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胰岛素样生长因子系统与运动系统的关系研究进展
胰岛素样生长因子系统(insulin-like growth factor,IGFs)是一个复杂的体系,其构成主要包括:IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IG阳P1-6(骨骼组织主要为IGFBP3-5)、IGF-IR,酸不稳定亚单位等成分.
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电压门控性钠离子通道与癫痫
癫痫(epilepsy)是一种由大脑神经元异常放电所引起的以短暂中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病,具有突然发生、反复发作的特点.目前众多研究表明癫痫与离子通道的功能改变有密切联系[1].离子通道为神经系统传输信号的基本元件,广泛分布在细胞体、树突、轴突及突触,它由多种通道蛋白质聚集而成,每种通道蛋白的亚单位由不同的基因编码.
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革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶和aac(6')-Ib-cr基因的检测
细菌对氨基糖苷类抗生素耐药机制研究以往主要集中在细菌产生的氨基糖苷类修饰酶~([1]).氨基糖苷类抗生素通过与细菌30S核糖体的16SrRNA亚单位结合,干扰蛋白质合成从而抑制细菌生长.
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结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究
目的 研究结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性.方法 用原核表达的Rv1009结构域多肽免疫BALB/c小鼠3次.每次间隔2周.用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度.分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数.ELISA方法检测淋巴细胞悬液中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-10和IL-12的产生水平.另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后,计数脾脏细菌负荷数.结果 Rv1009结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1:12 800.淋巴细胞增殖指数为2.40±0.18,明显高于生理盐水对照组的0.90±0.21.ELISA方法检测Rv1009结构域多肽免疫组IFN-γ、IL-10和IL-12水平为(1432±30)ng/L、(503±11)ng/L和(311±11)ng/L,显著高于生理盐水对照组的(256±20)ng/L、(76±6)ng/L和(56±8)ng/L(P<0.01).与生理盐水免疫组(细菌负荷6.64±0.13)相比较,Rv1009结构域多肽免疫组小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为4.86±0.14,P<0.05),但不及BCG免疫组的3.81±0.16.结论 Rv1009结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分.
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儿童肺炎链球菌分离株pbp2B基因突变分析
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)是引起儿童呼吸道感染的常见病原菌.近年我国多中心研究发现,无论是儿童还是成人所分离到的青霉素耐药SP(penicillin resistant streptococcus pneumoniae,PRSP)已占SP分离总数的10.0%~50.0%,并呈上升趋势[1,2].PRSP主要为青霉素结合蛋白(penicillin-binding proteins,PBPs)编码基因突变所致[3、4].为了解我国耐青霉素SP菌PBPs基因的突变状况,我们对2002年9月至2003年4月28株分离自苏州地区患儿呼吸道的SP菌之PBP2B亚单位编码基因pbp2B进行了套式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction, nPCR)扩增及其产物的全自动DNA序列测定.
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导致高水平氨基糖苷类抗生素耐药的新型16S rRNA甲基化酶研究进展
氨基糖苷类抗生素通过与细菌30S核糖体的16S rRNA亚单位结合,导致读码错误,干扰蛋白合成从而阻止细菌生长[1].氨基糖苷类抗生素作为一类高效、广谱的抗生素,因其具有浓度依赖性的快速杀菌、可与细胞壁活性抗菌药物产生协同作用的特点,一直是临床上治疗革兰阴性菌所致严重感染的重要药物.
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新型钙拮抗剂贝尼地平基础与临床研究进展
钙拮抗剂(Calcium Antagonist),又称钙通道阻滞剂(Calcium Channel Blocker),根据药物核心分子结构和作用于L型钙通道不同的亚单位,钙拮抗剂分为二氢吡啶类和非二氢吡啶类.
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大鼠肝再生相关基因LRRP1的人同源基因是一种新型琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因
目的:应用分子生物学和生物信息学方法,寻找、克隆大鼠肝再生相关基因LRRPl的人的同源基因,阐明LRRPl基因的结构和功能,为研究肝脏再生调节的分子生物学机制奠定基础.方法:利用美国国立卫生研究院建立的核苷酸数据库(GenBank)以及相应的核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTN),以大鼠的LRRPl的cDNA序列作为参照,对于人的同源性cDNA序列进行搜索分析,寻找人的LRRPl的同源基因序列.利用蛋白质一级结构序列的数据库以及相应的同源蛋白序列的搜索分析,阐明人LRRPl蛋白质一级结构与已知蛋白序列的同源性,从而根据蛋白质一级结构的相似性,对于新克隆基因进行功能方面的预测分析.应用在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质一级结构序列进行分析预测,分析其氨基末端序列是否具有信号肽序列,以判断人LRRPl蛋白是否是一种可以分泌表达的蛋白;同样对人LRRPl蛋白质一级结构序列进行在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质分子结构中的潜在的糖基化位点以及其他类型的修饰位点进行预测.结果:人的LRRPl的编码基因由480nt组成,编码产物由159aa组成.人LRRPl的蛋白质一级结构序列与人琥珀酸脱氢酶亚单位D、牛琥珀酸脱氢酶亚单位D高度同源,同源性分别为79%(126/159),78%(123/156).人LRRPl是一种分泌蛋白,在其分子结构中具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和豆蔻脂化修饰位点.结论:人LRRPl蛋白是一种新型的琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因.
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羧肽酶N调节乙型肝炎病毒核心启动子表达活性的研究
目的:乙型肝炎病毒(HBV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生发展密切相关.为深入研究HBV调节表达的机制,我们应用噬菌体展示技术,以HBV核心启动子DNA片段为固相支持物,筛选肝细胞cDNA文库,获得HBV核心启动子的肝细胞结合蛋白-羧肽酶N(CPN).CPN是一种从多肽和蛋白质C端氨基酸残基分离的血浆金属蛋白酶,他在调节激肽和过敏毒素的生物活性上起关键作用.CPN是分子量280 kD的四聚体,包含两个50KD酶性亚单位和两个83 kD调节亚单位.核心启动子产生两个3.5kb RNA:前-核心和前基因组RNA.前-核心RNA编码前-核心蛋白和e抗原,前基因组RNA不仅作为mRNA编码核心蛋白和聚合酶蛋白,而且与病毒蛋白一起包埋入核衣壳,作为模板逆转录.前基因组RNA的表达调控在病毒复制周期中起着关键作用.核心启动子分为两部分:基本核心启动子和核心上游调节元件(CURS),其上游为负性调节元件(NER,1616-1621 nt).CPD在体内与HBV核心启动子结合的作用还不清楚,我们分别构建HBV核心启动子及羧肽酶N的重组载体,通过脂质体转染NIH 3T3细胞,研究CPN对核心启动子的调节表达.方法:根据HBV核心启动子及羧肽酶N的序列设计引物,在核心启动子的引物两端引入MIu Ⅰ和Nhe Ⅰ的酶切位点,在羧肽酶N的引物两端引入EcoR Ⅰ和BamHⅠ的酶切位点.用聚合酶链反应(PCR)的方法分别扩增HBV核心启动子和羧肽酶N基因,克隆到pGEM-Teasy载体上.核心启动子经MIu Ⅰ和Nhe Ⅰ双酶切回收连接到同样酶切的pCAT载体上,羧肽酶N经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切回收连接到同样酶切的pcDNA3.1(-)质粒上,构建HBV核心启动子的报告载体及羧肽酶N的真核表达载体,脂质体法瞬时转染NIH 3T3细胞.结果:HBV核心启动子和羧肽酶N(CPN)的PCR产物经1%琼脂糖电泳鉴定与预期大小符合,分别为206 bp和580 bp.重组载体经双酶切鉴定后,证明HBV核心启动子的报告载体及羧肽酶N(CPN)的真核表达载体构建成功.脂质体法瞬时转染NIH 3T3细胞48 h后,用ELISA法检测β-gal的表达,显示核心启动子在羧肽酶N(CPN)的影响下,其活性有大约5-6倍的增加.通过体内实验证明羧肽酶N(CPN)可以上调HBV核心启动子的表达.结论:HBV核心启动子结合蛋白羧肽酶N(CPN)与HBV核心启动子共转染细胞,明显调节HBV核心启动子的表达,为进一步研究HBV复制的分子生物学机制提供了新的理论基础.
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幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达
目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.
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结核病免疫机制及疫苗研制开发研究进展
TB主要是由结核病病原体—— Mtb感染引起的具有重大公共卫生威胁的传染病.天然免疫细胞如巨噬细胞或树突状细胞,通过其表达的模式识别受体(PRRs)识别Mtb特有的病原相关分子模式(PAMPs)后,引起大量特异性的细胞因子表达及细胞活性的提高.被激活的巨噬细胞或树突状细胞不仅可以直接吞噬Mtb或Mtb感染的细胞,还可以通过释放各种活性分子与抗原提呈来激活适应性免疫应答.然而,Mtb在与宿主免疫系统的长期共同进化过程中发展出各种干扰或抑制免疫细胞功能的机制:如抑制细胞因子的产生;抑制吞噬体与溶酶体的融合;抑制巨噬细胞的自噬;抑制免疫细胞的凋亡;抑制树突状细胞的成熟和抗原提呈等,从而能够在巨噬细胞内存活.目前,惟一使用的减毒Mtb活疫苗——BCG却缺乏有效性.人们对TB发生机制的认识不足,严重限制了对TB新型高效的抗Mtb疫苗的研发.尽管近年来在新型疫苗研制开发方面已经取得一些进展,目前进入临床状态的候选疫苗已达十几种,但是距离实际应用还任重而道远.按照免疫策略和改进方法,新型疫苗可以分为重组BCG疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和减毒Mtb疫苗.研发新型疫苗关键需要解决以下问题:一是如何筛选到优质的抗原;其次,如何筛选到优质的佐剂以增加抗原的免疫保护效果;再次如何保证抗原的正确加工和有效提呈;第四,如何增加BCG的免疫记忆;第五,如何进一步降低BCG的毒力;后,如何对疫苗的免疫保护效果进行评估.
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浅低温不停跳二尖瓣置换术心肌保护的研究
晶体心脏停搏液结合局部低温长时间来被人们奉行为心肌保护的"金标准",我们在一组二尖瓣置换术病例中应用浅低温心脏不停跳与晶体心脏停搏液做比较,观察其对较长时间缺血心肌的保护作用,同时监测心肌肌钙蛋白T亚单位(cTnT)与心肌酶谱作比较,探讨该类患者术中较好的心肌保护方法和监测指标,进一步提高手术的安全性.
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Skp2、p27及PTEN在胰腺癌组织中的表达及其意义
大多数恶性肿瘤的形成过程中都存在细胞周期的紊乱.细胞s期激酶相关蛋白2(S-phase-kinase associated protein 2,Skp2)是泛素连接酶SCF(skpl-cull-F-box protein,SCF)的底物识别亚单位,主要通过识别p27进而介导其泛素化降解来调控细胞周期,是细胞周期由G_1期进入S期所必需的~([1,2]).
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心肌肌钙蛋白I在冠心病中的临床意义
心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,具有较高的心肌特异性及敏感度,已越来越多地用于心肌梗死、心绞痛的诊断和鉴别诊断,并逐渐有取代心肌酶的趋势[3,4].
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二甲基三十六烷基铵.卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应
目的 探讨二甲基三十六烷基铵(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应.方法 采用热酚法制备BCG-PSN,与DDA联合作为融合蛋白AMM(Ag85B-MPT64190-198-Mth8/4)佐剂免疫小鼠,设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂(IFA)及单独应用DDA或BCG-PSN一种佐剂的各组作为对照.应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应.结果 分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞,用特异性抗原AgSSB刺激后,AMM+DDA+BCG-PSN疫苗组、AMM+DDA组和卡介苗组小鼠每1×106个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64,均明显高于AMM+PBS组(40±4)、AMM+IFA组(10 ±3)、AMM+BCG-PSN组(132±18)和生理盐水组(8±4),差异有统计学意义(t值为2.923~7.118,均P<0.05);与单用DDA组比较,添加DDA和BCG-PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2a/IgG1较高(0.125和0.025),但γ-干扰素分泌水平没有增高.结论 AMM+DDA+BCG-PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应,DDA+BCG-PSN(尤其是DDA)具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应.
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结核分枝杆菌热休克蛋白16.3及其合成肽诱导小鼠免疫应答的研究
1±3)mg/L],3个实验组之间均无显著差别.3个实验组均对MTB在脾脏[细菌数为(6.74±0.14)~(6.81±0.28)lgCFU]和肺脏[细菌数为(5.74±0.27)~(6.65±0.32)lgCFU]中的增殖有明显抵抗作用,但效果均未超过卡介苗组[细菌数分别为(5.95±0.17)和(5.62±0.23)lgCFU].结论 HSP16.3和HSP16.3合成肽在免疫学特性方面各有优势,提示二者均有望成为结核病疫苗的候选组分.
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异丙酚预先给药对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤的保护作用科
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发病机制复杂,目前已知参与ARDS发病的炎症介质多达150余种,其中绝大多数终都要通过G蛋白这个跨膜信号转导通道,将信号转导至效应器而发挥作用[1].Gq/11蛋白属于G蛋白,广泛分布于各组织和细胞系,可以和多种激素、肽类及炎性介质的受体耦联.如能阻断或改变G蛋白对这些信息的转导,就有可能改变众多炎症介质而引起肺脏的病理生理改变.异丙酚预处理可减轻内毒素休克大鼠肺损伤程度[2] .我们拟通过观察异丙酚预处理对ARDS大鼠肺组织Gαq/11亚单位的表达,揭示其对减轻肺损伤的可能机制.
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免疫蛋白酶体亚单位低分子量多肽7(β5i)的研究进展
泛素-蛋白酶体系统(UPS)是真核细胞内非溶酶体通路的蛋白质降解主要途径,UPS水解活性与β1、β2、β5亚基密切相关,在特定的条件下,β1、β2、β5亚基可被相应的免疫亚基β1i、β2i和低分子量多肽7(LMP7或β5i)替代,其中β5i活性强,新形成的结构被称为免疫蛋白酶体(immunoproteasome).β5i在自身免疫性疾病、心脑血管疾病、肥胖与代谢疾病、肿瘤等方面发挥着重要作用.本文综述了β5i在上述疾病中的研究进展,以便为药物治疗提供理论依据,从而改善疾病预后.
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风湿性心脏病慢性心房颤动患者的心房肌钙离子通道组成蛋白α1c的变化
心房颤动(房颤)是临床上常见的心律失常之一,房颤的确切发病机制尚不完全清楚,治疗的总体效果较差.房颤的电生理特征是心房肌有效不应期明显缩短,目前普遍认为L型钙通道电流(ICa-L)密度的下降是心房肌动作电位时限和有效不应期缩短的主要原因,但是导致房颤时心房肌细胞ICa-L密度下降的具体机制仍不十分清楚.本研究的目的在于明确ICa-L密度下降是否缘于钙离子通道形成亚单位α1c蛋白含量和mRNA表达的变化,同时进一步探讨房颤时左、右心房之间的电生理差异是否缘于α1c表达的不同.
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心力衰竭家兔左心室瞬间外向钾通道重构及氯沙坦干预研究
本研究应用膜片钳全细胞记录方法记录左心室心肌瞬间外向钾电流(Ito);应用半定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测左心室瞬间外向钾通道a亚单位KV1.4、KV4.2和KV4.3 mRNA表达,观察心力衰竭家兔左心室瞬间外向钾通道重构情况以及氯沙坦的干预作用,进一步探讨血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)降低心力衰竭心律失常的机制.