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小鼠骨髓及肝血中嗜多染红细胞微核率的比较
哺乳动物骨髓微核试验已被国内外毒理学界广泛应用于致突变剂的检测.但由于骨髓对某些前致突变/致癌物活化能力有限,而且在肝脏中形成的短寿的终致突变/致癌物不能较久地滞留于血循环中,难以在骨髓内达到显示诱变效应的浓度.而肝脏是很多外来化合物代谢、转化、贮存的场所,极易受到各种化学物的作用,有一些还是肝脏的特殊致癌剂及诱变剂.因此,如果能直接用体内肝血微核试验检测化学物对染色体的损伤是很有意义的.我们对10种不同物质对小鼠骨髓及肝血嗜多染红细胞(PCE)微核诱发率作了平行观察,以便进一步扩展现有的微核检测方法.
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1-19 重质芳烃的致突变性
目的与方法用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、人外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)试验以及小鼠精子畸形试验对重质芳烃进行了致突变性研究.结果重质芳烃无移码突变和碱基置换效应;微核试验显示在316～1 580 mg/kg剂量范围内,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增加(6.25‰～10.00‰,与阴性对照组的2.38‰比较,P＜0.01);SCE试验结果显示在活化系统(S9混合液)存在的条件下,人外周血淋巴细胞SCE频率较对照组显著增高(在0.5 mg/ml及5 mg/ml剂量组分别为3.48及4.84,对照组为1.08);小鼠精子畸形试验显示在1 580 mg/kg剂量水平,小鼠精子畸形率显著增高(8.56‰),与阴性对照组(3.33‰)比,差异有显著性(P＜0.01).结论重质芳烃具有间接致突变性,对其职业性接触及应用的安全性应给予高度重视.
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鲜人参的价值
鲜人参含有很高的药用价值,饮食文化价值,护肤美容价值和交际价值.其一,"中药鲜用"价值,鲜人参有一药多效的作用.用鲜人参配制的中草药能大补元气、生津、滋阴、清肺、润燥、滋补肾虚头晕、治疗肝虚贫血、中气不足、脾胃虚弱、营养不良、腰背酸痛、慢性腹泻、神经官能症、月经不调等疾病,长期食用能起到补气壮阳、补气健脾、调节血液循环、增强智力、防衰老延年益寿的作用.根据现代药理为小鼠骨髓SCE试验表明,鲜人参同干人参相比药效是无可比拟的,一支鲜人参相当三支红参的作用.
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Kinectin与树突状细胞TLR4-TRIF信号途径的相关性
驱动结合蛋白Kinectin是真核细胞内一种与囊泡转运相关的膜受体蛋白,为驱动蛋白(Kinesin)受体.当树突状细胞(DC)接受细菌脂多糖(LPS)的刺激后,其Toll样受体(TLR)4信号途径被活化,大量的抗原肽-MHC Ⅱ复合物被转运到细胞表面以启动免疫应答.研究表明,TLR4-TRIF信号途径对MHCⅡ从胞内转运到细胞表面至关重要.由于Kineetin定位于合成MHCⅡ的内质网且参与调节胞吐、胞质运输等过程,我们通过荧光定量PCR检测了小鼠骨髓来源DC中Kineetin的mRNA表达,以探讨其与TLR4-TRIF信号途径的关系.
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人乳头瘤病毒16型E7基因修饰小鼠骨髓树突状细胞诱导的细胞免疫应答
利用人乳头瘤病毒16型E7(HPV16-E7)基因修饰小鼠骨髓树突状细胞(DC),探讨其修饰的DC是否能使机体产生特异性的免疫反应,为以DC为基础的主动性免疫基因治疗提供实验依据.
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HSP70BCG修饰的DC抗肿瘤作用的机制研究
近年来发现Toll样受体(TLR)是结合病原微生物的受体,参与固有免疫及适应性免疫,在DC上有所表达.结核杆菌中有多种抗原物质可激活细胞免疫功能,并对多种肿瘤细胞株有细胞毒作用.在上述研究的基础上,本文应用卡介苗来源的热休克蛋白70(HSP70BCG)修饰小鼠骨髓DC及经抗-TLR4抗体封闭TLR4后的小鼠骨髓DC,观察其抑瘤效果及TLR4的作用.
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小鼠骨髓树突状细胞改良培养及体外生物学特性的比较
目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用混合淋巴细胞增生反应(MLR)、细胞免疫组织化学染色及光镜、扫描电镜观察二种DC生物特性及免疫活性的差异.结果:培养6-8 d,二种方法培养的骨髓DC(BM-DC)均有大量细胞从集落中释放,并呈成熟状态,重组mGM-CSF,mIL-4刺激培养的DC得率稍高(6×106)于腹膜培养组(3×106),但无显著性差异;培养7 d BM-DC的B7-2表达较高,呈强阳性,混合淋巴细胞反应(MLR)中均表现出有强烈刺激同种T细胞增生的能力;尤以重组mGM-CSF,mIL-4组明显高于腹膜培养组,未加任何处理的空白对照组中DC前体具有非成熟DC的形态及功能特征,且无刺激同种T细胞增生的能力.结论:实验结果提示用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长可获得一定数量的树突状细胞并具有相应的生物学特性及功能,基本能满足实验研究的需要,为基层单位开展树突状细胞的研究提供了可能性.
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白细胞介素10基因修饰的树突状细胞对小鼠支气管哮喘模型气道炎症的影响
树突状细胞(dendritic cell,DC)作为免疫系统中专业的抗原递呈细胞,有启动和抑制机体免疫反应的潜能[1].通过基因工程的方法生产出能够编码免疫调节因子的免疫调节性DC,对于基因水平治疗移植排斥、自身免疫反应以及过敏性疾病具有广阔前景[2].本研究中采用基因工程的方法合成小鼠白细胞介素(IL)10基因,并转染小鼠骨髓来源的DC,观察其对支气管哮喘(简称哮喘)模型气道炎症的影响,探讨哮喘发病的早期(抗原递呈期)给予干预,控制哮喘发病的可行性及可能存在的机制.
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川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓白细胞功能相关抗原-1表达的影响
骨髓属于辐射敏感器官,造血功能障碍是放射损伤基本的病理变化.造血细胞的增殖、分化和释放是通过造血细胞与基质细胞上的黏附蛋白配体结合而实现的.以往研究证明川芎嗪可以改善骨髓微环境,提高基质细胞黏附功能[1].本实验采用流式细胞术检测骨髓造血细胞表面黏附分子白细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达水平的变化及骨髓造血恢复的分子生物学机制.
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极小胚胎样干细胞修复心肌的研究进展
美国路易斯维尔大学Kucia等[1]于2006年首次从小鼠骨髓中分离出一种稀少(占骨髓单个核细胞0.01％)的非造血干细胞,表型为Sca-1+ lin CD45 -,表达原始多能干细胞(pluripotent stem cells,PSC)标志,直径仅为2～4 μm,具有胚胎干细胞的典型生物学特征,故命名为极小胚胎样干细胞(very small embryonic like stem cells,VSEL).VSEL在脑卒中、心肌梗死等机体应激状态下可动员到外周血,但数量极少,且动员后迅速降低,不足以修复损伤组织[2-6].VSEL在体外培养中能够分化为内、中、外胚层的细胞[1],潜在分化能力强,动物实验初步表明心肌梗死后VSEL移植可改善左心室结构和功能[7],因此VSEL已经成为目前PSC移植研究的热点.本文就VSEL的生物学特征、体外扩增及分化、心肌损伤后的动员机制、细胞移植及存在的问题做一综述.
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粒细胞集落刺激因子促进血管新生及损伤修复的研究进展
粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)首先发现于1980年,Mtcalf等在研究中发现内毒素处理过的小鼠血清或者条件培养其中的一种成分具有诱导小鼠骨髓单核细胞白血病细胞集落分化的功能[1].他们进一步纯化得到这种物质,将其命名为粒细胞一巨噬细胞分化
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7%CO2对培养液pH值、小鼠骨髓间充质干细胞增殖和OCT4蛋白表达的作用研究
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是组织工程瓣膜理想的种子细胞来源之一.种子细胞的培养通常采取5%CO2(气体浓度为体积分数,下同)、21%O2、100%湿度、37℃及pH值7.2～7.4的环境[1].
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SSH方法分离大剂量照射后小鼠骨髓差异表达EST序列
目的为探讨骨髓辐射损伤的分子机理,研究了整体照射条件下,辐射前后骨髓基因表达的变化.方法小鼠7 Gyγ射线照射后4 h提取骨髓总RNA为实验方(tester),对照组动物骨髓总RNA为驱动方(driver);实验方、驱动方总RNA由SMART cDNA合成方法合成双链cDNA,进而由抑制消减杂交(SSH)方法获得消减杂交产物,消减杂交产物克隆到T载体建立消减文库;对部分克隆进行杂交筛选及序列比对.结果消减杂交文库挑取800个克隆进行PCR扩增,阳性率约为86%;部分克隆经两轮杂交筛选获得14个差异片段;7个差异片段与鼠EST库已有序列高度相似,其余7个差异片段可能是新的EST序列.结论大剂量照射后小鼠骨髓cDNA消减文库的建立以及部分差异表达EST的验证为进一步研究辐射相关差异表达基因奠定基础.
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Vam3对辐射所致小鼠骨髓单个核细胞损伤的保护作用
电离辐射引起造血系统损伤是电离辐射损伤的主要表现之一。造血干细胞（ hematopoietic stem cell， HSC）是造血系统中一类具有自我更新与定向分化能力的细胞，电离辐射可以引起HSC损伤，导致其数目减少，体内体外自我更新及重建能力降低，进而引起骨髓的持久性损伤［1-3］。研究发现，电离辐射引起的骨髓持久性损伤主要是由于受照射后HSC内持续升高的活性氧（ reactive oxygen species，ROS）激活下游p38MAPK信号通路终引起HSC衰老所致［4-6］。 Vam3是从山葡萄根中获得的天然二苯乙烯低聚体类化合物，在植物体内含量较低，现可以白藜芦醇为原料化学合成。研究提示， Vam3可以通过降低细胞内ROS水平进而抑制烟雾凝集物诱导的人支气管上皮细胞自噬［7］。本研究根据Vam3能够降低细胞内ROS水平这一特点，观察Vam3对辐射后的小鼠骨髓单个核细胞损伤保护作用，为探索新型辐射防护剂提供实验依据。
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当归补血汤对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响
目的 观察当归补血汤方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响.方法 将44只NH小鼠随机分为空白组(n=13)、对照组(n=15)、中药组(n=16).空白组予腹腔注射生理盐水,剂量为150mg/kg;后两组均腹腔注射环磷酰胺150mg/kg复制小鼠骨髓抑制模型,1d后全部经目内眦眼底取血,检测血常规.中药组予当归补血汤10mL/kg 灌胃,2次/d,连续10d.结果 中药组外周血白细胞及血小板较对照组显著升高.结论 当归补血汤明显升高放化疗后骨髓抑制所致的外周血白细胞及血小板的减少.
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合成冰片和天然冰片的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
冰片为临床常用的内服或外用中药,来源有天然与合成之分,含右旋龙脑(d-borneo1)的天然冰片,传统认为是冰片中的正品.合成冰片是经化学方法合成而得,除含有龙脑外,还含有大量异龙脑(龙脑的差向异构体),目前大多中成药均使用合成冰片.近年,在湖南等地发现从樟属植物中可提取纯度95%以上的右旋龙脑,增添了一种新的天然冰片药物资源[1],临床和制药选择时,需对其安全性进行较系统的研究.本实验对该来源冰片和现用合成冰片的毒性进行了较系统的对比研究,对两种冰片进行了小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验.
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猪蹄甲与穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍作用的实验研究
穿山甲为鲮鲤科动物穿山甲Mains pentadactyla Linnaeus的鳞甲,由于其具有较好的临床疗效而被广泛应用于内、外、妇、儿各科.但受生态环境影响和人为因素的破坏,穿山甲野生资源日益匮乏,药材供需矛盾比较突出,限制其临床应用.
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川芎嗪对骨髓移植小鼠骨髓中硫酸肝素表达水平的影响
我们通过观测小鼠同基因骨髓移植(BMT)后骨髓中硫酸肝素(HS)表达水平的变化，探讨HS在骨髓重建造血过程中的作用。我们曾观察到川芎嗪有促进小鼠骨髓造血重建的作用［1］，故以川芎嗪介入骨髓造血重建过程，探讨川芎嗪在此过程中对骨髓HS表达水平的影响，为寻找促进骨髓移植后骨髓重建造血的治疗方法提供科学依据。
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川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建作用的研究
造血的发生需要特定的骨髓微环境,骨髓移植(BMT)后造血功能的恢复有赖于血窦结构和功能的完整.我们通过对骨髓移植小鼠骨髓血窦、中央静脉口径及多能造血干细胞、造血祖细胞变化的观察,来探讨川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建作用.
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表达Y568F/Y570F双位点突变型人c-kit受体对小鼠FDCP-1细胞增殖特性的影响
我们选择来源于正常小鼠骨髓的一种典型的早期造血祖细胞FDCP-1作为细胞模型,通过对稳定表达野生型和Y568F/Y570F双位点突变型人c-kit受体的重组细胞株hc-kit/FDCP-1和hc-kitDM/FDCP-1生物学特性进行比较,研究hc-kit受体近膜区第568位和570位酪氨酸磷酸化对FDCP-1细胞增殖的影响.
