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单核细胞趋化蛋白和CD40L在胃癌中的表达差异及相互关系
研究表明,胃癌的侵袭转移程度是影响其预后的主要因素.侵袭转移是多基因及其蛋白表达产物协调作用的结果,如能在早期找到其浸润转移的指标,对于判断预后及指导治疗,提高手术生存率有十分重要的意义.我们对单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和CD40配体(CD40L)在人胃癌中的表达及它们之间的相互作用进行研究分析,以了解它们在人胃癌中的临床意义.
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脾阳虚大鼠脾失健运相关蛋白mRNA表达差异的研究
目的:研究脾阳虚大鼠脾失健运相关蛋白mRNA表达差异.方法:利用现代分子生物学RT-PCR的实验方法,运用蛋白组学技术鉴定大鼠回肠组织中与脾阳虚相关的2个蛋白,即结蛋白(Desmin)、甘油醛三磷酸脱氢酶(glycer-Mdehyde-3 phosphate dehydrogenase,GAPDH),从基因水平检测蛋白质mRNA的差异性表达.结果:Desmin的mRNA表达在正常组和脾阳虚组没有明显差异,GAPDH的mRNA表达在正常组和脾阳虚组有明显差异.结论:GAPDH可作为脾阳虚证的辅助检测指标之一.用分子生物学RT-PCR检测方法检验了两个蛋白mRNA在转录过程中是否发生变化,从结果中看到了蛋白组学筛选的GAPDH在转录过程中发生变化,充分证明了GAPDH与脾阳虚证有关.Desmin的mRNA表达在脾阳虚大鼠中与正常组没有明显差异,还需要进一步进行验证.
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mRNA差异显示技术的发展及其在眼科学的应用
一、引言差异显示(差显,Differential Display,DD)技术是1992年由Peng Liang等构建的寻找和分离不同种细胞以及同种细胞在不同环境中基因表达差异的方法[1].该方法的出现为寻找致病基因以及各种差异基因提供了便捷的途径.7年间,该技术迅速发展、完备,已成为一种成熟的技术被应用于医学各科和生物学等各领域的基础研究中.高级生物拥有约10万个不同的基因,而单个细胞只表达其中的15%.哪些基因表达能决定其整个生命进程,包括发育、分化、应激、细胞周期调节、老化和细胞程序性死亡等.各种疾病的病理学改变都可能是单基因突变或是多基因作用的结果,这些都导致基因表达的改变.
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PCNP在类风湿关节炎发病中的表达及其意义
目的:探讨PCNP在牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性小鼠关节炎模型(CIA)脾脏及类风湿关节炎(RA)患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义.方法:使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立CIA小鼠模型;将RA患者分为静止组和活动期组,取外周血提取淋巴细胞.分别用半定量RT-PCR及荧光定量RT-PCR检测CIA小鼠脾脏和患者外周血淋巴细胞中PCNP基因的表达差异;Western blot检测CIA小鼠脾脏及患者淋巴细胞中PCNP蛋白表达差异.结果:CIA小鼠的脾脏细胞中和患者外周血淋巴细胞中PCNP在基因和蛋白水平表达增强,RA患者在活动期PCNP表达更高,有统计学意义.结论:在基因和蛋白水平,PCNP在CIA小鼠脾脏和RA患者外周血淋巴细胞中的表达明显高于健康对照组,而且PCNP的表达水平和类风湿关节炎的严重程度密切相关.
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APF与TNF-α在类风湿性关节炎中医辨证分型中的差异
类风湿性关节炎(RA)是一种以慢性多关节炎症为主要表现的全身免疫性疾病,由于该病呈进行性、侵袭性发展,如诊治不能及时、有效,则危害将相当严重.因此,对该病早诊断、早治疗的研究就显得十分重要.RA属祖国医学"痹证"范畴,中医学者们多在传统中医基础上结合自身的临床经验进行辨证分型治疗,如此又缺少了客观的标准化指标.因此,笔者在对RA进行辨证分型的基础上,选取了对RA具有较好的敏感性和特异性并在RA的早期即可检出的实验指标APF和TNF-α进行检测,来探讨客观指标在RA各中医证型中的表达差异,以期为RA的辩证分型提供参考.
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Graves'病患者不同病程中白介素18水平分析
Graves'病是一种器官特异性自身免疫性疾病,常由于甲状腺损伤释放出甲状腺成分刺激机体产生促甲状腺受体抗体(TRAb)和甲状腺素受体刺激抗体 (TSI),或病毒、细菌感染后产生的抗体与甲状腺组织成分发生交叉反应而引起发病,在其中,细胞因子起着非常重要的调控作用 .IL-18是新近发现的一种Th1相关性细胞因子,本文探讨了其在Graves'病患者不同病程中的表达差异,现将结果报告如下.
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浅论辅助性化疗对宫颈癌细胞miRNA表达差异的影响
目的:探讨进行辅助性化疗对宫颈癌细胞miRNA表达差异的影响.方法:从50名宫颈癌患者的身体上搜集了50对宫颈癌组织(每对宫颈癌组织包括1块接受化疗前的宫颈癌组织和1块接受化疗后的宫颈癌组织).将取得的宫颈癌组织交由北京博奥森生物技术有限公司进行芯片检测,然后观察进行辅助性化疗对宫颈癌细胞miRNA表达差异的影响.结果:经过检测,这50对宫颈癌组织中有33对宫颈癌组织存在miRNA表达差异,其中有19对(占57.57%)宫颈癌组织的miRNA表达呈上升趋势,有14对(占42.43%)宫颈癌组织的miRNA表达呈下降趋势.在这33对存在miRNA表达差异的宫颈癌组织中,有3对宫颈癌组织的miRNA表达差异>1.5倍.结论:通过对宫颈癌组织miRNA表达差异的研究可以发现,进行辅助性化疗对宫颈癌细胞miRNA的表达差异具有明显的影响.这说明,对宫颈癌患者进行辅助性化疗可取得良好的效果.
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肺癌患者外周血淋巴细胞亚群变化研究
大量证据显示机体免疫功能降低是导致恶性肿瘤发生的主要因素之一,对肿瘤的发生、发展、转移、疗效及预后有直接的影响.机体抗肿瘤免疫由细胞免疫和体液免疫共同参与,T细胞、B细胞及NK细胞在免疫监视、杀伤靶细胞、免疫调节等方面发挥了重要作用.本文从性别、年龄、病理分型、疾病分期、手术、化疗等方面对肺癌患者外周血淋巴细胞亚群的表达差异进行综述.
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利用生物信息学资源进行差异表达ESTs的分析与新基因的克隆
人类真核细胞中大约有70,000个不同的基因,不同类型的细胞所表达的基因不同,即便是同一类型的细胞,在特定时刻同时表达的基因也是很少的一部分,约占基因总数的10~15%.基因差异表达决定了生命的所有过程,分析不同类型的细胞以及同一细胞在不同病理和生理状况下的基因表达差异可以有助于我们获得与生命本质有关的信息,揭示疾病发生发展的分子机制.因此,如消减杂交与基因芯片等差异表达(Differential display)基因的克隆技术越来越多的应用于生命科学研究领域.随着生物技术的发展,各种差异表达基因克隆技术日益成熟,每种方法的应用都会使我们获得少则几十条多则上百条的差异表达的ESTs(expressed sequence taps,ESTs),如何对这些ESTs进行分析以获得有价值的信息并拟定新基因的克隆方案具有重要意义.
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鼻咽癌的64排CT表现与VEGF表达的关系
目的:探讨鼻咽癌( NPC)的64排CT表现与血清促血管内皮因子(VEGF)表达的关系.方法:搜集46例NPC患者首次放疗前行64排CT检查的资料,用酶联免疫夹心法(ELISA)检测血清VEGF的表达,并分析其CT特征与VEGF表达的关系.结果:46例中,原为癌11例,咽旁间隙侵犯9例,鼻窦、鼻道侵犯18例,颈部淋巴结转移12例,远处转移8例.原位癌中血清VEGF表达差异无统计学意义(p>0.05),向周围侵犯及淋巴转移的血清VEGF表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:鼻咽癌血清VEGF水平与鼻咽癌的侵润、转移密切相关,治疗前鼻咽癌患者的血清VEGF表达水平是反映鼻咽癌侵袭生长及转移潜能的有效生物学指标.
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乙型肝炎病毒X基因诱导的细胞基因表达与肝细胞肝癌
乙型肝炎病毒x基因与原发性肝癌的发生密切相关,其编码的蛋白质(HBxAg)具有的反式激活功能,可通过结合细胞核内的转录因子和改变细胞质内信号转导途径而激活宿主基因的转录及调控细胞凋亡等.研究发现,用HBx基因转染HepG2细胞,有10个细胞基因有表达差异,其中8个基因表达增强,2个基因表达减弱.已经证明,HBx诱发的这种高水平表达的细胞基因产物及其相应的抗体常存在于肝癌发生之前的乙型肝炎患者血清中,而且这些细胞蛋白及其相应抗体的出现早于甲胎蛋白几个月,甚至一年以上.提示,这些指标有可能用于原发性肝癌的筛查和早期诊断,成为原发性肝癌颈警、早期诊断和疗效评估的新指标.
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海马结构基因表达差异及其功能分析
海马结构(hippocampal formation)的主要组成是海马和齿状回(dentate gyrus,DG),它们与大脑皮质和皮质下中枢有广泛的纤维联系,参与形成学习记忆.海马皮质从海马沟至脑室回依次为分子层、锥体层和多形层;齿状回皮质也分3层:分子层、颗粒细胞层和多形层,其神经细胞发出的纤维不超出海马结构范围.海马内锥体细胞规则排列,故结构比较一致.尽管如此,依据细胞形态、不同皮质区发育差异以及纤维排列不同,海马皮质亦能分为4个沿其长轴分布的不同亚区,即CA1、CA2、CA3、CA4区,且研究表明各亚区在基因表达方面也存在显著差别.
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Barrett食管与贲门黏膜蛋白质组分析研究
近年来食管腺癌和贲门癌的发病率在西方国家和亚洲地区呈均上升趋势.对我国局部地区的研究也证实存在这种趋势,并以贲门癌发病率增高为主.大量研究发现,食管腺癌和贲门癌的发生与Barrett食管(BE)有直接的关系,食管末端的腺癌几乎都产生于BE,而40%以上贲门癌的发生与BE有关[1].但关于BE上皮的起源问题,一直存在食管鳞状上皮起源学说和贲门上皮起源学说,但近学者提出新的观点,认为贲门黏膜本身也是后天化生上皮,是食管鳞状上皮和BE上皮的中间过渡阶段[2].蛋白质组学是指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科,可从整体角度分析细胞、组织动态变化的蛋白质组成成分、表达水平及修饰状态.本实验采用蛋白质表达差异分析的方法,对人BE黏膜和正常贲门黏膜组织的蛋白质组进行分析,对部分差异显著的蛋白质点进行鉴定,分析二者间的异同,从而探索BE黏膜与贲门黏膜的关系,为研究BE的起源提供线索.
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环氧合酶-2的信使核糖核酸在人类食管鳞癌中的表达
食管癌是世界第三大恶性肿瘤,该病在中国的发病率和死亡率均较高.每年全世界新增加的30万食管癌患者中,约有一半发生在中国,且多为食管鳞癌(ESCC).在本研究中,我们通过检测环氧合酶-2(COX-2)的mRNA在人类食管鳞癌和正常食管鳞状上皮中的表达差异,探讨COX-2与食管鳞癌发病机制之间可能存在的关系.
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基因表达谱芯片对结肠癌相关基因的研究
基因芯片技术是一项低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因表达谱的新技术[1],目前已广泛应用于基因功能的研究,尤其是肿瘤发生的分子生物学方面的研究.结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,发病率在逐年增加,已成为严重危害人民健康的主要疾病之一.结肠癌的发生和发展与许多已知的和未知的基因相关,用基因芯片方法寻找在结肠癌组织中特异性表达差异的基因,会对结肠癌的早期诊断、防治起到积极的作用.
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人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定
差异显示技术可用于研究多种组织中mRNA的表达差异.荧光差异显示技术(FDD)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因.材料与方法一、细胞系人胃腺癌MKN-28(高分化)细胞,MKN-45(低分化)细胞,购自日本Riken Cell Bank(RCB),RPMI 1640,10%FBS常规培养.
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MicroRNA在6种肿瘤细胞中的表达差异
目的:利用生物芯片技术分析6种不同器官肿瘤细胞中microRNA(miRNA)的表达差异.方法:将210个与已知人类和小鼠miRNA互补的序列(206个miRNA,4个阳性对照)作为探针,点于玻片上制备寡核苷酸芯片.提取肿瘤细胞HeLa(人宫颈癌上皮细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、A549(人肺腺癌细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、ES-2(人卵巢透明细胞癌)、K562(人慢性髓细胞性白血病细胞)的miRNA,荧光染料Cy3标记,并与制备好的芯片杂交;用ScanArrayTM Express1.0扫描仪扫描荧光信号,采用ScanArray3.0和Cluster3.0软件分析处理扫描结果;Northern blotting和RT-PCR方法对芯片检测结果进行验证.结果:在6种不同器官肿瘤细胞中,检测到115种miRNA存在差异,91种miRNA没有明显差异;其中,miR-21在6种肿瘤细胞表达水平均较高,miR一125b表达水平均较低,let-7不同亚型在6种细胞系中表达水平较低;miR-17-5p和miR一20a呈集簇表达,在卵巢肿瘤ES-2细胞中的表达水平高于其他细胞,乳腺肿瘤细胞系MCF-7和宫颈癌细胞系HeLa的miRNA表达谱聚为一类.Northern blotting检测到miR-17-5p及其前体在K562细胞中均见表达,A549和ES-2细胞中只见较弱的前体表达,MCF-7、HeLa和HT-29中可见明显的前体和较弱的成熟miRNA的表达.RT-PCR检测到miR-17-5p前体在K562细胞中表达水平高于其他几种细胞,在ES-2细胞中的表达量低于K562细胞,同时高于另外4种细胞;miR-21在6种肿瘤细胞中表达水平均较高,在A549细胞中表达高.结论:应用生物芯片技术检测肿瘤细胞中miRNA的表达差异为进一步探索miRNA与肿瘤间的关系奠定基础.
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肝细胞癌中Hep Par 1、p53、HBsAg表达差异与细胞形态计量学变化的关系
目的探讨原发性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中肝细胞抗原(Hep Par 1),p53,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的表达差异及与细胞形态学变化的相关性.方法用免疫组织化学方法(两步法-EnVision System-HRP)检测10对肝癌和癌旁组织,3例正常肝组织中Hep Par 1,p53,HBsAg等蛋白的表达差异;用HPIAS-1000图象分析系统测量实质细胞的总面积(以细胞直径代替)和核质比.结果1)Hep Par 1:正常肝组织中肝细胞中度表达,癌旁肝组织中肝细胞为弥漫性高表达,肝癌细胞中阳性率为24.53%(13/53);2)p53:正常肝组织和癌旁肝组织中均呈阴性;肝癌组织,在被检的10例样品中肝癌细胞均为阳性;3)HBsAg:正常肝组织中肝细胞呈阴性,癌旁肝组织中肝细胞为片状弥漫性或散在性高表达,肝癌组织,在被检的10例样品中肝癌细胞仅有1例呈阳性;4)各种组织中实质细胞的平均直径为癌旁肝细胞>正常肝细胞>肝细胞癌细胞;5)正常肝细胞和癌旁肝细胞的核质比无差别(P>0.05),但均明显<肝细胞癌细胞(P<0.01和P<0.01).结论肝细胞抗原(HepPar1)在分化较高的肝细胞癌细胞中有不同程度的表达,可作为鉴别原发性肝细胞癌细胞来源的标志;原发性肝细胞癌细胞核质比明显>正常肝细胞和癌旁肝细胞(P<0.01和P<0.01).
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氯氮平联合二甲双胍对SD大鼠空腹血糖及胰岛GLUT2表达水平的影响
背景:抗精神病药物可引起血糖升高甚至导致2型糖尿病.二甲双胍可能会减轻上述副作用.目的:评价二甲双胍能否减轻使用抗精神病药氯氮平时发生的糖代谢异常.方法:将18只成年SD大鼠分为3组,分别用生理盐水、氯氮平(20mg/kg)及氯氮平(20mg/kg)+二甲双胍(78mg/kg)灌胃28d.在基线及其后每隔7天测空腹血糖.实验第28d麻醉大鼠使其安乐死,此时取腹主静脉血,用放射免疫法检测血胰岛素和C肽水平;取胰腺组织,采用实时聚合酶链反应和Western Blot技术检测葡萄糖转运体2(glucose transporter-2,GLUT2)的表达水平.结果:氯氮平组第14天、21天和28天的空腹血糖值均显著高于基线值,但氯氮平+二甲双胍组仅第14天时的空腹血糖值较基线明显升高.尽管如此,重复测量的方差分析并未发现三组间随时间变化的血糖水平差异有统计学意义(p=0.136).多组比较发现氯氮平+二甲双胍组的胰岛素均值显著低于盐水组及氯氮平组.组间GLUT2 mRNA的表达差异具有统计学意义(氯氮平+二甲双胍组<氯氮平组<盐水组),组间GLUT2 蛋白的表达差异亦有统计学意义(氯氮平+二甲双胍组,氯氮平组<盐水组).结论:本研究发现氯氮平一定程度上能使SD大鼠空腹血糖水平升高,联合使用二甲双胍可部分抵消血糖的升高.正如预期,接受氯氮平的SD大鼠GLUT2的表达水平降低.然而,意料之外的是氯氮平联合二甲双胍治疗28 d并未使GLUT2的表达水平正常化.
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Feasibility and limitation of patch-clamp recordings on neonatal rat cardiac ventricular slices\脉压对急性心肌梗死及冠状动脉介入术后内皮祖细胞内皮相关基因表达差异的影响