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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究
目的:探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移的机制。
方法:利用D-4F预孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs),而后给予氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导;采用CCK8细胞活力试剂盒检测VSMCs的增殖;利用transwell迁移小室和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移;采用活性氧探针测定活性氧簇(ROS)的释放;利用western blot检测PI3K/Akt信号通路的激活和血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达。使用PI3K/Akt抑制剂、HO-1抑制剂及RNAi下调HO-1的表达,检测D-4F拮抗ox-LDL诱导VSMCs增殖和迁移的机制。 -
生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜(BF)[1],关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料:抗菌药物:亚胺培南(美国默沙东公司)。试剂:2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等,均为国产分析醇。菌株:选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株(中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离)。培养基:胰酶大豆肉汤(TSB,法国BioMerieux公司)。Nitrocefin (英国Oxiod公司)。器材:医用硅胶膜(北京医用硅胶研究所);扫描电镜(S-800 日本Hitachi公司);低温超速离心机(上海安亭公司);可见紫外分光光度计:日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法:(1) 生物被膜的建立:取30株肺炎克雷伯杆菌,经37 ℃孵育24 h,配制成0.5 mol/L菌悬液,将每株菌菌悬液3等份分为3组,A组为浮游克雷伯杆菌,B组及C组菌以硅胶膜为载体,用改进的平板培养法[2]建立生物被膜,标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定[3]。(2) 诱导β-内酰胺酶产生:亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定,采用标准微量稀释法,其MIC值介于0.07~0.5 mg/L,将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备:A、B、C 3组菌孵育至第3天,将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡(120 W,15 min)。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min,弃去上清液,以0.05 mol/L,pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后,将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中,用冻融法[4]使细菌菌体破坏,然后以低温2 000 r/min离心60 min,上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性:用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定:以Nitrocefin为底物,在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析:对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验,分析差异的显著性。
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基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9在壶腹癌中的基因表达及意义
肿瘤从原位增殖到侵袭转移的过程中,肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质的能力,必须借助某些酶,使基底膜成分降解,并在有关因子的协同作用下穿透基底膜完成侵袭转移过程。其中基质金属蛋白酶是重要的一类,MMP-2和MMP-9是降解基底膜主要的基质金属蛋白酶。本组用免疫组化方法观察壶腹癌中MMP-2、MMP-9的表达,探讨其在肿瘤侵袭转移中的作用。 资料与方法 1.材料:本组壶腹癌42例,男26例,女16例,年龄30~68岁。正常壶腹8例(标本取自胰腺癌行胰十二指肠根治术)。所有标本均经手术证实或在本院病理科复查HE切片后确诊,经10%甲醛固定、石蜡包埋、4μm连续切片。根据癌细胞分裂相、核异型程度及癌细胞的排列分为高、中、低分化3组,并按美国癌症联合会(AJCC)标准进行TNM分期。 2.试剂:鼠抗人MMP-2、MMP-9单克隆抗体,胃蛋白酶、S-P试剂盒及DAB显色试剂盒为Maxin公司(美国)产品。 3.方法:采用S-P免疫组化法,切片常规脱腊水化,3% 过氧化氢洗10min,PBS洗10min。按不同抗原进行预处理,MMP-2组切片不作预处理,MMP-9组切片以胃蛋白酶消化20min。10%正常羊血清室温孵育10min;一抗(1∶75)4℃孵育过夜,PBS洗10min;生物素标记的二抗室温孵育15min,PBS洗10min;链亲和素-过氧化物酶室温孵育10min,PBS洗10min;DAB显色3~5min,流水冲洗,苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,干燥,中性树脂封片,光镜下观察结果。以已知胰腺癌阳性片为阳性对照,以PBS代替一抗为阴性对照。
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氧化型低密度脂蛋白脑血管运动效应的实验研究
近年来的研究结果提示,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可抑制人和动物冠状动脉内皮依赖的舒张,而其对脑动脉的影响则知之甚少.因此,我们研究了ox-LDL 对兔离体颅内外脑血管(颈动脉和基底动脉) 内皮依赖的舒张功能的影响,现将结果报道如下.材料和方法:成年雄性新西兰大白兔,随机分为4组:1组(6只),以天然LDL(n-LDL)孵育血管条30 min;2组(6只),以ox-LDL孵育血管条30 min;3组(5只)以ox-LDL+L-精氨酸孵育血管条30 min;4组(对照组),单纯以Krebs液孵育.用不连续密度梯度超速离心法提取LDL,Cu2+ 诱导法制备ox-LDL;等长张力法测定动脉条的反应性,得出浓度反应曲线,进行统计学处理.
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1997-1998年非洲东部的裂谷热
自1997年11月开始,非洲东部经历了一次高记录的裂谷热大流行.爆发由1997年10月到1998年1月罕见特大降雨和洪水引起.这些外部条件适宜埃及伊蚊卵在泛滥洪水中孵育,而伊蚊卵在干旱条件下存在于整个地区.
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谷氨酰胺对大鼠海马脑片谷氨酸递质释放的影响
在以前的工作中我们观察到,饲料中补充谷氨酰胺(Gln)可使大鼠脑组织中Gln和谷氨酸 (Glu)含量升高,并引起一系列代谢和功能的改变.当脑组织处于丰富的 Gln环境中时,Glu 等兴奋性氨基酸的释放是否会受到影响呢?由于条件所限,在整体无法观察这一过程,但离体脑片为我们提供了一个较为理想的研究方法.本实验通过对离体海马脑片进行孵育,观察 Gln对 Glu递质释放的影响,从而进一步探讨 Gln的中枢作用机制.
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大脑中动脉栓塞再灌注鼠脑一氧化氮合酶活性变化及地塞米松的治疗效应
1.2 标本制备: 1.2.1 四氮唑(TTC)染色:大鼠断头取脑,经前联合冠状切片,厚约2 mm,浸入2% TTC液中置于37 ℃孵箱孵育60分钟,取出置于4%多聚甲醛中固定,TTC染色观察。 1.2.2 脑组织含水量:采用干湿重法: 含水量(%)=(1-干重/湿重)×100%。
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胰岛移植的研究进展
1胰岛干细胞研究脑神经干细胞与成熟胰岛β细胞的生物学特性具有较多相同点,可作为干细胞来源之一.Burns等从胚胎大鼠前脑中取出脑神经干细胞,在含有db-cAMP和烟碱的培养基中孵育,结果表明,这种干细胞对葡萄糖的刺激有反应,并且有一定C肽分泌.因此实验证实,神经干细胞作为胰岛细胞来源是可以实现的(#495).
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133 高LET照射后用核酸内切酶-Ⅲ孵育所致DNA链断裂及羟自由基聚集
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灌洗的大鼠肺泡巨噬细胞碱性磷酸酶组化显示
血液中单核细胞的碱性磷酸酶(Alkline phosphatase,AKP)呈阴性。本文对灌洗的大鼠肺泡巨噬细胞,以偶氮偶联法进行细胞化学染色,对其碱性磷酸酶的阳性反应进行探讨,并从肺泡巨噬细胞的获取、固定时间及孵育条件等方面进行了摸索。
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改良衣原体、支原体荧光检测法
采用军事医学科学院微生物检验中心生产试剂的原方法,将标本涂于载玻片上,然后以甲醇固定10 min,在将荧光抗体染液滴于标本上,置湿盒中,于37℃温箱孵育30 min后,冲洗,晾干,封片,镜检,所需时间近1 h.
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取卵术患者异丙酚麻醉时卵泡液异丙酚浓度的变化
异丙酚静脉麻醉是经阴道B超引导下穿刺取卵术的主要麻醉方法[1-3].实验研究显示,大鼠卵母细胞在含高浓度异丙酚(10μg/ml)中孵育30 min时,成熟率降低[4];在含异丙酚浓度≥0.4 μg/ml的培养液中孵育60 min后,卵母细胞受精融合率降低[5].本研究拟观察取卵术患者异丙酚静脉麻醉时卵泡液异丙酚浓度的变化,为异丙酚用于经阴道穿刺取卵术静脉麻醉的安全性研究提供依据.
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白色念珠菌对上皮细胞粘附性的观察
念珠菌性口腔炎是口腔的常见疾病,病原体以白色念珠菌多见.据报道[1、2],口腔粘膜上皮细胞对念珠菌的粘附性与上皮细胞的分化程度有关.我们从健康人的口腔粘膜获取上皮细胞标本,与白色念珠菌混合孵育后,应用巴氏染色方法来观察念珠菌对各类上皮细胞的粘附性能.
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高效价冷凝集素致血型鉴定困难1例报告
患者,男,12岁,因肺炎、胸膜炎、贫血入院,既往无输血史.Hb:65g/L;WBC:27×109/L.申请输血,但因患者血样在室温下出现凝集,考虑疑难血型而送检血样至本实验室进行血型鉴定.经检查发现患者血清中含有高效价冷凝集素,经37℃孵育并洗涤后定为"O"型,现报告如下.
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酶联免疫反应加速仪在检测乙肝表面抗原中的作用
我国为世界上乙型肝炎高发区,因此乙型肝炎表面抗原(HBsAg)已作为临床常规检验项目.酶联免疫吸附试验(ELISA)常规操作使用水浴箱孵育,而采用ELISA加速仪可加速反应,提高灰区标本检出率.为探讨ELISA加速仪的应用价值,我们同步检测质控血清和临床标本的HBsAg,并对结果进行对比分析.
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氟对家兔骨骼肌和血液中Ach释放及Ach-E、chE活性影响的探讨
氟对神经递质的影响引起许多学者的关注.一些研究表明,氟对骨骼肌运动终板神经递质能产生一定的影响[1,2].然而,迄今为止,氟在不同条件下对骨骼肌乙酰胆碱(Ach)的释放,乙酰胆碱酯酶(Ach-E)、胆碱酯酶(chE)的活性影响,以及他们之间的相互关系等方面的综合研究,尚未见报道.为了进一步验证氟对神经递质和其相关酶的作用.本研究采用组织孵育、组织化学、生物化学等方法,观察了氟对骨骼肌运动终板及全血中Ach、Ach-E、chE的释放及活性变化,探讨不同浓度的NaF对其影响的剂量效应和作用途径,无疑对氟中毒发病机理的研究将有重要意义.
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全自动酶免疫分析系统缓慢升温对ELISA试验结果的影响
ELISA全自动酶免疫分析系统对于减少人为差错和板间差异,以提高工作效率起到重要的作用.但是在实际工作中发现,全自动酶免疫分析系统的孵育系统升温比较缓慢,而温度是影响ELSA试验结果的关键因素之一.因此作者观察了全自动酶免疫分析系统缓慢升温对ELISA试验结果的影响.取HBsAg酶标板,用电子测温仪测量板中的蒸馏水在恒温水浴箱和FAME孵育槽中从25℃到37℃的温度变化.
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应用血型微板自动化鉴定血型的主要技术参数
微板法全自动血型检测系统是近期发展起来的新方法,由于许多技术参数尚无统一标准,使其推广受到一定限制.为探求该法各项技术参数的佳值,以ATplus2自动加样AnthosTs孵育震荡.
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血小板左旋精氨酸/一氧化氮系统在2型糖尿病胰岛素抵抗中的意义
近来研究表明,左旋精氨酸(L-Arg)/一氧化氮(NO)系统与胰岛素抵抗(IR)有关.血小板是胰岛素的作用部位之一,膜上有一氧化氮合酶(NOS)和转运L-Arg的通道.本研究测定2型糖尿病(DM)患者血小板NO含量并观察L-Arg和胰岛素孵育对血小板产生NO的影响,以探讨血小板L-Arg/NO系统在IR中的意义.
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联合应用血管紧张素Ⅱ与四氯化碳致大鼠肝纤维化模型研究
Hafizi等[1]证明,将心肌间质、肾间质成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)溶液中孵育,可促成纤维细胞增殖及细胞外基质(ECM)合成.将激活的肝星状细胞(HSC)在AngⅡ溶液中培养可促其收缩、分裂和增殖[2].