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问号钩端螺旋体血清群LipL32基因型分析及其重组蛋白的免疫学鉴定
目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在主要外膜蛋白(MOMP)基因(LipL32),克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长LipL32基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测rMOMP表达情况.分别用兔抗TR/patocⅠ钩体全菌抗血清、rMOMPs免疫兔血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rMOMPs免疫兔血清的交叉凝集效价,钩体细胞黏附模型检测抗体阻断效果. 结果上述17株钩体均有LipL32基因,但可分LipL32/1和LipL32/2两种基因型.13个LipL32/1和4个LipL32/2基因型之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.12%~96.60%和97.79%~98.16%.IPTG诱导后rMOMP1和rMOMP2表达量分别占细菌总蛋白的40%和10%.rMOMP1和rMOMP2均能与兔抗钩体TR/patocⅠ血清发生结合反应,免疫家兔可对上述17株钩体产生1∶2~1∶64 MAT效价的凝集抗体.1∶2~1∶16稀释的兔抗rMOMP1和rMOMP2血清均能有效地阻断钩体的黏附. 结论所有检测的钩体具有LipL32/1或LipL32/2基因.所构建原核表达系统能表达rMOMP1和rMOMP2.rMOMP1和rMOMP2有良好的免疫原性和免疫反应性.rMOMP1和rMOMP2是具有属特异性的钩体表面外膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集、阻断黏附的抗体.
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LTB-hpaA融合基因原核表达系统的构建及其产物免疫性鉴定
黏附素(HpaA)是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)鞭毛鞘膜蛋白,几乎存在于所有的Hp菌株表面,序列高度保守,可作为基因工程疫苗的候选抗原.本文构建了ltB-hpaA融合基因原核表达系统pQE32-ltB-hpaA-E.coli M15,并用SDS-PAGE、Western blot和GM1-ELISA分别证实了LTB-HpaA重组蛋白(rLTB-hpaA)表达和免疫性.
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静注丙种球蛋白加减方案治疗重型血小板减少性紫癜
重症免疫性血小板减少性紫癜(idtopathic thrombocytopenis purpurh,ITP)常因内脏出血而危及生命需要紧急治疗,临床通常选用糖皮质激素,但起效缓慢.为此,我们观察了大剂量丙种球蛋白联合小剂量糖皮质激素(联合组)疗效,并与单用大剂量静注丙种球蛋白(HD-IVIG组)、标准剂量糖皮质激素(激素组)方案进行比较,现报告如下.
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1例周期性免疫性粒细胞缺乏症的护理
我科于2002年9月收治1例周期性免疫性粒细胞缺乏症的患者,经精心治疗护理,病情控制,粒细胞恢复正常出院,现报道如下.
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免疫性动脉炎伴多发真性动脉瘤超声表现1例
患者男,26岁.低热、头痛3个月,伴下肢疼痛2个月.双侧上肢、下肢动脉及腹主动脉彩色多普勒超声表现:(1)右侧腋动脉起始部呈瘤样扩张,内膜毛糙增厚,厚处为1.5 mm(图1),瘤腔内可见湍流血流信号;(2)腹主动脉内径15 mm,内膜厚5 mm,腹腔干近肝总动脉分叉处可见囊状膨出,大小为30 mm×21 mm,囊壁厚4 mm,囊腔内血流紊乱;(3)右侧腘动脉胫腓干下方17mm处远端血流信号中断,近端管壁增厚.
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1012例变态反应性疾病的测敏及脱敏治疗分析
我科于1991-10起开始对变态反应性疾病进行测敏及脱敏治疗,在临床上取得了一定的经验和疗效,现将1991-10/1999-10有完整资料的1012例总结分析如下。1 对象和方法1.1 对象 1012病例来源于皮肤科、内儿科、耳鼻喉科,其中男425例,女587例。1岁~20岁132例,21岁~40岁638例,41岁~60岁192例,61岁以上50例。支气管哮喘148例,过敏性鼻炎164例,慢性荨麻疹581例,慢性湿疹116例,过敏性紫癜2例,春季卡他性结膜炎1例。其中支气管哮喘、过敏性鼻炎、春季卡他性结膜炎(共313例)做吸入组过敏原测定,慢性荨麻疹、慢性湿疹、过敏性紫癜(共699例)做食物组过敏原测定。1.2 皮肤试验1.2.1 检查前停用肾上腺皮质激素及抗组织胺药3d,全部采用皮内注射法,(抗原液系北京协和医院变态反应科生产)。吸入组抗原浓度,除蔷属花粉1∶1000外,其余均为1∶100,食物组均为1∶10。1.2.2 皮试方法,在患者两上臂外侧皮肤做皮内注射,15min观察丘疹红斑反应。1.2.3 观察结果标准:①(-):丘疹微红不增大;②(+):丘疹红肿直径在5mm~10mm之间,周围有红斑反应;③():丘疹直径在10mm~15mm之间,周围有宽度在10mm以上红斑反应带;④():皮肤丘疹直径在15mm以上或不规则,出现伪足,周围有宽度在10mm以上红斑反应带;⑤():除局部反应外还有全身痒、皮肤潮红、憋气感、哮喘发作等症状。
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双重滤过血浆置换治疗重度类风湿性关节炎合并尿毒症及肝硬化患者1例
双重滤过血浆置换(Oouble Filtration Plasmapheresis,DFPP)是适用于类风湿性关节炎等免疫性疾病患者的一种血液净化方法.解放军302医院肝衰竭治疗研究中心血液净化科为1例重度类风湿性关节炎合并尿毒症及肝硬化患者实施双重滤过血浆置换治疗,取得很好疗效.
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扩张性心肌病的免疫吸附治疗
扩张性心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)是一种以心肌收缩功能进行性减退和心室扩张为特征的疾病.根据WHO分类,DCM分为特发性、家族/遗传性、病毒性和/或免疫性、酒精性/中毒性.特发性、家族遗传性、病毒性和免疫性DCM往往相互交叉.病毒感染可诱发自身发免疫反应,同时又有遗传易感因素.
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新生儿溶血病临床研究进展
新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是指母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病.在人类29个血型系统中,多数血型系统都能引起HDN,但常见的是Rh(D)HDN,在国外发病率较高;其次是ABO-HDN,在我国人群中发病率为15.6%[1-2],其他系统HDN偶见报道.对HDN的早期诊断与防治,现已成为临床研究的热点.目前国外主要侧重对Rh系统和ABO血型系统所致严重HDN非侵袭性诊断方法以及对单克隆抗-D免疫球蛋白预防作用的机制、开发和应用进行了深入的研究.
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非急性过敏性肺炎的CT表现
过敏性肺炎(hypersensitivity pneumonitis,HP)也称为外源性过敏肺泡炎(exogenetic allergic alveolifis,EAA),是一种由易感个体反复吸入各种过敏原所引起的以远端支气管、肺泡和肺间质肉芽肿样炎症病变为特征的免疫性肺部疾病[1].致病物质通常是微生物、动植物、低分子化合物或药物,鸟型结核分枝杆菌复合物也可致病[2-3].但部分病例缺乏明确的外源性过敏原,也没有急性过敏过程,因此,在美国文献中更多使用HP而非EAA[4].
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择期手术患者术前备血不规则抗体筛查的临床意义
不规则抗体筛查是检测患者血清中是否存在ABO血型 系统以外的抗体.不规则抗体可引起免疫性溶血性输血反应.
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系统性红斑狼疮患者外周血干扰素诱导蛋白4与细胞间黏附分子-1的相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)病因学的近年研究表明,干扰素(IFN)家族及其免疫调控通路可能在SLE发病中起重要作用,而细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在介导免疫性炎症反应中具有重要意义[1].本研究通过对SLE患者和正常人外周血中干扰素诱导蛋白4(IFIT4)和ICAM-1水平的研究,以探讨其与SLE疾病发病机制和病情活动度的相关性.
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多次输血产生免疫性抗-JKa和抗-S引起溶血性输血反应一例
患者女,57岁,尿毒症,血型:A、CCDEe,既往4次妊娠,2次同种异体肾移植,多次输血.2003年5月29日在山西省第二人民医院肾移植中心透析治疗,输洗涤红细胞2 u无不良反应.
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何谓人类主要组织相溶性复合体?
问:何谓人类主要组织相溶性复合体? 答:人类白细胞抗原(human leucocyte antigen system),简称HLA系统.1987年第十届国际讨论会报告HLA共有7个系列148个抗原,分为三类分子.Ⅰ类分子包括HLA-A、B、C抗原,具有识别"自我”和排斥"非己”的免疫功能;Ⅱ类分子是HLA-D抗原,有调节免疫反应的作用;Ⅲ类分子即补体C2、C4、备解素、B因子等,具有非特异性的免疫功能,也可引起免疫性病理过程.HLA分子受第6号染色体之短臂上一段连锁基因群编码控制.HLA与器官移植排斥反应有关,临床上与多种变态反应性疾病有关.总之,HLA是免疫应答的介质.
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沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定
目的 表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定.方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167~434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性.结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167~aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct 感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1:1 280以上.结论表达的重组外膜蛋白2aa167~aa434具有良好的免疫性.
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大鼠免疫性肝纤维化形成中MMP-1和TIMP-1表达的动态变化
目的:研究MMP-1,TIMP-1在肝纤维化发生发展中的作用.方法:♀SD大鼠48只,体质量120-150 g,随机分成正常对照组8只和肝纤维化组40只.肝纤维化动物模型制备按Blackwell方法稍加改进,予HSA致敏大鼠后再予尾静脉攻击注射.在攻击注射0,2,4,6,8 wk后取肝.应用肝组织羟脯氨酸(HYP)的测定和HE,嗜银及VG染色监测肝纤维组织增生情况,ELISA方法测定MMP-1,TIMP-1的蛋白表达,半定量RT-PCR方法测定MMP-1,TIMP-1基因表达.结果:HYP随着HSA的不断注射逐渐升高,纤维组织增生逐渐加重,显示HSA所致的免疫性肝纤维化逐步形成.正常肝组织有MMP-1蛋白表达,在肝纤维化发展过程中以及肝硬化阶段,其蛋白表达没有显著性变化(P>0.05);而TIMP-1蛋白表达水平逐渐增加(4 wk后,与0 wk比较有统计学差别:P<0.01),到肝硬化阶段达到高峰(8 wk时接近0 wk的4倍).在肝纤维化形成的进展中,MMP-1mRNA表达无明显变化(P>0.05),而TIMP-1mRNA表达随着时间的推移而逐渐增高(4 wk后与0 wk比较,P<0.01).在肝纤维化发生发展中,MMP-1/TIMP-1蛋白表达比值逐渐降低,尤其是4 wk以后,分别与0 wk比较有显著差异(P<0.01).按肝纤维化增生程度分组,随着肝纤维化程度的加重,TIMP-1的表达逐渐升高,MMP-1/TIMP-1比值逐渐减小.结论:在大鼠免疫性肝纤维化进程中,TIMP-1进行性升高,使MMP-1活性受到抑制.MMP-1及TIMP-1比例逐渐失调并持续存在,加速了肝纤维化的进程.
关键词: 免疫性 肝纤维化 基质金属蛋白酶-1 基质金属蛋白酶抑制因子-1 大鼠 -
小肠移植动物实验研究进展
小肠移植是治疗永久性肠功能衰竭的理想方法.但由于小肠具有高免疫性且含有大量的淋巴细胞和大量肠道菌,肠腔细菌易位和感染等都较其他器官移植明显,小肠移植后肠功能恢复困难,因此手术难度较大,成功率也极低.直到环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)等一些强力免疫抑制剂的问世,才使得小肠移植逐渐走向成熟.本文针对小肠移植在临床药物、排斥反应、小肠保存、实用模型这几方面的动物实验研究进展作一综述.
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家族性扩张型心肌病一家系分析
扩张型心肌病是以左心室或双心室扩大伴收缩功能障碍为特征的心肌疾病,临床上表现为进行性心力衰竭、心律失常、血栓栓塞、猝死等,其病因可以是特发性、家族性/遗传性、病毒性和(或)免疫性、酒精性/中毒性等[1].据国外前瞻性研究报道,家族性扩张型心肌病(Familial Dilated Cardiomyopathy FDC)占扩张型心肌病的20%以上[2],表现为同一家族的一级亲属中有两例以上扩张型心肌病患者.因此,对扩张型心肌病患者应详细询问家族史,对有家族史者应进行家系调查,以便及早发现尚无临床症状的扩张型心肌病患者,并为遗传学研究提供资料.
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羧基肽酶-H抗体对成人隐匿性自身免疫糖尿病的诊断意义
目的探讨羧基肽酶-H自身抗体(CPH-Ab)阳性的2型糖尿病(T2DM)患者的临床特征及该抗体对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的诊断价值. 方法选择临床初诊为T2DM患者545例,1型糖尿病(T1DM)患者85例,健康对照123例进行CPH-Ab测定,同时检测T2DM患者谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab).比较各组CPH-Ab的阳性率以及T2DM中依据CPH-Ab、GAD-Ab划分的3组患者的临床特点.采用放射免疫沉淀法检测CPH-Ab和GAD-Ab. 结果 CPH-Ab阳性率在T2DM患者(5.5%,30/545)高于T1DM患者(0%,0/85)和正常对照(0.8%,1/123)(P<0.05),30例CPH-Ab阳性的T2DM患者只有1例同时GAD-Ab阳性.CPH-Ab在低体重(BMI<21 kg/m2)者中的阳性率较高,且该抗体阳性的患者具有起病年龄跨度大、病程较长、低体重、易发生酮症等特点,其空腹C肽介于GAD-Ab阳性与两种抗体(GAD-Ab和CPH-Ab)均阴性的T2DM患者之间,反映代谢综合征的指标水平较低(包括较低的BMI、血压和甘油三酯),而周围神经病变的比例较高. 结论 CPH-Ab阳性糖尿病患者的临床特点介于经典的LADA(GAD-Ab阳性)与T2DM患者间.CPH抗体检测是LADA诊断的一项新指标.
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急性脑梗死患者白细胞介素18水平检测分析
急性脑梗死是中老年人常见的心脑血管疾病之一,动脉粥样硬化是急性脑梗死发生的基础,细胞因子在动脉粥样硬化中的作用备受重视.有研究表明,白细胞介素(IL)18在免疫反应调节中具有关键作用,介导了神经系统中多种炎症和免疫性疾病形成[1].我们对58例急性脑梗死患者进行IL-18检测,探讨其在急性脑梗死中的临床意义.