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细胞毒作用前后马来丝虫微丝蚴氨基酸组成及含量的测定分析
目的通过观察马来丝虫微丝蚴(mf)经细胞毒作用后,虫体氨基酸含量的变化,进一步探讨宿主体内的杀虫机制.方法应用高速氨基酸分析仪对细胞毒作用前后的周期型马来丝虫mf进行氨基酸组成及含量的分析比较.结果马来丝虫mf含1 7种氨基酸,缺少色氨酸.经宿主细胞毒作用后的虫体氨基酸绝对含量明显低于细胞毒作用前(P<0.05).其中,精氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸下降显著(P<0.01).结论虫体氨基酸含量下降,尤其是碱性氨基酸与酸性氨基酸、芳香族氨基酸之间比率下降可能是宿主体内杀伤丝虫mf的机制之一.
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IL-2/IL-15刺激后脐血NK细胞穿孔蛋白表达及其与细胞毒活性的关系
本研究旨在探讨脐血NK细胞的穿孔蛋白表达水平以及IL-2、IL-15作用下穿孔蛋白表达与NK细胞细胞毒活性的关系.采用CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法纯化脐血NK细胞,流式细胞术测定NK细胞纯度,通过IL-2、IL-2+IL-15两种细胞因子培养体系培养3天,流式细胞术测定培养前后穿孔蛋白表达水平;LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562的细胞毒活性(效靶比10:1).结果表明,纯化后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%.,以K562为靶细胞,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2 + IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,新鲜纯化CB-NK穿孔蛋白表达率为(67.21±6.14)%,IL-2组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(84.55±3.8)%,IL-2 + IL-15组CB-NK细胞穿孔蛋白表达率(87.22±2.2)%.穿孔蛋白表达率与NK细胞毒活性呈正相关(r=88.6,p< 0.05).IL-2组穿孔蛋白表达率与新鲜组差别有统计学意义,IL-2组与IL-2 + IL-15组穿孔蛋白表达率差别无统计学意义.结论:促进穿孔蛋白表达是IL-2提高脐血NK细胞细胞毒活性的途径之一.
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细胞因子联合激活人骨髓和外周血免疫细胞的比较研究
在本研究中比较了某些细胞因子在体外联合激活骨髓和外周血免疫细胞后二者免疫细胞数量、形态、细胞化学染色、免疫表型和细胞毒变化的差异.在体外加入IFN-γ,rIL-1,rIL-2和McAb-CD3分别激活培养骨髓和外周血单个核细胞,培养过程中观察两组免疫细胞增殖数量及形态的变化,培养前后两组取样进行细胞化学染色和免疫表型检测,用MTT法检测培养后两组的细胞毒情况.研究结果发现,两组的细胞数量在激活培养后均较培养前明显增加,但外周血组增加倍数更多(P<0.05);细胞化学染色可见两组培养以后髓过氧化物酶积分均较培养前减少,过碘酸雪夫染色见两组含较多粗颗粒的淋巴样细胞明显较培养前多;两组CD3+,CD56+和CD38+细胞较培养前明显增加(P<0.05),但两组增殖无明显差别;骨髓组培养后CD3+CD56+细胞无明显增加,而外周血组培养后则增加显著(P<0.05);两组激活培养后细胞的细胞毒无明显差异.结论:IFN-γ,rIL-1,rIL-2和CD3单抗联合激活骨髓和外周血单个核细胞可使二者细胞数量和细胞毒明显增加,在临床上可利用激活的不同来源的细胞因子诱导的杀伤细胞进行细胞免疫治疗.
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慢性HBV感染者调节性T细胞、黏附细胞对细胞毒T淋巴细胞体外增殖的影响
乙型肝炎患者体内细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)的功能和数量直接影响着病毒的清除和肝细胞的损伤.本实验主要探讨慢性HBV感染者调节性T细胞(Tr)、黏附细胞(AC)对HLA-A2限制的HBV特异性CTL体外增殖的影响.
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外周血淋巴细胞穿孔素和颗粒酶在不同乙型肝炎患者中的表达率比较
乙型肝炎发病机制涉及到细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK),穿孔素和颗粒酶是CTL和NK的主要效应物质.本文旨在探讨外周血淋巴细胞穿孔素/颗粒酶的表达与不同乙型肝炎的关系.
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HIV-2 gp105重组鸡痘病毒引起小鼠细胞和体液免疫应答
人免疫缺陷病毒Ⅱ型(human immunodeficiencyvirus type 2,HIV-2)于1986年在几内亚-比绍被发现.起初HIV-2仅在西非呈区域性流行,随后在欧洲、美洲和亚洲也出现了感染者和发病者.我国的首例HIV-2感染者于1998年在福建省发现[1],并检测出HIV-1与HIV-2的共感染患者[2].因此,研究有效的HIV-2疫苗势在必行.HIV-2 env基因编码前体蛋白gp140,后者裂解后生成外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp36.gp105是病毒的主要抗原,其表面具有大量的Ab表位、TH表位和CTL表位,能诱导机体产生强烈而广泛的中和抗体和细胞毒(CTL)反应,因此是基因工程疫苗研究的重要靶点.本研究将已构建的HIV-2 gp105重组鸡痘病毒大量制备后免疫BALB/c小鼠,观察其在小鼠体内的免疫原性,以获得第一手的实验资料.
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两种荧光染料-CFSE与碘化丙啶染色方法检测细胞杀伤能力
细胞杀伤能力在评估细胞毒T细胞(CTL)及NK细胞的杀伤能力中起到重要的作用.我们采用两种荧光染料染色的方法检测脾细胞对同种异体细胞的杀伤能力.将实验小鼠分为4组,见表1.
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肌动蛋白样分子参与TNFRⅡ介导的TM-TNF-α杀瘤活性的研究
目的寻找并研究参与TM-TNF-α杀瘤的协同分子,进一步揭示TM-TNF-α发挥生物学作用的特征,阐明其与S-TNF-α功能差异的分子机制. 方法利用免疫共沉淀法、质谱分析、Western blot及细胞毒实验探索参与TM-TNF-α杀瘤功能的协同作用分子并确定其性质. 结果 TM-TNF-α免疫共沉淀产物中发现一相对分子质量(Mr)为43×103蛋白分子,用质谱分析及Western blot证实该分子属于肌动蛋白家族;用抗肌动蛋白抗体封闭效应细胞和/或靶细胞后,TM-TNF-α对主要表达TNFRⅡ的肿瘤细胞HL-60的杀伤作用显著下降,而对主要表达TNFRⅠ的肿瘤细胞MCF-7则无影响. 结论 Mr为43×103的肌动蛋白样分子可能参与并增强TM-TNF-α通过TNFRⅡ介导的杀瘤功能.
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氩氦刀冻融的癌细胞激发骨髓树突状细胞的免疫效应
氩氦刀冻融可以杀灭肿瘤细胞,也是一种免疫治疗方法.抗原呈递能力强的树突状细胞(DCs)是机体免疫应答的重要启动和调节因素,经肿瘤抗原致敏的DCs通过细胞毒T淋巴细胞(CTLs)有效激发特异性抗瘤免疫.本实验通过体外观察氩氦刀冻融的肺癌细胞对人骨髓DCs诱生的免疫效应.
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化疗药物渗漏致组织损伤的防治
化学治疗是肿瘤治疗的重要手段之一,化疗药物用药的主要途径是静脉给药,而静脉给药又与我们护士有直接关系.长期以来,临床上片面地把外渗性损伤归结于护理技术操作不当所致,化疗药物属细胞毒类制剂,毒性高于其他药物,故化疗给药不同于一般的静脉注射,发生渗漏是与药物的性质,毒性以及输注量、速度、输注时间、压力有着密切关系的,还与患者的个体状况血管痉挛及其局部解剖特性有关.化疗药物在静脉给药过程中意外渗漏的发生率为0.1%~6%[1].
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1例肺癌化疗致肿瘤溶解综合征患者的护理
肿瘤溶解综合征是自发或细胞毒治疗引起恶性细胞快速崩解,细胞内容物释放入血循环,超过肾脏的排泄能力,产生危及生命的电解质紊乱和代谢异常.其特点是高尿酸血症、高钾血症、高磷酸血症、低钙血症或肾功能不全,常发生于对细胞毒治疗敏感的增殖快负荷大的肿瘤,包括高度恶性淋巴瘤、白细胞计数高的白血病和少数实体瘤.我科于今年收治了1例肺瘤行化疗后发生肿瘤溶解综合征的老年患者,现报道如下.
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莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒
目的 研究莫诺苷抑制过氧化氧诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒作用.方法 体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别加入莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2 O2 300~500 μmol/L,作用18 h,检测细胞内游离钙离子浓度、乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与未加莫诺苷预孵育的细胞相比,莫诺苷10μmol/L、100μmol/L能抑制神经细胞内游离钙离子浓度增加,莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L能降低LDH的释放率.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒,有神经保护作用.
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脑胶质瘤极光激酶B的研究进展
胶质瘤是一种常见的恶性肿瘤,胶质瘤占所有颅内肿瘤的45%左右,儿童颅内恶性肿瘤中排名第二。肿瘤快速增殖、对脑的侵袭性传播及其所致的脑水肿等病理学特征,导致常规手术切除、放射治疗、细胞毒化学药物治疗等多种方法综合治疗胶质瘤仍难以根治,患者预后极差。针对胶质瘤形成、增殖、侵袭、血管形成等多种生物位点的靶向生物治疗已成为现代神经肿瘤学的重要研究方向。
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常用过敏原检测方法的探讨
过敏反应[1] ,又称变态反应,是指机体通过各种途径接受某种抗原刺激并产生初次应答后,再次接触相同变应原刺激时,发生的组织或器官甚至全身性的强烈反应,从而引起各式各样的生理功能紊乱或特定组织损伤为主的特异性免疫应答.1963 年,Cooms 和Gell 依超敏反应发生机制及临床特点将其分为4 型,即Ⅰ型(速发型)、Ⅱ(细胞毒型或细胞溶解型)、Ⅲ(免疫复合物型或血管炎型)、Ⅳ(迟发型).其中与过敏性疾病相关的变态反应主要是Ⅰ型变态反应,也包括Ⅳ型变态反应.
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羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记肿瘤细胞及其在细胞毒检测中的价值
目的 探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记肿瘤细胞的佳条件及其在细胞毒检测中的价值.方法 用不同浓度的CFDA-SE标记K562(人红白血病细胞)、YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)、A375(人乳腺癌细胞)、MCF-7(人黑色素瘤细胞)不同肿瘤细胞系,并检测其0~24 h的荧光强度,观察荧光强度变化的时间动力学,选择CFDA-SE标记细胞的佳浓度;CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1~6 h,再用DNA染料碘化丙啶(PI)标记,流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞,并计算细胞死亡率,研究CFDA-SE对细胞的毒性.CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15 min,测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率,选择佳标记时间;用CFSE在佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验.结果 对于不同肿瘤细胞系,CFDA-SE标记的佳浓度不同;CFDA-SE对细胞没有毒性,死亡率低于5%;佳标记时间为8 min.人外周血单个核细胞和BALB/c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性,杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加.佳效靶比为50∶ 1~25∶ 1,共孵育时间为2~4 h.结论 CFDA-SE具有标记细胞稳定,能用于细胞培养时间较长的研究,不影响细胞功能,适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点,是一种很好的标记细胞的荧光素染料.
关键词: 流式细胞术 细胞毒 羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯 -
系统性红斑狼疮患者辅助T细胞和细胞毒T细胞亚群的变化及临床意义
系统性红斑狼疮(SLE)发病过程中存在T细胞亚群功能失衡和细胞因子网络失调,但各细胞亚群在SLE发病机制中的作用,尚无统一认识.本研究利用荧光标记流式细胞术,检测SLE患者不同时期外周血辅助T细胞(Th)1/Th2、细胞毒T细胞(Tc)1/Tc2,以探讨SLE患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2的变化及与SLE活动性的关系.
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重视重症肝病患者深部真菌感染的诊断与治疗
近10余年来,临床深部真菌感染呈持续增多趋势,其原因有:①由于医药科技的高速发展带来的负面作用,如高效广谱抗生素、皮质类固醇激素广泛应用,抗肿瘤细胞毒药物治疗、器官移植免疫抑制剂深入开展,外科静脉营养、其他导管介入性治疗等治疗手段不断实施;
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细胞凋亡与病毒性肝炎
0 引言凋亡是机体清除感染、变异及衰老细胞而维持自身生理状态的主要调节方式之一.肝炎病毒(HBV和HCV)侵入机体,在感染宿主肝细胞的同时,也参与激活细胞毒T细胞(CTL).被活化的CTL在识别、杀伤病毒感染的肝细胞,清除肝炎病毒的同时,也造成正常肝细胞损伤.因此,肝细胞坏死和肝细胞凋亡共同构成了病毒性肝炎病理基础.
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大肠癌细胞功能性Fas配体的表达度与肿瘤免疫逃逸的关系
目的:表达Fas配体(fasligand,FasL)的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加.肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致.观察Fas与FasL在结肠癌细胞株的表达,在体外验证结肠癌细胞SW620是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡.方法:用免疫组织化学SABC法观察结肠癌细胞系和Jurkat T淋巴细胞系Fas与FasL的表达,为癌细胞的Fas和FasL的功能提供形态学依据.采用非放射性细胞毒分析,测定SW620结肠癌细胞与Jurkat靶细胞共培养后LDH释放值检测效应细胞的杀伤效应.结果:结肠癌SW620细胞FasL染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜及核周区,而Fas染色几乎呈阴性反应.Jurkat细胞系Fas,FasL免疫组化染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜.CytoTox96非放射性细胞毒分析显示大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,诱导对Fas介导的凋亡敏感的T淋巴细胞(Jurkat T细胞)明显凋亡,并随着SW620接种浓度增加和共培养时间的延长,Jurkat T细胞凋亡的比例显著增加.用含有乙酸肉豆佛波醇(phorbol 12-myristatel3-ac-etate,PMA)加离子霉素(ionomycin)的DMEM培养基孵育48 h的大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,Jurkat T细胞凋亡的比例也明显增加.结论:结肠癌细胞SW620表达功能性FasL,能杀伤Fas阳性Jurkat T淋巴细胞,形成免疫逃逸.
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抗人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4单克隆抗体对特应性支气管哮喘患者记忆性T淋巴细胞功能的影响
细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)可以抑制变应原诱导的T淋巴细胞增殖和细胞因子的产生.而记忆性T淋巴细胞(CD+45RO+ T淋巴细胞)在特应性支气管哮喘(简称哮喘)发病中起着重要作用[1].我们通过CTLA4对哮喘患者CD+45RO+ T淋巴细胞的负向调控作用进行初步探讨.