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生长因子在细胞凋亡中的作用
细胞凋亡(apoptosis)是各种生理的或非生理性的因素激活细胞自身固有的程序所导致的非坏死性改变,这种死亡的特征是核染色质密度增高并凝聚在核膜周边,形成"核着边"(margination)现象,凋亡小体的形成.其生物化学反应主要是胞质内Ca2+浓度增加,蛋白质发生降解,核酸内切酶被激活,染色质DNA被核酸内切酶在核小体单位之间降解,产生若干寡核苷酸片段,在琼脂糖凝胶电泳上呈现阶梯状DNA区带图谱(DNA ladder).细胞凋亡失衡和许多疾病的发生发展有关,其机制已成为研究的热点.
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抗核小体抗体的检测与临床应用进展
核小体是染色体的功能亚单位,是DNA与组蛋白形成的复合体,存在于细胞核中.在系统性红斑狼疮(SLE)发生中,核小体是主要的自身抗原,抗核小体抗体是SLE的早期的指标之一.许多文献认为抗核小体抗体是诊断SLE很好的标志,它优于抗dsDNA,敏感度高,且有很高的特异度.抗核小体抗体主要应用ELISA法检测,由于核小体抗原纯化制备方法的不同,抗核小体抗体的检测方法也由第一代发展到第二代.随着抗原纯化技术的提高,极大提高了抗核小体抗体对SLE的特异性,已开始应用于临床常规检测.
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1型糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响因素
细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),是指局部环境生理或病理性变化引起的、由自身内部机制调节的一种主动的、按一定程序进行的细胞自发性死亡方式.其形态学特点包括染色体浓集、胞膜皱缩和凋亡小体的形成.其生化特征是核酸内切酶活化,使染色质在核小体间断裂,从而在DNA电泳时形成特征性的梯形带.
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EZH2在胚胎干细胞和肿瘤方面的研究进展
PcG蛋白家族成SEZH2是PCR2复合物的催化活性亚单位,通过甲基化核小体组蛋白H3的27位赖氨酸残基,沉默下游基因.这些下游靶基因大部分具有抑制肿瘤发生和调控干细胞分化的作用,它们的沉默将导致肿瘤的发生和干细胞多向分化潜能障碍.EZH2介导的基因沉默机制和DNA甲基转移酶(DNMTs)以及组蛋白脱乙酰酶(HDACs)之间存在密切的联系.现就EZH2在胚胎干细胞、肿瘤研究和临床应用前景作一综述.
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组蛋白去乙酰化酶在慢性气道炎症性疾病中的作用
生物DNA紧密缠绕在组蛋白(H2A、H2B、H3、H4)八聚体上构成染色质的基本单位--核小体.核心组蛋白N端富含赖氨酸残基的长末端与基因表达调节密切相关.
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肿瘤表遗传学(九)
第九讲肿瘤的表遗传学改变(2)1 组蛋白修饰及其在癌细胞中的改变1.1 染色质结构功能状态与组蛋白修饰真核细胞DNA的生理状态是染色质,是由DNA、组蛋白和非组蛋白组成的核蛋白.染色质结构的基本单位是核小体,该复合物是146 bp的基因组DNA围绕核心组蛋白八聚体而成,八聚体是由1个H3-H4四聚体和两个H2A-H2B二聚体组成;连接组蛋白H1则把核小体连接起来,成为纤丝状的染色质.除常见组蛋白外,还存在一些组蛋白变体如H2A.X,也与基因组功能状态密切相关.组蛋白是真核细胞DNA主要结合蛋白,也是已知进化上保守的蛋白,是一些小分子碱性蛋白,其中带正电荷的氨基酸,如赖氨酸和精氨酸的含量较高[1-3].
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抗核小体抗体与系统性红斑狼疮的关系
目的:抗核小体抗体与系统性红斑狼疮关系.方法:采用德国IMTEC公司提供的ENA抗体免疫印迹试剂盒(包括抗SmD1、抗组蛋白、抗核小体抗体),操作规范的按着试剂盒说明书操作.结果:抗核小体阳性的病人11例,占12.5%,11例病人抗组蛋白全部阳性,有2例伴随抗SmD1阳性;抗组蛋白阳性的病人21例,占23.9%.抗SmD1阳性的病人12例,占13.6%.结论:抗核小体抗体对系统性红斑狼疮(SLE)诊断敏感性高、特异性强,与SLE疾病活动性密切相关.诊断SLE不应该只注重抗Sm、抗dsDNA两种以前认为是SLE特征性抗体,而应该联合检测抗核小体抗体,这样对诊断SLE意义更大.
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中药制剂对慢性肝炎肝细胞DNA的保护
DNA损伤是细胞变性坏死、凋亡过程中必经环节之一,细胞凋亡时胞内核酸内切酶活化,后者将DNA链在核小体间连接区切成缺口,使核内DNA断裂成小片断[1].在组织细胞原位DNA切口可被脱氧核糖核酸转移酶末端标记,因此应用DNA片段原位末端标记技术(TUNEL)可及时发现细胞DNA断裂损伤.本研究以四氯化碳慢性肝损伤组织为对照,应用TUNEL技术研究66例慢性丙肝患者组织DNA的损伤,并观察了中药复方保护作用.
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肺岩宁对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织中核小体构象调控因子H3-K56、Rtt109、Asf1及E2F1表达的影响
目的:恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期.前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G1/S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响.方法:将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只.右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型.观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Ty1转座基因调节因子109(regulator of Ty1 transposition 109,Rtt109)、细胞反沉默功能因子1(antisilencing function 1,Asf1)、腺病毒E2启动子结合转录因子1(E2F1)mRNA和蛋白的表达.结果:肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组(P<0.01),抑瘤率分别为27.92%和42.50%.肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例少(P<0.01).肺岩宁组H3-K56、Rtt109、Asf1、E2F1 mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调(P<0.05).结论:肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用.
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联检抗C1q抗体、ds-DNA、抗-核小体、抗-Sm、ANA在狼疮性肾炎中的临床意义
系统性红斑狼疮(SLE)是一种多器官受累并产生自身抗体参与免疫介导的组织损伤为特征的疾患.SLE常累及肾脏,临床上又称为狼疮性肾炎(Iupus nephritis,LN).
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高迁移率族蛋白1与肿瘤
高迁移率族蛋白(high mobility group,HMG)因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中有很高的迁移率而得名.根据其结构,HMG超家族可分为HMGB、HMGN、HMGA三类.高迁移率族蛋白1(HMGB1)属于HMGB家族,是一种高度保守的核蛋白,广泛存在于真核细胞内,与染色质疏松结合.它作为一种DNA结合蛋白,可以稳定核小体,调节多种基因的转录、表达,参与DNA转录与修复、细胞生长与分化、细胞外信号转导等一系列重要的生理过程.
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ELISA法定量检测长春新碱诱导的K562及K562/VCR凋亡
细胞凋亡是一种不同于细胞坏死的细胞死亡方式,具有特殊的形态学及生物化学特征.其生物化学变化主要表现为内源性核酸内切酶的激活.它依赖于Ca2+、Mg2+的核酸内切酶从核小体间连接处将双链DNA切断,形成以180bp为小单位的DNA片断,经琼脂糖电泳分离后形成"DNA梯子",故可用琼脂糖电泳法检测细胞凋亡,但此方法只能进行定性分析,而无法对细胞凋亡进行定量检测.本试验采用ELISA法检测凋亡细胞组蛋白-DNA片断,并将测定结果与流式细胞仪PI染色法进行了比较.
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脓毒症中的基因沉默
炎症性疾病中基因表达的重编程被认为是危重病医学中的一个具有重要临床意义的概念.脓毒症及其后续症重症脓毒症,脓毒性休克以及多器官功能不全(衰竭)共同的病理生理机制是机体促炎和抗炎反应失控引起的严重全身炎症反应.基因重编程引起急性促炎基因沉默在脓毒症的发生发展中起着重要的作用.现将从以下三方面综述脓毒症中基因沉默的发生:①急性促炎基因的重编程;②急性促炎基因沉默的可能机制;③急性促炎基因沉默的组织异质性.
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抗核小体抗体在系统性红斑狼疮中的意义
狼疮中抗ds-DNA抗体、抗组蛋白抗体与核小体特异性抗体同属于大的抗核小体抗体家族,抗ds-DNA抗体、核小体特异性抗体和核小体-抗核小体抗体免疫复合物在系统性红斑狼疮的病理生理中起重要作用.抗核小体IgG抗体是比抗ds-DNA抗体更敏感的系统性红斑狼疮指标,抗核小体IgG抗体仅在系统性红斑狼疮、硬皮病、混合结缔组织病中出现,高水平的抗核小体IgG抗体几乎是仅在系统性红斑狼疮中出现,抗核小体IgG3抗体与系统性红斑狼疮疾病活动指数有很强的联系.
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表达核小体Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建
目的:构建表达核小体Th表位(H2B14-28)的口服减毒鼠伤寒沙门菌株.方法:将H2B14-28基因插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pH2B(pYA3149-H2B14-28)后,转入鼠沙门菌株X4550,斑点印迹鉴定表位肽的表达.观察X4550(pH2B)体内外携带重组质粒的稳定性.结果:酶切鉴定和基因测序显示pH2B构建成功.斑点印迹证实表位肽的表达.重组菌株在体内、外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖.结论:成功构建了能稳定表达核小体Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株,为进一步直接应用减毒鼠伤寒沙门菌活菌苗在肠道内表达抗原诱导SLE免疫耐受奠定基础.
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核小体诱导BALB/c 小鼠产生狼疮肾的研究
目的了解核小体在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.方法用蔗糖连续密度梯度离心法从新鲜鸡血红细胞中提取核小体,皮下免疫BALB/c小鼠,采集小鼠血清和肾脏标本.ELISA方法检测其IgG型dsDNA抗体和ANA抗体水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏lgG型免疫复合物的沉积情况;组织病理观察小鼠肾脏损伤情况.结果核小体免疫后14 d,BALB/c小鼠血清中开始出现IgG型dsDNA抗体和ANA抗体,其滴度随时间延长逐渐升高;核小体免疫后35 d,小鼠肾脏出现大量IgG型免疫复合物沉积,光镜观察显示有明显肾脏损伤.对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变.结论核小体可以诱导正常小鼠产生SLE样征候群,提示核小体参与SLE的发病.
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系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞核小体释放水平及其临床意义
目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)释放核小体的水平变化及其与自身抗体、病情活动度的关系.方法应用ELISA方法检测SLE患者PBMC裂解上清液核小体及其血清自身抗体水平,用SLEDAI积分法评估SLE活动度.结果活动期SLE患者PBMC释放核小体的平均水平为(39.39±25.70)IU/mL,明显高于正常人对照组(11.73±7.87)IU/mL和静止期SLE患者(J3.44±8.82)IU/mL,并且与其凋亡率呈显著正相关(r=0.83,P<0.001);SLE患者PBMC的核小体释放水平与SLEDAI积分数、ds-DNA抗体水平和补体C3降低水平均呈显著正相关(P值分别<0.01、0.01和0.05).结论SLE患者PBMC凋亡产生的核小体水平变化与SLE临床病情活动程度密切相关,提示核小体可能是诱导SLE发病的重要抗原之一.
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抗核小体抗体检测在系统性红斑狼疮诊断中的意义
目的: 探讨抗核小体抗体(ANuA)的检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的意义.方法: 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测59例SLE患者、24例疾病对照组(除SLE外其他结缔组织病患者)、20例正常对照组血清ANuA,并分析ANuA与其它免疫指标(ANA、dsDNA抗体)间的关系.结果: SLE患者血清ANuA阳性率为64.4%,疾病对照组阳性率为4.2%,正常对照组无一例阳性;SLE患者血清ANuA 阳性率与两个对照组比较均有显著性差异(P<0.01).ANuA 在SLE患者中检测敏感性为64.4%,特异性为97.7%,高于dsDNA抗体的敏感性(50.8%);不同ANA滴度的 SLE病人,其ANuA阳性率间的比较,差异有显著性(P<0.05).结论: ANuA检测对SLE的敏感性高、特异性强,与SLE疾病活动性相关,可作为SLE诊断的一个重要指标.
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风湿病抗核小体抗体检测的临床意义
目的 评价抗核小体抗体(AnuA)检测对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的敏感性和特异性.方法 以ELISA法检测AnuA,间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(抗dsDNA).共检测146例SLE,169例对照疾病包括类风湿关节炎(RA)、原发性干燥综合征(pSS)、多发性肌炎(PM)、骨关节炎(OA)、系统性硬化症(SSc)、混合性结缔组织病(MCTD)、强直性脊柱炎(As)和30例正常人.结果 SLE组中60.9%血清AnuA阳性,阳性率显著高于疾病对照组和正常对照组(P<0.01).AnuA的滴度以SLE组高,除SLE外,AnuA阳性也见于RA(10/80)、SSc(5/16)、pSS(2/15)、MCTD(1/5)和As(1/34).在SLE中AnuA、ANA、抗dsDNA检测的敏感性和特异性分别为60.9%和87.2%、94.5%和56.8%、43.2%和98.9%.AnuA和抗dsDNA抗体联合检测敏感性为65.1%.AnuA与抗dsDNA两抗体相关,但两抗体并不完全重叠.结论 AnuA对SLE诊断有重要价值,敏感性显著高于抗dsDNA且可与之相互补充,特异性低于抗dsDNA,也可见于其他风湿病.
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LSD1与肿瘤相关分子机制的研究进展
真核生物的DNA是被包裹在以核小体为基本组成单位的染色体当中的。而这个基本组成单位,核小体,又是由145~147bp的DNA缠绕在以H2A、H2B、H3 和 H4组蛋白为核心的八聚体结构上, 这种结构使该组蛋白易于被组蛋白修饰酶识别,再进行基因翻译之后的共价修饰过程。随着我们对组蛋白修饰酶的探索,很大部分翻译后组蛋白修饰机制已经逐渐被人阐述清除。