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B细胞中葡萄糖依赖的脂质从头合成：脂多糖诱导的分化需要ATP-柠檬酸裂解酶
细菌来源的脂多糖（LPS）能刺激天然的B细胞分化为浆细胞。B细胞的分化包括增殖的过程及随后胞内的细胞膜分泌网络的扩增，支持并终产生抗体。然而，天然的B细胞在LPS刺激下是如何通过重组代谢来支持增殖及内膜网络扩增所需的脂质的从头合成，这一问题至今还未得到解答。本文的研究人员发现，LPS刺激下的B细胞会从细胞外获取葡萄糖，再通过细胞内的代谢重组来支持脂质的从头合成。
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脂多糖诱导树突状细胞成熟过程中Toll样受体的表达变化
本研究以体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞(DC)为模型,对脂多糖(LPS)诱导DC成熟过程中10种不同Toll样受体(TLR)的动态表达变化进行了观察分析.
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免疫荧光法检测脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB的活化
人们一直关注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等细菌产物如何激活炎性细胞,并促进炎性细胞因子表达.目前已经明确,编码TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的基因,是由核转录因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)控制表达的.
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表皮生长因子受体对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的抑制作用及对炎症反应的影响
目的 探讨表皮生长因子受体在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的抑制作用及对炎症反应的影响.方法 选择2014年6月至2016年7月进行实验的SD大鼠40只,取10只大鼠作为空白对照组,另取30只大鼠采用脂多糖诱导建立大鼠急性损伤模型.建模成功后随机数字法分为阳性对照组(n=10)、生理盐水组(n=10)和表皮生长因子受体组(n=10).阳性对照组建模成功后不采取任何措施处理,生理盐水组在大鼠建模成功后注射0.5 ml/kg生理盐水,表皮生长因子受体组建模成功后注射0.5 mg/kg表皮生长因子受体抑制剂.采用酶联免疫吸附试验测定各组大鼠肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;取大鼠急性肺损伤组织进行病理HE染色,测定组织中过氧化物酶(MPO)含量、肺湿/干重比(W/D).结果 表皮生长因子受体组与空白对照组建模处理3 d后TNF-α及IL-6水平差异无统计学意义(P >0.05);表皮生长因子受体组TNF-α及IL-6水平均低于生理盐水组和阳性对照组(P <0.05);生理盐水组TNF-α及IL-6水平,均低于阳性对照组(P <0.05).空白对照组未参与建模,肺部未见损伤,HE染色下正常;阳性对照组建模成功后未采取措施处理,肺部损伤明显,炎症反应严重;生理盐水组肺组织中损伤明显,存在肺气肿、肺泡塌陷等典型组织变化;表皮生长因子受体组大鼠肺部组织病理变化明显改善;表皮生长因子受体组MPO及W/D水平,均低于生理盐水组、阳性对照组(P <0.05);生理盐水组MPO及W/D水平,均低于阳性对照组(P <0.05).结论 脂多糖能诱导大鼠急性肺损伤,将表皮生长因子受体抑制剂用于大鼠急性肺损伤中有助于降低炎症反应,值得推广应用.
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脂多糖诱导黏蛋白MUC5AC表达上调机制的研究进展
一、黏蛋白（Mucin，MUC）和脂多糖的生化特性及作用MUC广泛分布于机体各组织黏膜上皮表面，对黏膜起润滑、保护的作用。MUC的分布有组织、器官和细胞特异性。目前已经报道的有20余种[1-4]。MUC是由其多肽基因（Muc gene）编码而成的，根据MUC存在形式的不同可将其分为两类：分泌型和膜结合型。分泌型MUC包括MUC2、MUC5AC、MUC5B、MUC6、MUC7、MUC8、MUC9。其中MUC2、MUC5AC、MUC5B和MUC6位于染色体11p15.5[5]，其结构与人血管性血友病因子（vWF）有很高的一致性，这种结构特点被认为与MUC寡聚化形成凝胶有关。分泌型MUC另一个结构特点是C-半胱氨酸结（CK），此结构可能参与了MUC蛋白单体起始二聚化的过程。膜结合型MUC包括MUC1、MUC3A、MUC3B、MUC4、MUC12、MUC13、MUC16、MUC17和MUC20。这些MUC的共同结构是从氨基末端黏蛋白样结构（串联重复序列）-表皮生长因子（EGF）样区域-N-糖基化区域-第二个EGF样区域-疏水的跨末端及胞质内部的羧基末端。膜结合型MUC通过延伸到细胞表面顶部的外功能区形成保护性黏液凝胶，其胞质尾部含苏氨酸、酪氨酸和丝氨酸的潜在磷酸化位点，可能与增殖、分化和转移有关。
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参麦注射液对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤防护机制探讨
在急性肺损伤(ALI)发病过程中,促炎细胞因子和抑炎细胞因子的共同作用介导着炎症的发生和发展[1].本组研究应用静脉注射脂多糖(LPS)复制大鼠ALI模型,观察参麦注射液对LPS所致大鼠ALI的作用.
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传代树突状细胞诱导特性及其对小鼠气道变应性炎症的影响
树突状细胞被认为是T淋巴细胞分化的重要因素,我们观察了脂多糖体外诱导对树突状细胞免疫标志蛋白和相关细胞因子表达的影响以及脂多糖诱导树突状细胞对小鼠气道变应性炎症的影响,旨在探讨树突状细胞免疫调节的机制及其在哮喘中的作用,为哮喘的细胞免疫干预提供依据.
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脂多糖性急性肺损伤血管紧张素转换酶2表达变化及血管紧张素Ⅰ受体拮抗剂的干预作用
血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)于2000年被发现,是人体内近半个世纪发现的第一个ACE同源化合物,它是仅含有一个催化位点的羧肽酶,对血管紧张素Ⅱ(angiotermin Ⅱ,Ang Ⅱ)的催化作用与ACE相反.研究发现,酸吸入和脓毒症诱导大鼠急性肺损伤(acutelung injury,ALI)模型中,ACE2对肺组织有显著保护作用;而肾素-血管紧张素系统中其他成员如ACE和Ang Ⅱ却促进ALI的发生、发展[1].本实验通过观察脂多糖对ALI大鼠肺组织局部ACE2表达的影响,并给予AngⅡⅠ型受体(AT1R)拮抗剂干预,旨在研究脂多糖诱导大鼠ALI肺组织ACE2表达的变化规律及可能的调节机制.
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重组BPI对内毒素休克大鼠肝脏一氧化氮合酶和微循环灌注的影响
体外试验显示,杀菌/通透性增加蛋白(BPI)能与多种革兰氏阴性菌脂多糖分子结合,并抑制脂多糖诱导的细胞应答反应.我们新近的观察证实,重组BPI片段(rBPI21)能有效减轻内毒素休克时全身血流动力学紊乱及组织微循环障碍,但其确切的作用机理尚不清楚.本研究应用大鼠内毒素攻击模型,旨在探讨rBPI21对内毒素诱导肝组织一氧化氮合酶(NOS)和局部微循环灌注的影响及其意义.大鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素(15.0 mg/kg)复制内毒素休克模型,动物随机分为正常对照组(n=10)、内毒素休克组(简称休克组,n=20)和rBPI21治疗组(简称治疗组,n=20).治疗组动物于内毒素攻击后0.5、2小时静脉注射rBPI21(10.0mg/kg);休克组、治疗组动物分别于内毒素攻击后4、8小时活杀,留取肝组织标本检测NOS活性、三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP-CHI)活性及生物喋呤含量,同时还观察肝脏微循环血流灌注量的改变.结果显示：(1)内毒素休克大鼠肝组织结构型NOS(cNOS)活性仅呈现升高趋势,但与对照组相比无明显差异(P＞0.05),而诱生型NOS(iNOS)活性则大幅度上升,内毒素攻击后8小时为基础值的13.5倍(P＜0.01).给予rBPI21治疗可有效抑制肝组织iNOS活性(P＜0.01),但对cNOS活性无明显影响(P＞0.05).(2)休克组肝脏微循环灌注量迅速下降,4、8小时分别为对照46.4％、35.3％(P＜0.01);治疗组动物肝脏微循环障碍明显改善,内毒素攻击后4小时其灌注量显著高于休克组(P＜0.01),8小时则趋于正常对照值.(3)治疗组局部组织GTP-CHI活性降低(P＜0.01),生物喋呤含量亦显著下降(P＜0.05).该结果表明：内毒素休克早期给予rBPI21能选择性抑制肝组织iNOS活性及改善局部微循环,其作用机理与降低组织GTP-CHI活性及其介导生物喋呤诱生有关.
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TREM-1在脆弱类杆菌脂多糖诱导单核细胞炎症反应中的作用
脂多糖(LPS)与免疫细胞表面相应的受体结合后可引发一系列信号转导进而诱生大量炎性介质,导致全身炎症反应综合征(SIRS)或脓毒症.以往的研究多以大肠杆菌LPS为对象,对于临床厌氧菌感染中重要的致病菌脆弱类杆菌(bacteroides fragilis,B.fragilis)的LPS研究较少.髓系触发受体-1(TREM-1)是新近发现的表达于单核/巨噬细胞等髓系细胞表面的激活型受体,能在细菌或LPS等的刺激下触发髓系细胞产生大量炎性因子,从而在炎症反应的触发和放大过程中起重要作用[1-4].本文拟通过体外单核细胞炎症反应模型,观察TREM-1在转录及翻译水平的表达情况,以探讨其是否参与脆弱类杆菌LPS所致炎症反应.
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MiR-145-5p基因对LPS诱导的肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质分泌的研究
[目的]探讨上调microRNA-145-5p(miR-145-5p)基因表达对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质分泌的影响.[方法]大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1随机分为空白组、LPS组和LPS+miR-145-5p mimics组(miR-145-5p组),miR-145-5p mimics转染参照脂质体LipofectamineTM2000说明,刺激24 h后,MTT及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;Western blotting检测纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的蛋白表达.[结果]转染miR-145-5p mimics后的HBZY-1细胞miR-145-5p表达明显高于空白组(P＜0.05).与空白组比较,LPS组细胞活力及FN、TGF-β1和Bcl-2的蛋白表达显著升高,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达显著降低(P＜0.05).与LPS组比较,miR-145-5p组细胞活力及FN、TGF-β1和Bcl-2的蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达显著升高(P＜0.05).[结论]上调miR-145-5p基因表达可抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞活力,通过下调FN和TGF-β1表达抑制细胞外基质分泌,通过下调Bcl-2和上调Bax表达诱导细胞凋亡.
关键词： 肾小球系膜细胞 miR-145-5p基因 脂多糖诱导 凋亡 细胞外基质分泌 -
047 干扰素γ和一氧化氮在脂多糖诱导的肺水肿及死亡中的作用
细胞因子在内毒素引起的肺损伤中具有重要作用,而细胞因子干扰素γ(IFN-γ)在其中的作用尚未深入研究.已知IFN-γ可激活诱导型一氧化氮合酶(iNOS),增高一氧化氮(NO)的水平,而由iNOS产生的大量NO在脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤中起着关键作用.本研究旨在探讨IFN-γ在LPS引起的小鼠肺水肿、细胞因子和NO水平的升高及死亡中的作用,并观察了NO对肺水肿和细胞因子释放的影响
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异丙酚对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶及NF-κB表达的影响
一氧化氮合酶(NOS)在血管内皮细胞中主要有两种亚型:内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS),前者在生理状态下正常表达,后者则在炎性刺激等病理情况下被大量诱生.由iNOS所产生的过量NO可对血管内皮细胞造成损伤.NF-κB是一种与急性炎症密切相关的核转录因子,多种炎症介质如iNOS等基因的启动子和增强子均含有κB位点[1].前期研究证实异丙酚能减少脓毒症动物体内一氧化氮(NO)的产生,对内毒素(LPS)所致急性肺损伤具有保护作用[2].本研究拟观察异丙酚对人脐静脉内皮细胞eNOS、iNOS及NF-κB表达的影响,探讨异丙酚抗炎作用的机制.
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氯胺酮预先给药对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞超氧阴离子生成和细胞内钙离子浓度的影响
脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的组成成分,侵入机体后,在LPS结合蛋白介导下,与巨噬细胞膜上的CD14结合,通过NF-κB信号转导途径促进细胞因子释放和超氧阴离子(O2-·)生成,诱发炎性反应[1].
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维甲酸对脂多糖诱导急性肺损伤防治作用的实验研究
急性肺损伤（ALI）是指机体遭受严重感染、创伤、辐射、休克等以后，出现的以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致肺通透性增加、进而导致大量蛋白和炎症细胞因子渗出为病理特征的一种肺部炎症，是急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的早期阶段，以呼吸困难、难治性低氧血症和非心源性肺水肿为临床特征。目前，ALI的病死率约为35％~40％，是重症监护病房内患者死亡的主要原因之一［1］。研究表明，核转录因子-κB （NF-κB）、基质金属蛋白酶（MMP ）-2、9及在内毒素致急性肺损伤的发病中有重要作用［2］。维甲酸是维生素A在生物体内的主要活性形式，调节包括细胞生长、分化、发育和肿瘤发生等在内的多种重要生物学功能对各种炎症和免疫细胞的功能具有调节作用，同时对细胞损伤有修复作用［3］。研究表明，给予外源性 RA可改善肺泡结构、降低肺纤维化程度［4］。本实验通过观察 ALI 大鼠肺组织中NF-κB、MMP-2、9表达的变化，探讨ALI的发病机制及维甲酸对ALI的治疗作用，为临床防治ALI提供新的实验依据。
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IL-1β诱导新生牛脑微血管平滑肌细胞表达E-选择素
E-选择素是细胞粘附分子中选择素(Selection)家族的主要成员之一,属人类白细胞分化抗原CD62E,为110 kD的跨膜糖蛋白[1];大多数研究认为,E-选择素只表达在受细胞因子作用后的血管内皮细胞[2],但近来有文献报道,非内皮源性的细胞经细胞因子或脂多糖诱导后也可表达E-选择素[3,4].本研究将观察新生牛脑微血管内皮细胞(BCMSMC)经IL-1β诱导后是否表达E-选择素.
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脂多糖诱导牛肾细胞β-防御素-5 mRNA表达的可能机制
β-防御素是可被炎性因子和细菌产物诱导产生的天然抗菌肽,对细菌、真菌、支原体、衣原体、螺旋体及病毒等微生物均有很强的杀伤活性[1].脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,是诱发炎症的主要致病因子,细菌在生长繁殖过程中和死亡后均可释放LPS,激发机体非特异性免疫[2,3].研究发现,β-防御素-5(BNBD5)在患子宫内膜炎的奶牛子宫内膜组织中表达显著升高,可能是LPS诱导机体免疫应答,并促进了机体BNBD5的表达.尚无证据表明,BNBD5是否通过TLR4/NF-κB信号通路表达.因此,我们有必要对LPS诱导细胞BNBD5表达的信号通路进行研究.为探索BNBD5表达的分子调控机制提供理论基础.
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NHE-1与肝纤维化的关系及姜黄素的影响
姜黄素(Curcumin,CUR)是从中药姜黄中提取的一种酚类色素,其对四氯化碳、D-氨基半乳糖及卡介苗加脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用,对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有治疗作用,可显著抑制肝星形细胞(HSC)的增殖和分泌细胞外基质,并诱导其凋亡[1-3].本研究观察肝纤维化大鼠肝脏Na+/H-交换泵(NHE)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ERK-1、NF-κB表达关系及姜黄素的影响,探讨姜黄素对肝纤维化的作用.
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八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织NF-κB活性增高的抑制作用
目的和方法:研究证实,内毒素激活核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B, NF-κΒ),进而诱导前炎性因子大量生成,是内毒素休克和急性肺损伤的关键发病学环节.
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八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性
目的:内毒素血症时单核-巨噬细胞释放过量炎症介质是导致休克甚至多器官衰竭的主要病理学基础.肺组织中存在3种巨噬细胞:肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)、肺间质巨噬细胞(interstitial macrophage,IM)和肺血管内巨噬细胞.近来研究表明,内毒素血症时IM较AM更早受到LPS攻击,其吞噬功能、对补体的趋化作用及产生氧自由基的能力明显强于AM,在肺组织炎症反应中起重要作用.因此,有效控制肺IM的过度激活将对减轻肺组织炎症反应起到积极的保护作用.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin oct apeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxic shock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,抑制肺组织核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)活性.原位PCR及免疫组织化学实验显示肺巨噬细胞有CCK受体表达,因此推测C CK-8可能通过与其受体相互作用来干预LPS激活肺巨噬细胞的过程.为深入探讨CCK-8抗ES 作用的分子机制,本研究以体外培养的大鼠肺IM为对象,观察CCK-8对脂多糖(lipopolysac charide,LPS)作用下NF-κB活性的影响.方法:分离大鼠肺IM,加入LPS ( 10 mg/L)、CCK(10-8、10-7、10-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺(2 mg/L)及溶剂单独或共同孵育2 h.用电泳迁移率变动分析技术(electrophoretic motility shift assay,EMSA),检测肺IM NF-κB 活性,用免疫组织化学技术观察p65、p50在肺IM中的表达及分布.结果:(1) CCK-8(10-8、10-7、10-6 mol/L)可明显抑制LPS诱导的肺IM NF- κB活性,并呈明显的剂量依赖性,用丙谷胺预孵育肺IM可拮抗CCK-8的作用;(2)LPS作用2 h,肺IMp65、p50核内表达明显增加,而CCK-8预孵育肺IM则可显著减少p65、p50核移位.结论:CCK-8可抑制LPS诱导的肺I M NF-κB活性,该作用是由CCK受体介导的,在减轻ES时肺组织炎症反应中具有重要意义.
