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罕见染色体异常核型2例
病例1男性,34岁,结婚4年,其妻自然流产4次,均于孕50~70 d自然流产.本人身体发育正常,父母非近亲婚配无不良生育,其弟、妹所生子女均正常.细胞遗传学检查:取患者外周血2 ml做细胞培养,常规制备中期染色体,G显带分析30个中期核型为46,XY,t(4;6)(p16;p12);46,XY,t(4;6)(4qter→4p16::6p12→6pter;6qter→6p12::4p16→4pter).其妻染色体核型正常.
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1-21 3-甲氧基槲皮素的致突变性
目的 3-甲氧基槲皮素是从植物中提取的药物,研究发现有很好的抗病毒作用.该文研究了3-甲氧基槲皮素致突变性效应.方法采用Ames试验,CHL细胞体外染色体畸变试验,小鼠骨髓微核试验,小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验进行检测.结果 Ames试验:在加或不加肝微粒体代谢活化酶系(S9)的条件下,各菌株对高浓度3 750μg/皿均呈现不同程度的抑菌作用,4个标准菌株各浓度组结果均阴性.CHL细胞体外染色体畸变试验:3-甲氧基槲皮素致染色体畸变类型以断片为主,未加代谢活化的24h染色体畸变率为9%,在5.0%~9.9%范围内,判定为染色体畸变试验可疑阳性(±),48 h未加代谢活化组以及加代谢活化的24h试验组,收获CHL细胞均未呈现染色体畸变作用.表明3-甲氧基槲皮素对CHL细胞体外染色体畸变试验为可疑阳性.小鼠骨髓微核试验阴性.小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验:3-甲氧基槲皮素分别腹腔注射给于小鼠1/2、1/4、1/8 LD50,每天1次,给药5 d,给药后13 d剖杀检查精母细胞染色体.各试验组与阴性对照组比较,常染色体和性染色体单价体、染色体易位和断片的出现率均无统计学意义的增加.结论本试验条件下,3-甲氧基槲皮素无诱发基因突变,对CHL细胞体外染色体畸变试验为可疑阳性,小鼠骨髓微核试验阴性,不引起生殖细胞染色体畸变.
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染色体畸变的现代诊断技术研究进展
染色体畸变是人类常见的遗传病,患者大多有严重的智力障碍和某些组织器官畸形等,同时也是导致妊娠早期自然流产和不孕不育的重要原因.传统的染色体畸变诊断方法为G显带染色体核型分析,这是20世纪70年代建立起来的经典诊断方法,可以观察染色体的数目和整套染色体的主要带形,其分辨率约为350~450个染色体条带.但对于标记染色体(来源不明的染色体)、复杂的染色体易位或重排,以及微小的染色体结构畸变则难以进行准确的分析[1].随后发展起来的高分辨显带核型技术和一系列与分子诊断技术相结合的诊断技术,极大地丰富了染色体病的诊断方法.本文对这方面的进展进行综述.
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用于诊断白血病BCR/ABL1染色体易位荧光原位杂交探针的研究
目的 本文拟自主研制可以检测白血病染色体BCR/ABL1易位的荧光原位杂交(FISH)探针以满足国内科研和临床的需要.方法 根据染色体基因图谱,选定合适的BAC克隆重叠群分别作为BCR和ABL1探针.将BCR探针标记绿色荧光素,ABL1探针标记红色荧光素.用双盲法检测血液病临床样本20例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究.结果 自制和进口FISH探针均检测到其中相同的9例阳性样本,两种探针检测阴阳性结果相符.自制探针在Spectrum Green和Cy3TM v1通道中信号的平均荧光强度明显提高(自制探针分别为:2 440± 11.83,2672±83.35;进口探针分别为:1 855±62.78,1 764±58.61),BCR和ABL1两种自制探针信噪比分别为进口探针的2.0倍和2.2倍.结论 本文研制的白血病BCR-ABL1双色双融合试剂盒荧光信号强、灵敏度高,可用于替代价格昂贵的进口产品.
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t(6;11)(p21;q12)转录因子EB基因融合相关性肾细胞癌临床病理观察
目的 探讨t(6;11) (p21;q12)转录因子EB(TFEB)基因融合相关性肾细胞癌临床病理学特点、诊断与鉴别诊断.方法 应用组织学、免疫组化和分子遗传学对1例t(6;11) (p21;q12) TFEB基因融合相关性肾癌进行研究,并复习相关文献.结果 肿瘤边界清楚,切面灰黄、灰红色伴出血囊性变.镜下肿瘤由大、小两种细胞构成,大细胞呈巢状、腺泡样,乳头状排列;小细胞围绕透明基质呈特征的“玫瑰花环”样结构,瘤细胞胞质透明,部分嗜酸.免疫组化:TFEB、HMB45和melanA(+).鉴别诊断主要有TFE3基因融合相关性肾细胞癌及腺泡状软组织肉瘤等.结论 t(6;11) (p21;q12) TFEB基因融合相关性肾细胞癌是一种罕见肿瘤,明确诊断需结合组织学形态、免疫表型及分子生物学检测.
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Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌的临床病理学特点
目的 探讨 Xp11.2 易位/TFE3 基因融合相关性肾细胞癌的临床病理学特点、诊断与鉴别诊断.方法 报道 2 例Xp11.2 易位/TFE3 基因融合相关性肾细胞癌,结合文献复习对该肿瘤的临床表现、组织学特点、免疫表型及预后进行分析.结果 患者均为男性,年龄分别为 56 岁和 4.5 岁.肿瘤界限清楚,切面灰黄色,可见出血、坏死和钙化.组织学上,肿瘤显示腺泡状、片状和假乳头状生长方式.肿瘤细胞界限清楚,胞质淡红染至透亮,细胞核圆,染色质呈空泡状,核仁明显.肿瘤细胞TFE3、CD10 和 P504S 弥漫强(+).结论 Xp11.2 易位/TFE3 基因融合相关性肾细胞癌是一种罕见肿瘤,好发于年轻人.其诊断主要依靠组织病理学和免疫组化 TFE3 染色.
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石蜡切片FISH技术应用于肿瘤组织的探讨
荧光原位杂交(FISH)是80年代初期发展起来的非同位素杂交技术之一.FISH是DNA片断物理定位的主要方法,是绘制人类基因组物理图谱的主要手段.此外,FISH也可作为传统细胞遗传学的补充,在中期染色体片上检测出难以确定的染色体易位、微小缺失等,即使在分裂象少、分散质量差的玻片上,也能得到良好结果.因此,FISH是一种重要的分子细胞遗传学方法.1986年细胞遗传学概念提出后,FISH技术的应用领域大为扩展,可以在细胞系、分离细胞核、印片以及石蜡切片等标本中检查染色体数目和结构畸变,使细胞遗传学成为真正的全周期细胞遗传学,从而也引起了肿瘤学家的关注.利用此项技术的有关报道国内时常可见,但是用于石蜡切片者几乎没有,主要是方法上还存在一定难度,结果也不太好分析等.将FISH技术用于肿瘤石蜡切片,可以在病理形态尚正常时对肿瘤进行早期的分子水平的诊断,具有非常诱人的应用前景.我们采用一个染色体着丝粒探针和一个单拷贝基因探针,利用鼻咽癌和口腔癌石蜡切片,经过反复摸索,建立了石蜡切片FISH技术.
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长距离小载体PCR检测多发性骨髓瘤 IgH基因转换区易位
免疫球蛋白重链基因(immunoglobulin heavy chin,IgH)相关的染色体易位是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中常见的染色体异常,可能与发病有关,与疾病的预后也有一定关系.为了快速、简便检测IgH基因相关易位的发生并明确易位的伙伴染色体和克隆断裂点,根据易位的断裂点通常位于IgH基因转换区,参考国外专利和文献,建立了长距离小载体PCR方法.结果表明,用该方法检测骨髓瘤细胞株U266,得到3.5kb的PCR产物,两端序列分别与11q和IgH基因α1转换区同源.结论:长距离小载体PCR是一种有效的检测手段,应用该方法对中国人遗传背景的MM患者进行大样本检测,可以发现IgH基因相关易位的发生和分布,有助于解释该遗传背景下的特殊临床表现,阐明发病机制,寻找MM治疗的分子靶点以及对预后的评估.
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T(11;18)和核bcl-10蛋白在胃肠MALT淋巴瘤中的表达
粘膜相关淋巴组织(MALT)型淋巴瘤在欧美的发病率仅次于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡型淋巴瘤而位居第三,虽然85%的这类早期肿瘤单纯抗幽门螺旋杆菌(HP)的治疗可获完全缓解,但伴有t(11;18)染色体易位和bcl-10核蛋白表达的病例多处于疾病的进展期,应用抗生素治疗多无效.
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FHIT基因研究进展
早在1979年,Cohen等就发现一家族性早发、双侧、多灶的肾透明细胞癌与t(3:8)染色体易位有关.此后,人们在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中观察到3号染色体短臂的高频率缺失,提示在3p上可能存在抑癌基因.1996年,Ohta等[1]用差异显示分析探针和外显子捕获法在3p14.2上确定了一个新的基因,由该基因cDNA推算的蛋白质与具有3价组氨酸结构域的HIT蛋白质家族高度同源,又因为此基因跨越脆性位点(fragile site),故将之命名为FHIT(fragile histidine triad)基因.FHIT基因全长超过1 Mb,为一高度保守的基因序列,其mRNA全长约1.1 kb,包含10个外显子,由第5~9外显子编码一个相对分子质量约为16 800的蛋白.Barnes等[2]通过蛋白质活性分析证实,人类FHIT蛋白是一典型的二腺苷酸三磷酸水解酶(Ap3A),催化Ap3A水解为ADP和AMP,FHIT蛋白质水解酶活性丧失将导致Ap3A水平升高.
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软组织肉瘤染色体易位机制研究进展
软组织肉瘤种类繁多,形态各异,长期以来一直是病理诊断中的难点.细胞遗传学研究相继发现多种软组织肉瘤存在特征性的染色体易位.这些染色体易位引起相应染色体上的基因发生断裂,并形成新的融合基因,且编码融合蛋白,融合基因的检测已成为诊断这些肿瘤的敏感的分子手段(表1)[1].目前的研究主要集中于这些融合蛋白功能的研究上,大多数融合蛋白属于融合性转录因子或辅助因子,在特定肿瘤的发生中可能起重要作用.软组织肉瘤染色体易位发生机制的研究尚少,有一些问题尚待阐明,如染色体易位的发生是随机的还是有内在规律?发生易位的染色体有何特殊结构或序列?染色体易位的发生与哪些因素有关?我们对此方面的研究进展情况作一综述.
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染色体易位及其在骨和软组织肉瘤诊断上的应用
研究表明,许多恶性肿瘤存在细胞遗传学异常,常见的是染色体结构畸变,包括染色体易位、倒位、缺失、重复、插入以及环状染色体和等臂染色体等。染色体易位是染色体异常常见的一种表现形式,常见于淋巴造血系统恶性肿瘤及骨和软组织肉瘤中。由于染色体易位具有肿瘤类型特异性,为非随机性异常,它对肿瘤的诊断具有重要意义。 一、染色体易位 1.染色体易位的概念及成因:染色体易位是指细胞核内两条非同源染色体各发生一处断裂,并交换其无着丝粒节段,形成两个融合后的新染色体的过程。染色体易位发生的原因尚不完全清楚,研究表明射线和化疗不会增加染色体易位的发生率,p53及Rb基因胚系突变亦不会增进染色体易位的发生[1]。
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采用长距离PCR检测黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤新鲜标本中特异性染色体易位
目前用于检测软组织肿瘤染色体易位的技术方法各有特色,其中长距离PCR技术仅适用于新鲜标本,但可扩增基因断裂点周围长至10余kb的DNA片段,从而可以检测出内含子上断裂点的位置,确定融合基因类型,并可进一步用于分析染色体断裂点基因组DNA序列,以确定是否有某些特征序列参与了染色体易位的发生.
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应用多重逆转录聚合酶链反应技术检测石蜡包埋三种软组织肉瘤中融合基因的表达
目前,用于软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多[1],以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法为常用[2,3].然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤,运用RT-PCR技术对不同融合基因逐一检测和排除,也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足.针对此问题,我们设计了多重引物,应用多重RT-PCR技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达,建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法.
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用荧光原位杂交在石蜡切片上检测t(11;18)和涉及bcl-10基因染色体易位的方法
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridisation,FISH)是在石蜡包埋组织中检测细胞染色体变化及基因异常的一种敏感性强、特异性高的分子生物学方法.对石蜡包埋组织进行FISH染色所采用的方法有两种,在提取的细胞核上进行和直接在石蜡包埋组织切片上进行.然而,从石蜡包埋组织中提取细胞核进行FISH的方法复杂、耗时,而且所需组织较多,在临床活检小组织中的应用受到一定局限.我们介绍一种简单易行的在常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片上进行FISH方法.
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儿童常见淋巴造血系统肿瘤的诊断和鉴别诊断和鉴别诊断
儿童的多数恶性肿瘤,包括实体瘤与非实体瘤,在病理学上大多表现为一致性小细胞(母细胞)组成的肉瘤,以往称为"小蓝细胞肉瘤",其病理诊断有时十分困难.近年来由于免疫组织化学、流式细胞术和基因重排、染色体易位检测技术的发展,儿童的小细胞肉瘤的诊断与鉴别诊断有了巨大的进展,同时带来治疗上的进步.目前多数儿童的淋巴瘤/白血病是可以治愈的.可以说儿童淋巴瘤/白血病,尤其是实体瘤的诊断与治疗领先于成人肿瘤.
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做好靶向病理诊断夯实肿瘤靶向治疗的基础
近30年随着肿瘤分子生物学研究的不断深入,特别是对癌基因和肿瘤抑制基因、生长因子和生长因子受体、调解肿瘤细胞生长和分化及凋亡的信号分子、肿瘤血管形成以及大量非随机出现在各种肿瘤的染色体易位等方面的研究成果地不断涌现,已为针对这些关键分子靶点开展肿瘤靶向治疗奠定了基础.
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Notch信号通路在软组织肉瘤中的作用
软组织肉瘤(soft tissue sarcoma)是较常见的肉瘤,可以发生在任何年龄全身各部位。由于肿瘤易转移和病理的多样性对于传统的治疗方法反应差,导致预后效果不佳。软组织肉瘤源于染色体易位和调控组织形态发生的通路异常的间叶组织。Notch通路在细胞增殖、分化、凋亡中起到重要作用,且与肿瘤的发生和发展存在密切的关系。在人类头颈部肿瘤、肾癌、子宫颈癌、乳腺癌、小细胞性肺癌、黑素瘤等中Notch 信号通路起着促癌作用;但其在前列腺癌、非小细胞肺癌、皮肤癌起着抑癌作用;同时发现在软组织肉瘤中Notch通路调控能力降低。本研究对Notch 信号通路生物学特性以及其对软组织肉瘤作用机制的研究现状作一综述。
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急性早幼粒细胞白血病诊治的回顾及进展
急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊的髓细胞性白血病,在法、美、英(FAB)分型中属M3型,具有独特的细胞形态学和生物学特性.APL的特征性标志是染色体t(15;17)(q22;q21)易位,并形成PML-RARα融合基因.因此,t(15;17)(q22;q21)染色体易位和PML-RARα融合基因可以作为APL的细胞遗传学和分子生物学标记物,对APL的诊断、治疗、监测复发、估计预后以及停药时机的确定均有重要意义[1].
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急性早幼粒细胞白血病的诊疗现状和进展
急性早幼粒细胞白血病( APL)是急性髓系白血病( AML)中的一个特殊亚型,约占成人AML 的10%~15%。不同于其他肿瘤, APL的发病率并不随年龄的增长而增高[1],说明其发生受制于基因水平。 APL患者通常具有特殊的t(15,17)染色体易位,从而使15号染色体上的PML基因与17号染色体上的RARα基因形成融合基因。该融合基因的形成导致了白细胞成熟障碍分化阻滞,终导致APL的发生。