体外培养状态下心肌细胞有丝分裂的证据

目的 探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据.方法 分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T(cTnT)、磷酸化组蛋白H3(H3P)和微管蛋白(tubulin),利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处于分裂期的心肌细胞.结果 原代培养的心肌细胞生长状态好、纯度高,可观察到分裂各期的心肌细胞及其微管蛋白的变化.处于分裂各期的心肌细胞不隆起变圆仍维持扁平状.分裂前期细胞核形状规则,染色质凝集,H3P开始表达;前中期核膜破裂,纺锤体形成;中期染色体排列在赤道面,纺锤体呈典型纺锤样;后期染色单体分开并移向两极;末期子核形成,平行微管聚结在两子核之间;胞质分裂期形成两个子细胞,两个细胞分开后,可见有少量微管呈丝状连接.原代培养1 ～12d的心肌细胞在整个细胞分裂图像中很少见到双核心肌细胞.培养第3天开始发现分裂象的心肌细胞,占总心肌细胞数的2/127(1.57％)和1/92(1.09％),培养第7天,分裂细胞比率达3/69(4.35％)和5/163(3.07％),培养第12天有2/100(2％)和0/60(0)的心肌细胞处于分裂期.结论 体外培养的心肌细胞存在一定数量的完全有丝分裂,是心肌增殖和心肌再生的细胞学证据.

新生大鼠心肌telocytes在体外培养状态下的分裂方式

目的 探讨体外培养新生大鼠心肌telocytes的分裂方式.方法 采用0.1％胶原酶I/0.125％胰蛋白酶联合消化法分离培养新生大鼠心肌telocytes,活细胞工作站动态捕捉和苏木素染色检测telocytes的分裂方式.结果 酶联合消化法培养新生大鼠心肌telocytes纯度高、活力好,增殖迅速.无丝分裂时,胞核变大,以出芽方式生长,形成哑铃状细胞核,核芽逐渐拉伸并与母细胞分离.有丝分裂前中期,染色质缩短变粗为染色体,整齐地排列在赤道板处;分裂末期,染色体到达两极,子核已初步形成;胞质分裂期,胞质逐步拉开,形成两个子细胞.在有丝分裂不同时期,心肌telocytes均保持其原有的形态特征.结论 体外培养心肌telocytes增殖时有丝分裂和无丝分裂两种方式并存.

MiR-100对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1蛋白表达的作用

目的 探讨microRNA-100(miR-100)对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1(PLK1)表达的作用.方法 采用实时定量PCR和免疫荧光方法检测miR-100和PLK1在人肝癌细胞HepG2中的表达.利用Oligofectamine脂质体介导将Cy3荧光标记的miR-100模拟物瞬时转染HepG2细胞,分析细胞有丝分裂和PLK1蛋白表达情况.结果 肝癌细胞HepG2的miR-100表达量低于正常肝细胞,而PLK1 mRNA和蛋白表达却异常升高.在miR-100模拟物转染后48h,实验组细胞有丝分裂指数显著小于对照细胞,经Western blotting分析显示,实验组细胞PLK1蛋白表达水平较对照组细胞均显著减低.同时免疫细胞化学检测发现,在有丝分裂中晚期和末期位于细胞核内的PLK1蛋白基本消失.结论 miR-100具有抑制PLK1蛋白表达的作用,可引起肝癌细胞有丝分裂阻滞.

磷酸化组蛋白H3——检测心肌细胞有丝分裂指数的可靠指标

目的 采用磷酸化组蛋白H3鉴定心肌细胞有丝分裂,为研究心肌细胞增殖机制奠定形态学基础.方法对H9c2(2-1)大鼠心肌细胞进行培养,利用免疫荧光双重染色技术,用横纹肌肌动蛋白IgM单克隆抗体标记心肌细胞,用磷酸化组蛋白H3 IgG单克隆抗体标记有丝分裂的染色体,同时用Hochest 33342显示细胞核.荧光显微镜观察并摄片. 结果心肌细胞胞质呈红色荧光,有丝分裂的染色体呈现不同形状的绿色荧光,胞核为蓝色.结论 磷酸化组蛋白H3是观察和鉴别心肌细胞有丝分裂的可靠指标.

蛋白激酶C在培养神经元突起生长中的作用

为探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在神经再生中的作用,本研究在对培养神经元生长规律与PKC活性作相关分析的基础上,观察PKC活性改变对原代培养的脊髓前角神经元突起生长状态的影响.以5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制有丝分裂代替免疫淘汰法提高神经元的纯度进行胎鼠脊髓前角神经元的原代培养.

高尔基体基质蛋白GM130的研究现状与分析

GM130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装.当GM130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡.GM130还参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移.它还参与细胞自噬与凋亡.GM130与肿瘤的发生有关.它的减少显著降低CVB3病毒的复制.GM130失活可以引起雄性模型小鼠的不育.可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白.

Salusins:新的心血管调节及有丝分裂的活性肽

CHIP基因稳定转染人慢性髓系白血病K562细胞诱发有丝分裂异常

本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP(carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interacting protein)的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型,以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响.采用脂质体介导的方法,经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U-box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆.对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测相关蛋白表达,瑞氏-姬姆萨染色进行细胞形态学观测.结果表明,过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响,细胞周期中G2/M期细胞比率增加,CHIP对BCR-ABL激酶的稳定性没有影响,但却明显导致细胞形态异常,表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多,出现异常有丝分裂相等,提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用.结论:野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常.

Prp19干涉导致细胞染色体错误排列及有丝分裂前中期阻滞

目的:验证针对实验室前期筛选到的新有丝分裂期调控分子候选蛋白mRNA前体剪切因子19(pre-mRNA processing factor 19,Prp19)功能和查明作用机制.方法:采用多个靶向不同序列的siRNA在HeLa细胞中敲低Prp19,应用流式细胞术检测Prp19敲减对细胞周期进程的影响.采用Time-lapse成像技术进一步明确Prp19干涉对细胞分裂的影响.采用冷处理实验观测Prp19干涉对微管与着丝粒连接的影响.应用Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测和Caspase 3、PARP免疫印迹实验检测Prp19干涉对细胞凋亡的影响.结果:流式细胞术检测结果表明,Prp19干涉导致有丝分裂期阻滞.Time-lapse成像动态观测发现Prp19干涉导致细胞前中期阻滞和染色体错误排列.冷处理实验结果表明干涉Prp19损害了微管与着丝粒的连接.Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测以及Caspase 3、PARP免疫印迹检测结果显示Prp19干涉导致肿瘤细胞凋亡.结论:Prp19是细胞有丝分裂正常进程中不可或缺少的蛋白质,抑制Prp19可能对抗有丝分裂的抗肿瘤药物研发提供新的策略.

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路与细胞命运的联系

细胞在接受特定的细胞外信号刺激后会产生相应的特异性生理应答.Ras/Raf/MEK/ERK信号级联通路是一条可被广泛激活的有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)通路,它能将细胞外信号传递入细胞核内,引起细胞内特异蛋白的表达谱变化,从而影响细胞命运.

极体样激酶1与乳腺癌的研究进展

极体样激酶1(PLK1)是一类广泛存在的、高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在启动、维持和完成有丝分裂的过程中发挥着重要作用.学者们发现,PLK1在肿瘤中高表达与肿瘤(尤其是乳腺癌)的生物学行为及预后有密切关系.本文就近年来PLK1与乳腺癌发生发展关系的研究进展进行综述.

STK 15基因沉默导致胃癌细胞分裂停滞

目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15 (serine/threonine kinase15, STK15) 基因在胃癌细胞有丝分裂中的作用.方法应用RNA干扰技术(RNAi)抑制胃癌细胞株MKN45细胞STK15基因表达;real-time定量PCR及Western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;MTT法检测细胞增殖速度的变化;免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变.结果 STK15基因沉默后,其 mRNA及蛋白质表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后48 h, STK15-组STK15 mRNA 水平较对照siRNA组的下降了89.54%;Western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平较对照siRNA组降低了57.18%.较多MKN45细胞呈圆形改变并呈现G2期细胞的DNA含量, STK15-组3个时间点的圆形细胞占18.95%,而对照siRNA组为8.34%,差异有统计学意义 (P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,STK15-组G2期DNA含量细胞平均值为26.13%,而对照siRNA组G2期DNA含量细胞平均值12.46%(P<0.05).细胞增殖速度减慢(P<0.05).细胞有丝分裂表型发生改变(P<0.05).结论 STK15基因在MKN45细胞有丝分裂过程中可能起着关键作用,阻断其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞.

骨髓干细胞动员在治疗缺血性心肌疾病中的进展

心肌梗死是人类常见疾病之一,病情凶险,病死率较高.传统观念认为心肌细胞属于不可再生细胞,当心肌细胞受到损伤导致细胞死亡后,心肌细胞的总数下降,梗死区坏死的心肌细胞则被纤维瘢痕组织等所代替,发生心室重构,终导致心脏功能衰竭[1].1998年Kajstura等[2]利用共聚焦显微镜观察发现正常的成熟心肌细胞具有分裂和增殖能力, 2001年Beltrami等[3]在共聚焦显微镜下观察到梗死的心肌组织中有丝分裂过程中的纺锤小体、收缩环、核分裂和胞质分裂,心肌梗死后有少量心肌细胞发生分裂增生,使心肌是"永久性细胞"的观念受到挑战.

有丝分裂纺锤体检验点基因在肿瘤中的作用研究进展

细胞分裂周期是一个受到严格调控、保守有序的过程.在细胞有丝分裂过程中纺锤体微管从两极发出分别和姐妹染色单体动粒相连,牵引将两套姐妹染色单体分别进入子代细胞,这一过程被高度保守的信号机制所调控,这些起关键作用的调控基因称为有丝分裂纺锤体检验点基因(the mitotic spindle assembly checkpoint,SAC).研究发现SAC基因和肿瘤的发生、发展密切相关.本文就队SAC基因的分子生物学特点,SAC基因与肿瘤的关系的研究进展进行介绍.

神经再生修复与神经发育

一、神经再生与神经发育研究的关系脑损伤包括脑出血、脑梗死、颅脑外伤、放射性脑损伤、中毒性脑损伤等.这些脑损伤造成的神经功能缺失可通过理疗、针灸、功能锻炼等康复治疗,神经功能往往会得到改善,那么人们自然会问,其功能恢复与重建与神经再生是否有关?神经细胞是一种终末细胞,处于有丝分裂后状态,缺乏再生能力,长期以来,人们一直认为中枢神经系统损伤后功能难于恢复[1].

白细胞分化抗原3单克隆抗体检测T细胞功能的研究

自80年代以来,发现可用CD3单克隆抗体(单抗)作为特异性刺激原激活T淋巴细胞,诱导有丝分裂反应,促进细胞因子产生[1].以检测T淋巴细胞功能.本课题探讨CD3单抗单独或协同非特异性刺激原植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞(PBL)增殖转化、细胞因子产生情况.一、对象与方法

骨髓基质干细胞移植治疗心肌损伤

尽管心肌细胞是终末分化细胞,成熟心肌细胞不再发生有丝分裂的观点新近受到挑战[1],但是心肌细胞的再分裂增殖的能力是非常有限地,心肌细胞坏死和凋亡的病理过程持续存在,终造成心肌细胞数量的减少和功能低下,这是心功能不全发生的病理基础.

乙型和丙型肝炎病毒对JNK/SAPK转导途径的影响

0引言乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的感染是世界范围内导致肝细胞癌(HCC)发生的主要危险因子,HCC在慢性病毒携带者中的危险性增加了100倍.像所有肿瘤的发生一样,病毒诱导HCC的发生是多步骤过程,宿主因素作为始动因素增加肝细胞的增生,随后恶性化.信号分子在信号转导过程中起到不可缺少的作用,常成为外源性蛋白的靶作用目标引起细胞正常生理活动的改变,如有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)系统的干扰往往引起细胞分化、增生、死亡的紊乱.目前所知MAPK超家族包含三条平行的MAPK级联反应:ERK、JNK/SAPK、P38MAPK途径,以高度保守的三级激酶级联的形式(MAPKKK-MAPKK-MAPK)转导信号,他们拥有各自的底物和调节蛋白激酶,接受不同的信号刺激引起特异的细胞效应,这些信息流之间的‘交谈'构成信号转导的网络,使细胞察觉到细胞外环境的变化做出适当的应答.JNK/SAPK信号转导途径主要对毒素、炎性细胞因子、紫外线照射、渗透压等应激信号进行转导,肝炎病毒蛋白作用于JNK/SAPK可对细胞的分化、增生等产生影响.

一种简单诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的方法

目的：小鼠胚胎干细胞（mESCs）具有多向分化潜能，包括向心肌细胞分化，被广泛应用于心脏再生、细胞治疗与免疫治疗中。目前，mESCs向心肌细胞分化的诱导剂主要有DMSO，5-aza，RA，ICA，vitaminC以及中药丹参等。据报导，一定浓度的青链霉素（双抗）对mESCs的有丝分裂具有一定的抑制作用。然而，双抗诱导mESCs向心肌细胞分化却未见报导。我们的研究旨在探讨双抗诱导mESCs向心肌细胞分化作用。

支气管哮喘的表观遗传学

表观遗传的概念早是在1942年由Waddington提出的,描述了所有细胞减数分裂和有丝分裂在表型或基因表达状态上的可遗传改变,且不借助DNA序列本身的改变[1],即表观遗传是非DNA序列差异的核遗传.表观遗传调控对哺乳动物发育期间产生细胞类型多样性起到关键作用,而且对维持不同类型细胞的基因表达谱的稳定性和完整性也很重要.