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3种可转换型腔静脉滤器过滤血栓效果的对比分析
目的 研究不同血栓直径和血栓含量下可转换型腔静脉滤器用于治疗肺动脉栓塞后的过滤血栓效果.方法 构建3种过滤单元形状(L、S和W型)的可转换型腔静脉滤器模型,利用计算流体力学方法进行血流动力学数值模拟,对比分析不同直径(5、10、15 mm)和不同含量(10％、15％、20％)血栓下的过滤效果.结果 血栓直径越大,含量越多,滤器滤杆上分布的血栓体积分数越大,滤器的过滤血栓效果越好.当血栓直径为5 mm时,与其他两种滤器相比,S型滤器的过滤效果好;当血栓直径为10 mm时,W型滤器的过滤效果好;而在血栓直径为15 mm时,S型滤器与W型滤器的过滤效果相同,均比L型滤器的过滤效果好.结论 滤器的植人造成了血流动力学的改变,它的过滤效果不仅与过滤单元结构有关,还与血栓含量和血栓直径大小有着密切相关.研究结果为新型可转换型腔静脉滤器的设计和临床选择提供了理论参考依据.
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糖酵解抑制剂对人食管癌Eca109细胞的影响
食管癌是发生于食管上皮组织的消化系统恶性肿瘤,目前的治疗措施主要有外科手术、放射治疗和化学治疗等.食管癌复发和转移是治疗中存在的主要问题.本研究观察不同体积分数氧作用下,糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对人食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,可以从体外细胞学实验的角度研究2-DG对人食管癌细胞的作用及机制,为其用于治疗食管癌提供实验依据.
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高压舱内专用Siaretron 1000型呼吸机排气方式的改进
随着高气压医学不断发展,应用高压氧治疗危重患者日益增多.由于高压舱环境的安全要求,常压下使用的呼吸机不能直接搬入高压舱内使用[1].我院引进了意大利生产的高压舱内专用Siaretron 1000型呼吸机,但其呼气管(排氧管道)直接排入舱内,会使舱内氧体积分数增高,可能存在安全隐患.我们在临床使用过程中,对该呼吸机排气装置做了改进,通过临床应用取得良好效果,报告如下.
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成功抢救急性重度CO中毒一例
患者:男性,28岁,已婚,浙江温岭人,1999年6月2日晚使用液化淋浴器,12 h后被家人发现昏迷在床下,妻子睡在床上(已去世),即送当地医院抢救.患者出现昏迷的房间封密2天后(即6月5日)仍测得CO体积分数5%.因当地医疗条件有限,直到6月3日18:00方才送到温州某三级医院行高压氧(HBO)治疗,1次/d,舱压不详,共10次.
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高压氧辅助治疗耳廓离断伤一例
患者,男,38岁,职业工人,因工作不慎被钢板砸伤右耳,并头皮裂伤.右耳上部仅有0.5cm大小皮肤粘连,余完全离断,伴活动性出血.右耳感音丧失.30min后来我院行清创后断耳再植术,术后抗感染,止血等支持疗法,第2天行高压氧(HBO)治疗.采用杭州新颖高压氧舱YYC1800B-6小型空气加压舱,治疗压力0.2MPa(2ATA),升、减压各20min,稳压70min,面罩吸氧(体积分数99.8%)30min2次,间隔10min吸舱内空气.每日1次,连续治疗12次.
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酒精和碘酊合用治疗冻疮的临床观察
冻疮是因寒冷、潮湿引起局部血循环障碍所致的皮肤损害.笔者自1998年开始应用稀碘酊(体积分数为2%的碘酊4份与体积分数为75%的酒精1份混合)治疗学生冻疮50例,收到良好的疗效,现将结果报道如下.
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本刊有关论文中法定计量单位的书写要求
本刊法定计量单位实行国务院1984年2月颁布的《中华人民共和国法定计量单位》，并以单位符号表示。具体使用参照1991年中华医学会编辑出版部编辑的《法定计量单位在医学上的应用》一书。正文中时间的表达，凡前面带有具体数据者应采用d、h、min、s，而不用天、小时、分钟、秒。注意单位名称与单位符号不可混合使用，如ng·kg－1·天－1应改为ng·kg－1·d－1；组合单位符号中表示相除的斜线多于1条时应采用负数幂的形式表示，如ng／kg／min应采用ng·kg－1·min－1的形式；组合单位中斜线和负数幂亦不可混用，如前例不宜采用ng／kg·min－1的形式。在叙述中，应先列出法定计量单位数值，括号内写旧制单位数值；但如同一计量单位反复出现，可在首次出现时注出法定计量单位与旧制单位的换算系数，然后只列法定计量单位数值。凡是涉及人体及动物体内的压力测定，可使用mmHg或cmH2 O为计量单位，但首次使用时注明与kPa的换算系数。原子量改为相对原子质量（ Ar）。分子量改为相对分子质量（ Mr）。关于浓度，只有“B的物质的量浓度”（ B代表物质的基本单元）可以称为“B的浓度（ cB ）”，定义为“B的物质的量除以混合物的体积”，单位为“mol／m3”或“mol／L”。正确使用以下量的名称：（1）以B的体积分数（φB）取代习用的B的体积百分浓度（V／V）；（2）以B的质量分数（ωB）取代习用的B的质量百分浓度（W／W或m／m）；（3）以B的质量浓度（ρB）取代习用的以“W／V”或“m／V”表示的浓度，单位为“kg／L”或“kg／m3”。量的符号一律用斜体字，如吸光度（旧称光密度）的符号为A，“A”为斜体字。
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黄斑裂孔视网膜脱离C3F8气体注入术的护理
C3F8气体是一种对机体无毒、透明、在眼内能够膨胀并且能维持时间较长的气体,已经广泛应用于玻璃体视网膜手术.本院采用体积分数为0.997的C3F8气体治疗黄斑裂孔视网膜脱离,现将其临床护理要点介绍如下.
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后牙Gc Gradia聚合瓷邻嵌体的临床应用
临床上后牙邻面牙体缺损常见，精确修复困难，破坏程度居中或较大的牙体缺损是嵌体修复的适应证[1]。随着人们对美观的需求提高，粘结技术日益进步，越来越多的人选择非金属材料，包括全瓷和间接复合树脂嵌体。全瓷嵌体价格昂贵、硬度高、脆性大、修复体完整性不及硬质树脂嵌体[2]。聚合瓷为光固化有机基质中加入了硅烷化混合型无机填料的第二代间接复合树脂[3]，Gc(Gradia（由日本而至公司生产）就是其中一种，其基质是二甲基丙烯酸酯聚氨酯，填料为石英硅微粉，直径在2(μm以下，体积分数约68%，挠曲强度124(MP。通过体外模型制作修复体，避免了Ⅱ类洞树脂直接充填过程中存在的聚合收缩、聚合不全、充填体邻面形态和边缘嵴形态恢复困难等问题。本次研究通过观察Gc(Gradia聚合瓷嵌体修复后牙邻面牙体缺损12个月后的临床效果，评价其疗效。现报道如下。
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应用小鼠月经模型对子宫内膜白细胞周期性变化的研究
目的:应用小鼠月经模型,通过免疫组织化学及计算机辅助图像分析系统(CAST2)研究巨噬细胞和T淋巴细胞随月经周期在子宫内膜的分布变化以及在子宫内膜所占体积分数(volume fraction)的变化.方法:用成年雌性去势C57BL/6小鼠34只,给予序贯性激素处理,在末次激素处理后4～6h,实验组小鼠宫腔内注射0.2 ml消毒花生油诱导子宫内膜蜕膜化反应,对照组小鼠给予同样序贯性激素处理但无宫腔油剂注射.分别取出各组子宫内膜组织,进行常规HE 染色,以F4/80作为巨噬细胞的标记分子,CD4和CD8作为T淋巴细胞的标记分子进行免疫组织化学染色,用计算机辅助图像分析软件CAST2计算分析巨噬细胞、CD4和CD8 T淋巴细胞和在子宫内膜组织中所占的体积分数.结果: HE 染色子宫内膜组织切片显示激素撤退后实验组在宫腔内注射油剂后30～35h可观察到子宫内膜脱落,免疫组织化学组织切片显示在激素撤退早期实验组与对照组子宫内膜内的巨噬细胞均增加并且分布无明显差别(P=0.642),但在激素撤退晚期实验组子宫内膜内的巨噬细胞无明显减少(P=0.061),对照组与之相比则明显减少(P=0.032).CD8 T淋巴细胞的增多仅出现于激素撤退早期实验组子宫内膜.CD4 T淋巴细胞在子宫内膜的数量很少且不随月经周期变化.结论:蜕膜化的子宫内膜在激素撤退后将导致内膜的脱落与白细胞的侵入,且数量与分布的变化与激素撤退的时间明显相关.
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内部沸腾法提取三七多糖的研究
目的 探讨内部沸腾法对大分子物质-三七多糖的提取工艺.方法 以减压内部沸腾法预处理三七物料以除去皂苷、黄酮、单糖等小分子物质,然后再采用常压内部沸腾法提取多糖,以单因素实验分析操作参数对提取率的影响.结果 内部沸腾法提取三七多糖的佳操作参数为:体积分数为80%的解吸剂,液料比为15:1,提取温度为95℃,提取时间为8 min,此条件下多糖得率为5.6%、含量为62.8%.与乙醇回流预处理后水提的传统提取方法相比,得率增加2.1%、速度提高15倍及乙醇用量减少2.5倍.结论 内部沸腾法提取三七多糖比传统法优势明显.
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肝硬化对小鼠羧酸酯酶的影响
我们在酶学及基因水平观察肝硬化对小鼠羧酸酯酶的影响,以期为临床上肝硬化患者用药提供实验依据.一、材料与方法1.动物模型及分组:雄性昆明鼠40只,体重20 g,随机分2组,每组20只:正常对照组,2次/周用生理盐水0.1 ml/10g体重灌胃3个月;肝硬化组,2次/周用体积分数为10%的CCl4花生油溶液0.1ml/10g体重灌胃3个月.肝硬化组有2例死亡.
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腹腔镜手术中不同膨腹气体对肿瘤浸润淋巴细胞体外生长的影响
本实验旨在研究二氧化碳（CO2）、氦气（He）、一氧化二氮（N2O）对模拟气腹条件下肿瘤浸润淋巴细胞体外生长的影响，探讨此类气体是否对机体免疫功能产生抑制作用，导致在气腹条件下肿瘤细胞的扩散与转移，现将结果报道如下。 一、材料与方法 1.肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)的制备：肿瘤浸润淋巴细胞分离自1999年8月于我院妇产科手术的卵巢浆液性囊腺癌患者的癌性腹水，按标准方法提取分离TIL细胞，白细胞介素(IL)-2 1×106U/L（上海第二军医大学）体外刺激增殖，培养于含体积分数为20%小牛血清RPMI1640完全培养液中，体积分数为5%的CO2温箱培养3周，以台盼蓝染色后在荧光显微镜下计数。调整浓度为5×108个/L的细胞悬液。
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外源性胃泌素在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用
我们应用MKN45胃癌细胞株通过四唑蓝(MTT)比色分析法及流式细胞仪观察胃泌素在细胞增殖、凋亡中的作用，同时观察丙谷胺对胃泌素的拮抗作用，并与5-氟尿嘧啶(5-Fu)作比较，结果报道如下。 一、材料与方法 1.细胞培养：MKN45胃癌细胞株(上海市消化疾病研究所提供)培养于RPMI 1640培养液中，加入体积分数为10%小牛血清，置37 ℃5%CO2恒温培养箱，隔天换液，3 d传代。 2.试剂配制及实验分组：用5%的小牛血清的1640液将胃泌素(上海丽珠东风生物技术公司)配为25 mg/L浓度，丙谷胺(江苏金坛制药厂)浓度为32 mg/L，5-Fu浓度为10 mg/L。实验共分5组：空白对照组、胃泌素组、丙谷胺组、胃泌素＋丙谷胺组和5-Fu组。 3.MTT比色分析法：取传代后72 h的细胞，用含10%小牛血清的培养液调整细胞浓度为1× 108个/L，接种于96孔培养板，每孔100 μl，待细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5 %小牛血清培养液100 μl，胃泌素组加胃泌素液100 μl，丙谷胺组加丙谷胺液100 μl ，胃泌素＋丙谷胺组二者各加50 μl。5-Fu组加5-Fu液100 μl，每组设8个复孔，培养72 h，结束培养前6 h加质量分数为5%MTT(Sigma公司)20 μl/孔，继续培养6 h,离心，弃上清，每孔加质量分数为20%十二烷基硫酸钠(SDS)100 μl，震荡5 min，室温30 min后，在酶标仪上测定570 nm波长处的吸光度值(A)。 4.流式细胞术：传代后72 h细胞用含体积分数为10%小牛血清培养液调整细胞浓度为1×10 9个/L，接种于6孔培养板，每孔1.2 ml，细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5%小牛血清培养液2.0 ml，胃泌素组加胃泌素液2.0 ml，丙谷胺组加丙谷胺液2.0 ml，胃泌素＋丙谷胺组二者各加1.0 ml。培养48 h后，分别收集每孔细胞，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，2 ml 1640液制成细胞悬液，测定前离心弃上清，碘化丙啶(PI)染色，ANNEX IN-V(Boehringer mannheim公司)标记，测定凋亡细胞百分率。 5.统计学方法：两组间吸光度值采用t检验；凋亡百分率采用U检验。 二、结果 1.胃泌素对MKN45胃癌细胞的增殖作用：对照组吸光度A值为0.561±0.056；胃泌素组为0.767±0.065与对照组比较，MKN45增殖作用明显加快；丙谷胺组0.556±0.040与对照组间差异无显著性(P＞0.05)；胃泌素联合应用丙谷胺可抑制细胞的增殖［A值为0. 583±0.032，与胃泌素组比较，P＜0.01，但不如5-Fu (0.453±0.045)强( P＜0.01)］。 2.胃泌素对MKN45胃癌细胞凋亡的影响：胃泌素对MKN45细胞的凋亡有明显的抑制作用，胃泌素组细胞凋亡百分率仅为1.39%，明显低于对照组的9.58%(P＜0.01)，联合应用丙谷胺后凋亡增加(表1)。
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感觉和运动神经源性雪旺细胞与神经元共培养神经生长因子mRNA的表达
临床上修复神经缺损使用自体神经移植体时，神经感觉功能恢复较运动功能好，这可能与移植神经取自感觉神经有关，这种神经特异性再生的机制目前认为有多种机制参与［1］，而神经损伤后初雪旺细胞是远段神经的唯一成分，而且雪旺细胞被证实可以分泌包括神经生长因子(NGF)在内的多种神经营养因子［2］，因此我们以感觉和运动神经来源的雪旺细胞为研究对象，以NGF为指标，研究两种雪旺细胞与神经元共培养后NGF mRNA的表达是否有差异，探讨这种差异对神经特异性再生的作用。 一、材料和方法 1.雪旺细胞和神经元的体外培养：感觉性和运动性雪旺细胞、感觉和运动神经元的体外共培养参考文献［3，4］的方法。简要步骤如下：无菌条件下，分别取5 d龄SD乳鼠的背根神经(感觉性雪旺细胞)和股神经肌支(运动性雪旺细胞)，14 d龄SD胚鼠背根神经节(感觉神经元)和脊髓前角(运动神经元)，剪碎成糊状；分别置入离心管中，加入0.125%胰蛋白酶+0.03%Ⅳ型胶原酶(Sigma公司)，消化30～40 min；1 500 r/min离心5 min；用DMEM/F12(Gibco公司)培养基将沉淀混悬成悬液，接种到培养皿中；37 ℃，体积分数为5%CO2细胞培养箱中孵育；雪旺细胞在48 h添加阿糖胞苷(5×10 -8 μg/L)，抑制成纤维细胞，第4天按1×109个/L的密度传代接种到6孔培养板盖玻片上，2 d后接种原代培养神经元细胞，这样就获得感觉性雪旺细胞和感觉神经元、运动性雪旺细胞和运动神经元的共培养。 2.共培养细胞NGF mRNA的表达：NGF mRNA表达的检测采用武汉博士德公司原位杂交检测试剂盒(MK1032型)提供的方法进行。简要步骤如下(以下溶液中均含有0.1%焦炭酸二乙酯)： 4%多聚甲醛固定液30 min；磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤3次；甲醇(含体积分数为0.03%过氧化氢)30 min；PBS洗涤3次；灭菌水洗涤3次；蛋白酶K，37 ℃，10 min；灭菌水洗涤3次；地高辛标记的cDNA探针和无关序列在杂交液内首先经过100 ℃，8 min的变性处理，然后置于碎冰中3 min，滴加到盖玻片上，上面覆以专用盖片(Sigma公司)；37 ℃孵育20 h；2 5 ℃的2×SSC(氯化钠17.4 g，柠檬酸钠8.8 g溶于1 000 ml水中)洗涤2次；37 ℃的0.1 ×SSC洗涤1次；加入封闭液，不洗；加入抗地高辛抗体，34 ℃孵育30 min；TBS(氯化钠30 g，三羟甲基氨基甲烷1.2 g，纯乙酸0.5 ml溶于1 000 ml水中)洗涤；加入酶标二抗， 34 ℃孵育20 min；TBS洗涤；加入显色液，34 ℃显色30 min；灭菌水洗涤，中止反应。显微镜下观察、比较。 二、结果 感觉和运动雪旺细胞与相应神经元混合培养后，第3天分别进行NGF mRNA原位杂交，图1为运动性雪旺细胞NGF mRNA表达染色，图2为感觉性雪旺细胞的表达，图3为空白对照，图中黑褐色染色颗粒的多寡即代表NGF mRNA表达量的多少。由图中可见，感觉性雪旺细胞NG F mRNA的表达颗粒明显较运动性雪旺细胞密集，而运动性雪旺细胞的表达接近于空白对照。
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应用传感针观察脊髓损伤后脊髓氧分压的变化
急性脊髓损伤后的缺血、缺氧是脊髓继发损害的重要原因之一。我们应用中医传感针测定急性脊髓损伤后脊髓组织氧分压的动态变化，并探讨其与病理变化及神经功能损害的关系，现将结果报道如下。 一、材料与方法 1.脊髓损伤模型制作：SD大鼠56只，雌雄不限，重(220±20) g ，随机分为对照组及伤后30 min、1、3、6、24、72、168 h共8组。体积分数为1.0%戊巴比妥钠30 mg/kg体重腹腔注射麻醉，切除T10椎板，暴露脊髓；按改良的Allen打击法［1］，以10×10 gcm能量致伤脊髓。对照组除不致伤外，余处理均相同。 2.脊髓氧分压的测定：应用中医传感针测定脊髓组织氧分压，该设备由华中科技大学同济医学院生物医学工程实验室研制［2］。先将氧分压测试仪接电源预热，将232型饱和甘汞电极、传感针末端分别与之连接，调零后将测试仪置于测试状态，将待测大鼠的尾巴置于生理盐水烧杯中(甘汞电极一端先已置入其中)。在显微镜监视下，将氧分压传感针尖端(直径0.1 mm)沿脊髓背侧中线旁开0.5 mm处插入固定，深度0.5 mm。待显示屏上数值稳定后记录读数，此即脊髓组织氧分压值(kPa，1 kPa=7.5 mm Hg)。 3.脊髓组织学检查：每组动物各取1只处死，快速取出损伤中心段脊髓标本，常规方法固定、包埋、切片，层厚10 μm，行苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察；每组再另取1只处死，立即取伤段脊髓置于4 ℃体积分数为0.025%戊二醛液中固定、磷酸液冲洗，0.1%锇酸固定，制作电镜包埋胶囊，超薄切片，透射电镜观察。 4.运动功能评定：按Rivlin斜板法［3］，于麻醉苏醒后开始检查。在一长方形有纹橡胶垫覆盖的斜板上，将大鼠头朝前、身体纵轴与斜板纵轴垂直放置，测试角度从0开始渐增大，至其刚好可以维持5 s时，记录此临界角度。 5.统计学方法：采用t检验。 二、结果 1.脊髓损伤后脊髓组织氧分压的变化：对照组大鼠脊髓组织氧分压值(kPa)为4.80±0.5 2，伤后30 min、1、3、6、24、72、168 h分别为4.80±0.52、2.49±0.22(与对照组比较，下同，P＜0.01)、1.16±0.10(P＜0.01)、0.97±0.08(P＜0.01)、0.77 ±0.06(P＜0.01)、0.93±0.08(P＜0.01)、1.28±0.12(P＜0.01)、2.87±0.24(P＜0.01)。 2.脊髓组织病理学改变：(1)HE染色：伤后30 min开始出现病理改变，至1 h脊髓灰质灶性出血，神经细胞变性；6 h神经细胞固缩、坏死，白质出血、水肿，轴索肿胀；24 h 神经细胞大部消失，白质部分溶解，脊髓大部分坏死，残留轴索肿胀，髓鞘破裂。(2)透射电镜观察：伤后30 min神经细胞内线粒体肿胀，至1 h较为明显，6 h神经细胞膜破裂，核膜不完整，线粒体嵴断裂或消失，髓鞘板层结构松散、断裂，24 h上述变化更为明显，至1周时仍未恢复。 3.运动功能评分：对照组大鼠斜板试验结果为(71.4±10.7)度；损伤组伤后6 h降至(24 .3±3.2)度，以后逐渐回升，24?h为(26.1±3.8)度,1周时为(31.9±4.5)度, 至伤后4周达(35.0±5.6)度，仍显著低于对照组水平(P＜0.01)。
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低温保存人肝细胞Na+/H+交换与细胞内钙和细胞活力的关系
我们通过阻滞Na+/H+交换,观察低温保存肝细胞Na+/H+通道的特点及其对细胞内Ca2+和细胞存活率的影响,现将结果报道如下。 一、材料和方法 1. 试剂:Ⅱ型胶原酶,透明质酸酶,DNA酶Ⅰ,阿米洛利(A)购于Sigma公司,离解酶Ⅱ型购自Boehringer公司。 2. 肝细胞分离及保存:按照Seglen［1］的方法并做改进。肝脏获取后,以1 000 ml含乙二醇四乙酸(EGTA)0.5 mmol/L的Hanks液以每支管20 ml/min的速度灌注。然后改以500 ml含Ca2+、Mg2+,15 mmol/L的4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸(HEPES),0.5 mmol/L的Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶的Hanks液循环灌注至肝脏彻底消化,小心取出肝细胞放入含体积分数为10%小牛血清,0.01%DNA酶I,0.01%Ⅱ型离解酶及0.08 mmol/L的Mg2+的1640培养基中混均,过滤。然后4℃,50 g离心5 min,以含钙的Hanks液漂洗至少3次。取细胞悬液台盼蓝染色判断细胞存活率。离心后肝细胞悬液均匀悬于高Na+保存液(高Na+保存液配方为：NaCl 137 mmol/L；KCl5.40 mmol/L；KH2PO40.44 mmol/L；NaH2PO41.34 mmol/L；MgSO40.83 mmol/L；CaCl21.67 mmol/L；葡萄糖10 mmol/L；半乳糖5 mmol/L；NaHCO3 10 mmol/L；HEPES 20 mmol/L；青霉素0.1 g/L；丙酮酸盐5 mmol/L)中低温保存。实验组加1 mmol/L的阿米洛利。分别于0、15、30 min、1、2、6、12 h取肝细胞行细胞内Na+、Ca2+及细胞存活率的检查。
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活细胞杂种生物瓣的研究
我们采用组织工程技术将活细胞引入去细胞的异种瓣纤维支架上，旨在获得一种有活细胞代谢的“杂种”活细胞瓣，现将报道如下。 一、材料与方法 1. 异种瓣的加工与分组：新鲜猪主动脉瓣置于4℃Hanks液中带回实验室，洗尽血液，为新鲜瓣叶(F)组。新鲜瓣叶于体积分数为1％辛基酚聚乙二醇醚(Triton X-100)及0.01 mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液中4℃下持续振荡24 h；转入体积分数为1％Triton X-100及1.5 mol/L KCl溶液24 h；0.01 mol/L Tris溶液充分洗涤； DNA酶、RNA酶37℃消化过夜；转入低渗Triton X-100液中，4℃振荡24 h，充分洗涤，为去细胞瓣叶(aF)组［1，2］。上述两种瓣叶经体积分数为0.5％戊二醛 4℃固定48 h，充分洗涤，分别为戊二醛(G) 组和去细胞-戊二醛 (aG) 组。转入质量分数为8％L-谷氨酸液（pH3.5）中48 h，充分洗涤，分别为戊二醛-谷氨酸 (GG) 组和去细胞-戊二醛-谷氨酸(aGG)组。上述各组瓣叶经12 000 Gyγ射线灭菌，即可用于细胞种植。 2. aGG组与GG组瓣叶机械性能的比较：两种瓣叶各25片，分别测定组织含水量，热皱缩温度，厚度，并描记应力应变曲线，测定断裂伸长率和断裂强度。
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双荧光素染色检测5-氟尿嘧啶及羟基喜树碱诱导的肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究
我们用5-氟尿嘧啶(5-Fu)、羟基喜树碱(HCPT)在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721 产生凋亡，并用双荧光染料吖啶橙／溴乙锭(AO／EB)染色结合DNA电泳法进行观察，结果报道如下。 一、材料与方法 将1×108/L SSC-7721细胞(中国科学院上海细胞学研究所)接种于含体积分数为10%小牛血清的RPMI 1640培养液中，于37 ℃，体积分数5%CO2培养24 h，细胞铺满瓶底，呈对数生长时加入5-Fu、HCPT使二者终浓度分别为75 mg/L、1 mg/L，再继续孵育，分别于6、1 2、24、48 h观察结果。 细胞孵育至特定时间，以质量分数为0.125%胰酶消化细胞3～5 min，细胞脱壁后加入原培养液洗刷细胞，2 000 r/min离心5 min，弃上清，加入500 μl培养液，配成细胞悬液，再加入实验用AO/EB溶液20 μl，混匀，置1滴于载玻片上，荧光显微镜下观察200个细胞，分别计数早期凋亡细胞(VA)、晚期凋亡(NVA)、活细胞(VN)及非凋亡的死亡细胞(NVN)，计算凋亡率。 凋亡率＝(VA+NVA)/(VA+NVA+VN+NVN)×100% 收集细胞，磷酸盐缓冲液洗涤2遍，低速离心5 min后弃上清。加入抽提缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl ph 8.0、20 mg/L胰RNA酶、0.5%SDS)，37?℃ 1?h。加入蛋白酶K至终浓度100 mg/L，55?℃ 3?h，每隔20～30 min摇动1次至室温，按酚／氯仿法抽提DNA。1%琼脂糖凝胶电泳，紫外投射仪上观察并摄片。 二、结果 5-Fu、HCPT均能诱导SMMC-7721细胞产生凋亡，且随时间延长，其凋亡率在增加，在加药后6、12、24、48 h用AO／EB染色法检测，细胞凋亡率5-Fu组分别为19.6%、 23.8%、35.4%、38.7%，HCPT组分别为21.2%、26.5%、37.1%、42.6% ，而对照组分别为2.0%、2.8%、3.2%、3.5%。两种药物在相同时间诱导SMMC-7721凋亡的百分率差异无显著性(P＞ 0.05 )，而两者诱导细胞凋亡的百分率与对照组比较，差异均有显著性(P＜0.01。DNA电泳显示两种药物诱导6 h后均可见DNA裂解成180～250 bp整数倍的小片段，呈典型的梯形条带，以4 h为明显，而对照组无此表现。 三、讨论 本研究结果显示，SMMC-7721细胞经小剂量5-Fu、HCPT作用后，DNA电泳显示出典型的梯形条带。在琼脂糖凝胶电泳中DNA片段呈梯形表现，是DNA链被裂解成核小体间长度片段的特异性表现。从而提示小剂量的5-Fu、HCPT具有诱导SMMC-7721细胞产生凋亡的作用，可作为细胞凋亡诱导剂用于肝癌治疗。
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骨水泥体积分数对单侧经皮椎体后凸成形术后相邻椎体骨折的影响
目的 探讨单侧椎体经皮后凸成形术后骨水泥体积分数与相邻椎体骨折(AVF)的关系. 方法 对2006年1月至201 1年12月收治的495例单节段骨质疏松性椎体压缩骨折行单侧PKP的患者资料进行回顾性分析.根据椎体新发骨折分为3组:AVF组(52例)、非AVF组(58例)和非骨折组(385例).比较AVF组患者的骨水泥体积分数与其他两组的差异,同时比较3组患者的骨水泥渗漏率、手术前、后cobb角及视觉模拟评分(VAS).结果 AVF组骨水泥体积分数(32.5％±5.5％)高于非AVF组(27.3％±1.8％)和非骨折组(27.0％±2.6％),差异均有统计学意义(P＜0.05).AVF组骨水泥渗漏率(36.5％,19/52)高于非AVF组(20.7％,12/58)和非骨折组(17.7％,68/385),差异均有统计学意义(P＜0.05).3组患者术后的cobb角和VAS评分均较术前明显改善,差异有统计学意义(P＜0.05),但手术前、后cobb角和VAS评分3组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 根据骨水泥体积分数决定骨水泥用量可获得良好效果,AVF和骨水泥渗漏的风险随骨水泥体积分数增加而增加.
