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一种测定癌细胞迁移能力的便捷方法
目的和方法:用聚四氟乙稀制作内径1.4 c的小圆筒,以一片聚碳酸酯核孔膜(孔径8μm,中国科学院上海原子核研究所提供)和一片醋酸纤维酯微孔滤膜(孔径5μm,上海医药工业研究院提供)将小圆筒分隔成上下二个小室,上室高1.8 cm,下室高0.3 cm,二室间以螺丝固定.将1 mL 1640培养液培养的人胃腺癌细胞(SGC-7910)或B16黑色素瘤细胞(二细胞株均由中国科学院上海药物研究所提供)置于上室,下室加同样的培养液,保持上下二室的培养液液面相平.CO2培养箱37℃培养.培养结束后取出微孔滤膜,用70%乙醇固定,H.E染色.将滤膜等分为四个象限,用光学显微镜随机计数每个象限中二个视野内穿过核孔膜并粘附在微孔滤膜上的癌细胞数.结果:如此处理的二类癌细胞都有能力迁移通过核孔膜均匀地粘附在微孔滤膜上.计数观察清晰容易.并且随着癌细胞孵育时间(5~30 h)的延长,迁移到膜上的细胞数也增加.随着所用细胞浓度(5×104~4.5×105细胞数/mL)的增加,迁移到微孔滤膜上的细胞数也增加.将药物(阿霉素,甲2巨球蛋白-广谱蛋白酶抑制剂)置于上室与癌细胞同孵育,可以观察到药物的不同浓度和不同的持续作用时间,能够明显地影响癌细胞的迁移能力.结论:采用此种微孔滤膜腔法测定癌细胞的迁移能力,较之以往使用的琼脂糖移植法和毛细血管法方法更简便,加入的癌细胞体积可达1 mL,并且用化学蚀刻扩孔制成的核孔膜,微孔呈直筒状,孔径一致,膜耐高温,化学稳定性极好.这些均为实验结果的准确性提供了保障.癌细胞的迁移能力与其转移特性密切有关.这一方法的建立,将为在离体条件下观察癌细胞转移特性及药物对癌细胞转移能力的影响提供了可行的手段.
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Urotensin II诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及机制探讨
目的:采用Urotensin II( UII)体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,并探讨其机制。方法:采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞,后半小时与1×10-7 mol/L insulin共孵育,葡萄糖-己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量,以HepG2细胞蛋白进行定量,确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间;多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧( ROS)变化;Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS-1及Akt蛋白的表达。结果:hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h,佳UII浓度为1×10-7 mol/L。与空白对照相比,UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显( P<0.05);且UII孵育组IRS-1及Akt蛋白的表达明显降低(P<0.05),提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论:采用UII体外诱导的方法,UII浓度为1×10-7 mol/L,作用24 h后,可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。
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四环素类药物对牙周炎治疗作用的研究进展
牙周炎主要是由特异性微生物的龈下感染所致,表现为牙周组织炎症和牙槽骨吸收.传统的牙周治疗是采用机械疗法清除局部刺激物.这种外科性质的清创术只能去除附着性菌斑,对于非附着性菌斑则未能奏效.四环素类药物近十多年来国内临床很少应用,近期国外学者认为盐酸四环素是牙周炎化学疗法的首选药物.四环素对牙周炎的治疗作用具有如下特点:(1)有效抑制龈下菌斑中致牙周炎的革兰氏阴性菌:(2)在龈沟液中的浓度明显高于其血清浓度;(3)易于吸附于牙根表面,然后以活性形式缓慢释放,从而延长作用时间.四环素还具有调节宿主反应的非抗菌特性;(1)促进成纤维细胞的增殖,分化及结缔组织的附着,有利于破坏的牙周组织获得再附着;(2)抑制胶原酶的功能和分泌;(3)直接影响破骨细胞的结构和功能.
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麦冬提取物抗犬心肌缺血的药效学实验研究
目的:对麦冬提取物抗心肌缺血的药效学观察做到标准化、序列化和规范化,为临床提供有效、安全、稳定,使用方便的新药制剂.方法: 采用犬冠状动脉结扎模型,设立模型组、恬尔心组及麦冬提取物大、中、小3个剂量组,应用十二指肠给药的途径,通过心外膜心电图、心肌酶谱及形态学等指标来观察麦冬提取物对缺血心肌的保护作用.结果: (1)心外膜心电图标测结果:结扎30 min时,心外膜心电图标测Δ-ST均有明显变化,各组差别无显著(n=5,P>0.05).麦冬提取物大剂量组(LD)及中剂量组(MD)用药后1 h Δ-ST分别由给缺血30 min时的45.40±16.42及38.50±10.85降至38.30±9.28和38.30±9.28.随着药物作用时间延长至3 h,麦冬提取物大剂量组及中剂量组Δ-ST进一步分别下降了28.20±9.57及24.00±3.88,Δ-ST相对变化率为1.61±0.17(n=5,P<0.01)和1.60±0.38(n=5,P<0.05).(2)心肌酶谱(CK、CK-MB)观察结果:结扎前心肌酶谱已有变化,但各组之间并无明显差别(n=5,P>0.05),实验观察结束时,各组心肌酶谱均明显变化.CK-MB,麦冬提取物大剂量组和中剂量组心肌酶谱与模型组比较均显著差异(n=5,P<0.01).CK,麦冬提取物大剂量组与模型组比较均显著差异(P<0.01).而中剂量组心肌酶谱与模型组比较均明显差异(n=5,P<0.05).酶谱(CK、CK-MB)的自身变化率比较显示:大剂量组与模型组相比,显著差异(n=5, P<0.01),而中剂量组与生理盐水组比较,P<0.05.(3)犬急性心肌梗死范围(N-BT染色)测量结果:麦冬提取物大、中两个剂量组心肌梗死区的绝对重量以及梗死区占心室的百分比与M模型组相比,显著差异(n=5,P<0.05).(4)透射电镜超微观察显示:模型组表现出缺血心肌典型超微结构特征:如线粒体、细胞核和肌原纤维核浆的改变及增生活跃间质细胞所分泌的胶原.与模型组比较小剂量组心肌超微结构的改变虽有所减轻,但仍发生明显的线粒体及细胞核损伤.中剂量组心肌超微结构线粒体及细胞核虽有部分、一定程度的损伤,但与模型组相比,有一定的改善.大剂量组心肌超微结构的改变发生了明显的改观.结论: 麦冬提取物有明显地抗心肌缺血的作用,并呈现出一定的量效关系.
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吲达帕胺与苯那普利联合应用治疗中、重度高血压疗效观察
吲达帕胺(Indapamide)是一种具有利尿作用和钙离子拮抗作用的新型降压药,它具有降丈夫效果好、作用时间长、副作用少,可长期使用等优点[1].苯那普利(Benazepril)为第三代血管紧张素转化酶掏抑制剂(ACEI),经肾和胆汁双通道排泄,为长效降压药.本研究旨在观察两药联合应用对中、重度高血压病的降压效果、血清电解质、血脂、血糖和心、肾功能的影响.使用药物吲达帕胺为天津工业研究所生产,苯那普利为瑞士汽巴嘉基公司生产.
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瑞芬太尼TCI复合依托咪脂麻醉用于无痛人工流产术的临床效果
瑞芬太尼(瑞捷,湖北宜昌人福药业)为新一代阿片类麻醉性镇痛药,具有起效快、作用时间短、镇痛作用强等优点, 依托咪脂(福尔利乳剂,江苏恩华药业)为短效催眠药,对呼吸循环的影响轻微,因此适用于门诊短小手术的应用.我院从2007年以来开展瑞芬太尼-依托咪脂复合麻醉实施人工流产手术,现报告如下.
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三氧化二砷失活致化学性颌骨坏死10例临床分析
三氧化二砷(As2O3)失活法是目前临床上广泛应用的牙髓无痛法,效果肯定.但其属剧毒药物,对组织的毒性作用没有自限性,使用不当或作用时间太长极易形成药物性根尖周炎及牙周膜炎[1,2],严重者可造成牙槽骨的坏死[3].我科自1990年以来收治因As2O3失活不当导致的化学性颌骨坏死共10例,报道如下.
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四环素甲硝唑凝胶配合牙列套治疗牙周炎的疗效观察
牙周炎是以厌氧菌感染为主的感染性疾病,药物治疗能够控制引起牙周病的致病菌,其疗效肯定.但全身用药时,局部药物浓度不高,造成药物浪费,并可能引起副作用.牙周局部给药,用药量小,副作用少,目前虽有多种局部给药的方式,但存在着作用时间短,或因牙周袋较深或袋口窄紧而操作困难等缺点.使用四环素甲硝唑凝胶配合牙列套局部给药, 其接触作用时间可达10h/d左右,该方法安全可靠,使用方便,可由患者自行操作.材料和方法1.病例选择选择我院口腔科门诊牙周炎患者30例,共392颗牙,年龄16~72岁,平均年龄 33.5岁.受试者近3个月内均未进行过牙周的基础和药物治疗.
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自蛋白纳米粒的制备工艺及在药学中的应用
白蛋白纳米粒是以白蛋白作为载体,包封或吸附药物,经过同化分离而形成的实心球体.由于白蛋白材料具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等特点,使其在药物输送方面具有许多优越性:(1)可缓释药物,从而延长药物作用时间;(2)可达到靶向输送的目的;(3)可在保汪药物作用的前提下,减少给药剂量,从而减轻或避免毒副反应;(4)可提高药物的稳定性,有利于储存;(5)可用以建立一些新的给药途径,包括体内局部给药、黏膜吸收给药、多肽类药物的几服给药等.
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Ang Ⅱ受体拮抗剂的研究进展
1971年,Gavras报道了兔动物实验,静脉输入大量血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)可致大面积心肌坏死,1973年,Laragh等以原始型AngⅡ受体拮抗剂肌丙抗增压素(saralasin)静脉注射可使肾素依赖型高血压患者的血压立即下降至正常,并可使急性心力衰竭患者的异常血液动力学恢复正常,这是世界上第一次应用肽类AngⅡ受体拮抗剂(ARB),由于saralasin不能口服,作用时间短,只具有部分AngⅡ效应,故未能应用于临床.从此,科研人员加速了对肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)的科学研究[1].
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慢性应激动物模型的应用与思考
慢性应激概念属病理生理学或生理心理学范畴,即非直接的致病因素,也非病理结果,而是介于因果之间的机体的非特异性复杂心身反应过程,是临床多种疾病发生发展过程中的重要参与机制,具有多因素综合作用、多系统共同参与、表现复杂多样的特点.心身医学的兴起以及社会文化与人类健康关系的研究促使新健康观念形成,肯定了应激源、应激反应与多种疾病之间存在密切联系.根据应激理论,人们利用不同性质、强度、作用时间和方式的各种应激源作用于实验动物,以期在实验动物体上复制人类的慢性应激状态或模拟慢性应激相关性疾病,从而为研究慢性应激的病理生理机制、慢性应激与疾病的关系、防治与慢性应激损伤相关的心身疾病以及抗慢性应激损伤药物的研究开发等提供可靠的实验工具.目前学术届关于慢性应激动物模型的制作方法以及模型应用方面存在争议,非常有必要对该动物模型的制作方法要点及适用范围、使用条件进行归纳总结与探讨.
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米索前列醇塞肛预防产后出血效果观察
产后出血是导致产妇死亡的主要原因.以往使用缩宫素作为子宫收缩剂,对防治产后出血起到重要作用,但存在起效慢、作用时间短、用法单一等缺陷.现观察米索前列醇在减少产后出血方面的效果,报告如下.
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异丙酚在人工流产术中的应用
异丙酚是新型短效静脉麻醉药,因起效快、作用时间短及副作用少等优点而逐渐被广泛应用于临床麻醉诱导与维持.我院使用异丙酚静脉麻醉开展无痛人工流产服务,取得较好效果,现报道如下.
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米索前列醇预防产后出血的临床研究
宫缩乏力是产后出血的首位原因,传统的宫缩药物是催产素和麦角新碱,但前者的敏感性个体差异较大,作用时间较短,后者的禁忌证较多,应用受限.近年来,国内外已开始用前列腺素(PG)防治产后出血,效果满意[1].为探索一种新的预防产后出血的安全有效的方法,我们采用米索前列醇(misoprostol,米索)于产后肛门用药,作前瞻性研究.
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异烟肼药物浓度及作用时间对结核分枝杆菌生长状态的影响
目的 了解异烟肼药物浓度及作用时间对结核分枝杆菌生长状态的影响.方法 29例结核分枝杆菌异烟肼敏感株与0.2μg/ml、1μg/ml、5μg/ml浓度异烟肼分别作用24h、48h、72 h后,接种7H10固体培养基,37℃培养,观察异烟肼不同浓度、不同作用时间下结核分枝杆菌生长情况,以未与异烟肼作用的菌株作为对照;以初见菌落时间与第5周末菌落状态(包括菌落数量、大小、疏密程度)为观察指标,并将菌落数量、大小等设定等级给予相应分数得到每株菌的菌落状态评分;终以平均初见菌落时间与5周末菌落状态平均分值作为考量指标.结果 对照组平均初见菌落时间为12.48 d,经0.2μg/ml、1μg/ml、5μg/ml浓度异烟肼作用24 h时平均初见菌落时间比对照组分别延长3.80 d、6.93 d、7.55 d,作用48 h时分别延长9.90 d、10.86 d、12.45 d,作用72 h时分别延长9.31 d、9.80 d、12.18 d;对照组5周末菌落状态平均分值为10.59,经0.2μg/ml、lμg/ml、5μg,/ml浓度异烟肼作用24 h时菌落状态平均分值比对照组分别减少2.04、3.79、3.9,作用48 h时分别减少6.04、6.35、6.83,作用72 h时分别减少5.66,6.25,6.76.结论 异烟肼对结核分枝杆菌生长状态的影响与药物浓度的升高关系并不明显,但其影响随着药物作用时间的延长而显著,且在作用48 h达到平台期.提示我们在临床用药中应考虑药物的抗菌后效应.
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伊拉地平对血压和肾功能的影响
钙拮抗剂是目前应用较广的降压药物,尤其是钙拮抗剂的缓释剂型,具有降压作用时间长,不良反应轻和服药次数少的优点,颇受临床欢迎.本文应用伊拉地平(Isradipine,导脉顺,瑞士产)治疗20例高血压病(EH)患者,通过观察用药前后血压和肾功能的变化,探讨其对血压和肾功能的影响.
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积极开展老年人合理用药
衰老是一种既复杂而又难以严格区别的生理过程,通常表现为人体的形态结构和生理功能都发生衰退和老化,如胃肠蠕动减弱,消化酶分泌量及其成分减少,血微循环不畅、血浆电解质很容易发生紊乱,特别是肝和肾这两个处理药物的重要器官,其功能随着年龄增长而明显降低,导致药物化体内的代谢和排泄水平下降,容易产生蓄积.另外老年人自身防御功能较差,机体的适应能力下降,药物作用的受体数目及亲和力发生变化,常导致机体的耐受性降低,敏感性升高.总之由于在衰老过程中,人体的生理功能的变化,使得药物在老年人体内的吸收、分布、代谢、排泄以及机体对药物的反应性等,均与青年人明显不同,常出现药物效应增强、作用时间延长、毒副反应增加等现象.
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丙泊酚伍用芬太尼在无痛流产手术麻醉中的应用
丙泊酚是目前临床上应用为广泛的静脉麻醉药.它静脉注射后起效快,作用时间短,几乎适合临床各类手术的全麻诱导,尤其是需要术后快速清醒的患者[1].丙泊酚以其良好的可控性和清醒彻底的优点,广泛用于无痛人流,还可以与强效镇痛药芬太尼、阿芬太尼氯胺酮等联合用于时间稍长的手术[1].本研究的主要目的是进一步了解丙泊酚与芬太尼伍用,在无痛人工流产中对循环、呼吸系统的影响和术中患者是否知晓情况.
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腰麻-硬膜外联合麻醉后垫枕和免枕平卧对头痛的影响
腰麻-硬膜外联合麻醉(CSEA)兼有腰麻(SA)起效迅速、作用完善和连续硬膜麻醉(CEA)作用时间灵活等很多特点.笔者对CSEA后垫枕和免枕平卧对头痛的影响进行了比较,现报道如下.
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硬膜外腔注入康宁克通-A复合液治疗腰腿痛93例
腰腿痛是临床常见病、多发病,发病原因很多,治疗方法也有很多。我院应用硬膜外腔注入康宁克通-A复合液的方法治疗腰腿痛93例,治愈率88.1%,有效率96.8%,疗效显著,报道如下。1 临床资料1.1 一般资料 1997年1月~2000年6月在本院治疗的腰腿痛患者93例,男82例,女11例;年龄19~60岁,平均43.5岁,病程长3年,短1 d。其中经CT或(和)X拍片确诊为腰椎间盘突出症者52例,肥大性腰椎炎21例,坐骨神经痛15例,其它原因的腰腿痛5例,全部患者经检查均排除恶性病变。1.2 治疗方法 患者取侧卧位,患侧在下,根据临床检查提示在患者病变椎体上1~2个椎间隙行硬膜外腔无菌穿刺,穿刺成功后,先注入2%利多卡因3 ml,观察5 min,无不良反应并排除脊髓麻醉现象后,再缓慢注入由康宁克通-A针剂40 mg(美国施贵宝大药厂生产),维生素B 12 500μ g、生理盐水8 ml组成的复合液,然后拔出穿刺针,平躺观察30~40 min。1.3 疗效标准及结果 治愈:疼痛完全消失,直腿抬高试险阴性。有效:疼痛明显减轻,直腿抬高试验50~60度。无效:疼痛无变化。93例患者中治愈82例,有效8例,无效3例。治愈率88.1%,有效率96.8%。全部患者均未发生其它并发症及明显副作用。2 讨论 腰腿痛的产生主要是由于相应的神经根受到刺激后,神经根及周围组织产生渗出、细胞增生、粘连等组织变性,使疼痛的敏感性增加,痛阈降低,从而产生疼痛。康宁克通-A是一种作用时间长、消肿作用强的合成皮质类固醇,维生素B12具有改善神经细胞代谢,营养神经的作用。通过硬膜外腔注入康宁克通-A复合液,可以直接作用于病变部位和受累神经根,充分发挥其消炎、消肿作用,消除或减轻粘连和肌肉痉挛,改善病变部位及神经根的血流和营养代谢,达到止痛效果。