每日DON和ZEN暴露量的P1～P99及其分布,将DON和ZEN暴露量的P1～P99分别与暂定大每日耐受摄入量(PMTDI)和每日耐受摄入量(TDI)进行比较,分析超过健康指导值的小暴露量百分位数及其分布,采用t检验比较不同年龄组调查对象DON和ZEN暴露量差异.结果 小麦粉和玉米制品中DON污染阳性率分别为100.0％(292/292)、97.4％(338/347),高于限量标准(1μg·kg-1 ·d-1)的样品分别占1.7％ (5/292)、4.6％(16/347);小麦粉和玉米制品中ZEN污染阳性率分别为53.4％ (156/292)、87.6％(304/347),玉米制品中ZEN高于限量标准(0.25μg·kg-1·d-1)的样品占15.6％(54/347),小麦粉样品中ZEN均未超过限量标准(0.25 μg·kg-1·d-1).3～13岁组DON的P50、P75、P90、P95、P975和P99的x (95％ CI)分别为0.170 (0.170～0.171)、0.762(0.759 ～0.765)、2.066(2.038 ～2.069)、3.515(3.501 ～3.530)、5.342(5.314 ～5.372)和9.220(9.155 ～9.279) μg·kg-1·d-1,均高于≥14岁组的x(95％CI)[0.131(0.130～0.131)、0.500(0.498 ～0.501)、1.280(1.276 ～1.285)、2.138(2.128 ～2.147)、3.510(3.494 ～3.527)和5.512(5.474～5.546) μg· kg-1·d-1](t值分别为87.19、163.87、164.66、157.78、105.47和96.31,P值均＜0.001),3～13岁组ZEN的P50、P75、P90、P95、P975和P99暴露量分别为0.001 (0.001～0.001)、0.006(0.006 ～0.006)、0.039(0.038 ～0.039)、0.101 (0.100 ～0.101)、0.195 (0.194 ～0.197)和0.378(0.374 ～0.381) μg · kg-·d-1,均高于≥14岁组的x(95％CI)[0.001 (0.001 ～ 0.001)、0.004(0.004 ～0.004)、0.026(0.026 ～0.026)、0.061(0.060 ～0.061)、0.115(0.115 ～0.116)和0.232(0.231 ～0.235)μg· kg-1·d-1](t值分别为151.11、73.80、96.81、100.81、91.93和76.13,P值均＜0.001).3～13岁组超过PMTDI的DON小暴露水平为P76,其P99为1.03 μg·kg-1·d-1,≥14岁组超过PMTDI的DON小暴露水平为P84,P95为1.01μg·kg-1·d-1.3～ 13岁组超过TDI的ZEN小暴露水平为P97,其P95为0.25μg·kg-1·d-1,≥14岁组超过TDI的ZEN小暴露水平为P98,其P90为0.26 μg·kg-1·d-1.结论 中国小麦粉和玉米制品中DON和ZEN的污染水平较低;人群膳食DON和ZEN暴露风险较低;3～ 13岁组对DON和ZEN的膳食暴露量均高于≥14岁组,是膳食暴露DON和ZEN的高危人群.
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制.方法 取原代培养人胚胎膝关节软骨,用DMEM/F12培养基进行培养和传代,在培养基中加入DON,建立以下DON染毒浓度:0.1、0.2、0.4、1.0 μg/ml组和空白对照组.在处理72 h后进行相关研究指标的检测:分别用ELISA法检测培养上清基质金属蛋白酶13(MMP-13)、前列腺素E2(PGE2)含量,硝酸还原酶法检测上清液的一氧化氮(NO)含量,流式细胞术法检测软骨细胞凋亡情况、软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Ⅱ型胶原表达的情况,RT-PCR法分析iNOS mRNA和Ⅱ型胶原mRNA的表达.结果 DON组凋亡率为6.78%～19.05%,高于对照组的1.20%,凋亡率随DON浓度增高而增加(F=174.761,P<0.05).DON组上清液NO含量为20.8～40.7 μmol/L,高于对照组的10.2 μmol/L(F=91.966,P<0.05);MMP-13含量为0.25～0.56 μmol/L,高于对照组的0 μmol/L(F=78.420,P<0.05);PGE2含量为3.2～20.6 μmol/L,高于对照组的1.6 μmol/L(F=276.453,P<0.05).DON组软骨细胞iNOS表达强度为14.8%～56.8%,高于对照组7.1%(F=214.614,P<0.05).高剂量DON组(0.4 μg/ml和1.0 μg/ml)Ⅱ型胶原表达强度分别为56.7%和52.7%,低于对照组的62.2%(F=5.134,P<0.05).DON组软骨细胞内iNOS mRNA表达的吸光度值(A值)为1.07～1.33,高于对照组的0.62(F=8.358,P<0.05).高剂量DON组(0.4、1.0 μg/ml)软骨细胞内Ⅱ型胶原mRNA表达量分别为0.83和0.82,低于对照组的1.14(F=7.887,P<0.05).结论 DON导致人软骨细胞合成NO增加,并通过NO调节MMP-13和PGE2等促进Ⅱ型胶原等软骨基质的降解和软骨毒性损伤;DON可促进软骨细胞的凋亡.
