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休克肠淋巴液通过抑制F－actin表达提高大鼠主动脉内皮细胞通透性
目的：观察失血性休克肠淋巴液（PHSML）对大鼠胸主动脉内皮细胞（TAVECs）通透性以及细胞骨架蛋白F－actin表达的影响。方法：建立失血性休克模型（40 mmHg，1．5 h），液体复苏后，常规方法引流PHSML，分为0～3 h和3～6 h两个亚组；原代培养大鼠TAVECs并传代，检测CD31表达；分别观察4％和10％的PHSML对TAVECs形态（光镜、扫描电镜）和活性（ MTT法）的影响，并以LPS作阳性对照；应用Transwell小室，观察PHSML对TAVECs跨细胞电阻（ TEER）以及FITC－白蛋白透过率的影响；检测F－actin表达。结果：原代培养TAVECs呈CD31阳性表达；4％和10％的PHSML 0～3 h或3～6 h以及LPS均在不同程度上使TAVECs出现结构损伤与活性降低，TEER与F－actin表达降低，FITC－白蛋白荧光通透系数增加。结论：失血性休克肠淋巴液可损伤TAVECs，增加TAVECs单层细胞的通透性，其作用机制与降低F－actin表达有关。
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小分子HSP对缺血-再灌注所致小鼠心肌actin损伤的影响
目的:观察小鼠心肌缺血再灌注损伤时主要骨架蛋白actin的损伤性改变, 研究心肌组织中两种含量丰富的小分子热休克蛋白(HSP)-αβ-crystallin和HSP25对上述损伤的保护作用,寻找小分子HSP保护心肌损伤的可能靶蛋白.方法:采用Langendorff离体小鼠心脏灌流模型, 经停灌30 min复灌45 min导致缺血-再灌注损伤,测定心肌组织匀浆中脂质过氧化物丙二醛( MDA)的含量;运用光镜和电镜观察心肌组织形态学改变;采用免疫双荧光标记技术和激光共聚焦扫描显微镜(confocal microscopy)观察心肌细胞中actin的结构变化、αβ-crystalli n及HSP25分布的改变及其与actin的相互关系.进一步采用适宜浓度的活性氧H2O2在体外损伤心肌组织总蛋白,损伤后蛋白质经离心取沉淀,分别或联合加入αβ-crysallin、HSP25 和 HSc70(组成型HSP70)后,通过Western blot观察其对上述损伤蛋白质中的actin的解聚和复性作用.结果:小鼠离体心脏缺血-再灌注损伤后,心肌组织MDA含量明显增多(P＜0.05);与正常对照组相比,光镜及电镜下可见明显的细胞结构破坏和肌原纤维损伤:经免疫双荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜观察,发现心肌细胞重要骨架蛋白actin的排列发生紊乱和异常 "聚集”,αβ-crystallin和HSP25从胞浆向肌丝移位,其中HSP25与受损聚集的actin存在 "共分布”的现象.经蛋白质体外损伤和保护实验进一步发现,200 mmol H2O2可导致心肌组织蛋白发生变性、聚集及沉淀,而αβ-crystallin和HSP25可使上述蛋白质沉淀物中的actin 重新解聚和复性而出现在上清中,且两者间具有协同的效应,当有HSc70存在时,这种协同效应更加明显.讨论及结论:本研究首次观察到缺血再灌注可导致心肌组织主要的收缩蛋白和骨架蛋白actin发生排列紊乱和异常"聚集”,这种变化可能是导致缺血再灌注心脏心律失常、舒缩功能降低和细胞结构破坏的分子机制之一.本实验证实,心肌缺血再灌注时αβ-c rystallin和HSP25从胞浆向肌丝移位,其中HSP25和actin"聚集物”形成"共分布”关系. 此外,本实验通过蛋白质损伤和保护模型,发现两种小分子热休克蛋白对受损的actin具有解聚和复性作用,且小分子HSP之间及小分子HSP与HSc70之间具有协同的效应.上述发现提示小分子HSP可能在保护心肌损伤方面起着重要的作用,actin可能是HSP25保护的主要靶蛋白之一.另外,我们近期实验发现在上述心肌缺血再灌注损伤时αβ-crystallin有与另一细胞骨架蛋白:结蛋白(desmin)形成"共分布”的现象.结蛋白是否为αβ-crystallin 保护的主要靶蛋白尚待进一步研究.
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阿尔茨海默病患者神经细丝蛋白的过度磷酸化和聚集
细胞骨架蛋白tau的异常修饰在阿尔茨海默病(AD)的发病中起重要作用.神经细丝(NF)也是重要的细胞骨架,由轻(NF-L),中(NF-M)和重(NF-H)三种亚基组成.NF的正常功能是维持神经细胞的构架和轴突的口径.在AD患者,NF结构消失,被神经原纤维缠结所取代,然而,关于NF在AD发病中的作用尚不清楚.本研究应用一系列特异性识别磷酸化和非磷酸化NF亚基的单克隆抗体(SMI31, SMI32,SMI33, SMI34和NR4)以及定量放免印迹技术,发现AD患者大脑灰质中NF-H和NF-M的磷酸化程度比年龄匹配的神经性舞蹈病(HD)患者显著增高;NF-L只在去垢剂抽提级分被检测,且其含量也显著高于HD对照者;此外,从AD和HD脑灰质的不同级分或用不同抗体所检测到的NF各亚基的分布及其表达特性均存在多样性.上述研究结果不但为AD发病机制提供了新资料,还为深入探讨NF在AD发病中的作用奠定了基础.
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Alzheimer样蛋白磷酸酯酶缺陷的细胞毒性作用及其保护途径的探讨
目的和方法:蛋白磷酸酯酶缺陷是Alzheimer病(AD)患者神经细胞骨架蛋白异常磷酸化及其所致的神经原纤维变性的基础.本研究在细胞水平探讨AD样蛋白磷酸酯酶缺陷对神经细胞的毒性及其保护途径.结果:(1)15 nmol/L冈田酸(okadaic acid, OA)可使人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)光泽度降低,突起数目减少,轴突长度缩短,细胞活性降低;当增加OA浓度至30 nmol/L时,上述细胞毒性作用增强,并出现大量无光泽,无突起的圆形细胞;当OA浓度达45 nmol/L时,全部细胞均漂浮死亡.(2)正常SY5Y细胞中神经细丝以非磷酸化和磷酸化两种形式分布在细胞的胞体和突起,用OA处理后,识别磷酸化神经细丝的抗体SMI31和SMI34显色随OA浓度增加而明显增强,尤其在胞体中增强作用更为显著.相反,识别非磷酸化神经细丝的抗体SMI32和SMI33显色随OA浓度增加而显著减弱.(3)OA处理使抗微管蛋白的抗体DM1A显色显著减弱.(4)免疫印迹定量分析结果表明:OA处理使神经细丝和微管含量呈剂量依赖性降低.(5)一定浓度的褪黑激素(Melatonin, Mel)可从细胞形态,细胞活性,细胞骨架蛋白的磷酸化及细胞骨架降解等不同水平拮抗OA的毒性作用.结论:该研究结果为AD发病机制、模型复制以及有效防治途径提供了新资料.
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细胞骨架蛋白Testin通过调节内皮细胞功能发挥抗动脉粥样硬化作用
目的：动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种慢性炎症过程，其发病机制复杂，目前公认的是内皮损伤反应学说。有研究称，细胞骨架蛋白与内皮细胞功能及内皮相关信号通路密切相关。 Testin是一种新发现的细胞骨架蛋白，主要分布于黏着斑和细胞间连接的区域，参与细胞间的黏附，调节细胞的运动。然而，Testin在AS中的作用尚不明确。方法：利用家兔高脂饮食喂养16周建立冠脉AS模型，分离冠脉，免疫荧光染色观察Testin的分布，检测AS兔与正常兔Testin的表达水平；分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），分别予以1 mg／L LPS、40 mg／L ox－LDL刺激6 h，检测Testin表达水平的变化；于HUVECs过表达或下调表达Testin，观察其对细胞增殖、凋亡、迁移、招募单核细胞能力及AS相关因子表达的影响。结果：染色示Testin主要表达于血管内皮层并与内皮标志物CD31存在共定位，AS兔Testin mRNA和蛋白表达水平较正常兔降低（P＜0．05）；给予HUVECs刺激后，Testin mRNA和蛋白表达水平降低（ P＜0．05）；过表达或下调Testin，不影响细胞增殖和凋亡能力（ P＞0．05）；过表达Testin可促进HUVECs迁移而抑制单核细胞与其黏附，下调Testin则呈现相反作用（P＜0．05）；过表达Testin可升高一氧化氮合酶水平而降低单核细胞趋化因子1、基质金属蛋白酶2水平，下调Testin则呈现相反趋势（ P＜0．05）。结论：Testin可通过影响内皮功能发挥抗AS作用。
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肾上腺髓质素通过调控Rho GTPases促进足细胞细胞间接触的形成
目的 通过观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对足细胞细胞黏附分子和肌动蛋白相关蛋白的调控作用及相关机制,探讨AM对足细胞细胞间接触形成的影响.方法 将温度敏感型小鼠足细胞株分为对照组、AM处理组(10-7 mol/L)及AM联合蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89(10-6mol/L)处理组,并以腺苷酸环化酶激活剂福司柯林(forskolin)处理组(10-5 mol/L)作为阳性对照组.作用12h后,经免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜,观察细胞黏附分子和肌动蛋白相关蛋白的表达改变,并经Western印迹法检测其蛋白表达水平;采用谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验(GST-pull down assay)法检测Rho GTPases酶活性变化,Western印迹法检测其蛋白表达水平.结果 经AM作用12 h后,细胞黏附分子、肌动蛋白相关蛋白以及肌动蛋白F-actin均向细胞间接触集聚表达,该效应与forskolin作用一致,且可被H89阻断,但其蛋白水平均未见明显改变(P＞0.05).AM可分别上调RhoA、Rac1及Cdc 42的酶活性水平(P＜0.05),该作用被H89部分阻断,其总蛋白水平未见明显变化(P＞0.05).结论 AM可促进足细胞细胞间接触的形成,其作用机制可能与AM上调RhoA、Rac1和Cdc42酶活性,从而促进细胞黏附分子、肌动蛋白相关蛋白及肌动蛋白的重排密切相关,该效应部分由cAMP-PKA信号通路介导.
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颅脑损伤后细胞骨架蛋白羰基化致轴索损伤研究
目的 研究不同程度颅脑损伤(TBI)后脑组织氧化应激及细胞骨架蛋白羰基化水平变化及意义.方法 SD成年大鼠15只按随机数字表法分为轻度TBI组(n=5)、重度TBI组(n=5)和假手术组(n=5),应用液压颅脑损伤仪根据相应参数制备轻度、重度及假手术组动物模型.应用酶联免疫吸附法和Western blotting检测TBI后24 h大鼠脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及细胞骨架蛋白[β-肌动蛋白、β-微管蛋白和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)]羰基化水平,并应用Western blotting检测轴索损伤标志物磷酸化tau(p-tau)蛋白水平.结果 轻度、重度TBI组大鼠脑组织中MDA水平分别为(389.62±29.95) μmol/g、(642.50±37.56) μmol/g,较假手术组[(233.94±25.08) μmol/g]显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);GSH水平分别为(352.10±37.75) μmol/g、(153.27±43.49) μmol/g,较假手术组[(492.48±41.43) μmol/g]显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);β-肌动蛋白、β-微管蛋白和GFAP在轻度TBI组羰基化比例分别为0.099±0.104、0.194±0.114、0.643±0.037,重度TBI组分别为0.142±0.017、0.290±0.029、0.902±0.021,较假手术组(0.068±0.017、0.108±0.016、0.673±0.032)明显升高,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);p-tau比例在轻度、重度TBI组分别为0.289±0.014、0.373±0.012,较假手术组(0.185±0.009)差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TBI后脑组织氧化应激及细胞骨架蛋白羰基化水平随着TBI程度的增加而增加,可造成神经轴索运输障碍而导致轴索损伤加重.
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利用亚细胞组分蛋白分离技术有效提取细胞骨架及其相关蛋白
目的 建立一种可用于后续双向电泳研究的细胞骨架及相关蛋白的提取方法.方法 采用亚细胞组分蛋白分步提取方法,根据提取过程中细胞形态变化,提取后组分蛋白电泳图谱等优化提取条件.用双向凝胶电泳、免疫印迹分析、蛋白质点质谱鉴定等方法验证该提取方法的重复性和各组分蛋白提取纯度.结果 各组分蛋白的双向电泳蛋白图谱差异明显,具备各自特征性的蛋白点分布,各组分标志蛋白FAK、Integrin-β1、Histone Hl和cytokeratin 19分别只表达在细胞浆、细胞膜、细胞核和细胞骨架组分.细胞骨架蛋白组分中约90％以上的蛋白质点经质谱鉴定为细胞骨架及相关蛋白.结论 亚细胞组分蛋白顺序提取方法具有较好的重复性,提取组分选择性较高,并且能够有效提高低丰度蛋白的检出效率,是一种比较理想的进行蛋白质组学研究的样本预处理方法.
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内毒素血症大鼠心肌细胞骨架蛋白基因表达的变化
目的 探讨内毒素血症大鼠心肌细胞骨架蛋白基因表达的变化.方法 37只Wistar大鼠随机分两组,静脉注射精制内毒素或生理盐水,连续24h监测两组大鼠的心功能;另取54只大鼠注射精制内毒素之后不同时间点处死大鼠,取左心室心肌组织,给予常规病理切片、电子显微镜观察以及actin、tubulin、desmin等细胞骨架蛋白基因的转录水平检测.结果 内毒素组大鼠LVSP在8～24 h与对照组相比有显著降低,而LVEDP变化不明显,表明LPS以损害心肌收缩功能为主;显微结构实验显示给予内毒素处理不同时间段的大鼠心肌组织显微结构有明显的破坏,基因表达实验显示细胞骨架蛋白基因的转录水平变化随内毒索注射时间变化出现显著性差异.结论 LPS可引起大鼠心功能及心肌细胞结构出现明显的损害,并引起心肌组织细胞骨架蛋白α-actin、tubulin基因表达发生显著的变化.
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Annexin A2与肺癌
Annexin A2是钙依赖性磷脂结合蛋白Annexins 家族中的一员，在上皮细胞、巨噬细胞和单核细胞等多种组织和细胞上表达。 Annexin A2具有钙离子依赖性，能够结合磷脂、细胞骨架蛋白，参与人类许多疾病的发生发展，如心血管疾病、炎症性疾病及肿瘤等。目前研究发现Annexin A2与肺癌密切相关，本文重点综述Annexin A2的生物学功能及其与肺癌的关系。
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肿瘤抑制基因PTEN对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的影响
目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达变化对体外活化肝星状细胞(HSC)纽蛋白(vinculin)的影响.方法 分别将含有野生型PTEN基因及含有靶向PTEN的RNA干扰序列短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,构建体外活化大鼠肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型;应用免疫荧光法并结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测活化HSC的vinculin分布及表达.实验分组:(1)Control组:以无血清无抗生素的DMEM培养液代替腺病毒液转染体外活化HSC;(2)Ad-GFP组:以仅带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的载体空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC;(3)Ad-PTEN组:以带有GFP基因并携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad-PTEN转染体外活化HSC;(4)Ad-shRNA/PTEN组:以带有GFP基因并携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC.结果 外源性野生型PTEN基因及靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,并成功构建体外活化肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型.HSC的vinculin蛋白主要表达于胞浆,4组HSC的vinculin亚细胞分布未发生明显变化.Ad-PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(251.78±12.68)明显低于Control组(381.13±9.12)及Ad-GFP组(383.87±12.15),P<0.05;而Ad-shRNA/PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(770.77±20.12)显著高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组之间HSC的vinculin蛋白荧光强度差异无统计学意义(P>0.05).结论 PTEN表达变化对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的亚细胞分布无明显影响,但PTEN过表达可下调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达,而PTEN低表达则可上调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达.
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Ezrin和AnnexinⅡ在胆囊癌中的表达及意义
目的：探讨细胞骨架蛋白Ezrin 和AnnexinⅡ在胆囊癌发展转移过程中的意义。方法：应用免疫组织化学（Max-Vision）技术对含有59例胆囊癌组织及6例正常胆囊组织的组织微陈列芯片进行 Ezrin 和AnnexinⅡ表达的检测；应用Western blot 方法检测20例新鲜胆囊癌标本和6例正常胆囊标本中 Ezrin 和AnnexinⅡ的表达。并收集临床病理数据，与检测结果作统计分析。结果：免疫组织化学检测结果表明：胆囊癌组织中Ezrin 和AnnexinⅡ的阳性表达率分别为47．5％和50．8％，Ezrin 和 AnnexinⅡ在胆囊癌组织中的表达明显高于在正常胆囊组织中的表达， Ezrin 的阳性表达与肝脏侵犯、淋巴结转移和 Nevin 分期有关；AnnexinⅡ的阳性表达与肝脏侵犯、分化程度和Nevin 分期有关；胆囊癌中的 Ezrin 与 AnnexinⅡ的表达有统计学相关性（r ＝0．423， P ＜0．05）。 Western blot结果提示：Ezrin和AnnexinⅡ在胆囊癌组织中呈高表达，在正常胆囊组织中低表达，Ezrin和AnnexinⅡ的高表达与肝脏侵犯相关。结论：Ezrin和AnnexinⅡ可能是反映胆囊癌侵袭和转移潜力的重要生物学标记。检测Ezrin和AnnexinⅡ的表达对评估胆囊癌的恶性生物学行为有一定的临床意义。
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MTSS1与恶性肿瘤相关性研究进展
侵袭转移是恶性肿瘤重要的生物学特性,肿瘤转移是在一系列相关基因及分子改变调控下发生黏附、降解及运动,从而使肿瘤细胞浸润周围组织,浸润血管,在转移部位形成新的转移灶.已知细胞骨架蛋白可维持细胞形态、运动、黏附、有丝分裂过程,其中肌动蛋白的聚合及解聚可调节肿瘤细胞的形态及运动等,从而在恶性肿瘤转移中扮演重要角色.MTSS1 (metastasis suppressor 1)又称为MIM(missing in metastasis),是由Lee等[1]在研究膀胱癌转移机制发现的,初定义为一种转移抑制基因,其可通过多途径调控肌动蛋白参与肿瘤的浸润、转移,从而在恶性肿瘤生物学行为中发挥重要作用.
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复方861对活化肝星状细胞超微结构及细胞骨架蛋白的影响
为探讨复方861抗肝纤维化的药理作用,研究其对活化的肝星状细胞系(HSC-T6)超微结构及细胞骨架蛋白的影响.
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PTEN过表达及其突变对活化肝星状细胞纤维状肌动蛋白的影响
目的 探讨过表达野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)及其突变体G129E(仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失脂质磷酸酶活性)对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤维状肌动蛋白(F-actin)的影响. 方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞(HSC-T6),用瞬时转染技术,将携带野生型PTEN基因及G129E基因的腺病毒转染活化HSC.实验分组如下:对照组:腺病毒转染时以DMEM培养基代替病毒液;Ad-GFP组:转染表达绿色荧光蛋白(GFP)的载体空病毒Ad-GFP;Ad-PTEN组:转染携带野生型PTEN基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-PTEN;Ad-G129E组:转染携带G129E基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-G129E.应用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测活化HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;借助激光扫描共聚焦显微镜(LSCM),应用荧光素四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)标记的鬼笔环肽检测HSC形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内钙离子(Ca2+)浓度的变化.多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD检验. 结果 野生型PTEN基因及G129E基因在活化大鼠HSC大量表达;对照组与Ad-GFP组HSC多呈星形或多边体形,F-actin重构形成大量粗大的应力纤维,横跨于整个细胞内,细胞周围可见层状伪足;Ad-PTEN组及Ad-G 129E组HSC多为梭形,F-actin主要分布于细胞周边,细胞内可见少量纤细的应力纤维,细胞周边层状伪足消失.F-actin的荧光强度:Ad-PTEN组(357.67±13.39)及Ad-G129E组(377.25±14.55)较对照组(961.87±27.33)及Ad-GFP组(954.68±20.71)明显降低(F=1 783.486,P＜0.05);而Ad-PTEN组与Ad-G129E组、对照组与Ad-GFP组间的差异均无统计学意义(P＞ 0.05).HSC内Ca2+相对浓度:Ad-PTEN组(251.60±90.88)及Ad-G129E组(352.18±146.01)较对照组(1 953.95±132.99)及Ad-GFP组(1 937.57±115.17)明显降低(F=834.988,P＜0.05);而Ad-PTEN组与Ad-G129E组、对照组与Ad-GFP组间的差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 过表达的野生型PTEN及其突变体G129E可显著抑制体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构、降低了HSC内Ca2+浓度;并且,野生型PTEN的作用与其突变体G129E无明显差异.
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转化生长因子-β1对心房结构重构及细胞骨架蛋白的影响
心房颤动是临床上常见的持续性心律失常.大量研究发现,心房颤动的发生发展与心房结构重构密切相关,而心房纤维化是主要的结构重构改变.转化生长因子-β1是心房颤动纤维化重构中重要的致纤维化因子,不仅能引起细胞间质重构,还能影响心肌细胞骨架重塑及相关骨架蛋白表达异常.特别是使心脏特异性肌动蛋白交联蛋白α-actinin-2表达增加.细胞骨架蛋白参与了结构重构改变.现对转化生长因子-β1对心房结构重构及心房肌细胞骨架蛋白的影响进行综述.
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从遗传性心律失常的研究中我们学到了什么
心律失常的基因分子生物学研究至今已有15年,此领域所取得的进展硕果累累,越来越多的心律失常发生被证实与基因异常有关,其中既有单个基因突变的单基因遗传,也有多因素共同作用的群体遗传;多数为编码心脏离子通道的基因异常,也有为编码通道相互作用蛋白、细胞骨架蛋白、细胞间缝隙连接蛋白等非离子通道的基因异常.
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按摩促进兔股四头肌损伤修复的体内研究
目的 研究按摩对兔股四头肌损伤的肌组织病理修复、细胞骨架蛋白结蛋白( Desmin)和α-肌动蛋白(α-Actin)表达的效应差异,探讨按摩促进肌肉损伤修复的作用机制. 方法 健康成年雄性新西兰大白兔27只,体重(2.0±0.5) kg,随机分为3组,正常对照组(A组,n=3)、自然恢复组(B组,n=12)和按摩组(C组,n=12).A组实验动物不作任何处理,B、C组实验动物用自制打击器制备兔右后肢股四头肌损伤模型.C组于造模后第8天开始按摩,按摩转速3 000～3 100 r/min,按摩时间15 min,每天1次至处死取材为止；B组不予按摩.B、C组于伤后14d及21d各取6只实验动物股四头肌样本,HE染色观察组织病理变化,免疫组织化学染色及Western blot检测Desmin、α-Actin表达,并与A组正常股四头肌标本进行比较. 结果 B、C组实验动物均存活至实验完成.A组肌纤维形态规整,排列整齐,无结缔样组织；B组股四头肌标本见明显组织坏死,多数肌纤维断裂、萎缩、排列紊乱；C组骨骼肌组织形态、肌萎缩较B组改善,受损部位可见新生肌纤维.免疫组织化学染色显示各时间点B、C组Desmin、α-Actin表达均低于A组(P＜0.05);但C组Desmin、α-Actin表达均较B组增强(P＜0.05),且21 d时明显高于14d (P＜0.05).Western blot检测示A组Desmin、α-Actin高于B、C组(P＜0.05),B组两种蛋白表达低. 结论 按摩可促进兔损伤股四头肌的组织形态及细胞骨架恢复,可能通过上调Desmin、α-Actin表达促进骨骼肌组织损伤修复.
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内皮抑素对视网膜新生血管中细胞骨架蛋白Tubulinβ mRNA表达的影响
目的 观察血管生成抑制因子内皮抑素(endostatin, ES)对视网膜新生血管中细胞骨架蛋白Tubulinβ mRNA表达的影响.方法 试验分为高氧组、ES治疗组和对照组,每组18只新生C57BL/6小鼠.通过高氧的方法建立小鼠视网膜新生血管模型.ES治疗组小鼠分别于出氧箱后12 h、36 h随机选择一侧眼球玻璃体腔内注射1 μg ES.对照组小鼠在正常氧环境中饲养.提取3组小鼠视网膜总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR方法定量检测Tubulinβ mRNA在3组小鼠视网膜中的表达.结果 RT-PCR结果显示氧致视网膜病变小鼠视网膜中Tubulinβ mRNA的表达升高,与正常对照组比较差异有统计学意义[(5.34±1.35) vs (4.58±1.17)lg拷贝数/μg,P<0.05];ES作用后Tubulinβ mRNA的表达减少[(3.44±0.96)lg拷贝数/μg],与高氧组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 ES可以抑制Tubulinβ mRNA在视网膜新生血管中的表达,这可能与ES抑制视网膜新生血管形成的机制有关.
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肿瘤抑制基因PTEN/MMAC1/TEP1作用机制的研究进展
1997年Parson等三个美国研究小组在10q23.3位先后分离、鉴定、克隆到同一个新的肿瘤抑制基因,分别命名为:与细胞骨架蛋白Tensin同源在肿瘤第10号染色体有缺失的磷酸脂酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、在多个进展期肿瘤中均有突变的基因(mutated in multiple advanced cancer 1,MMAC1)、能被转化生长因子β1调节并在上皮细胞中富含的磷酸酶(TGF-β1-regulated and epithelia cell-enriched phosphatase 1,TEP1).本文就近年其抑瘤机制方面的研究进行综述.
