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酶联免疫法(ELISA)在检测肝纤维化指标中的应用
目的探讨酶联免疫法(ELISA)在检测血清透明质酸(HA) 、Ⅲ型前胶原(PCⅢ) 、Ⅳ型胶原(CIV)、层粘蛋白(LN)中的应用.方法利用ELISA与放射免疫分析法(RIA)分别检测116例慢性肝炎组、215例正常组和36例肝硬化组的血清HA、PCⅢ、CIV、LN,比较二者的优缺点.结果两种方法结果无差异(p>0.05).结论 ELISA法准确、简便和安全,可代替RIA法.
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丙肝抗原的检测与抗-HCV及HCV-RNA定量的关系探讨
丙型肝炎呈世界性分布,各国丙型肝炎病毒(HCV)感染率为0.1%~10%,平均为3%,1.7亿~2亿人感染了 HCV。我国一般人群 HCV感染率为3.2%[1]。成人感染 HCV后,50%~80%发展成慢性肝炎,其中约20%可发展为肝硬化。肝硬化患者中,每年1%~4%可发展为肝癌[2]。由于目前对丙型肝炎已有有效的治疗方法,因此对 HCV感染者的病毒检测,既有利于控制丙肝的传播和预防,又有利于丙肝患者的治疗。
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慢性肝炎的分级分期系统的评价及其实际应用中的问题
慢性肝炎是常见的肝脏疾病,主要原因为病毒性肝炎,但其他原因(如酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝炎、代谢性疾病等)引起的慢性肝炎不少见.
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内皮型一氧化氮合成酶及其mRNA在慢性乙型肝炎肝组织中的表达及意义
目的研究内皮型一氧化氮合成酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及其mRNA在慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)肝组织中的表达及与肝组织病变的关系和临床意义.方法采用免疫组化及核酸原位杂交等技术对48例CHB肝组织中eNOS的表达进行了观察和分析,同时研究了eNOS对CHB肝组织中转化生长因子-β受体Ⅰ(Transforming growth factor-β receptor Ⅰ,TGF-β RⅠ)的表达的影响.结果 eNOS主要表达于肝细胞、窦内皮细胞及血管内皮细胞,以肝细胞为主.连续切片观察,eNOS mRNA的表达与其酶蛋白的表达在阳性细胞数量及分布上基本一致.随CHB肝组织炎症程度和纤维化程度的加重,eNOS表达增强(r=0.6855,P<0.05;r=0.4828,P<0.05).随eNOS表达上调,患者PA及血清ALB下降(F=3.4101,P<0.05;F=9.1714,P<0.01).CHB肝组织内eNOS的表达与TGF-β RⅠ的表达呈明显正相关(r=0.7781,P<0.05).结论 eNOS可能通过影响TGF-β RⅠ在肝组织中的表达,参与CHB肝组织病理损伤过程.
关键词: 内皮型一氧化氮合成酶 转化生长因子-β受体Ⅰ 慢性肝炎 病毒性 免疫组织化学 核酸原位杂交 -
194例慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系的研究
目的 探讨慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系.方法 对194例慢乙肝患者进行肝组织病理、HBV免疫组化检查,并检测肝功能、血清HBVM和HBV DNA.结果 血清HBeAg阳性组的肝组织G2、G3~4、S2、S3~4发生率与阴性组比较差异有统计学意义,肝组织SO组与S1~4组比较差异有统计学意义,肝组织G0~1组与G2~4组、HBcAg阳性组与阴性组的HBVDNA含量比较差异亦有统计学意义,肝组织HBsAg表达为"+"者与"++~+++"者血清HBV DNA含量比较差异无统计学意义,肝组织达S1或(和)G2以上者血清ALT水平分别为:<40 U/L组占28.57%.40-80 U/L组占53.33%,81~400 U/L占80.15%,>400 U/L组占77.88%.结论 血清HBVDNA与肝组织HBcAg表达有一致性,与肝内HBsAg无关,HBV DNA含量低可能是肝组织炎症活动度和纤维化程度高,ASC和轻度肝损害者应争取肝活检,以及时判断肝组织病理程度和治疗时机.
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RNA干扰在抗HBV感染中作用的研究进展
乙型肝炎病毒(HBV)可引起慢性肝炎,慢性乙型肝炎(慢性乙肝)终可能发展为肝硬化、肝癌[1,2],所以慢性肝炎是严重危害人类健康的一种疾病.目前用干扰素或核苷类似物如拉米夫定、阿德福韦等治疗慢性乙肝,但疗效不理想,特异性差,易出现耐药性[3,4].RNA干扰(RNAi)是一种普遍存在的自然过程,双链RNA直接作用于同源基因特别序列使其沉默.这一过程非常保守,在真核生物中广泛存在[5,6].哺乳动物细胞mRNA可被RNAi特异地降解,如23、21个核苷酸的双链RNA [7,8],从而特异地阻断相应基因的表达[9].近几年来RNAi的研究取得了重大进展,因此被
评为2001年十大科学成就之一. -
丙型肝炎重组病毒载体疫苗的研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)是诱发丙肝的病原体,人类感染HCV后容易导致人类慢性肝炎、肝硬化或肝癌。HCV包膜糖蛋白的高变异性和体外细胞培养模型的缺乏制约了丙肝有效疫苗的研制。重组病毒载体疫苗是一项有前景的丙肝实验性疫苗,它可针对HCV产生有效的体液免疫与细胞免疫,现已成为丙肝疫苗研究领域的热点之一。本研究将对丙型肝炎重组病毒载体疫苗的研究进展进行综述。
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乙肝成体转基因小鼠模型的建立及应用
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒科,其感染可导致人类急慢性肝炎,尽管预防性乙肝疫苗的广泛接种,极大的降低了HBV感染的发病率,但由慢性乙型肝炎及其导致的肝硬化和肝细胞癌等仍严重危害人类的健康[1].
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慢性乙型肝炎患者血清细胞间粘附因子一1水平与干扰素应答的关系
我们检测一组慢性乙型肝炎患者血清sICAM-1水平,探讨其与慢性乙型肝炎肝细胞损害及干扰素应答的关系。研究对象为67例慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者,男61例,女6例,平均年龄(37.6±16.9)岁。其中慢性肝炎轻度21例、慢性肝炎中度27例、慢性肝炎重度19例。正常对照34例,男30例,女4例,平均年龄(35.9±15.3)岁。67例CHB患者均接受基因工程干扰素α1b(赛若金,深圳科兴公司产品)治疗24周。每次300万单位,第1~4周每日1次肌注,第5~24周每周注射3次。于治疗前、治疗12周、治疗结束及治疗结束后24周采血检测sICAM-1及肝功项目,并进行统计学处理。
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肝炎、肝硬化、肝癌患者外周血TGF-β1的检测
转化生长因子β是一个能调节多种细胞分化、增殖、迁移及细胞外基质合成与降解的多功能细胞因子.近年来,它在肝硬化的形成过程中的作用、在肝癌发病中的作用以及对肝癌的诊断价值受到关注,我们用酶联免疫法(ELISA)测定了119例急、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者血清TGF-β1的含量,并以健康人作对照,以了解其临床意义.
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乙型肝炎患者表面抗原与抗体检测和分析
我们采用Abbott公司的Imx自动免疫分析仪及其微粒子酶免分析法进行HB-sAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hbe和抗-HBc的检测;采用美国Biatronics公司建立的Am-plisensor法进行PCR定量检测;采用PCR产物直接测序。统计学方法,率采用x检验;均数采用t检验;相关性采用直线回归分析。共调查317例,男254例,女63例,年龄2~77岁,平均(32.9±14.7)岁,共检出HBsAg与抗-HBs同时阳性者29例,总检出率9.15%,其中无症状感染者4.69%(3/64)、急性肝炎0(0/16)、慢性肝炎11.11%(16/144)、重型肝炎18.42%(7/38)和肝硬化5.45%(3/55)。
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端粒酶hTR基因在石蜡包埋肝脏活检组织中的原位杂交检测
为了探讨肝脏活检组织中端粒酶RNA基因 hTR表达与肝炎病毒表达的关系,及hTR与肝癌发生的关系,我们用原位杂交方法分析了70份石蜡包埋肝脏疾患组织中的hTR活性表达,及HBV HCV和HAV-IgmAb的检测结果,并与癌旁及正常组织进行比较,其中46份针吸活检肝组织:包括20份肝细胞癌,14份肝硬化,12份慢性肝炎;24份手术切除的肝细胞癌组织;2份尸解死婴肝脏组织做正常对照.
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RT-PCR检测不同人群庚型肝炎病毒感染
为了解成都地区HGV感染情况,我们采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)对职业献血员、健康自然人群和急慢性肝炎病人进行了检测。 1 材料和方法 1.1 对象成都职业献血员165名,各项体检均合格。成都键康自然人群406名,A~E肝炎血清标志均阴性,ALT正常。肝炎病人包括急性甲型肝炎32人,急性乙型肝炎87人,慢性乙型肝炎95人,慢性丙型肝炎23人,非A~E肝炎18人,这些病人均用酶联免疫吸附试验(ELSA)(上海科华试剂)测定血清病毒抗原/抗体证实。 1.2 HGV引物据5'-NCR和NS5α区设计引物和捕获探针[2],由北京赛百盛(美国)生物工程公司合成。5'-NCR区扩增位于100-285核苷酸片段,NS 5α区扩增位于6 904-7 059核苷酸片段。
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慢性病毒性肝炎及肝硬化患者肠道菌群失调动态变化慢性病毒性肝炎及肝硬化患者肠道菌群失调动态变化
肠道内正常菌群是一个复杂的相互依赖、相互制约的微生态体系,其“平衡失调”与人的疾病状态密切相关〔1〕。据报道肝硬化患者均有不同程度的肠道菌群失调〔2〕。而慢性肝炎患者的肠道菌群状态及其在肝硬化后的变化情况,迄今国内外鲜有报道。为此,我们做了以下工作。1 材料和方法1.1 研究对象 于1996年8月至1997年5月期间随机选择我院住院患者50例,其中男46例,女4例,年龄17~52岁。按诊断标准〔3〕分成5组:慢性肝炎轻度组、慢性肝炎中度组、慢性肝炎重度组、慢性重型肝炎组和肝炎后肝硬化组,每组均为10例。选健康成人10例为对照组,年龄18~45岁,经病史询问、体格检查和肝功能试验证明未患过肝炎
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对几种肝纤维化诊断指标的评价
对104例病毒性肝炎患者同时进行了血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)及透明质酸(HA)等纤维化指标及肝组织病理学检查,以评价国产试剂在病毒性肝炎肝纤维化诊断中的意义。 1 材料和方法 1.1 研究对象 104例病人均为解放军302医院住院病人。男性93例,女性11例,年龄15~67岁。 1.2 诊断标准 按照1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。急性肝炎10例,慢性肝炎81例,晚期肝硬化14例(均为死亡患者)。 1.3 标本采集 肝穿活检前后2 d空腹抽血,分离血清,-20℃冻存备用。死亡患者死后立即肝穿,同时留取静脉血或心血分离血清。 1.4 试剂及方法 PCⅢ、HA采用放射免疫法,Ⅳ-C采用一步夹心EIA法。试剂分别购自重庆市肿瘤研究所和上海海医研究所。 1.5 统计分析 采用F检验。
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起病不到半年的慢性重型肝炎120例的临床特点分析
因为病程超过半年即为慢性肝炎,但起病不到半年的重型病毒性肝炎,判断为急性还是慢性,有一定的困难.由于两者的临床特点及预后,有较大的差别,有必要将他们加以区别.基于以上考虑,特将302医院1997年至1999年收治的起病不到半年的,后诊断为慢性重型病毒性肝炎120例患者的临床特点进行分析,供临床医师参考.
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病毒性肝炎患者全血及血清中Bcl-2蛋白的检测及其临床意义
为研究Bcl-2蛋白在急慢性肝病患者全血中存在情况及其临床意义,以及判断是否在血清中存在Bcl-2蛋白,特立此题。1 材料和方法1.1 研究对象及诊断标准 46例患者均为302医院1998年4月至1998年8月住院病人,男37例,女9例,年龄17岁~67岁,平均38.1岁。急性肝炎4例,慢性肝炎轻度8例,中度4例(慢性肝炎均经病理证实),肝炎肝硬变20例,慢性重型肝炎10例。临床及病理诊断均按照1995年5月北京第5次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。肝穿活检前后2天空腹抽血。1.2 Bcl-2蛋白含量检测 按照Bcl-2酶联免疫试剂盒提供的方法进行检测,并Labsystems Multiskan MS上,于450nm读吸光度A值,经换算得出Bcl-2蛋白含量。
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丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV RNA水平对疗效的影响
丙型肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染机体后引起的肝脏炎症,约85%的急性丙肝可转变为慢性肝炎,20%演变为肝硬化,1%~5%发展为肝细胞癌.
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用原位杂交证实检测非甲~非戊型肝炎患者肝组织中存在HGV RNA
应用原位杂交技术以地高辛素标记的HGV cDNA探针,对36例血清非甲~非戊型肝炎(HNA-E)患者肝组织中HGV RNA进行了检测,HGV RNA总检出率为30.6%(11/36),其中急性重型肝炎1例,亚急性重型肝炎3例,急性轻型肝炎3例,慢性肝炎4例.原位杂交阳性信号为兰紫色,细颗粒状,定位于肝细胞浆或/和核内.在急性和亚急性病毒性肝炎肝组织,阳性肝细胞多弥散分布,而于慢性肝炎多近汇管区呈片灶状.急性重型肝炎肝组织于残存的肝细胞中可见部分有阳性表达.肝组织免疫组化检出HGV NS5Ag阳性13例(36.1%),其中5例为HGAg单项阳性(急性重型肝炎1例,急性轻型肝炎3例及慢性肝炎1例).另8例同时呈HBsAg或/和HCV NS3Ag阳性.经统计,本组病例中原位杂交及免疫组化均阳性8例,两者均阴性16例,原位杂交阳性、免疫组化阴性3例,原位杂交阴性、免疫组化阳性5例,经配对计数资料的卡方检验,两种检出率差异无显著性(χ2=0.125,P>0.50).此外,病毒基因与抗原阳性表达的肝细胞其分布也较为一致,HGV RNA阳性信号不仅见于肝细胞胞浆内,也于肝细胞核和核周表达.
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新型乙肝疫苗CpG-BW006佐剂对鼠脾B细胞表型和功能的影响
乙型肝炎病毒(HBV)感染是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的重要原因,目前尚无治疗HBV感染的特效方法.乙肝疫苗是预防HBV感染安全、有效的手段.然而,接种乙肝疫苗后的免疫应答受多种因素的影响,约有10%的人群对该疫苗反应低下或无反应[1].CpG为近年来佐剂研究的热点.由于CpG-ODN具有同时提高细胞免疫和体液免疫的特点,在体内主要诱导Th1型免疫应答,因此被认为是一种有潜力的新型免疫佐剂[2].本研究用一种新设计合成的含有CpG基序的寡核苷酸( BW006)联合HBsAg对B细胞表型和功能的影响进行研究,目的是探讨CpG作为乙肝疫苗佐剂诱导机体免疫应答的机制,为新型预防和治疗性乙肝疫苗的研发提供依据.