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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制作用
目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制活性.方法设计合成分别互补于HPSE mRNA 5＇未翻译区和起始密码区的AS-ODN1、AS-ODN2及相应对照NS-ODN1、NS-ODN2,在脂质体介导下以250nmol/L终浓度转染人乳腺癌MDA435细胞,以RT-PCR和Western blot分别检测HPSE mRNA和蛋白表达,以基质凝胶侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 AS-ODN2组的HPSE mRNA相对表达量、蛋白表达量和侵袭细胞数(0.62±0.04、12.70±1.70、61.00±9.00)与脂质体对照组(1.60±0.04、36.20±2.10、178.00±17.00)和NS-ODN2组(1.48±0.03、35.50±2.30、174.00±20.00)相比较均显著降低(P<0.01);而AS-ODN1组与脂质体对照组和NS-ODN1组相比较差异均无显著性(P>0.05).结论互补于起始密码区的HPSE AS-ODN可通过下调HPSE表达显著抑制人乳腺癌细胞株MDA435的侵袭力.
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磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和侵袭力的影响
乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移仍然是导致患者预后不良的重要因素,明确乳腺癌的增殖和侵袭转移机制有助于找到针对其更好的治疗方法.我们应用磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路抑制剂LY294002和Wortmanin处理乳腺癌细胞株MCF-7,以MTT和Transwell法检测处理后MCF-7细胞的增殖和侵袭力变化,探讨乳腺癌细胞中潜在活化的PI3K信号通路对其增殖和侵袭力的影响及意义.
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酵母双杂交系统筛选IEX-1相互作用蛋白
骨肉瘤恶性程度高,侵袭力强,易发生早期肺转移,预后差,严重影响青少年身心健康.近20年来,其5年生存率虽有所增加,但治疗一直处于平台期,化疗疗效没有较大提高[1].我们研究表明早期应答基因IEX-1与骨肉瘤相关,IEX-1在As2O3作用后,表达明显下调[2].
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靶向血管生成因子2的shRNAs降低U87胶质瘤侵袭力的研究
血管生成因子(Ang)-2作为多个促肿瘤迁移因子的潜在激活物质,在胶质瘤新生血管生成与稳定、周围基质降解与侵袭方面发挥重要作用[1,2].我们通过敲低Ang-2在人源性U87胶质瘤细胞中的表达,观察其对胶质瘤侵袭力的影响.
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凝血酶敏感蛋白-1对人肝癌细胞株HCCLM3侵袭力的影响
肝细胞癌(HCC)的恶性生物学特征使得手术切除为主的综合治疗效果仍不理想,对其侵袭转移机制的研究显得尤为重要[1].凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在调节肿瘤细胞的多种生物学行为中发挥重要作用[2].本研究旨在探讨TSP-1对肝癌细胞株体外侵袭的作用及其可能的作用途径.
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PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU-87增殖和侵袭力的影响
PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,它通过发挥磷酸酶作用,阻断信号传导通路,抑制细胞的生长、黏附、铺展和迁移,诱导凋亡,从而对肿瘤的生长和侵袭产生负性调节作用[1].研究发现,在人类多种肿瘤中均有PTEN的丢失或突变,其表达与肿瘤的发生、发展及预后有一定的相关性.本实验将外源性PTEN转染入人膀胱癌细胞系BIU-87中,观察其对肿瘤细胞增殖力和侵袭性的影响,以探索膀胱癌基因治疗的新靶点.
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微小RNA-221通过靶基因细胞因子信号抑制因子1表达水平调控前列腺癌细胞的侵袭力
目的 观察前列腺癌细胞中微小RNA(miRNA,miR)-221的表达及其对前列腺癌细胞侵袭力的影响.方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异,利用细胞转染构建miR-221过表达和抑制细胞株,再通过细胞迁移实验检测细胞侵袭力的变化;使用荧光素酶报告实验验证miR-221与细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的直接调控关系,再采用Western blot检测细胞中SOCS1基因表达水平的变化.结果 RT-qPCR检测细胞株可见miR-221在PC3、LNCaP和DU145 3种前列腺癌细胞株中表达量(6.51、7.52和8.03)均比前列腺正常细胞株表达量(12.12)低(F=235.852,P=0.000),其中两两比较差异也有统计学意义.细胞迁移实验结果显示,过表达miR-221的前列腺肿瘤细胞迁移速度显著慢于对照组(25.3 h比17.8h).荧光素酶报告实验显示,miR-221能明显抑制SOCS1-3'UTR的荧光素酶活性(P =0.006).过表达miR-221后,PC3细胞中SOCS1的蛋白表达下调(P=0.035).结论 miR-221负调控SOCS1能抑制前列腺癌细胞的迁移.
关键词： 前列腺癌 微小RNA-221 侵袭力 细胞因子信号抑制因子1 -
巨噬细胞对胃癌细胞增殖及侵袭力的影响
目的 观察巨噬细胞对胃癌细胞生物学行为的影响,以探讨肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)在胃癌侵袭转移中的作用.方法 将人单核细胞株THP-1体外诱导为巨噬细胞,并与胃癌细胞株AGS共培养模拟胃癌微环境,观察并分析其对胃癌细胞增殖力和侵袭力的影响.结果 胃癌细胞与巨噬细胞共培养后,增殖能力有所减弱,倍增时间为(38.42±2.68)h,而未经共培养者倍增时间为(24.36±2.91) h(P ＜0.001)；而体外侵袭实验显示胃癌细胞共培养后及未共培养时侵袭细胞计数分别为308±15和168±4,侵袭力增强(P＜0.01).巨噬细胞对胃癌细胞的作用与其分泌细胞因子相关.THP-1细胞激活并分化为巨噬细胞后,培养上清中白细胞介素(IL)-8及IL-1β表达量分别增加了40和20倍(P＜0.01)；肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量增加了8倍(P＞0.05).结论 巨噬细胞可增强胃癌细胞的侵袭力,该作用可能与其分泌的细胞因子IL-8及IL-1β和TNF-α增高有关.
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提高我国神经母细胞瘤的研究与诊治水平
神经母细胞瘤在我国小儿恶性实体肿瘤的发病统计中常列首位.在近的小儿实体肿瘤协作组的资料中,神经母细胞瘤仍列发病首位(21.4%).尤其值得提出的是,神经母细胞瘤具有恶性程度高、侵袭力强、晚期病例多和治疗效果较差的临床特点,在先天性畸形和感染性疾病诊治水平明显提高的现代社会,已成为严重威胁儿童生命的一个常见死亡病因.为此,如何提高神经母细胞瘤的临床研究和诊治水平,已引起国内外学者的普遍关注.
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血管内皮细胞通过Notch信号通路对胶质瘤细胞侵袭性生长的影响
目的 探讨血管内皮细胞对胶质瘤细胞侵袭力的影响及其与Notch信号通路之间的关系.方法 在体外采用Transwell共培养系统将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)和U87胶质瘤细胞进行间接共培养;抑制剂DAPT(N-[N-(3,5-di-fluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycinet-butylester)抑制Notch信号通路;Transwell小室快速检测各组U87细胞的侵袭力;Real-time PCR检测各组U87细胞中Notch1、Notch2、Hes1、Delta样配体4(Dll4)、Cathepsins B、MMP-9、MMP-2 mRNA的表达情况;Western blot检测各组U87细胞中MMP-9、MMP-2蛋白、Cathepsins B的表达情况.结果 共培养组较单纯组U87细胞生长旺盛,DAPT处理后生长受抑制;共培养组穿过Matrigel膜的U87细胞数目明显多于单纯组,DAPT处理组较共培养组穿膜细胞数目减少.共培养组U87细胞的Notch1、Notch2、Hes1、Dll4、Cathepsins B、MMP-9 mRNA的表达及各组U87胶质瘤细胞中MMP-9、Cathepsins B蛋白的表达水平明显升高,DAPT处理组较共培养组相关的mRNA和蛋白水平降低.结论 血管内皮细胞可以通过Notch信号通路增强U87胶质瘤细胞的侵袭力,DAPT抑制Notch信号通路可以降低血管内皮细胞对U87胶质瘤细胞侵袭力的增强效果,Notch信号通路在血管内皮细胞对U87胶质瘤细胞的侵袭力的增强过程中起重要的调控作用.
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Annexin 2基因对多发性骨髓瘤细胞侵袭力的影响及相关机制
目的 了解Annexin 2 (AnxA2)基因对骨髓瘤U266、RPMI8226细胞侵袭力的影响及相关机制.方法 采用siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMI8226细胞,应用Real-time PCR、Western blot鉴定干扰效果.继而应用Transwell板检测细胞侵袭力,应用Real-time PCR检测对侵袭相关基因的影响.结果 AnxA2 siRNA转染U266和RPMI8226细胞可明显降低细胞侵袭力(P＜0.05),同时降低侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、MT1-MMP和TIMP-2的表达(P＜0.05).结论 AnxA2基因在骨髓瘤细胞U266和RPMI8226侵袭中起促进作用.
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肼苯哒嗪对宫颈癌细胞系侵袭力的影响
目的 探讨肼苯哒嗪去甲基化作用对人宫颈癌细胞系HeLa(HPVl8型)、CaSki和SiHa(HPVl6型)细胞侵袭力的抑制影响.方法 Transwell侵袭小室法检测肼苯哒嗪处理前后人宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa的侵袭力.甲基化特异性PCR(MSP)法检测肼笨哒嗪处理前后各细胞系中APc基因和CDH1基因5'端启动子区CpG岛甲基化状态.实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测肼苯哒嗪处理前后.上述三种细胞系中APC和CDH1 mRNA表达情况.结果 与未处理组比较,10 μmol/L肼苯哒嗪对人宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa的侵袭力抑制作用差异无统计学意义,20 μmol/L与40 μmol/L肼苯哒嗪对人宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa的侵袭力抑制作用差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);且不同浓度之间有差异,以40 μmol/L肼苯哒嗪抑制作用强.40 μmol/L肼苯哒嗪处理后,上述三种细胞系中APC和CDHl基因呈现不同程度的去甲基化现象.经40 μmol/L肼苯哒嗪处理后.上述三种细胞系中APC mRNA表达分别是处理前的5.89倍、8.46倍及0.97倍.CHD1mRNA表达分别是处理前的4.82倍、5.90倍及8.46倍.结论 一定浓度的胼苯哒嗪能明显抑制宫颈癌细胞系HeLa、CasKi和SjHa的侵袭力,其作用机制之一是通过去甲基化作用影响APC和CHD1的表达.
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槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖及侵袭力的影响
目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435 S增殖及侵袭能力的影响.方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435 S以12.5、25、50、100、200 μM终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞的增殖状况、流式细胞术法检测细胞的凋亡率、Boyden小室法检测细胞的侵袭能力.结果 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S经槲皮素处理后,其体外增殖及侵袭能力明显下降的同时凋亡率明显上升,且与药物的剂量呈正相关,当槲皮素终浓度达到200μM时,MDA-MB-435 S细胞的生长及侵袭能力几乎完全受到抑制.结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435 S的增殖及侵袭能力并能诱导其凋亡,为槲皮素用于乳腺癌的预防和治疗提供了部分依据.
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左下肺三重混合癌一例
患者，男，71岁。反复咳嗽、咳血丝痰1年，伴进行性消瘦。无畏冷、低热、盗汗等不适，体检无明显阳性体征。胸部正侧位片示左下肺后段一大小约5cm×6cm×8cm团块状阴影，密度均匀，边缘不清；左心缘呈双边影，左肋膈角变钝。X线意见：①左下肺炎性假瘤合并左侧胸腔少量积液?②左下周围型肺癌并左侧胸腔少量积液?CT及MRI示左下叶后炎性假瘤可能。 手术所见：左下肺后基底段一肿物约6cm×7cm×8cm，质地较实，左胸腔血性积液约800ml。 病理：左下肺腺鳞癌，部分透明细胞癌(周围型)。癌组织侵及脏层胸膜，支气管旁淋巴结转移。 讨论在肺的同一原发性癌肿内出现了两种或两种以上不同细胞类型癌的混合存在，称为肺原性混合癌(Pulmonary primary mixed carcinoma，PPMC)［1］。国外文献报道PPMC的发生率为5%～10%，而国内报道一组PPMC的发生率分别为3.4%、1.96%，且三重混合癌发生率0.3%［2］。本例的临床及胸部影像学表现与肺癌其它类型无明显差异，诊断较困难。术后病检是获得肯定诊断的主要措施。PPMC有侵袭力强、早期转移、进展猛烈等低分化癌特征，预后极差［3，4］。本例术后4个月因广泛转移而死亡。
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整合素αvβ3对体外骨肉瘤细胞增殖与侵袭力的影响
目的 研究整合素αvβ3在骨肉瘤细胞增殖和侵袭性生长中的作用,为以整合素αvβ3,为靶点治疗人骨肉瘤提供实验依据.方法 ①采用MTY比色法和PCNA免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的MG-63骨肉瘤细胞增殖的影响;②建立Boyden小室细胞侵袭模型,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的骨肉瘤细胞侵袭能力的影响.结果 ①整合素αvβ3抗体对体外培养的MG-63骨肉瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P<0.05);②整合素αvβ3抗体显著降低体外培养的MG-63骨肉瘤细胞的侵袭能力,其作用亦表现出明显的量效关系(P<0.05).结论 整合素αvβ3对骨肉瘤细胞的恶性增殖和侵袭性生长具有促进作用,其为抗整合素αvβ3治疗骨肉瘤提供了实验依据.
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缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响
目的 探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响.方法 绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组.应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化.结果 与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9 mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P＞0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力.
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缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响
目的 探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响.方法 将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150 μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性.缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05).结论 在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化.
关键词： 缺氧 MMP9/TIMP1 细胞滋养细胞 侵袭力 -
致腹泻大肠埃希菌及其检验诊断进展
无论在发展中国家还是在发达国家, 由大肠埃希菌(简称大肠杆菌)所致的腹泻仍然严重威胁着人类健康, 重要的致腹泻大肠杆菌已明确者有产毒素大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC, EAggEC)、细胞脱落性大肠杆菌(DAEC), 尚有产坏死性毒素大肠杆菌、产志贺毒素且具侵袭力的大肠杆菌(ESIEC)等. 其病原学诊断常被忽视, 原因之一是除EHEC可致严重临床问题外, 一般均易于治疗, 服用抗生素加补液可迅速见效; 其二是缺乏常规的检验手段, 难以及时明确病原. 但近年来, 由大肠杆菌所致腹泻及其并发症日趋复杂与严重, 细菌的耐药性也在增强, 需要及时明确病原; 而且检测手段的进步可以弥补这一微生物诊断的薄弱环节.
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38株致泻大肠艾希氏菌血清型分布及药敏检测
目前世界上公认的致泻大肠艾希氏菌有6种,即肠致病性大肠艾希氏菌(EPEC)、肠侵袭性大肠艾希氏菌(EIEC)、肠产毒性大肠艾希氏菌(ETEC)、肠集聚性大肠艾希氏菌(EAggEC)、肠产志贺样毒素且具侵袭力大肠艾希氏菌(ESIEC)及肠出血性大肠艾希氏菌(EHEC).
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疑似食物中毒患者标本一株侵袭性大肠埃希菌O29:K?的分离及实验探讨
目的 对一株分离于疑似食物中毒腹泻患者的EIEC菌株进行生化特征、血清学及致病侵袭力实验探讨.方法 参照GB/T4789.6-2003和卫生防疫细菌检验.结果 3份标本分离到的同一血清型EIEC O29:K?菌株,经全面生化反应,血清学及Sereny试验证实为一株非典型生化特征,丧失侵袭力的EIEC菌株.结论 在肠道病原菌的鉴定中,非典型生化特征及丧失侵袭力的EIEC菌株应引起注意.
