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2种仙人掌多糖对S180小鼠红细胞免疫功能影响的研究
目的:研究仙人掌多糖对S180小鼠红细胞免疫功能的影响.方法:应用药理方法及化学试剂盒进行测定.结果:仙人掌多糖可增加荷瘤小鼠肿瘤红细胞花环率,提高红细胞C3b受体花环促进率,降低红细胞C3b受体花环抑制率,提高红细胞表面唾液酸含量.药用仙人掌多糖中剂量组及食用仙人掌多糖高剂量组效果显著(P<0.01).结论:仙人掌多糖可以改善荷瘤小鼠红细胞免疫功能,可能是其抗肿瘤作用的机制之一.
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免疫原快速激活系统血液固有免疫反应研究思路的演变与创新
1953年Nelson发现人类红细胞可与特异调理过的梅毒螺旋体及肺炎双球菌结合,称为免疫黏附,并推测红细胞膜表面可能存在免疫黏附受体,免疫复合物与该受体结合可促进白细胞的吞噬作用,是宿主防御机制的一部分.后来证明此黏附受体即为C3b受体(CR1、CD35).
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低功率毫米波对荷瘤小鼠红细胞免疫黏附活性的影响及作用分析
目的研究毫米波(MMW)对荷瘤小鼠红细胞免疫粘附功能的影响.方法健康雄性昆明小鼠60只,体重(16±2)g,随机分为两组,每组30只.两组小鼠腹腔接种浓度为1×106/ml小鼠艾氏腹水癌细胞0.2ml,接种后当天开始,辐射组用频率36GHz,功率密度0.73-1.46mW/cm2毫米波辐射小鼠背部30min,每日1次,连续8天.对照组在同等条件下进行假辐射.于辐射后0d、3d、6d分别取辐射组及对照组小鼠各10只,抽取静脉血,分别测定RBC-C3b受体花环率(RCR)、tumour-RBC花环率(TRR)、RBC-SOD活性及RBC-LPO含量.结果在辐射后3天时,辐射组的RCR、TRR显著高于对照组( P<0.01),RBC-LPO含量下降明显( P<0.05),RBC-SOD活性无明显增加( P>0.05);在辐射后0天和6天时,辐射组各测定指标与对照组相比无显著差异( P>0.05).结论低功率毫米波辐射可促进荷瘤小鼠红细胞免疫粘附功能,减轻红细胞的脂质过氧化损伤,其免疫学效应与时间有关.
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HBsAg基因启动子Ⅰ DNA结合蛋白1下调IL-18基因启动子
目的:研究HBsAg基因启动子I DNA结合蛋白1(SBP1)与白介素-18(IL-18)基因表达的关系,研究SBP1在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:构建质粒pcDNA3.1(-)-SBP1,pCAT3-IL-18,转染HepG2细胞进行表达,应用酶联免疫黏附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性.结果:构建的表达载体pcDNA3.1(-)-SBP1经过序列分析和酶切鉴定正确.真核表达载体pcDNA3.1(-)-SBP1和pCAT3-IL-18P共转染的HepG2细胞的pCAT表达活性是pCAT3空载体的0.37倍,是转染pCAT3-IL-18P的0.17倍,抑制率达到86.32%.结论:SBP1可以下调IL-18启动子的活性,抑制IL-18基因的表达.
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选择性环氧合酶-2抑制剂CelebreX对胰腺癌PGE2和血管内皮因子表达的影响
目的:观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC-3细胞株移植瘤生长和肿瘤组织VEGF和PGE2表达的影响.方法:观测Celebrex对移植瘤生长的影响,并采用放射免疫测定(RIA)和酶联免疫黏附测定(ELISA)检测裸鼠移植瘤组织中PGE2和VEGF的表达.结果:治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平.对照组移植瘤近似体积为0.438 cm3,治疗组为0.212 cm3(抑瘤率为51.6%,P<0.05).PGE2表达,对照组为66±12 ng/g,治疗组为29±5 ng/g,两组间表达有非常显著性(P<0.01).VEGF表达,对照组1.11±0.11μg/g,治疗组0.66±0.11μ/g,VEGF抑制率为40.6%,两组间有显著性差异(P<0.05).结论:COX-2可能参与了肿瘤新生血管的生成,而PGE2可能在该过程中起着重要的介导作用,选择性COX-2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用.
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乙型肝炎病毒DNA YMDD变异的检测技术
拉米夫定治疗乙型肝炎耐药性的产生主要与HBV P基因突变有关,耐药株中多见P基因变异且相对集中于YMDD基序.YMDD变异的检测技术包括核苷酸序列测定法、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析、基因芯片技术、聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫黏附法等.本文就乙型肝炎病毒DNA YMDD变异的检测技术作一综述.
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血管内皮生长因子在胃癌血清中的表达意义
目的:检测胃癌患者术前血清血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)表达水平,探讨VEGF与胃癌临床病理特征的关系及其临床意义.方法:运用酶联免疫黏附法(ELISA)定量检测60例胃癌和15名健康人血清中VEGF的含量.结果:胃癌组血清VEGF表达水平(1047.71±339.47)ng@1-1明显高于健康人组(760.50±111.80)ng@l-1(P<0.01).胃癌组术前血清VEGF水平与肿瘤大小、侵袭程度、TNM分期等密切相关(P<0.05).结论:VEGF可能参与胃癌的发生、发展和转移过程的调控,血清VEGF含量的增强,预示胃癌的转移和预后不良.
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血清、组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系
目的:通过检测结直肠癌患者血清E-钙黏附素(E-Cd)浓度和组织E-Cd的mRNA水平,探讨E-Cd与结直肠癌浸润和转移的关联性.方法:应用酶联免疫黏附方法测定28例结直肠癌患者血清可溶性E-Cd浓度;应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的mRNA灰度均值.结果:结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P<0.001),Dukes C组或有淋巴结转移组明显高于Dukes A、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05),切除瘤体后上述各组的血清E-Cd浓度均明显下降(P<0.01-0.05).各组的组织E-Cd mRNA均值变化与血清E-Cd浓度的一致,且两指标间具有明显的相关性(P<0.05).结论:血清、组织E-Cd可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.
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良性与恶性胃溃疡患者红细胞免疫和T细胞亚群的变化及相关性分析
目的:探讨良性与恶性胃溃疡患者(BGU&MGU)RBC免疫功能和T细胞亚群的变化及其相关关系,为其免疫防治提供理论依据.方法:应用免疫黏附去和SAP法对55例BGU&MGU患者RBC免疫活性(RBC--C3bRR,RBC-ICR和RBC-TRR)和外周血T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+和CD4+/CD8+)进行检测.结果:25例MGU组RBC-C3bRR和RBC-TRR(16.0±3.8和23.1±5.8)明显下降,显著低于30例BGU组(19.9±4.3和34.6±6.5)和32例正常对照组(25.4±5.7,43.8±6.7,P<0.01).CD3+,CD4+和CD4+/CD8+在MGU组(0.59±0.05,0.33±0.04和1.08±0.15)显著低于BGU组(0.63±0.05,0.37±0.05和1.23±0.21)和正常对照组(0.68±0.06,0.42±0.05和1.48±0.23,P<0.05).RBC-ICR和CD8+在MGU组高(8.7±3.1和0.32±0.04),BGU组(6.9±2.6和0.31±0.05)次之,对照组(5.4±2.0和0.27±0.05)低(P<0.05).BGU,MGU组RBC-C3bRR和RBC-TRR与CD4+/CD8+呈明显正相关(P<0.01).结论:RBC免疫与T细胞亚群均参与了BGU与MGU的发生和发展.RBC免疫可能通过某种机制调控了包括T细胞亚群在内的某些免疫细胞的活性,从而共同发挥免疫防御作用.
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6上调新生多肽相关复合物α多肽基因的表达
目的:探讨HCV核心蛋白结合蛋白6对新生多肽相关复合物α多肽启动子的激活作用.方法:以基因表达谱芯片技术筛选HCBP6表达质粒转染HepG2细胞后的差异表达基因为基础,利用生物信息学技术确定NACA的启动子区域(NACA-p),聚合酶链反应(PCR)扩增NACA-p,克隆至真核表达载体pCAT3中,构建pCAT3-NACA-p表达载体;以该质粒转染COS-7、NIH3T3细胞系,用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;与pcDNA3.1(-)-HCBP6共转染NIH 3T3细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果:质粒pCAT3-NACA-p在NIH 3T3、COS-7细胞中能够激活CAT的表达;共转染实验中pCAT3-NACA-p+pcDNA3.1(-)-HCBP6组CAT的表达活性是pCAT3-NACA-p的4倍.结论:pCAT3-NACA-p具有启动子活性;HCV核心蛋白结合蛋白6对NACA-p有激活作用.本研究为探讨HCV核心蛋白结合蛋白6的功能提供新的实验及理论基础.
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丙型肝炎病毒核心蛋白上调细胞周期调节蛋白Wee1基因表达研究
目的:了解丙型肝炎病毒核心蛋白和细胞周期调节蛋白Wee1基因表达的关系,研究HCV核心蛋白在HCV致病的分子生物学机制中的作用.方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增Wee1基因启动子,命名为Weep.以T-A克隆法,将Weep基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pT-Weep,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和XhoI双酶切后构建Weel启动子报告载体pCAT3-Weep,分别以重组报告载体pCAT3-Weep和pcDNA3.1(-)-core瞬时转染HepG2细胞,以转染pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照,48 h后收获细胞.应用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解HCV核心蛋白对Wee1基因启动子的反式激活作用.结果:构建的表达载体pcDNA3.1(-)-core和报告载体pCAT3-Weep经过序列分析和酶切鉴定正确.pCAT3-Weep和pcDNA3.1(-)-core瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的3.4倍,pCAT3-Weep的2.3倍.结论:丙型肝炎病毒核心蛋白可反式激活Wee1基因启动子,进而上调细胞周期调节基因Wee1的表达.
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噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体
目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv).方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍.用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性.其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(P24)阳性克隆.提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTAB5E载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv.
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丙型肝炎病毒核心蛋白上调层粘蛋白B1链基因启动子表达活性的研究
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对层粘蛋白B1链(LAMB)启动子转录的激活作用.方法:以我室构建的HCV核心蛋白反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交(SSH)筛选结果为基础,利用生物信息学技术确定LAMB的启动子区域(LAMB-p),聚合酶链反应(PCR)扩增LAMB-p,克隆至真核表达载体pCAT3中,构建pCAT3-LAMB-p表达载体;以该质粒转染COS-7、NIH 3T3细胞系,用酶联免疫黏附方法(ELISA)法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;与pcDNA3.1(-)-core共转染NIH 3T3细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果:质粒pCAT3-LAMB-p在NIH 3T3、COS-7细胞中能够激活CAT的表达;共转染实验中pCAT3-LAMB-p+pcDNA3.1(-)-core组CAT的表达活性是pCAT3-LAMB-p的3.3倍.结论:构建的pCAT3-LAMB-p具有启动子活性;HCV核心蛋白对LAMB-p有激活作用.本研究为利用SSH技术研究HCV核心蛋白致肝细胞癌机制提供新的实验及理论基础.
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丙型肝炎病毒核心蛋白上调NIP3基因表达研究
目的:了解丙型肝炎病毒核心蛋白和NIP3基因的表达的关系,研究HCV核心蛋白在HCV致病的分子生物学机制中的作用.方法:聚合酶链反应(PCR)扩增NIP3基因启动子,以T-A克隆法,将NIPP基因片段连入载体pGEM-T.获得的质粒pT-NIPP,和报告质粒pCAT3-basic分别用SacI和Bg1Ⅱ双酶切后构建报告载体pCAT3-NIPP,分别以重组报告载体pCAT3-NIPP和pcDNA3.1(-)-core应用FuGENE 6转染试剂瞬时转染NIH3T3细胞,以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照,48 h后收获细胞.应用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解HCV核心蛋白对NIP3基因启动子的反式激活作用.结果:构建的表达载体pcDNA3.1(-)-core和报告载体pCAT3-NIPP经过序列分析和酶切鉴定正确.pCAT3-NIPP和pcDNA3.1(-)-core瞬时转染的NIH3T3细胞中的CAT表达活性为pCAT3-NIPP的1.9倍,是pCAT3 basic的3.6倍,明显升高.结论:丙型肝炎病毒核心蛋白可反式激活NIP3基因启动子,进而上调NIP3基因的表达.
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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定
目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-Id scFv),为研制HCV E2的抗-Id scFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCV E2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCV E2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCV E2特异性抗-Id scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-Id scFv与HCV E2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(E11 A450 nm 0.928,E14 A450 nm 1.152,E17 A450 nm 1.136,E28 A450 nm 1.163,E53 A450 nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11 A450nm 0.044,E14 A450 nm 0.062,E17 A450 nm 0.166,E28 A450nm 0.012,E53 A450 nm 0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(E28)阳性克隆提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCV E2的抗-Id scFv,本实验结果为开展用抗-Id scFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用.方法:以HCV非结构蛋白NS3反式调节基因的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRDl的启动子区域(TXNRDlp),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRDlp,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS3共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果:成功获得TXNRDl启动子的正确克隆.CAT3-TXNRDlp和pcDNA3.1(-)-NS3瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的9倍,pCAT3-TXNRDlp的2.0倍,进一步验证了利用基因表达谱技术研究HCV NS3蛋白反式激活作用的结果.结论:TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HCV的NS3蛋白具有对TXNRD1的反式激活作用.
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老年脑梗死患者红细胞免疫功能的检测
随着免疫学的深入发展,近年来国内外学者发现红细胞除具有呼吸功能外,尚具有免疫黏附等功能[1].我们于2006年10月至2007年5月对红细胞补体大片段(C3b)受体花环率(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)在老年人脑梗死发病免疫机制中的相关性进行了观察.
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腹腔镜手术对红细胞CR1免疫黏附活性影响的研究
自1987年世界首例腹腔镜胆囊切除术以来,以其损伤轻、术后恢复快等优点而得到迅速发展,但腹腔镜基础方面的研究尚少.我们检测腹腔镜手术前后机体的红细胞Ⅰ型补体受体(CR1)免疫黏附活性,并比较术中腹腔内血性渗液与血液红细胞免疫黏附活性的改变,探讨腹腔镜手术对红细胞CR1免疫黏附活性的影响.
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红细胞表面CD44s对红细胞免疫黏附胃癌细胞的影响
目的 研究红细胞表面跨膜糖蛋白标准型CD44(CD44s)对红细胞黏附胃癌细胞的影响.方法 利用流式细胞分析法测定正常人红细胞表面CD44s表达情况;利用免疫组化方法 检测胃癌细胞表面透明质酸(HA)表达情况;以胃癌细胞红细胞花环形成率来评价红细胞对胃癌细胞的黏附能力.结果 正常人红细胞表面CD44s平均荧光强度为308.694±8.643;胃癌细胞表面的透明质酸平均IOD值为4617±1775.363;经鼠抗人CD44s单克隆抗体处理过的正常人红细胞黏附胃癌细胞的能力显著下降,胃癌细胞红细胞花环形成率为(20.6±9.232)%,明显低于空白对照组(P<0.05).结论 红细胞表面CD44s在红细胞免疫黏附胃癌细胞的过程中发挥一定的作用.
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卡介苗对消化系统癌症患者红细胞免疫黏附功能影响的实验研究
[目的]探讨卡介苗对消化系统癌症患者红细胞免疫黏附功能的影响.[方法]采用红细胞肿瘤花环试验方法,对不同消化道肿瘤患者的血液标本进行测定.[结果]食管癌、胃癌、直肠癌患者实验组的红细胞肿瘤花环率分别为0.11±0.00、0.15±0.02、0.19±0.02明显低于对照组0.19±0.02、0.21±0.03、0.24±0.03,有统计学意义(P<0.05);而胰腺癌患者实验组红细胞肿瘤花环率为0.18±0.03,对照组为0.22±0.03,两者比较无显著差异(P>0.05):且食管癌患者实验组红细胞肿瘤花环率为0.11±0.00,明显低于直肠癌患者实验组0.19±0.02.有统计学意义(P<0.05).[结论]卡介苗作用于不同种类消化系统癌症患者后,可使得癌症患者的红细胞肿瘤花环率降低,对免疫功能有调控作用.