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Daxx在细胞凋亡中的研究进展
Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein,Daxx)是一种高度保守核蛋白,能与Fas死亡结构域结合,激活Jun氨基端激酶通路促细胞凋亡,在某些情况下Daxx也具有抗凋亡作用.Daxx在细胞凋亡中起着重要的作用,这将为某些疾病的发病机制研究提供一定的理论与实践基础.
关键词： Fas死亡结构域相关蛋白 促凋亡 抗凋亡 -
中耳胆脂瘤上皮细胞的抗凋亡机制
近年来,有关中耳胆脂瘤的发生与细胞凋亡状态的研究受到广泛关注.新研究表明胆脂瘤上皮细胞凋亡受到抑制在中耳胆脂瘤的发生和发展中起着重要作用.本文对相关抗凋亡因子在中耳胆脂瘤中的表达进行了综述,并着重介绍了PI3K-Akt/PKB和MAPK两个抗凋亡信号转导通路及其在胆脂瘤上皮细胞抗凋亡机制中的作用.
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肾上腺素受体调节的自噬效应在胃癌细胞增殖及抗凋亡过程中的作用及机制
目的：流行病学研究表明，压力、慢性抑郁症和缺乏社会关心可作为癌症发生和进展的风险因素，但其机制并不清楚。自噬是细胞在多种应激状态下保护自身的一种重要机制，然而其在肿瘤发生发展中具有两种截然相反的作用：细胞保护作用及细胞毒作用。目前，关于应激在胃癌发生发展过程中的作用及自噬在应激下是促瘤作用还是抑瘤作用尚无相关研究。本研究探讨了慢性应激在胃癌发展过程中的作用及机制，并进一步探讨自噬在这一过程中的作用，为应激相关性胃癌的治疗提供新的思路。方法：采用束缚模具限制小鼠行动来建立应激模型；采用裸鼠皮下及原位移植瘤模型进行体内试验；在裸鼠后颈部皮下埋入微量药物泵来持续给予肾上腺素受体阻滞剂；采用高效液相色谱法检测小鼠血浆及胃组织中的儿茶酚胺浓度；采用电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察自噬体的形成；采用118例胃癌及癌旁组织制作组织芯片。结果：去甲肾上腺素及β2受体激动剂明显促进胃癌细胞的增殖，而β1受体激动剂无此效应；下调β2受体的表达可以阻断去甲肾上腺素的作用；β2受体途径在胃癌细胞抗凋亡中也具有促进作用；电子显微镜及激光共聚焦显微镜发现β2受体途径可以增加自噬体的形成。蛋白印迹发现β2受体途径上调LC3-II/tubulin比值并降低自噬底物p62的水平。使用E64d及Pepstatin A抑制自噬后，明显减弱去甲肾上腺素在胃癌细胞中的上述作用；体内试验也证实了上述作用；机制研究发现AMPK-ULK1通路介导了自噬在胃癌细胞中的作用；组织芯片检测发现ADRB2的表达与p-AMPK呈正相关；生存分析发现ADRB2高表达是胃癌患者的不良预后因素。结论：慢性应激及其介质去甲肾上腺素通过增强自噬效应，促进胃癌细胞的增殖及抗凋亡能力。我们的结果为胃癌的治疗提供了新的潜在靶点。
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NF-κB 通路与肿瘤发生及药物治疗的研究进展
自20世纪80年代 Sen 等［1］发现 NF —κB 以来，大量研究证明 NF —κB 参与机体多种生理和病理过程，包括炎症和细胞存活，增殖和分化以及肿瘤的发生和发展过程。NF —κB 能促进炎症的发生发展，也可以抗凋亡（促增生）。NF —κB 的这两个重要生理功能必须有精确的调节机制，维持两者间的平衡状态，这种平衡一旦被打破，机体将发生不可预知的病理过程，主要包括炎症的蔓延、肿瘤的发生发展［2］。现就 NF —κB 通路与肿瘤发生与药物治疗的研究进展综述如下。
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干细胞移植对大脑中动脉闭塞模型鼠脑组织miR-34a及survivin表达的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注损伤后大鼠脑组织miR-34a和survivin表达的影响,探讨BMSCs移植的抗凋亡和神经保护作用机制.方法 将192只大鼠随机分为空白组、模型组、PBS液移植组和干细胞移植组;采用改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型;通过尾静脉注射法行干细胞移植;改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)评估神经功能缺损;免疫组化检测survivin的表达;实时荧光定量PCR技术检测miR-34a的表达.结果 干细胞移植组的神经功能缺损评分在12h、1d时与模型组比较无明显差异(P＞0.05);3 d、7d时明显低于模型组(P＜0.05).干细胞移植组的survivin阳性细胞率在各时间点均显著高于模型组(P＜0.05).干细胞移植组的miR-34a表达量在各时间点均显著低于模型组(P＜0.01).结论 大鼠脑缺血-再灌注损伤可致病灶区miR-34a的表达上调;干细胞移植可明显改善脑缺血-再灌注大鼠的神经功能;移植干细胞可能通过下调病灶区miR-34a和上调survivin的表达发挥抗凋亡及神经保护作用.
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丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究
目的 观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型,采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系,确定丹酚酸B的保护作用,给药方式为预给药.实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R组)、H/R+丹酚酸B组,分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化.Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响,添加Akt抑制剂LY294002加以比较.结果 与正常对照组相比较,模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px以及CAT含量水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B能够显著提高SOD、GSH-Px以及CAT含量水平(P<0.05),显著降低LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平(P<0.05).Western印迹结果显示与正常对照组相比较,模型组Akt磷酸化水平显著降低(P<0.001),相对于模型组丹酚酸B能够显著提高Akt的磷酸化水平(P<0.01),而这种保护作用能被LY294002所阻断(P<0.01).结论 丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路相关.
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黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用的机制
目的 观察黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响,探讨黄芪甲甙抗心肌细胞凋亡的可能机制.方法 Balb/C小鼠50只随机分5组(每组10只).空白对照组:腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;病毒性心肌炎对照组:小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×105TCID50 CVB3 的Eagle's培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle's培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组:在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/(kg·d)]0.1 mL灌胃,共7天.采用缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.结果 与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组心肌细胞凋亡发生率增高;抑制凋亡因子Bcl-2基因及蛋白表达下降,而促进凋亡因子Bax基因及蛋白表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低.与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组能降低CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数,Bcl-2基因及蛋白水平表达增强,Bax基因及蛋白水平表达下降.结论 黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进了抑制凋亡基因Bcl-2表达,抑制了促凋亡Bax基因表达.
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KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染
目的 研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平；采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高.RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
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大鼠急性胰腺炎中核因子NF-κB抗凋亡机制的研究
目的探讨核因子NF-κB激活在急性胰腺炎抗凋亡机制中的作用.方法利用原位细胞凋亡检测法和免疫组织化学方法检测大鼠胰腺细胞凋亡及Bcl-2和Bcl-XL在胰腺组织中的表达.结果预防或治疗性给予N-乙酰半胱氨酸可不同程度地降低NF-κB激活,减轻胰腺坏死程度,增加胰腺腺泡细胞凋亡程度,降低Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达.结论细胞凋亡对腺泡细胞具有保护作用,与急性胰腺炎的严重程度呈负相关.Bcl-2和Bcl-XL基因表达可能参与NF-κB抗胰腺腺泡细胞凋亡过程.
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霍山石斛多糖通过激活GSK-3β信号通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤
目的:研究霍山石斛多糖抗心肌缺血-再灌注损伤的作用.方法:采用Langendorff离体灌流系统建造大鼠离体缺血-再灌注损伤模型.实验分为正常对照组(不停灌处理)、模型组(停灌20 min)及霍山石斛多糖低、中、高浓度(停灌前灌流已配制浓度为0.1、0.5、1.0 mg/L的KH液10 min)组.利用生物多导记录仪连续测定血流动力学参数.通过TTC染色检测心肌梗死面积.并用ELISA法检测冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性.ELISA法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比率、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.利用HE染色和TUNEL法分别检测心肌细胞的坏死和凋亡.Western blot检测心肌组织中GSK-3β的磷酸化水平.结果:与正常对照组比较,模型组出现严重的心肌坏死和极高的凋亡率,心功能下降,冠脉流出液中LDH和CK水平显著升高,心肌组织中MDA、IL-6和TNF-α含量显著升高,SOD的活性与GSH/GSSG比值均显著降低(P＜0.01).与模型组比较,霍山石斛多糖中、高剂量组的心肌坏死程度、梗死面积和细胞凋亡率显著降低,心功能显著改善;冠脉流出液中LDH、CK水平逐渐降低;心肌组织中MDA、TNF-α及IL-6含量显著降低,SOD活性和GSH-/GSSG比值显著升高(P＜0.01).高剂量霍山石斛多糖可显著降低心肌细胞凋亡指数,提高心肌组织中GSK-3β磷酸化水平.结论:霍山石斛多糖具有显著的抗心肌缺血-再灌注损伤作用,其作用机制可能与激活GSK-3β信号通路发挥抗氧化、抗炎和抗凋亡有关.
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小檗碱对糖尿病大鼠认知障碍及海马组织病变的影响
目的 观察小檗碱对糖尿病模型大鼠认知障碍及海马组织病变的影响,评价其对模型大鼠的脑保护作用.方法 雄性SD大鼠,除空白组外均以高糖高脂饲料喂养2个月,腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)40 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,模型复制成功后随机分为模型组,小檗碱低、中、高剂量组,给药1个月,Moriss水迷宫法进行行为学测试,检测血糖,部分动物取海马制备海马匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、钠钾ATP酶(Na+-K+-ATP)、乙酰胆碱酯酶(AchE),其余动物灌注取脑做海马组织病理切片,分别进行苏木精—伊红(HE)和免疫组化染色观察.结果 小檗碱可使模型大鼠体质量增加、血糖降低(P＜0.01),水迷宫实验逃避潜伏期缩短,原平台所在象限停留时间百分比和穿越原平台位置次数明显增加(P＜0.05,P＜0.01),SOD、Na+-K+-ATP酶活性明显增加,MDA水平、AchE活性均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),海马CA1区胰岛素样生长因子1(IGF-1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)表达增多,Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达减少.结论 小檗碱可通过降血糖,抗氧化、抗凋亡,降低胆碱酯酶活性等途径改善糖尿病模型大鼠认知障碍及海马组织病变,具有一定脑保护作用.
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过表达Wnt3基因抑制肝前体细胞凋亡
目的：利用腺病毒载体转染体外培养的肝前体细胞，研究过表达Wnt3对肝前体细胞凋亡的影响。方法用携带Wnt3的腺病毒载体（Ad-Wnt3）转染肝前体细胞，同时设立空载体腺病毒转染组（Ad-GFP）为对照。转染72 h后，用荧光显微镜观察Hoechst33342染色后细胞凋亡情况；流式细胞术检测Annexin-PE/7-ADD法标记的细胞凋亡率；RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示，Wnt3在肝前体细胞中特异性表达，表明腺病毒系统Ad-Wnt3能高效转染肝前体细胞。与对照组相比较，肝前体细胞转染Wnt3后，肝前体细胞的凋亡水平明显下降，凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。Bax的mRNA及蛋白表达水平则明显下降（P<0.05）。结论在肝前体细胞中，Wnt3基因过表达能抑制肝前体细胞凋亡，其机制可能是通过Bcl-2家族起作用。
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Nestin 表达对骨肉瘤细胞抗凋亡的影响
目的：探讨肿瘤干细胞标记物Nestin对肿瘤细胞抗凋亡的影响。方法采用骨肉瘤细胞MG63细胞株，经过0.9μmol／L顺铂处理12 h、洗涤后经免疫组化染色，显微镜观察幸存细胞的特性；并通过彗星实验验证0.9μmol／L顺铂对Nestin表达阳性细胞和Nestin表达阴性细胞的损伤程度差异。结果显微镜观察显示，顺铂处理后会有少量细胞幸存，且这些未凋亡的细胞绝大多数为Nestin表达阳性细胞；采用彗星实验的研究表明， Nestin表达阳性细胞经顺铂处理后的细胞核染色体损伤较Nestin表达阴性细胞更小。结论 Nestin可能在骨肉瘤MG63细胞抵抗化疗药物顺铂诱导的DNA损伤中起细胞核保护作用。
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氢气治疗心肌缺血-再灌注损伤相关机制的研究进展
氢是宇宙中分布广泛、含量丰富的元素.在正常条件下,氢气很少被人体吸收,因此,氢在生物体内的生理作用一直没有引起科学界的关注.近年来研究发现,氢气在心血管系统具有抗氧化、抗炎和抗凋亡的生理作用.在心肌缺血-再灌注损伤的病理生理过程中,其抗氧化保护作用业已证实,因此对心肌缺血-再灌注损伤有一定的治疗作用.本文就氢气在心肌缺血-再灌注损伤的应用及其可能机制进行综述.
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微小RNA与肿瘤干细胞耐药的研究进展
肿瘤治疗的障碍之一是出现耐药,传统化疗方案可以消灭大部分肿瘤细胞,但始终缺乏从根本上铲除肿瘤的方法.对肿瘤耐药发生机制的研究及寻找开发逆转耐药的药物是当前肿瘤化疗研究的重要课题.近年研究认为肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)具有自我更新、分裂增殖能力及耐药、DNA修复活性和抗凋亡等特性,而其耐药性使CSCs抵抗化疗药物的毒性作用,从而为肿瘤增殖和复发留下"种子",因此,CSCs是造成肿瘤耐药的根本原因.
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PI3K-p55γ亚基与疾病的关系
磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxy kinases,PI3K)是一个具有使羟基磷酸化功能和脂质激酶功能的酶家族.PI3K具有多种生物学功能,可被多种生长因子、细胞因子以及神经营养因子等激活,从而参与到多种细胞信号调节中,如细胞分化、迁移、增殖和抗凋亡等[1-3].根据各成员的序列同源性和脂质底物的特异性,PI3K家族成员可以划分为3类(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类),Ⅰ类进一步细分为Ⅰ A、Ⅰ B两种亚类.
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14-3-3蛋白与肝细胞癌发生发展关系的研究进展?
14-3-3蛋白是一个高度保守的细胞蛋白质,有7种亚型(β、γ、ε、η、ζ、σ和τ/θ),每种亚型都由不同的基因编码。目前研究发现14-3-3蛋白已有200多种靶蛋白,细胞中14-3-3蛋白可与磷酸化依赖的蛋白质相互作用,调控各种细胞功能,包括：促有丝分裂、调控细胞存活信号、细胞周期、细胞凋亡及细胞死亡。14-3-3蛋白表达增加有助于各种恶性肿瘤的发生、发展。14-3-3蛋白亚型的高表达与肝细胞癌( hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展以及不良预后有关。14-3-3蛋白通过调控多个靶点和信号通路来影响HCC细胞增殖、抗凋亡、HCC细胞迁移等。14-3-3蛋白连同特定下游因子,有可能成为影响HCC的治疗和预后因素。本文将从14-3-3蛋白对HCC细胞增殖、抗凋亡、侵袭的作用来综述其与HCC发生、发展的关系。
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卵巢癌耐药性研究进展
卵巢癌是女性致死率高的恶性肿瘤之一.化疗是非常重要的治疗手段.但是肿瘤的耐药性严重影响了治疗效果.近的证据表明细胞凋亡和抗凋亡的关键途径异常是肿瘤耐药发生和发展的关键因素之一.此外,新发现的这些途径之间的相互作用表明肿瘤耐药可能是多因素的.归根结底,肿瘤细胞在化疗药物作用下的存亡,决定于这一细胞的整体凋亡能力.在本文中,我们就促进细胞生存的生化途径和它们如何调节细胞的药敏性进行讨论,后得到一些新的研究方向,从而阐明基本的耐药机制.
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细胞凋亡在单纯疱疹病毒Ⅱ型中的研究
近年来,细胞凋亡在病毒研究中已成为了一个热点.凋亡是一种主动的由一些凋亡相关基因相互作用的细胞自我破坏过程.病毒必须在宿主细胞中生存与增殖,但病毒感染对细胞是不利的,因此被感染的细胞有许多通过自身凋亡来清除病毒,有些则被免疫系统所清除.在漫长的进化过程中,病毒也已形成了一些有效的逃避宿主防御反应的机制以维系自己的生存与繁殖,其中之一就是抗凋亡.
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冰冻葡萄粉及其多酚化合物抗凋亡的分子生物学机制研究
目的:探索冰冻葡萄粉抗胆酸诱导细胞凋亡的机制并调查冰冻葡萄粉中多酚化合物在此过程中的作用.方法:应用牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导Huh7细胞凋亡,同时用冰冻葡萄粉及其多酚化合物如表儿茶素、花青素、槲皮素、白藜芦醇进行干预,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量.免疫印迹法分析信号传导途径.结果:冰冻葡萄粉能显著降低TDCA诱导Huh7细胞产生的细胞内活性氧,凋亡蛋白Bax表达,并减少细胞色素C从线粒体内释放,抑制激活caspase-9, caspase-7和 caspase-3.在300 μg/mL浓度的冰冻葡萄粉中,4种多酚化合物只有槲皮素显示微弱保护细胞防止线粒体介导的凋亡.增加多酚化合物的剂量才能出现明显的细胞保护效应.4种多酚化合物按300 μg/mL的冰冻葡萄粉中各自的含量组合能够一定程度重现冰冻葡萄粉的抗凋亡效应.结论:冰冻葡萄粉降低氧化应激和线粒体介导的凋亡,其作用机制是防止线粒体损伤,抑制TDCA诱导的活性氧生成和激活的凋亡信号传导.推测表儿茶素、花青素、槲皮素是冰冻葡萄粉抗氧化、抗线粒体途径凋亡的重要活性成分.
