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兔血管平滑肌细胞活性氧的生成途径
目的探讨兔血管平滑肌细胞(VSMC)生成活性氧的途径.方法兔VSMC原代培养,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度过氧化氢(H2O2)对VSMC活力的影响;100μmol/L H2O2作用后不同时段,流式细胞仪检测VSMC细胞内超氧阴离子(·O2-)生成;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC NADPH氧化酶各亚基mRNA表达.结果随H2O2浓度增加,VSMC细胞活力逐渐下降,浓度≥30 μmol/L时,各时段吸光度值即有显著降低(P<0.05).100μmol/L H2O2作用后,(1)VSMC细胞内·O2-生成,其作用在24 h达峰值(DHE阳性细胞百分率24.01%);(2)VSMCp22phox mRNA的表达增加,并在1 h达峰值(为0 h的2倍),gp91phox和nox1mRNA的表达下降,尤其nox1,在1 h达低值(为0 h的15%).结论一定浓度的外源性H2O2可促进VSMC生成·O2-,NADPH氧化酶参与这一细胞效应.
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肌酐酶-肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐
目前肌酐酶法的测定主要有两种, 一种是监测肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶变化的酶动力学测定[1] , 另一种为肌酐氨基水解酶偶联肌氨酸氧化酶和过氧化物酶发生Trinder反应的酶动力学测定[2].其中, 后者由于试剂价格相对较低, 不受血氨和其他干扰物的影响, 目前已有大量的商品试剂盒供应.笔者将其应用在日立7600生化分析仪上进行肌酐两点速率法的测定, 取得满意的效果, 现报道如下.
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71例糖尿病患者并发泌尿系感染的临床分析
糖尿病发病率呈逐年上升的趋势,泌尿系感染是其常见并发症之一.糖尿病患者泌尿系感染的发病率明显高于非糖尿病患者,且病情严重,病程长,不易控制.如治疗不及时将影响糖尿病病情的控制及加重肾脏的损害[1].现将我院2006年12月-2008年12月45例糖尿病患者泌尿系感染情况分析报道如下.
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儿童肝小静脉闭塞症1例报告
患儿,女孩,6岁,以腹胀、腹痛、纳差21 d为主诉入院.21 d前无明显诱因出现腹胀、腹痛、纳差,病初在院外按"消化不良"治疗1周,食欲有所好转,仍有腹胀、腹痛,且腹部逐渐增大.肝功能:TP 40.3 g/L,A 28.1 g/L,G 12.2 g/L,ALT 130 U/L,AST 137 U/L,GGT 71 U/L;凝血功能:PT 15.5 s,PT-INR 1.4;胸腹部B超:右胸腔积液,肝中重度弥漫性损伤,肝大,腹水,下腔静脉肝后段狭窄;胸水ADA:2.82 U/L;腹水常规:粘蛋白阴性、定量22 g/L、细胞340×10~6/L、中性0.12、淋巴0.85、间皮0.03;血清铜蛋白氧化酶:125.5 IU/L;血常规、CRP、ESR正常;PPD试验阴性;结核抗体阴性;给予放腹水600 mL,输血浆、白蛋白等对症支持治疗,纳差、腹痛、腹胀无减轻,渐渐出现少尿.既往无肝炎、结核、血吸虫病史;爱吃零食,有随便吃药(有偷吃避孕药史,家中常备有三黄片等)及野生植物的习惯.
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重症卡介苗淋巴结炎与儿童X连锁慢性肉芽肿病
慢性肉芽肿病(chronic granulomatous disease,CGD)是少见的原发性吞噬细胞免疫缺陷病.患者的多形核粒细胞不能通过烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶产生超氧阴离子(O2-)来有效杀灭入侵的微生物.患者在儿童早期易于发生反复致命的过氧化氢酶阳性细菌和真菌感染,在慢性炎症部位形成肉芽肿[1].
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细胞色素c氧化酶与缺血性神经元损伤
细胞色素c氧化酶是细胞呼吸链终端酶,脑缺血缺氧时其活性下降与迟发性神经元损伤关系密切.研究其与迟发性神经元损伤的关系可能有助于认识缺血缺氧神经元损伤的发生机制.
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血清葡萄糖含量为零一例
我们用氧化酶(GOD-POD)法测定血清葡萄糖含量,遇到测定管不显色一例,报道如下:
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滇杠柳扦插繁殖及生根相关理化特性的动态分析
探索不同生长素类调节剂对滇杠柳扦插繁殖的影响,以及其生根过程中内源激素、氧化酶活性的动态变化规律.方法:采用不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、生根粉1号(ABT1)和萘乙酸(NAA)处理滇杠柳插穗,检测生根效果及生根过程中内源激素吲哚乙酸(IAA)、玉米素核苷类(ZRs)、脱落酸(ABA)含量及吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性的变化.结果:150 mg/L IBA处理滇杠柳插穗生根率达到80%,150 mg/L ABT1和NAA处理的插穗生根率为70%和68%,而对照只有23%生根.滇杠柳扦插生根过程可分为不定根诱导期、露白期和生长期3个阶段.不定根诱导期需要低含量的内源激素IAA、ZRs、ABA、较高活性的IAAO;不定根形成露白期需要高含量内源激素IAA、较高活性的PPO、低含量的ZRs、ABA和低活性的IAAO和POD;不定根生长期需要一定含量的IAA、ZRs、ABA和较高活性的PPO、POD、IAAO,在生根后期三种氧化酶活性下降.生根过程中,150 mg/L IBA的处理增加了插穗内IAA含量和PPO活性,降低了插穗内ABA、ZRs含量和IAAO、POD活性.结论:内源IAA、ZRs、ABA的含量和IAAO、PPO、POD活性的动态变化与插穗不定根生长过程密切相关.
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移植血管外膜早期NADPH氧化酶激活和新生血管形成
目的:动脉外膜所产生的活性氧和新生血管形成,可能导致和促进病理性血管重构的形成。本课题研究NADPH氧化酶在同种异体主动脉移植模型的外膜血管动态表达和新生血管形成。方法:将F344大鼠胸主动脉移植到Lewis腹主动脉造模。于移植后0.5、3、7和14 d收集移植血管,进行形态学分析、免疫组化和定量PCR检测。结果:血管外膜移植后3 d、内膜7 d增厚。移植血管外膜NADPH氧化酶亚基gp91phox和p47phox蛋白和mRNA表达水平3 d开始升高,14 d达高峰。免疫组化显示,巨噬细胞浸润可能是NADPH氧化酶表达的主要来源。而淋巴细胞浸润在各时点无显著差别。移植血管外膜分离、培养的原代成纤维细胞NADPH氧化酶表达也增加。 siRNA-p47phox沉默p47phox基因后,BrdU掺入和Transwell迁移实验显示,移植血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移能力显著受抑制。此外,移植14 d,移植血管外膜增厚伴有新生血管形成明显增加,外膜中微血管密度和血管内膜厚度呈正相关。结论:移植损伤可诱导血管外膜NADPH氧化酶表达和新生血管的形成,移植引起的外膜活性提高可能成为预防、治疗血管病变的靶点。
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Nox2来源的活性氧促进小鼠诱导性多能干细胞向动脉内皮细胞分化
目的:活性氧( ROS)调节诱导性多能干细胞( iPSCs)向内皮细胞分化的分子机制还不清楚。本研究旨在探讨NADPH氧化酶2(Nox2)来源的ROS在iPSCs向内皮细胞分化中的作用和分子机制。方法和结果:我们利用野生型和Nox2基因缺失型小鼠胚胎成纤维细胞,诱导生成小鼠iPSCs,发现Nox2基因缺失的小鼠iPSCs分化的血管内皮细胞( Nox2-/-miPSC-ECs)中, ;ROS水平、VEGF表达、内皮和动脉内皮细胞标志物以及Notch信号通路分子的表达均明显下调,且这种下调能被Nox2或Notch1过表达所逆转。外源性低浓度的H2 O2或过表达Nox2激活Notch信号通路,促进动脉内皮细胞标志物的表达,这种作用可被ROS抑制剂或抑制Notch1表达所阻断。 Nox2基因缺失导致iPSCs分化的内皮细胞存活、增殖、迁移及管腔形成能力下降。将Nox2-/-miPSC-ECs移植到小鼠缺血下肢肌肉中,缺血肢的毛细血管和小动脉密度明显低于对照ECs组, VEGF和Notch1表达下降。结论:Nox2产生的ROS通过激活Notch信号通路促进iPSCs向动脉内皮细胞分化。
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NADPH氧化酶介导地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡
目的:观察地塞米松( dexamethasone,Dex)对胰岛β细胞凋亡的影响及NADPH氧化酶( Nox)表达水平的变化。方法:将大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞分为正常对照组及不同浓度的地塞米松处理组。培养48 h后MTT法检测细胞增殖情况;An-nexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;real-time PCR检测Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达水平;荧光法检测ROS释放量;Western blot检测Nox4蛋白表达水平。结果:地塞米松诱导INS-1细胞凋亡具有明显的剂量依赖性,随Dex浓度增加,凋亡细胞数明显增多,并且在此过程中NADPH氧化酶Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达上调,Nox4蛋白表达水平随Dex浓度增加而升高,0.1μmol/L Dex处理细胞24h即可见ROS释放量明显增加,差异均具有统计学意义。结论:地塞米松诱导INS-1细胞凋亡可能与上调Nox1、Nox3、Nox4和p47phox表达,增加ROS生成,促进氧化应激反应有关。
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辛伐他汀对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织p47phox表达的影响
目的:观察辛伐他汀( SIM)对肾缺血再灌注损伤( RIRI)大鼠肾脏的影响。方法:SD大鼠分为5组;假手术组( sham);缺血再灌注组( I/R);SIM 5、20、40 mg? kg-1? d-1( Sim-L、M、H)组。给药2周后,复制RIRI动物模型,于再灌后24 h摘取双侧肾脏,观察肾损伤程度(HE染色);检测肾组织p47phox蛋白表达(Western blot)。结果:I/R组肾小管上皮细胞混浊肿胀,管腔扩张,上皮细胞胞浆空泡样变性、坏死。 Sim-M和Sim-H组肾小管上皮细胞损伤程度明显轻于IR组。 I/R组肾皮质p47phox蛋白表达较sham组明显上调;与I/R组相比,Sim-M和Sim-H组p47phox表达均明显减少。结论:SIM可明显减轻RIRI,减少RIRI大鼠肾皮质p47phox蛋白的表达,表明SIM减轻RIRI大鼠肾组织损伤的机制可能与其减少p47phox蛋白的表达、干扰NAD(P)H氧化酶生成通路的某些环节有关。
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TIR/BB环拟似物AS-1对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏的保护作用及其调控机制
目的:观察AS-1是否可通过调控肝组织慢性炎症和IR改善NASH,并阐明其调控机制。方法:在体实验,db/db小鼠MCD饮食4周复制NASH模型;体外实验,给予枯否细胞FFA与LPS共刺激,原代肝细胞IL-1β刺激。结果:与MCS对照饮食组相比,AS-1可明显降低MCD饮食组小鼠血浆中ALT水平,减少肝组织炎症细胞的浸润,抑制IRS1的丝氨酸磷酸化以及糖异生基因的mRNA水平增加。 AS-1可降低NADPH氧化酶mRNA水平和MDA含量。体外细胞实验发现,AS-1不仅可抑制FFA与LPS共刺激诱导枯否细胞pro-caspase-1裂解、caspase-1酶活化及IL-1β分泌。而且能够改善IL-1β诱导的肝细胞IR,抑制IL-1R与MyD88的结合及ERK/JNK/p38的磷酸化。结论:AS-1能够通过抑制肝组织炎症和改善IR,从而对NASH肝脏发挥保护作用,其机制与AS-1抑制IL-1R对MyD88的招募并影响MAPKs信号通路的激活,调控NADPH 氧化酶,抑制NALP3炎性小体活化以及IL-1β的分泌和功能的发挥有关。
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细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs通过PPARα发挥抗心肌肥厚的作用及机制研究
目的:心肌肥厚是心脏对于压力负荷或者容量负荷所产生的适应性反应。细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP 2J2)及其代谢产物EETs可以发挥抵抗心肌肥厚的作用,而其中的机制仍有待进一步探索。方法和结果:在体内研究中,我们采用PPARα缺陷小鼠以及野生小鼠为研究对象,并采用血管紧张素II( Ang II)诱导小鼠发生心肌肥厚。结果表明,Ang II可以明显诱导心肌肥厚,具体包括心脏肥大、心脏功能减低和心肌肥厚标志物表达增加。而在野生小鼠中,CYP 2J2过表达可以抑制Ang II所诱导的心肌肥厚,但是这一抑制作用在PPARα缺陷小鼠则没有体现。在离体研究中,我们以大鼠乳鼠心肌细胞作为研究对象并采用Ang II作为诱导因子。研究表明,外源性加入11,12-EET可明显抑制Ang II所诱导的心肌肥大,而PPARα特异性阻断剂GW6471可以阻断11,12-EET的作用,并且这一作用可能与Ras/MAPK以及NF-κB通路有关。另外,我们通过荧光报告基因系统以及染色质免疫沉淀实验证实, PPARα可以直接结合到caveolin-1的转录子区,并诱导caveolin-1的表达,而且采用siRNA介导caveolin-1的沉默,可以抑制11,12-EET抵抗Ang II的效应。结论:CYP 2J2及其代谢产物EETs可以通过PPARα缓解Ang II诱导的心肌肥厚,这一作用可能与其在转录水平上调caveolin-1的表达,并进一步抑制Ras/MAPK和NF-κB通路有关。
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Wilson病基因突变酵母分析系统的建立
[目的]建立一种能够对 Wilson病( WD)基因突变进行分析的方法,为众多的 WD基因突变进行致病性和致病程度的分析.[方法]本试验应用的酿酒酵母是 YPH252,及其 CCC2基因突变型 ccc2酵母细胞.应用酶切方法构建了寡拷贝酵母表达质粒 pMA92.将 ATP7B亚克隆到酵母表达质粒 pMA92上,进行 ccc2酵母的转化和筛选, Western blot分析转化后酵母 ATP7B的表达情况,在铜、铁、色氨酸缺陷型的酵母 SD培养基上培养转化的细胞,进行酵母生长曲线的分析,并进行 Fet3p氧化酶活性的测定.[结果]在 ccc2酵母细胞内表达人的 ATP7B可以弥补 ccc2的运铜功能,使 ccc2酵母细胞在铜、铁及亮氨酸缺陷型培养基上生长良好.[结论] ccc2酵母细胞是研究 ATP7B功能的一种良好的细胞模型,单拷贝 ATP7B的表达就可以代偿 ATP7B的功能缺陷,从而建立了可以对 ATP7B进行分析的酵母分析系统.
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产超广谱β-内酰胺酶嗜水气单胞菌致尿路感染1例
患者,男,69岁.双下肢无力10余天,神志不清1 d于2004年3月22日入院.体查:T 35.5℃;R 30次/min,BP120/80 mmHg;心率120次/min.WBC12.4×109/L,中性0.84,淋巴0.16,BUN52.5 mmol/L,Cr 1 610.7 mmol/L;尿常规:红细胞(+++),白细胞(+++).B超提示:双肾结石并积液.入院后予血液透析,抗感染治疗后,病情好转,拒绝外科治疗,出院.细菌学检查:将患者尿液10μl接种于血平板,24h长出圆形、有较大溶血环的菌落,菌落数为105/ml.涂片为革兰阴性杆菌.生化反应:OF试验呈F,氧化酶阳性.
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钙卫蛋白在疾病发生中的作用
钙卫蛋白是由 S100A8(MRP-8)与 S100A9(MRP-14)蛋白以钙离子依赖性方式形成的异源二聚体 S100A8/A9蛋白复合物[1-2]。它广泛分布在人体细胞、组织以及体液中,也是粒细胞、单核细胞和角质细胞的重要蛋白质[1]。在很多炎症情况下钙卫蛋白表达升高,它可以在血浆、尿液、粪便、脑脊液、唾液、滑膜液以及结肠活检组织中被检测到[2]。从细胞内的分布来看,钙卫蛋白主要定位于细胞质中[3]。研究[1,4]表明,钙卫蛋白可以激活 NADPH 氧化酶,运输花生四烯酸,结合到免疫通路受体如 Toll 样受体4(Toll-like receptors,TLR4)。
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从肺结核痰液中检出一株豚鼠气单胞菌
患者男,67岁.因咳嗽咳痰一个多月,痰中常见少许血丝.全胸X线片提示:右上肺结 核.于1998年7月28日住院治疗.临床诊断为肺结核.经异烟肼、丁胺卡那、氯霉素、庆大霉素治疗,病情好转,于9月10日出院.细菌学分离鉴定:取患者痰标本,接种于血琼脂平板,35℃温箱培养24 h,在血平板上生长出灰白色、光滑、湿润、凸起、直径为2 mm左右的β溶血菌落,转种麦康凯平板,生长为2 mm左右不发酵乳糖、较混浊的菌落.该菌为革兰氏阴性短杆菌,两端钝圆,有动力.生化特征:氧化酶阳性,发酵性代谢葡萄糖不产气,硝酸盐还原、靛基质、阿拉伯糖、 水杨苷、麦芽糖、精氨酸双水解酶、甘露醇、蔗糖均为阳性.鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶 、鼠李糖、肌醇、苯丙氨酸、枸缘酸盐、丙二酸盐、6.5%氯化钠蛋白胨水.廿叶苷、本糖 、DNA酶、乳糖均为阴性.根据上述生化反应和生物学特征,鉴定结果为豚鼠气单胞菌.为 慎重起见,经查浙江省军区后勤部卫生防疫站检验所<弧菌科细菌生化鉴定编码册>(第二 代GYZ-9V系统)检索编码是234,菌名是豚鼠气单胞菌,鉴定值是99.9%.讨论:豚鼠气单胞菌属弧菌科气单胞菌属,气单胞属是一群氧化酶阳性,发酵型代谢葡 萄糖的革兰氏阴性无菌胞杆菌,有九个种.通常于粪便中分离得到,为肠道致病菌的病原菌 之一,可引起急性肠道感染.但关于气单胞菌在肠道外的感染,过去文献较少有报道,近年 来报道有所增加,主要见于呼吸道感染,胆道感染,手术后伤口感染,尿路感染,腹膜炎, 脑膜炎,中耳炎及心内膜炎或继发感染于原有的基础疾病(慢性肝炎、肿瘤、白血病等等). 本次从肺结核患者痰中分离得到,说明该病菌可能与患者在原发性疾病基础上,由于患者机 体免疫力下降而造成的院内感染或者自身感染有关,提示临床和细菌检验工作者务必引起高度重视.
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尿酸试剂抗维生素C干扰能力的评价
目的 评价尿酸测定试剂抗维生素C干扰的能力.方法 采用两个厂家的尿酸测定试剂对尿酸浓度相同,维生素C浓度不同的系列标本进行测定.结果 日本协和医药株式会社生产的尿酸试剂在维生素C浓度<0.312 g/L时,所测尿酸结果保持恒定;而国内分装的瑞士某公司生产的尿酸试剂在维生素C浓度>0.049 g/L时,所测尿酸结果随维生素浓度的增高而迅速降低.结论 标明含1 KU/L维生素C氧化酶的分装尿酸试剂抗维生素C对尿酸测定的干扰能力较差.而日本协和医药株式会社生产的尿酸试剂可有效地消除≤0.312 g/L维生素C对尿酸测定的干扰.
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酒精性肝病发病机理的研究现状
一、酒精及其代谢产物对肝细胞的毒性作用酒精在肝脏的代谢过程中产生许多有毒性的代谢产物,造成肝脏形态和功能的改变.影响大的有还原型辅酶Ⅰ(NADH)和乙醛.(1)NADH:黄嘌呤(包括次黄嘌呤)的代谢是由黄嘌呤脱氢酶及氧化酶起作用,两酶保持着动态平衡.由于NADH的增加,氧化酶的作用占优势,结果使自由氧产生增加,导致肝细胞的损害,发生高脂血症及脂肪肝等.(2)乙醛:乙醇的代谢产物乙醛可引起细胞内线粒体和微小管的损害,不但引起肝细胞的气球样变,还可造成糖蛋白的糖化发生障碍,从而产生糖蛋白的微小变异(Carbo-hydrate deficent transferrin,CDT,De-Tf),后者成为临床诊断酒精性肝病重要的血清标志物之一[1].乙醛与血清蛋白结合形成乙醛-蛋白加合物,作为一种抗原而发生免疫反应是发生肝损伤的重要因素.采用豚鼠实验提示乙醛-蛋白加合物引起的免疫反应可造成肝炎和肝纤维化,血清中该抗体的测定也可作为诊断酒精性肝病有用的标志物.