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实验性糖尿病大鼠血清一氧化氮与肿瘤坏死因子的相关性研究
目的:目前多数学者认为胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)是在一定的遗传背景基础上,通过环境因素的作用诱发免疫机制的紊乱而发病.我们拟通过观察、分析糖尿病大鼠血清一氧化氮与肿瘤坏死因子的相关性.为从免疫病理的角度探讨糖尿病的发生机制提供理论依据.方法:将Wis-tar大鼠22只,均为雄性,随机分为正常对照组、糖尿病一周组和四周组.糖尿病组均在乙醚麻醉下,腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 60 mg/kg, 0.1 mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液,pH4.2)术后72 h测定空腹血糖,血糖16~30 mmol/L者纳入糖尿病组;正常对照组一次腹腔注射与STZ等量生理盐水.血糖采用邻甲苯胺法测定;血清NO含量和NOS活力采用比色法测定;血清TNFα采用放免法测定.数据处理:各组间差异的比较采用t检验,NO与TNFα的相关性用直线相关直接法计算相关系数,并且采用直接查表法进行相关系数的显著性检验.结果:糖尿病大鼠血清NOS活力和NO含量均随病程延长而增高,但在一周内不明显(P>0.05),至第四周明显增高(P<0.05);TNFα也随病程延长而明显增高,第一、四周均明显升高(P<0.001);各组内NO与TNFα均呈高度正相关.NO是由NOS催化L-精氨酸与氧分子经多步氧化还原反应生成,NOS是NO合成过程中的关键酶.诱导型NOS(iNOS)在受到细胞因子刺激时,通过启动基因转录合成iNOS,进而生成高浓度NO,高浓度NO是损伤β细胞的终末因子,胰岛β细胞受损机制是以T细胞介导的细胞免疫反应为主.结论:从糖尿病早期起TNFα即发挥刺激作用,使体内产生高浓度NO,促进糖尿病的发生.
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MTT比色法测定药物对人宫颈肿瘤HeLa细胞作用的实验研究
目的:虽然子宫颈癌的手术或/和放射治疗取得了很大的成功,但仍有部分患者特别是局部肿瘤较大或有区域淋巴性转移,初治后易出现肿瘤未控,复发及转移.因此,人们把注意力转移到化学治疗方面,人们试行各种形式的化疗.此实验观察顺铂(cis-Platin,PDD)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)、甲氨喋呤(methotrexatum, MTX)三种化疗药物对人宫颈肿瘤细胞(HeLa细胞)的作用,为临床用药提供一定的依据.方法:采用MTT测定法观察以上三个化疗药物单用及合用对HeLa细胞的影响.
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小鼠肢体缺血再灌注后肾组织AT1和Mas受体差异性表达与肾损伤的关系
目的:通过观察小鼠肢体缺血再灌注( LIR)后,肾组织中AT1和Mas受体的表达与肾损伤程度的改变,探讨局部组织肾素血管紧张素系统( RAS)稳态失衡在LIR后肾损伤中的作用。方法:止血带套扎双后肢阻断血流,2 h后解套扎进行再灌注复制小鼠LIR模型。将雄性8周龄ICR小鼠48只,随机分为8组,每组6只,一组作为对照,其余7组为再灌注10 min、0.5、1、2、4、6、12 h模型组。 HE染色肾组织病理切片观察肾组织形态变化并进行病理损伤评分;化学比色法测定血清肌酐和尿素的含量;蛋白免疫印迹法( Western blot,WB)检测肾组织AT1和Mas蛋白的表达。结果:病理结果显示,LIR后不同时点小鼠肾组织有充血、水肿、炎细胞浸润和上皮细胞变性等不同程度损伤,且随灌注时间的延长,损伤评分逐渐升高;生化测定结果显示,肌酐和尿素的含量随灌注时间的延长而增加,再灌注4 h达高;WB结果显示,随灌注时间的延长AT1蛋白的表达降低,Mas蛋白的表达增加。结论:LIR后肾组织损伤逐渐加重,AT1/Mas表达失衡可能参与小鼠LIR后肾损伤的发生。
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人参皂甙Rg1的肠内菌代谢产物Rh1对小鼠免疫细胞功能的影响
目的:通过离体实验初探人参皂甙Rg1的肠内菌代谢产物Rh1对正常小鼠免疫细胞功能的影响,并比较二者的差异.方法:用MTT比色法测定脾脏T、B淋巴细胞增殖能力.用中性红比色法测定腹腔巨噬细胞的吞噬能力.用Griess法测定腹腔巨噬细胞释放NO的能力.Rh1与Rg1的终浓度分别为0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L.结果:(1)Rh1在低、中、高浓度对脾脏淋巴细胞增殖均有直接的促进作用(P<0.05或P<0.01),各浓度Rg1仅有促进脾脏淋巴细胞增殖的趋势,无明显差异.二者相比,低、中、高浓度Rh1的作用均比同浓度Rg1强(P<0.05或P<0.01).(2)3种浓度的Rh1对ConA诱导的T淋巴细胞增殖呈浓度依赖性抑制,且有显著差异(P<0.01或P<0.05),Rg1只在高浓度有明显抑制作用(P<0.05),低、中浓度Rg1虽有作用趋势,但无明显差异.二者相比,Rh1的抑制作用均比同浓度Rg1强.(3)Rh1与Rg1对LPS诱导的B淋巴细胞增殖均无明显作用.(4)不同浓度的Rh1与Rg1均能显著增强腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.01或P<0.01),二者相比,Rh1的作用均比相应浓度的Rg1弱,且中、高浓度有显著差异(P<0.01或P<0.05).(5)Rh1在低、中浓度能促进腹腔巨噬细胞产生NO,Rg1在各个浓度均有此作用(P<0.01或P<0.01).结论:Rh1能够直接促进脾脏淋巴细胞增殖,能够下调ConA诱导的T淋巴细胞的增殖,且作用均比Rg1强,Rh1还能明显提高腹腔巨噬细胞吞噬能力,促进NO的释放,结果提示Rg1对机体的免疫调节作用可能是通过其肠内菌代谢产物Rh1入血后直接对T、B淋巴细胞和巨噬细胞作用的结果.
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急性胰腺炎患者血清淀粉酶测定时容易出现的错误
磺-淀粉比色法测定血清粉酶简便易行,但也容易出错,尤其是对急性胰腺炎患者,原因是由于操作时血消需稀释,而稀释多少倍须根据实验情况而定,致使操作者用的血清稀释倍数不同而得出不同的检验结果,给临床医生的诊断带来困难,甚至误诊.
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应用酸性染料比色法测定总生物碱的含量
生物碱是存在于生物体内的含氮有机化合物,大多数存在于植物中,目前已分离到3 000余种,其中近百种具有很强的生理活性,广泛应用于临床医疗.它们常用的含量测定方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、酸碱滴定法和酸性染料比色法等.
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双波长与一阶导数分光光度法联用测定新脚气水中苯甲酸和水杨酸的含量
新脚气水中含苯甲酸和水杨酸.河南省药品标准[1]采用比色法测定水杨酸的含量,用中和法同时测定两组份的总含量,后者减去前者得苯甲酸的含量.上法测定结果误差较大.本文采用双波长分光光度法测定苯甲酸的含量,用一阶导数分光光度法测定水杨酸的含量,不需预先分离即可分别测定二者含量,方法简便、快速,结果较为满意.
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HPLC测定食道平散中人参皂苷Rg1、Re含量
食道平散为中药复方制剂,主要由人参、西洋参、全蝎、蜈蚣、细辛、三七等十余种中药组成,具有益气破瘀,解毒散结等功效,用于中晚期食管癌而致食管狭窄梗阻,吞咽困难,疼痛等症.本品原质量标准用比色法测定人参皂苷Re的含量,其有费时,重现性差,精密度低等不足.我们参照相关文献,采用高效液相色谱法(HPLC)对制剂中人参、西洋参、三七所含成分人参皂苷Rg1和Re进行了测定,该方法简便、快速而准确,重现性好,能更好地控制该制剂的质量.
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三七总甙对大鼠烧伤后心肌细胞膜离子泵活性的影响
心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca2+-Mg2+泵通过消耗ATP, 调节离子转运,直接参与心肌舒缩过程的调控;红细胞膜上的Na+-K+泵与左心室收缩功能之间有高度相关性,而Ca2+-Mg2+泵则与心脏舒张及收缩功能均显著相关.本室既往研究发现大鼠在严重烧伤后心功能下降,三七总皂苷(PNS)能有效改善烧伤后心功能.为观察PNS对烫伤大鼠红细胞及心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca 2+-Mg2+泵活性的影响,进一步探讨PNS改善烧伤后心功能的机制,本研究通过30%体表面积背部皮肤Ⅲ度烫伤大鼠模型,应用溶血法制备红细胞膜,蔗糖密度梯度离心法分离心肌细胞膜,用哇巴因抑制Na+-K+泵活性,采用生化方法同步测定红细胞膜与心肌细胞膜中Ca2+-Mg2+泵及Na+-K+泵活性, 以单位时间内分解ATP产生Pi量表示酶活性.用硫代巴比妥酸比色法测定心肌MDA产量.结果发现:大鼠烫伤后心率加快,心电图T波低平,心肌细胞与红细胞膜Ca2+-Mg 2+泵和Na+-K+泵活性均显著下降(P<0.01),Ca2+-Mg 2+泵活性在心肌细胞膜与红细胞膜之间呈显著相关性(r=0.951,P<0.01).100mg/kg的PN S可使心率及T波恢复、离子泵活性明显增加(心肌细胞膜两种离子泵活性分别升高48%、102% ;红细胞膜两泵活性分别升高98%、33%).烫伤后心肌组织MDA含量显著增加(P<0.05),PNS 可剂量依赖性抑制这种变化,PNS剂量与MDA产量显著负相关(r=-0.973,P<0.01).提示三七总皂甙改善烫伤大鼠心功能与其提高心肌细胞膜Na+-K+泵、Ca2+-M g2+泵活性,减少烫伤后心肌脂质过氧化有关.
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双硫腙比色法测定食品中铅含量的体会
食品中的铅主要来自食品的原料、生产加工、食品添加剂的广泛使用以及贮存、运输、销售等过程.铅对人体是一种有害物质.我国食品卫生标准把铅列为十大类食品中的重要毒物指标,对其含量要求严格限制,规定每千克或每升不得超过1.0mg.
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比色法测定琐琐葡萄中总三萜类成分的含量
琐琐葡萄(Vitis amurensis Pupr)系葡萄科葡萄属植物,主产于新疆、甘肃等省,以果实入药,具有清热、活血和抗病毒等功效[1].参考文献[2]并加以改进,建立了测定琐琐葡萄中总有效成分三萜类成分含量的比色法.该方法简便、快速,可供琐琐葡萄质量控制.
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从24 h尿蛋白定量的不同结果看调零点的重要性
目前,比色法测定在日常工作和急诊化验中仍普遍使用.在比色测定中,用蒸馏水还是用空白管调0点,在不少人中有一个模糊的认识是,只要测定管和标准管在同一调0条件下比色,则结果不受影响.
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蛋白对碘—淀粉比色法测定血清淀粉酶的干扰及排除
血清与尿液淀粉酶的测定为诊断胰腺炎的主要指标,虽然目前检测方法已多达200多种,但碘-淀粉比色法仍具有成本低、检测不需要昂贵仪器、试剂稳定、操作简便等优点,尤其适于急症处理.但实际应用表明该法也具有重复性差、准确率低等缺点,尤其是血清淀粉酶的测定,结果普遍偏低,甚至会出现对照管吸光度低于测定管而计算出负值的现象.笔者通过试验发现血清中蛋白使测定管吸光度增高,对本法有严重干扰,并设计出效果理想、操作简便的排除方法,使碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶重复性、准确率大大提高,测定结果与PNP法比较相关性良好,在原有优点基础上更具有实用性.
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巧用半自动生化仪测定淀粉酶活性
碘比色法测定血清或尿液淀粉酶活性,因其计数公式特殊,在半自动生化仪比色后需经计算才能得出酶活性单位.本文利用法国BASIC 500 P+半自动生化仪的功能测定淀粉酶的活性,能直接打印报告单,现介绍如下.
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应用氨·次氯酸钠比色法测定碱性磷酸酶
血清碱性磷酸酶测定对于肝、胆疾患以及骨骼疾患的诊断有重要的临床意义.常用的方法有比色法(K-A)和速率法,一般实验室多采用前者.
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反向Calmagite-EDTA比色法测定血清镁
血清镁测定常用甲基麝香草酚蓝、Calmagite及邻甲酚酞络合酮等方法,但均受脂血、胆红素等因素的干扰,致使该类标本结果偏高,本文运用Calmagite-EDTA分光光度法(反向法)克服了上述缺点.
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一种新的血清尿素一步法测定
Jean-Luc等报道,根据脲酶水解尿素释放氨引起pH升高,利用邻甲酚酞络合酮随pH改变的颜色变化比色法测定血清中尿素[1].我们经改进和实际应用,认为该法具有操作简便、快速、准确性、重复性好和干扰因素少等优点.测定结果满意,现报告如下:
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比色法测定角膜宁滴眼液中硫酸软骨素含量
角膜宁滴眼液主要成份硫酸软骨素是一种粘多糖,为角膜基质的主要成份之一.原地方标准[1]采用硫酸钡沉淀法测定硫酸软骨素含量,此方法精密度虽高,但专属性差,分析时间长.为更有效地控制其质量,与硫酸软骨素原料的含量测定法一致,我们参照卫生部药品标准[2],采用比色法测定角膜宁滴眼液中硫酸软骨素含量,并对该含量测定方法依照<中国药典>2000年版二部附录[3]药品质量标准分析方法验证指导原则进行了验证.
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HPLC法测定硝酸异山梨酯气雾剂的含量及每揿含量
硝酸异山梨酯为常用的抗心绞痛药,其气雾剂具有起效迅速,生物利用度高等特点,临床上常应用于各型冠心病、心绞痛的治疗和预防.卫生部标准[1]采用比色法测定其含量和每揿含量,操作较为繁琐,本文改用高效液相色谱法进行测定,结果理想,操作简便.
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比色法测定医用装置中环氧乙烷残留量的研究
环氧乙烷是广谱、高效气体杀菌剂,扩散性、穿透性极强.可在常温下对包装成型的医用装置进行灭菌,但灭菌后残留的环氧乙烷,如果不能有效地降到安全水平将会引起很大危害,为此测定其残留含量十分重要,目前所采用的方法都为气相色谱法[1,2]技术要求高,很难为一般单位普及,本文用比色法测定环氧乙烷的残留量,方法简便、准确.其原理为:残留在医用装置上的环氧乙烷在酸性条件下定量水解成乙二醇,经高碘酸氧化成甲醛后,与品红-亚硫酸显色,在560 nm下测定,由吸光度大小测出环氧乙烷的含量.