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病毒性脑炎患儿脑脊液和血液中神经元特异性烯醇酶活性对比研究
神经元特异性烯醇酶( neuron-specific enolase, NSE)是一种神经细胞特有的含有γ亚单位的糖酵解酶.脑损害时神经细胞崩解该酶溢入脑脊液( CSF),使其含量升高.但中枢神经系统感染时 CSF-NSE与血液 NSE的含量及其对比变化,作为判断脑内神经元损伤客观指标的有关报道甚少,因此,本文通过对急性病毒性脑炎患儿进行 CSF与血的 NSE含量测定及对比研究,以探讨两者的相关性及临床意义.
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钠离子通道基因SCN1A突变及其相关癫综合征
癫是多种原因引起的慢性脑功能障碍综合征,是由脑神经元过度同步化放电所导致.近10年来,国际上已发现许多离子通道编码基因是癫的致病基因,故癫又被称为"离子通道病" .编码电压门控Na+通道α1亚单位的基因SCN1A是与癫发病相关的重要的基因之一[1].SCN1A基因突变导致的癫综合征临床表现多样化,轻者表现为预后良好的热性惊厥(FS),重者表现为难治性癫.SCN1A基因突变引起的常见的遗传性癫有:Dravet 综合征、全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)和肌阵挛-站立不能性癫(MAE)等.已报道的与癫相关的SCN1A基因突变类型有300余种[2].本文重点综述SCN1A基因突变导致的遗传性癫的表型及基因突变特点.
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低钾性周期性麻痹的血清肌酶学改变
低钾性周期性麻痹(hypokalemic periodic paralysis,HoPP)是以反复发作的骨骼肌弛缓性瘫痪为特征的一种疾病,发作时伴有血钾降低,有研究证实[1],本病与染色体1q31-32连锁DHPR的als亚单位突变引起的骨骼肌钙通道异常有关,在我国以散发者多见.以往对本病发生后血清肌酶的研究不多,认为血清肌酶升高是肌炎的重要特征,在HoPP不会出现血清肌酶的改变.为探讨两者之间的关系,我们1999-2003年对我科住院的38例HoPP病人进行血清酶学检查发现32例病人血清肌酶升高,现报道如下.
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粘性放线菌5951菌毛亚单位组成分析
目的为深入研究粘性放线菌Ⅱ型菌毛的粘附功能,对仅含Ⅱ型菌毛的T14V变异菌株5951细菌Ⅱ型菌毛的分子质量及亚单位组成进行初步分析.方法采用免疫印迹实验对纯化的Ⅱ型菌毛进行分子质量检测. 结果显示分子质量为31ku一条单一的色带,表明粘放菌5951菌毛是由相同的分子质量为31ku的亚基组成.结论根据文献报道及本实验结果推测,粘放菌5951菌毛分子质量为124ku,由4个相同亚基组成.
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泛素-蛋白酶体通路:从理论到临床
真核细胞内大多数蛋白质降解过程的调控是通过泛素-蛋白酶体通路(UPP)进行的.该过程分为两个步骤:①蛋白质的泛素化:一个或多个泛素分子通过共价键连接在目标蛋白质上;②多泛素化的蛋白质被26S蛋白酶体降解成寡肽.26S蛋白酶体是一个多亚单位的蛋白酶复合体,它可分为一个19S具有调节功能的调节颗粒和一个20S具有蛋白酶体催化活性的核心颗粒.
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抗癌药紫杉烷类临床应用现况
目前用于临床的两种紫杉烷类为紫杉醇(paclitaxel,Taxo1)与紫杉萜(docetaxel,Taxotere),此两种药物均可与微管蛋白的β-亚单位结合,导致无功能的稳定微管束形成,从而干扰有丝分裂.紫杉醇作用于G2/M期交界阶段,而紫杉萜主要作用于S期.紫杉烷类具有诱导细胞凋亡及抗血管形成作用.
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失重性骨质疏松症成骨细胞整合素亚单位蛋白表达的研究
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钠离子通道亚单位与神经性疼痛
脊髓背根神经节的钠通道与神经性疼痛的形成有密切的关系.钠通道有α和β两种亚单位,它们的基因表达与电生理的改变可引起神经元兴奋性增高,产生异常高频放电,在神经性疼痛的形成中起着重要作用.
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幽门螺杆菌VacA毒性亚单位在大肠杆菌中的分别表达
目的用基因工程方法获取幽门螺杆菌vacA基因毒性相关片段p37和p58,以深入研究VacA的致病机制.方法用PCR技术,扩增幽门螺杆菌vacA基因的两个片段p37、p58,并克隆入原核表达载体pQE-31,构建重组质粒pQE31-p37和pQE31-p58,转化大肠埃希菌M15,IPTG诱导蛋白质表达,用Ni-NTA柱纯化融合蛋白.结果 SDS-PAGE分析显示,经IPTG诱导的E.coli M15表达出相对分子量分别为37kDa和58kDa的P37和P58融合蛋白质,SDS-PAGE分析表明,表达的蛋白质经含Ni-NTA的层析柱纯化后为单一蛋白质.结论成功构建了原核表达载体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度的单一蛋白质,为进一步探讨VacA的生物学活性及VacA抗体的制备鉴定了基础.
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北京大学第一医院麻醉科
科室概况 北京大学第一医院麻醉科于1951年成立,经过几代人的努力,现已形成建制齐全、具有较大规模、能够完成各类手术麻醉和危重病人的抢救、并胜任教学和科研工作的现代化科室.现有各级医师42人,其中主任医师4人,副主任医师13人,主治医师16人,住院医师9人,有15人为国外学成回国.麻醉科由以下亚单位构成:第一住院部麻醉科、第二住院部麻醉科、麻醉恢复室、麻醉科重症监护病房、麻醉研究室、疼痛门诊.
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脊髓小脑性共济失调6型
脊髓小脑性共济失调(SCA)6型(SCA6)为常染色体显性遗传的SCA的一种类型,与编码电压门控钙离子通道α1A 亚单位(CACNL1A4)基因3'区域三核苷酸CAG重复扩增相关,可见缓慢进展的共济失调和构音障碍.德国SCA6占常染色体显性遗传性共济失调(ADCA)家系的13%.近30%SCA6患者误诊为散发性疾病[1].西欧SCA6占ADCA的2%;法国罕见,仅为ADCA的1%;其他国家发病率从10%~30%不等[2].Geschwind等[3]发现SCA6占ADCA的12%,居SCA第2位或第3位.Soong等[4]报道中国台湾Machado-Joseph病(SCA3)常见,占ADCA的47.3%;其次为SCA6,占ADCA的10.8%.我国大陆尚无报道,台湾发病率类似于日本人,高于白人的5%.SCA6高发区域包括台湾、日本西部Chugoku、德国North Rhine-Westphalia地区[1,4~9].CAG重复扩增形成的谷氨酰胺使P/Q型通道发生功能障碍,表明SCA6为一种通道病[7].
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T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响
目的 探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2(TRP-21180-188)抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响.方法 构建TIM-3重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2,分别转染重组质粒及空质粒pFUSE-mIgG2Aae 1-Fc2至人上皮293T细胞,继续培养48 h,制备含TIM-3、免疫球蛋白(Ig-tail)的上清液.TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素(IL)-2刺激培养5d,以未刺激细胞作为对照组.构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系,分为空白对照组(加293T细胞培养48 h上清液)、TIM-3组(加含TIM-3上清液)、阴性对照组(加含Ig-tail上清液).CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度,流式细胞仪检测共培养体系中CD8+T淋巴细胞.结果 酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中,检测到转染重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达,转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达.CCK-8法检测显示24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为(100.00±10.42)%、(108.70±9.90)%、(78.06±6.37)%,48 h时分别为(100.00±6.24)%、(168.00±2.98)%、(42.93±5.93)%;24 h、48 h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组(均P< 0.05).TIM-3组48 h相比24 h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05).24 h时,空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为(216.44±7.85)、(223.67±7.79)、(192.96±5.05) ng/L,48 h时分别为(230.06±4.23)、(167.24±3.33)、(54.95±0.57) ng/L.24 h、48 h时,TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P< 0.05).24 h、48 h时,TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05).24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数分别为0.421%、2.22%、3.30%,48 h时分别为0.577%、0.691%、4.06%.24 h、48 h时TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组.结论 TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α,提高CD8+T淋巴细胞.
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HIV Tat49-57增强人乳头瘤病毒16E7细胞毒性T细胞表位穿膜效应研究
目的探讨有穿膜序列HIV Tat49-57的人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位融合肽的跨膜能力及其影响因素.方法在HPV16E7 HLA-A2+/H-2kb+限制性CTL表位E749-57的N末端连接穿膜肽HIV Tat49-57序列,应用固相技术合成此融合肽,用间接免疫荧光与激光共聚焦显微技术,研究其穿膜能力,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其体外诱导特异性CTL杀伤效应.结果穿膜序列HIV Tat49-57可以有效促进HPV16E749-57表位肽进人BHK细胞胞浆,并呈时间、剂量依赖关系(P<0.05);与原表位肽相比,该融合肽有显著地激发特异性CTL活性的能力.结论在原CTL表位基础上引入穿膜序列,可以使其更快速、更有效地进入活细胞胞浆,为HPV16肽疫苗的设计提供一种新的思路.
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改良A-T皮瓣法修复上唇鼻基底缺损的临床应用
面部肿物是皮肤科发病率较高的疾病,而上唇近鼻基底处皮肤缺损的修复一直是临床工作中的难题[1].该部位解剖结构复杂,包含多个美学亚单位,对面部外观影响较大,如方法选择不当,则易出现上唇外翻、人中沟偏移、唇线断裂、上唇胡须缺失等多种并发症.根据该部位的解剖学特点,我们设计改良的A-T皮瓣法修复肿物切除后皮肤缺损,取得满意的临床和美容效果,现报道如下.
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NMDA受体2B亚单位反义寡核苷酸对缺血性脑损伤影响的实验研究/电针对脊髓损伤后星形胶质细胞增生的影响/微囊化兔坐骨神经组织移植对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响/微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白-43表达的影响
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2014年浙江湖州南浔地区肠道病毒71型VP1基因特征分析
肠道病毒71(EV71)是引起HFMD的主要病原。EV71是小 RNA 病毒科肠道病毒属(Enterovirus)成员,是正向单链RNA病毒。 EV71病毒粒子的衣壳由60个亚单位构成,后者又是由4种衣壳蛋白(VP1~4)拼装成五聚体样结构。4种结构蛋白中,除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外,其他3种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面,因而抗原决定簇基本上位于VP1~3。根据病毒衣壳蛋白VP1核苷酸序列的差异,可将EV71分为A、B和C三个基因型[1]。
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肿瘤细胞周期中Cyclin E的失调节
细胞周期调控机制紊乱是细胞增生失控从而导致癌变的重要原因.Cyclin E作为CDK2的一个正向的调节亚单位,它在正常细胞的S期(S phase)有着重要的启动作用.曾经认为cyclin E的过度表达可以加速细胞周期,异常提高的细胞增殖能力而造成肿瘤发生.随着研究的深入,对于cyclin E及CDK2有了新的认识,并认为是cyclin E的失调节(Deregulation of cyclin E)导致细胞周期中染色体的不稳定性(chromosome instability,CIN),从而造成肿瘤发生.
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NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位
目的:研究含NR2B亚单位的NMDA受体(以下简称NR2B-NMDAR)与含GluR2亚单位的AMPA受体(以下简称GluR2-AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位.方法:以FLAG-NR2B、GFP-GluR2及CFP-Actin的表达载体共转染原代培养5 d的大鼠海马神经元,分别用抗FLAG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗-Cy3(红色荧光)、抗GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗-Alex488(绿色荧光)作活细胞双重染色,显示并计数表面表达的NR2B-NMDAR受体簇、GluR2-AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇. 结果:培养7 d和19 d时NR2B-NMDAR受体簇密度分别为39.7±5.0和64.7±6.1(P<0.01;n=6);GluR2-AMPAR受体簇密度分别为59.1±3.3和99.7±6.4(P<0.01;n=6);两者共定位的受体簇密度分别为29.9±4.5和37.5±2.5(P<0.05;n=6).培养7 d和19 d时,与GluR2-AMPAR共定位的NR2B-NMDAR受体簇占总NR2B-NMDAR受体簇的比例分别75.4%和57.9%,而与NR2B-NMDAR共定位的GluR2-AMPAR受体簇占总GluR2-AMPAR受体簇的比例分别为50.6%和37.6%.结论:随着海马神经元的发育,成熟神经元比未成熟神经元树突表面NR2B-NMDAR受体簇、GluR2-AMPAR受体簇,及共定位的受体簇密度均显著增加;然而,NR2B-NMDAR受体簇和GluR2-AMPAR受体簇共定位的程度却是下降的.提示兴奋性突触形成过程中,NMDA受体亚型和AMPA受体亚型的组合方式是异质性的,并随着发育阶段而改变.
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小鼠持续性脑缺血后NMDA受体亚单位表达的变化
目的:研究小鼠持续性脑缺血后不同脑区NMDA受体亚单位表达的变化及其与病理损伤之间的联系.方法:采用大脑中动脉阻断法制作小鼠持续性脑缺血模型,取缺血后不同时间的皮层、海马、皮层下脑组织,用免疫印迹技术测定NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2蛋白的含量.同时作冰冻切片和苏木素伊红染色,计算相应脑区神经元密度.结果:NMDA受体ζ1和ε1及ε2亚单位表达的改变发生于缺血后5 h内,皮层下3个亚单位表达均明显增加,海马则各亚单位表达变化不一.脑梗塞灶和相关脑区神经元密度显著减小均出现于缺血后5 h ,相关脑区神经元死亡严重程度依次为皮层下组织和海马CA1区及大脑颞叶皮层Ⅲ-Ⅳ层.结论:小鼠持续性脑缺血,缺血侧脑组织NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2表达的变化发生在明显的病理损害之前,表达变化程度因脑区不同,与相关脑区神经元损害的程度相应.
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电化学发光法定量检测CK-MB的方法学评价
肌酸激酶CK由M和B两种亚单位构成三种同工酶:CK-MB、CK-MM、CK-BB.其中在心肌CK-MB的含量丰富,是常用的诊断急性心肌梗死的指标.酶法测定CK-MB的活性是采用免疫抑制法,即在试剂中加入CK-MM的抑制剂,完全抑制CK-MM的活性,而不抑制CK-MB的活性,然后用酶动力学方法测定总酶活性,即得CK-MB活性,可是血清中CK-BB和腺苷酸肌酶(AK)都能干扰CK-MB的活性,因此,常有CK总酶活性正常而CK-MB活性升高,甚至CK-MB活性大于CK总酶活性的现象.本文采用电化学发光法对CK-MB进行定量检测(CK-MB mass assay),并对其进行方法学评价.