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骨髓巨噬细胞系QXMSC1诱导成年小鼠同种异基因移植耐受
抗原呈递细胞(antigen presenting cells, APC)不但在免疫应答中起关键作用,同时也是对自身反应淋巴细胞进行阴性选择的重要细胞.专职APC(professional APC)主要是树突状细胞(dendritic cells,DC)和巨噬细胞(macrophage).
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加强对移植物抗白血病作用的研究
造血干细胞移植(HSCT)是恶性血液病的有效治疗乃至唯一根治的方法,其中移植物抗白血病(graft versus-leukemia, GVL)作用,近年来有不少研究进展.早在1956年,Barnes等曾报道移植骨髓的小鼠能消灭照射后残存的宿主白血病细胞.对急、慢性白血病患者进行异基因骨髓移植(allo-BMT)的初设想之一就是移植物可能具有一种抗白血病作用,即GVL作用.近年来对人类BMT受者的分析结果支持这一设想.1 GVL与移植物抗宿主病(GVHD)的关系 GVL与GVHD常相伴而生,既相互依存又相互独立.Weiden等对262例同基因和同种异基因BMT患者分析后发现,未发生GVHD患者比发生Ⅱ~Ⅳ度急、慢性GVHD患者的复发危险度高2.5倍,从而获得GVL作用与GVHD相关联的证据.这种作用在急性淋巴细胞白血病比急性非淋巴细胞白血病、在白血病复发期而非缓解期进行移植的患者尤为显著.同基因BMT受者白血病复发率高,其重要原因之一可能是不发生或仅有轻度GVHD.在allo-BMT中,有Ⅱ~Ⅳ度GVHD的患者BMT后2年持续缓解率和活存率均高于0~Ⅰ度GVHD患者,但是GVHD的强度与GVL的作用大小并不呈正相关.我们于1986年用HLA相合异基因骨髓移植治疗1例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期患者,供体骨髓细胞先植入后排斥,经综合治疗,恢复了自身造血功能,移植后24个月临床复发,骨髓仍处慢性期.术后46个月在他院以马利兰、羟基脲和环磷酰胺联合化疗预处理后,患者接受了同一供者的第2次allo-BMT,未发生GVHD,活存至今,是我院allo-BMT后生活质量良好、活存长的1例,可能与GVL有关,也提示GVL不一定伴有GVHD.
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同种异体骨移植的免疫排斥
一、同种异体组织免疫排斥的原理同种异体组织(简称同种组织)免疫排斥反应是由供体组织MHC抗原引起的宿主对同种异基因供体组织的免疫攻击,主要通过T细胞介导的细胞免疫来完成.人类的MHC抗原称为HLA抗原,与移植排斥有关的是主要分布在白细胞表面的HLA-I类抗原和主要分布在B细胞、巨噬细胞和树突状细胞表面的HLA-Ⅱ类抗原.HLA的高度多态性使无关个体间的HLA型别不会完全相同,因而对同种组织有不同程度的排斥反应.
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骨髓移植的进展及护理
骨髓移植(BMT)是指对病人实施免疫抑制预处理后,使机体失去排斥异体组织的能力,通过输注骨髓来重建造血功能的综合性治疗措施.由于骨髓中含有丰富造血细胞,因此,BMT是临床上常用的造血干细胞移植方法[1].造血干细胞移植包括BMT、胎肝造血细胞髓移植、外周血干细胞移植及脐带血造血细胞移植[2].BMT一词,一般是指同基因BMT和同种异基因BMT[3].
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输入供体凋亡细胞对受体外周免疫耐受的影响
背景:预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受,但其具体途径尚不清楚.目的:观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化.设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成.材料:供体C57BL雄性小鼠14只,8~10周龄,受体Balb/c雄性小鼠50只,6~8周龄.方法:分离供体小鼠脾脏细胞,放置于紫外线灯距离20 cm处的摇床上照射1 h,紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡.将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组,分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠.主要观察指标:输注后0,1,3,6,12 h经心脏采血,Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1 β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化.结果:只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ 5种细胞因子,其他细胞因子末测出.经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%.与0 h相比,外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6 h和3,6 h明显升高,其他细胞因子无明显变化.与0h相比,输注凋亡细胞1,3,6,12 h后,外周血中各细胞因子无明显变化.活细胞组输注后1 h白细胞介素6和输注后3,6 h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组,其他细胞因子差异不显著.结论:同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化,提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响,其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用.
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青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用
背景:随着强效、特异免疫抑制剂的问世,小肠移植的成活率有了一定程度的提高。但这些免疫抑制剂的不良反应及昂贵的治疗费用,让很多患者难以承受。所以,选择有免疫抑制作用的中药在临床上应用是很有意义的。青蒿琥酯有免疫抑制作用,可以减轻小肠移植急性排斥反应,提高小肠移植的成功率。
目的:观察青蒿琥酯在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用及其机制。
方法:选用封闭群SD大鼠和Wistar大鼠建立同种异基因小肠移植模型,随机分为3组:①同基因移植组(SD→SD)。②异基因移植组(Wistar→SD)。③异基因移植+青蒿琥酯治疗组(Wistar→SD+青蒿琥酯60 mg/(kg?d),腹腔注射)。
结果与结论:同基因移植组大鼠存活均超过10 d,并于第10天全部处死。异基因移植组大鼠平均存活(6.73±0.58) d,治疗组大鼠平均存活(8.50±0.74) d,两组间比较差异有显著性意义(P<0.01)。病理组织学检查显示同基因移植组标本无明显排斥征象,异基因移植组标本在术后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应,治疗组部分标本有轻度排斥表现,但出现较晚、程度较轻。ELISA 法检测显示异基因移植组血清白细胞介素2、γ-干扰素表达水平在术后均显著高于其他2组(P<0.01),治疗组血清白细胞介素2表达水平与同基因移植组比较亦有升高,但差异无显著性意义(P>0.05),治疗组血清γ-干扰素表达水平高于同基因移植组(P<0.05)。结果可见青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应有抑制作用,其作用机制可能与抑制白细胞介素2、γ-干扰素等细胞因子的分泌表达有关。 -
IL-15对异基因抗原刺激下人CD8+T细胞增殖分化影响的初步研究
目的:探讨IL-15对异基因抗原刺激下人CD8+T细胞增殖分化的影响.方法:在IL-15存在的条件下,将从健康志愿者外周血中新鲜分离的CD8+T细胞与HLA-A,-B,-DR完全错配的异体抗原提呈细胞(APCs)进行混合淋巴细胞培养(MLRs).经9d培养后,对诱导后产生的CD28-CD8+和CD28+CD8+T细胞亚群进行细胞毒功能测定和表型检测,并对CD8+T细胞增殖分化过程中CD28分子的动态变化规律进行监测.结果:在IL-15诱导及异基因抗原刺激下,CD8+T细胞增殖分化后产生的CD28+CD8+T细胞具有细胞毒作用,与外周血新鲜分离的类似细胞相比,其高表达了FasL、颗粒霉素-B和穿孔素;而CD28-CD8+抑制性T细胞不具有细胞毒作用,与外周血新鲜分离的类似细胞相比,低表达了FasL、颗粒霉素-B和穿孔素.在异基因抗原提呈细胞刺激下,IL-15可诱导CD8+T细胞增殖分化过程中CD28-/CD28+细胞数比例升高(从0.24到1.01),并可诱导CD28+T细胞上的CD28分子丢失.结论:IL-15通过调节CD28分子的表达影响异基因抗原对CD8+T细胞的增殖分化.
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红藤对小鼠免疫功能及同种异基因皮肤移植排斥反应的抑制作用
红藤是大血藤科落叶木质藤本植物大血藤(Sargentodoxa cuneata)的藤茎,别名活血藤、血通,分布于我国华东和华南地区.红藤是重要的药用植物,其主要成分有多糖和有机酸等.随着对红藤药效作用的深入研究,发现其有明显的抑菌抗炎效应…,但对其免疫调节作用的研究至今未见报道也未见开发.本试验研究红藤对小鼠免疫功能及同种异基因移植排斥反应的影响,确定其免疫效应,为其作为中药免疫调节剂的开发和利用提供实验依据.
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荷肝癌小鼠皮肤移植后肿瘤生长和相关免疫指标的比较研究
原发性肝癌(HCC)在全球的每年新发病例数约130万余例[1],我国约占55%.现有的治疗手段(包括肝移植)对大部分发现时即为晚期的HCC无效.远期疗效也不理想,术后复发、转移和预防都存在许多困难[2].皮肤移植是临床常见的一种治疗方法,主要用于烧伤、整形等治疗.各种皮肤移植,尤其异体皮肤移植(小鼠为同种异基因皮肤移植)产生的排斥反应可动员体内大量的T细胞参与其中[3],此过程是否会对原发性肝癌产生治疗性作用,目前尚不清楚.本实验利用H22小鼠HCC皮下接种昆明(Km)小鼠作为动物模型,观察同种异基因皮肤移植对肿瘤生长的影响以及免疫和病理学指标的变化.
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同种异基因肾移植排斥反应相关信号通路的研究
各种慢性肾脏疾病终末期(慢性肾衰)的患者可以进行持续血液透析治疗来延长寿命,而肾脏移植治疗对患者的存活率及生活质量较前者明显要高.近年来,由于器官移植技术在临床的应用与研究逐渐发展成熟,肾移植已成为治疗慢性肾衰的首要方案.而移植术后所发生的急性与慢性排斥反应是导致手术失败的主要原因.在同种异基因移植排斥反应中很多研究表明:Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38-mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)及Notch等信号通路对移植排斥反应有着非常重要的作用.
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静脉剂型白消安在异基因造血干细胞移植中的应用与护理
2006年1月-2007年12月,我们采用静脉剂型白消安联合环磷酰胺对10例同种异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)患者进行预处理,临床效果满意.现将护理体会报告如下.
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诱导H-2半相合小鼠骨髓受体获得免疫赦免的体内研究
目的通过Fas配体(FasL)-Fas途径清除异体骨髓移植(allo-BMT)物中针对受体主要组织相容复合物(MHC) 的淋巴细胞,从而抑制受体发生移植物抗宿主病(GVHD).方法实验组(5组)用磁性细胞分离系统分离BALB/C小鼠(H-2d,雌性)早期造血细胞(HC),经逆转录病毒法转移外源mFasL cDNA基因并扩增1w后与BAC小鼠(H-2d×b,雄性)骨髓单个核细胞(BMMC)按0.625∶1混合培养1w,经尾静脉将5×106个混合细胞(0.5ml)注入经全身60Co γ照射的BALB/C小鼠.同时设立:1组(空白对照组,未移植细胞);2组(同基因BMT组);3组(转染外源FasL的同基因BALB/C HC+正常BALB/C小鼠 BMMC混合培养后移植组);4组(H-2单倍型不同小鼠的allo-BMT组).观察移植鼠的造血重建及细胞来源、GVHD、生存率和造血重建后的免疫学特征.结果 BMT后+10d、+20d,实验组、3和4组的外周血白细胞、血小板计数均低于2组(P<0.01),但+30d后以上各组则均恢复正常.实验组中存活2个月的8只BALB/C小鼠,其BMMC中供体来源Y染色体出现率为(81.14±5.3)%,其中1例脾细胞基因组DNA经PCR检出Neor和mFasL cDNA整合;各组移植2个月后的生存率为:实验组80%、1组0%、2、3组均为100%、4组20%,经对数秩和检验Kaplan-Meier曲线,实验组总体生存期明显长于4组(P<0.01).实验组和4组移植后死亡小鼠及4组存活2个月的小鼠肝脏、爪垫皮肤和小肠(回肠)组织切片大部分显示GVHD Ⅱ~Ⅲ度,而存活2个月的实验组小鼠组织切片则多显示GVHD Ⅰ度或无GVHD表现.BMT造血重建后,实验组的BALB/C小鼠脾细胞,与近交系供体BAC小鼠及BALB/C小鼠脾细胞混合培养均不显示增殖反应,但对无关Wistar大鼠脾细胞则仍显示明显的增殖反应.结论经逆转录病毒法基因转移并表达mFasL的受体HC,体外与异基因供体BMMC混合培养后移植,能使受体获得供体来源的造血重建,并明显降低GVHD发生,且无明显Fas+靶器官损害,延长了受体生存率.
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四种不同的同种异基因移植法治疗第一慢性期慢性粒细胞血病患者嵌合现象和微小白血病残留的比较研究
近,陆续出现了代替传统骨髓移植(BMT)和外周血干细胞移植(PBSCT)的新的治疗血液系统恶性肿瘤的异基因移植方法,其中之一是Slavin等报道的减量预处理后PBSCT,此种移植的特征为预处理过程对相关器官的毒性降低,从而使患者对移植的耐受性增强,同时亦为老年及有严重并发症的患者提供了异基因移植的机会. 另一种新的移植方法是高度纯化的CD34+外周血干细胞移植(CD34+PBSCT),此种移植的移植物中不仅富集造血干细胞,而且伴有CD3+T细胞的去除,后者是急性GVHD的效应细胞 .目前普遍认为,将急性GVHD的发病率从重度降为中度,即会显著降低移植相关的发病率和病死率.但T细胞去除PBSCT又伴随白血病复发风险的增加.
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小鼠同种异基因皮肤移植模型的建立
目的:为移植免疫及药物免疫机理研究建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型.方法:受体BALB/c分为A~E共5组,即对照组,5.0、7.5、10、20 mg/kg环孢菌素A(CsA)剂量组,通过背-背法进行C57BL/6的全厚皮皮片移植,以探求通过较小剂量CsA及优化实验条件和护理方式建立供免疫机理研究的动物试验平台.结果: 5.0、7.5、10 mg/kg组相对于对照组皮片排斥时间无明显差别,而20 mg/kg组植皮能较长时间存活. 结论:20 mg/kg的CsA剂量可以经济,快速地建立小鼠同种异基因移植动物模型.
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获得性再生障碍性贫血的发病机制及治疗
近十年来,关于获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制及治疗的研究有了很大进展,普遍公认的治疗方法有.免疫抑制剂联合治疗(IST)和同种异基因造血干细胞移植(Allo-SCT),使本病的预后有了明显的改善.儿童极严重再障的5年生存率已从20世纪80年代的37%上升到9O年代的83%,年龄<20岁重型再障患者10年生存率达73%,21~30岁者达75%,31~40岁者达66%,>40岁者达47%.以下将分述近年来在这方面的进展及临床应用.
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同种异基因造血干细胞移植治疗恶性肿瘤的研究进展
通常治疗恶性肿瘤手段有:外科手术切除、化疗、放疗、热疗、生物治疗等,然而我们还不能够单依靠哪一种手段完全治愈肿瘤,人们仍然在探索研究.人们探索肿瘤发病起因时在想既然肿瘤是由于某个或某些基因突变导致的异常增生紊乱的疾病,使机体失去了对其的调控,我们一味的去采取堵的方法――杀伤基因突变了的肿瘤细胞不是很理想,我们为什么不能采用疏堵结合的方法――用干细胞移植来达到清除肿瘤细胞的同时恢复机体正常免疫调节呢?近年来,干细胞成为生物医学领域研究的热点,数次被Science杂志列入世界十大科技进展.造血干细胞作为研究早、为深入的成体干细胞,其临床应用已有50余年的历史,美国的Thomas教授因为在造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)理论和技术方面的开拓性贡献,于1990年获得诺贝尔医学奖.如今造血干细胞移植已成为当今治愈多种良、恶性血液病、某些实体肿瘤、重症自身免疫性疾病与遗传性疾病的重要手段[1].
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供者淋巴细胞输注治疗白血病的研究进展
对白血病的治疗,目前较好的选择仍是采用联合化疗取得完全缓解后,以HLA匹配的骨髓进行异基因骨髓移植(Allo-BMT),这一方案确能延长白血病患者的生存期.然而不少患者终还是会因微量残留病灶(MRD)导致的复发而死亡.如何有效治疗Allo-BMT后复发的白血病成为临床所关注的重要问题.自从Kolb等[1]报告首例Allo-BMT后慢性髓系白血病复发的患者,经采用供者淋巴细胞输注(Donor Lymphocyte Infusion, DLI)诱导可再次完全缓解,开创了同种异基因白细胞输注治疗白血病的先河.随后,DLI已被广泛应用于治疗造血系统肿瘤Allo-BMT后的复发和微小残留病变,并将应用范围逐渐扩展到Allo-BMT后的非复发并发症和未经骨髓移植预处理患者的过继免疫治疗[2].至今,全世界已有数百名异基因骨髓移植后复发的病人接受了这种异基因细胞治疗,包括急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤和重度β地中海贫血、范可尼贫血等血液系统非恶性疾病.
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去白细胞血液成分的临床应用
患者在输注浓缩红细胞或浓缩血小板的过程中,接受大量同种异基因白细胞是无任何意义的,且血液成分中白细胞数量的多少与输血后副作用紧密相关.因此,近年来输血工作者一直致力于如何从血液成分中去除白细胞的研究工作,本文将对去白细胞血液成分的临床应用作一介绍.白细胞去除方法到目前为止,有许多方法如离心,冷冻/融化等均可以从血液成分中去除白细胞,但过滤法是目前在临床上常用的去除白细胞的方法,此外利用细胞分离机单采血小板因不需进一步处理,已在国内广泛使用.
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异种移植中的排斥反应及其对策研究进展
随着器官移植技术在临床的广泛应用,同种异基因器官供体远不能满足受体的需要,异种移植有可能解决这一矛盾.非灵长类动物,特别是猪,因其易于饲养,且器官大小及免疫学、生理学特性与人类有一定的相似性,作为适的异种移植器官供体已日益引起人们的关注[1,2].但由于人类和猪两种源间存在巨大的抗原差异,针对异种移植物的免疫应答比对同种移植物更加强烈.本文现对近年来有关异种移植排斥机制及其防治策略作一简要回顾.