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816例宫颈分泌物支原体、衣原体检测及耐药分析
沙眼衣原体(Ctrachomatis,Ct)、解脲支原体(Uurealyicum,Uu)、人型支原体(Mhominis,Mh)是导致泌尿生殖道炎症常见病原菌,常引起非淋球菌尿道炎(NGU),育龄妇女感染可以通过胎盘感染胎儿,引起自发性流产,并可吸咐于精子表面,产生神经氨酸酶样物质,阻碍精子运动,干拢精子与卵子结合引起不育症.为了解女性生殖道炎症,不孕症及非淋球菌尿道炎中Ct和Uu、Mh的感染率及耐药率,本文对816例患者进行检测,并对Uu和Mh进行了药敏分析.报告如下.
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中药抗流感病毒实验研究进展
流感病毒属正粘科病毒,是一类对粘蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒.根据病毒抗原所在部位不同分为内部抗原和外层抗原两类:内部抗原的核心为单链核糖核酸蛋白;外层抗原为糖蛋白,包括血凝素(Hemagglutinin,H)和神经氨酸酶(Neuramindase,N).根据其抗原性质不同,流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)型;又将其病毒分为若干亚型(H1～H15,N1～N9).B型和C型流感病毒抗原性较稳定,A型是造成流行的主要病原,其病毒表面抗原HA和NA较易发生变异.
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2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒HA基因同源性比较与进化分析
[目的]分析杭州市2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因序列,探讨该病毒的遗传变异和分子特性.[方法]应用RT-PCR的方法从临床标本中扩增新甲型H1N1流感病毒HA基因片段并测序.利用DNAMAN和Sequencher4.7软件对HA基因序列进行分析,比较HA基因氨基酸亲缘系数并绘制进化树.[结果]成功地对15例新甲型H1N1病毒的HA基因进行扩增并测序,2009年1月至2011年1月新甲型H1N1流感病毒的HA基因的氨基酸序列与参考株具有高度的同源性,其亲缘系数为98.9%～100%,且HA基因氨基酸序列发生了一定的变异.[结论]2009年至2011年新甲型H1N1流感病毒的基因组HA序列与我国和其他国家的新甲型H1N1流感病毒具有高度的同源性,但HA基因的氨基酸序列发生了变异,可能与患者的病情有关,因此需密切关注新甲型H1N1流感病毒的流行情况.
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流行性感冒抗病毒药物治疗与预防应用中国专家共识
流行性感冒（简称流感）病毒属于正黏病毒科，大多呈球形颗粒状，根据病毒核蛋白和基质蛋白抗原分为甲、乙、丙三型[1]。甲型流感病毒根据其表面血凝素和神经氨酸酶的不同分成多个亚型，日前已发现的血凝素有16个亚型（H1~H16），神经氨酸酶有9个亚型（N1~N9）[1]，在人类中流行的主要是甲型H1N1和甲型H3N2亚型[2]；乙型和丙型流感病毒均仅有一个抗原亚型，且宿主种类有限，较少发生流感大流行[3，4]。
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2009-2017年烟台地区甲型(H1N1)pdm09流感病毒神经氨酸酶基因进化分析
目的 分析2009-2017年烟台地区甲型(H1N1) pdm09流感病毒流行情况及神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因进化特征.方法 收集2009年8月～2017年8月烟台地区两家哨点医院流感样病例咽试子标本10 236份,狗肾细胞(Madin-Darby canine kidney cell,MDCK)分离流感病毒,血凝抑制实验进行病毒分型.选取甲型(H1 N1) pdm09流感毒株43株,扩增NA基因全序列并测序,应用分子生物学软件分析其遗传变异特征.结果 系统发生分析表明大部分烟台分离株属于2、7、6C、6B.1和6B.2基因型;NA蛋白分子多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株相比,6、7基因型增加了44位糖基化位点;6B.1和6B.2基因亚型,减少了386位糖基化位点;运用固定效应似然比模型和内部固定效应似然比模型发现34和386两个正向选择压力位点,NA蛋白酶活性中心位点及周围辅助位点均未发生变异.结论 2009-2017年烟台地区甲型(H1N1) pdm09流感病毒NA基因持续发生变异,仍对神经氨酸酶抑制剂敏感,未来仍应加强流感流行状况和病原基因特征监测.
关键词： 甲型(H1N1)pdm09 神经氨酸酶 耐药 基因进化 -
2014-2016年镇江地区甲型H1N1流感病毒分子进化特征研究
目的 了解镇江地区甲型H1N1流感病毒流行和变异特点.方法 收集2014-2016年镇江地区哨点医院流感样病例标本,进行核酸检测和病毒分离.在病毒流行期按月随机抽取13株甲型H1N1毒株,设计特异性的引物扩增血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,进行测序并分析其遗传进化特征.结果 13株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.3％～100.0％和96.6％～ 100.0％;NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为95.6％ ～97.5％和93.8％ ～96.6％.系统进化分析表明,13株病毒HA和NA基因分属于不同的进化谱系.分子特征表现为12株HA氨基酸序列均发生了抗原位点Sa区K173Q突变,1株同时发生了Sa区K181E突变;3株还发生了Ca1区V183I突变.受体结合位点和糖基化位点的氨基酸序列均未发生变异.结论 2014-2016年镇江地区甲型H1N1流感病毒与疫苗株相比,其HA、NA基因出现了一定程度的变异,但是抗原性并未发生改变,需进一步加强监测.
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2013-2017年苏州市H7N9禽流感病毒流行特征及耐药突变监测分析
目的 分析2013-2017年苏州市人感染H7N9亚型禽流感病毒疫情流行特征,获取神经氨酸酶基因数据进行耐药变异分析.方法 应用实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测疑似病例咽拭子标本甲/乙型及H7N9亚型流感病毒核酸.H7N9阳性标本送中国疾病预防控制中心所属国家流感中心进行病毒分离和神经氨酸酶基因测序分析.结果 2013年4月～2017年5月间苏州市共报告82例人感染H7N9禽流感实验室确诊病例,苏州人感染H7N9病毒总体病死率为41.46％(34/82).患者中位年龄为58岁,男女性别比例约为2.9∶ 1(61/21).85.37％(70/82)的确诊患者发病前有活禽暴露史.序列分析表明神经氨酸酶基因同源性为97.7％～100.0％.A/Suzhou/88/2016(H7N9)和A/Suzhou/54/2016(H7N9)分别发生H274Y及R292K耐药突变.A/Suzhou/63/2016(H7N9)等部分分离株NA蛋白出现42位潜在糖基化位点缺失.结论 H7N9病毒仍在不断进化,直接接触活禽或被病毒污染的环境是人感染H7N9病毒的主要途径;有必要密切监测可能出现的耐药突变及耐药毒株的扩散.
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甘草皂苷对神经氨酸酶及磷脂酶A2的活性抑制及构象关系研究
目的 预测甘草皂苷系列化合物对神经氨酸酶(NA)、磷脂酶A2(PLA2)的体外抑制活性.方法 通过甘草皂苷体外酶活性实验,得出各化合物的IC50值;基于化合物的靶蛋白活性评价信息,建立计算机模拟成分结构与靶点的关系模型,测试甘草三萜皂苷单体对神经氨酸酶(NA)、磷脂酶A2 (PLA2)的体外抑制活性. 结果 化合物ST-14(glycyrrhetic acid monoglucuronide)和ST-19(licorice-saponin H2)表现出较好的神经氨酸酶结合能;化合物ST-14(glycyrrhetic acid Monoglucuronide)与化合物ST-22(uralsaponin B)也表现出较好的磷脂酶A2结合能,能量值高于进行活性评价实验的甘草皂苷.结论 通过计算机模拟成分结构与靶点的关系模型,甘草中的三萜皂苷类成分可以对神经氨酸酶及磷脂酶A2的蛋白活性点进行结合,具有潜在抑制活性.
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H5N1型禽流感病毒增殖实验研究
禽流感病毒属甲型流感病毒,呈球形,直径80～120nm颗粒,有包膜;新分离到的病毒多为丝状体;基因组为含8个节段的单股负链RNA.依其外膜血凝素(H)抗原和神经氨酸酶(N)的不同,目前可分为15个H亚型(H1～H15)和9个N亚型(N1～N9).而不同禽流感病毒亚型,甚至同一亚型不同病毒株之间对不同宿主的毒力亦有很大差别.高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是特定亚型的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类急性高度致死性传染病.近年来H5N1型高致病性禽流感病毒多次在我国和东南亚地区爆发流行,香港、越南等地的禽流感病毒感染人体事件,提示AIV对人体组织和细胞具有亲嗜性,明确这种嗜性是由于基因重组抑或表面抗原漂移、抗原转换,对预防AIV的流行及其亚单位疫苗的研制具有十分重要意义.要达到上述目的,首先必须制备大量的禽流感病毒液.近来,我室选用鸡胚培养法对H5N1型禽流感病毒进行了增殖,现具体报道如下.
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黄芩苷与利巴韦林联用体内外抗流感病毒作用
目的 评价黄芩苷与利巴韦林联用体内外抗流感病毒作用,为其临床上联用提供实验依据.方法 CPE法和MTT法测定药物单用及联用对感染3种不同亚型流感病毒MDCK细胞的保护效果,分别应用合并指数法(combination index,CI)和MacSynergyⅡ分析法,分析黄芩苷与利巴韦林体外联用的相互作用.神经氨酸酶 (NA)抑制试验测定黄芩苷对流感病毒NA活性的抑制作用.应用H1N1亚型流感病毒 (FM1株)人工感染BALB/c小鼠模型,评价黄芩苷与利巴韦林联用对感染小鼠的保护作用.结果 体外黄芩苷与利巴韦林联用对H1N1和H5N1病毒的抑制表现为相加作用,对H9N2病毒的抑制表现为协同作用.黄芩苷对3种亚型流感病毒NA的半数抑制浓度 (IC50)在0.29～0.49 mmol·L-1范围.利巴韦林与黄芩苷联合给药与单独给药相比,提高感染小鼠的存活率,延长其存活时间.结论 黄芩苷对流感病毒NA活性具有抑制作用.黄芩苷与利巴韦林在体外联用,对不同亚型流感病毒的抑制表现为相加或协同作用;二者联用对感染流感小鼠的保护效果明显优于单用.
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表没食子儿茶素没食子酸酯抗甲型流感病毒的作用研究
目的 初步探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗甲型流感病毒的活性及其作用机制.方法 采用H5N1假病毒检测体系,观察EGCG对A/Thailand/Kan353/2004 H5N1毒株假病毒的抑制作用;采用神经氨酸酶抑制实验进一步分析其作用机制;采用H1N1 FM_1病毒检测体系,根据药物与病毒、细胞的不同作用,通过两种给药方式,评估EGCG对甲型流感病毒FM_1的抑制作用.结果 EGCG能特异性的抑制H5N1假病毒的进入,IC50为145.10 μmol·L-1;EGCG对神经氨酸酶具有抑制作用,IC50为417.20 μmol·L-1,EGCG对预防和治疗给药方式均有一定的抑制作用,其IC50分别为6.88 μmol·L-1和14.83 μmol·L-1,治疗指数分别为58.02和26.92.结论 EGCG在体外具有明显的抗甲型流感病毒作用,其作用机制包括抑制病毒的进入和神经氨酸酶活性.
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乙型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因变异的研究进展
乙型流感病毒是分节段的单股负链RNA病毒,其突变率较高,常在全球范围内的部分地区引起小规模暴发和流行,造成一定的疾病和经济负担.现主要对乙型流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)2个蛋白的结构、功能和基因特性等方面作一综述.
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甲型H1N1流感病毒分子流行病学研究进展
2009年3月甲型H1N1流感病毒首次在北美被发现,并通过人际间传播引起了世界大流行,严重威胁人类健康,造成巨大经济负担.随着时间的推移,甲型H1N1流感病毒的基因不断发生变异,文章主要综述近年来甲型H1N1流感病毒的分子流行病学特征(遗传性、抗原性、致病性、致死性、耐药性以及糖基化位点等),以提高人们对甲型H1N1流感病毒变异可能导致的流感大流行的警惕.
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全球B型流感病毒耐药相关突变株NA和HA序列特征分析
目的 研究全球B型流感耐药相关突变株的NA和HA序列特征及分子结构特点.方法 对我国2008-2012年B型流感病毒进行序列测定和分析,确定耐药相关突变株,进一步利用MEGA5.0软件分析我国与全球其他国家B型流感病毒的耐药相关突变位点和伴随位点的异同,并构建系统进化树,利用RasWin软件在NA、HA蛋白分子模型中展示突变位点.结果 我国2008-2012年共发现6株B型流感病毒耐药相关突变株,其携带的NA、HA伴随突变较少,且与国外B型耐药相关突变株的NA、HA序列处于不同的进化分枝上.结论 目前发现的B型耐药相关突变株的突变位点多种多样,且我国的B型流感病毒耐药情况与国际情况并不十分一致,这提示加强我国乃至全球B型流感病毒耐药监测的重要性.
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基于流感病毒M2蛋白的通用疫苗研究进展
目前,疫苗免疫仍然是防控流感病毒有效的措施,但当前商品化的流感疫苗主要是通过诱发流感病毒血凝素( Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的抗体起免疫保护作用.由于流感病毒亚型众多,HA有16个亚型,NA有9个亚型,且各亚型之间诱导的抗体交叉保护力差(或没有交叉保护).随着疫苗的大规模免疫接种,使得流感病毒抗原漂移( drift)和转换(shift)越来越快,流感病毒抗原性出现较大差异,导致流感病毒现地流株与疫苗株不匹配问题日益突出,严重的影响了流感病毒疫苗免疫的效果,乃至导致免疫失败.由于流感病毒变异非常快,其变异规律及其抗原决定簇出现的规律无法预测,这就使得必须不断的分析流感病毒现地流行株的变异,筛选疫苗候选抗原[1],对指导疫苗免疫接种造成困扰,给季节疫苗的储备和生产造成极大的浪费.
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410例患者支原体对9种抗生素的敏感性测定
近年来,解脲脲原体(Ureaplasma unedyticum,Uu)和人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)作为非淋菌性尿道炎的主要病原体,其感染率呈不断上升趋势.随着各种抗生素的滥用,其耐药性也日益上升,解脲脲原体可通过胎盘感染胎儿,引起自发性流产、早产、死胎与低体重胎儿.由于解脲脲原体可吸附于精子表面,阻碍精子运动;产生神经氨酸酶样物质干扰精子与卵子结合,以及对精子的免疫损伤等因素,常有不孕症发生[1].因此对解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的测定及药敏已十分重要,现将我院三个季度来支原体对9种抗生素敏感性的检查结果介绍如下.
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新余市甲型H1N1流感病毒H275Y突变监测
目的 分析2013年-2014年新余市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性.方法 收集新余市流感监测哨点医院的流感样病例的咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,随机选择15株甲型H1N1流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒NA基因部分片段,应用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法进行酶切分析.结果 新余市15株甲型H1N1流感病毒中,仅有A/江西渝水/SWL1220/2014(H1)发生了H275Y突变,它具有Oseltamivir耐药性.结论 新余市绝大多数甲型H1N1流感毒株对Oseltamivir敏感,但仍有必要持续监测和防范Oseltamivir耐药毒株的出现.
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使用奥司他韦需知
奥司他韦胶囊的商品名是达菲胶囊,由瑞士罗氏制药公司生产,1999年在美国上市,2002年下半年在中国上市;除胶囊之外,还有口服混悬液制剂,规格是12毫克/毫升.作用机理该药主要作用在流感病毒表面的神经氨酸酶,神经氨酸酶在病毒的生活周期中扮演着重要的角色.流感病毒在宿主细胞内复制表达和组装之后,会以出芽的形式突出宿主细胞,但与宿主细胞之间以凝血酶-唾液酸相连接.
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日照市流感病毒流行及H3N2亚型血凝素和神经氨酸酶变异情况研究
目的:分析近年来日照市流感病毒流行以及H3N2亚型流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA编码基因变异情况.方法:PCR扩增甲型流感病毒HA和NA编码基因特异性片段,PCR结合核酸序列分析检测11例流感病毒分离毒株HA和NA编码基因变异,所获序列采用MAGA软件与WHO推荐的流感疫苗株序列进行比对分析.结果:日照市自2009年开展流感网络监测以来,每年流行的流感病毒毒株有一定变化,新甲型H1N1流感病毒一直为流行毒株,之后依次为甲型H3N2流感病毒毒株和B型Yamagata系毒株;根据2013-2015年度的11株甲型H3N2流感毒株基因序列分析结果显示,流感病毒存在一定的序列差异,但与流感疫苗推荐的序列仍有较高的吻合度.结论:流感病毒在流行过程中每年的优势流行毒株存在着交替的现象,且流感病毒在流行过程HA和NA编码基因易发生变异,因此加强流感病毒变异的检测对了解其变异规律、筛选疫苗株具有重要意义.
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毛细管电泳用于神经氨酸酶抑制剂筛选方法研究
目的 建立适用于复杂体系的神经氨酸酶抑制剂毛细管电泳筛选方法.方法 以神经氨酸酶为靶点,以2'-(4-甲基伞形酮-α-N-乙酰神经氨酸)为底物,建立神经氨酸酶抑制剂的毛细管电泳筛选方法,并将该方法用于海洋药物可口革囊星虫粗提物的活性筛选.结果 以10 mmol·L-1 pH=10.0的硼砂为背景电解质,酶促反应底物与产物在4.5 min内基线分离.酶促反应在含4 mmol·L-1CaCl2的pH=3.5的磷酸体系中,37℃水浴中酶与底物孵育15 min,产物有稳定的较大的生成量.扎那米韦阳性对照验证结果表明,该方法可用于神经氨酸酶抑制剂筛选.对源于可口革囊星虫的11个粗提物筛选结果显示,7个粗提物对神经氨酸酶有抑制活性.结论 系统优化了毛细管电泳分离分析方法及神经氨酸酶反应体系,建立的模型可用于复杂体系中抗流感病毒药物神经氨酸酶抑制剂的筛选.
