首页 > 文献资料
-
原癌蛋白Pim-1激酶-GST融合蛋白的纯化及其激酶活性的分析
在大肠杆菌中成功表达了人原癌蛋白Pin-1激酶-GST融合蛋白,并对其激酶活性进行了分析。结果:Pim-1-GST融合蛋白具有激酶活性,体外能使人工底物组蛋白H1发生磷酸化。其激酶活性发挥的适宜条件为pH7.5,10 mmol/L MgCL2的反应体系。过高的离子浓度和过高或过低的PH值均抑制其激酶活性的发挥。
关键词: Pim-1-GST融合蛋白 大肠杆菌 激酶活性 -
精神运动性兴奋对血清肌酸激酶活性的影响
肌酸激酶(CK)主要存在于骨骼肌(MM型)、心肌(MB型),少量(BB型)存在于脑、胎盘、甲状腺[1].有研究显示精神分裂症患者处于精神运动性兴奋时,血清CK显著升高[2].本研究探讨精神运动性兴奋和血清CK间关系.
-
空气潜水致脑动脉气栓对血清肌酸激酶的影响
潜水减压病是一种严重威胁潜水人员生命安全的职业病.违反潜水规则的快速减压所导致的气泡形成,可能发生在任何部位,既可能在血管外,也可能在血管和淋巴管内,因此,对全身各脏器都会产生损害.国内外关于潜水致动脉气栓血清生化改变的报道鲜见.笔者观察了近10年我科收治的潜水致脑动脉气栓患者的血清肌酸激酶活性的变化.现报告如下.
-
酪氨酸激酶受体的小分子抑制剂
酪氨酸激酶(TK)和酪氨酸磷酸酶是调节蛋白酪氨酸磷酸化、控制细胞生长和分化所必需的酶.TK分为两类:非跨膜和跨膜生长因子受体TK(RTK),非跨膜或非受体TK有其内在的激酶活性,存在于细胞质和细胞核内,参与各种信号途径.非受体TK可分为多个亚群,大的亚群为src家族,包括src,Ick,Iyn,yes,fyn,fgr,hck,blk等.其它非受体TK家族包括abl,jak,fak,syk,zap和csk.这些酶均为新药开发的靶点,本文对此作一重点介绍.
-
IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用
白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子.它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2,IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键.本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述.以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物.
-
CDK11p58在H2O2诱导PC12细胞凋亡中表达及意义
目的:观察CDK11p58在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的表达及机制.方法:以H2O2处理PC12细胞和(或)过表达CDK11p58及其激酶突变的载体后,蛋白质免疫印迹观察CDK11p58的表达,流式细胞分析术分析PC12细胞的凋亡.结果:将CDK11p58表达载体转入PC12细胞中,在予H2O2处理细胞后,过表达CDK11p58的PC12细胞凋亡较未过表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).在转染双突变CDK11p58表达质粒PC12细胞中,H2O2诱导细胞凋亡较对照组无增高,但较转染全长的CDK11p58的表达质粒的细胞组有显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:CDK11p58可以促进H2O2诱导的PC12细胞的凋亡.
-
18F-FDG SPECT/CT和CT增强扫描在肺癌纵隔淋巴结转移诊断中价值
肺癌是临床常见恶性肿瘤,是癌症死亡之首,且5年生存率<15%[1],已经成为人类健康的杀手。降低肺癌病死率,早期诊断和治疗尤其重要。普通CT增强扫描判断淋巴结性质一般以淋巴结大小作为标准,很难区分良恶性质。SPECT/CT利用恶性肿瘤细胞血液循环丰富,己糖激酶活性较高,糖分解代谢旺盛并且缺乏葡萄糖-6-磷酸酯酶,因此癌细胞对18F-FDG代谢增高,从而显示正常组织与肿瘤组织代谢异常。现将60例肺癌患者纵隔淋巴转移结果报告如下。
-
PIK3CA基因突变与人类肿瘤关系的研究进展
??人类癌症关于PIK3CA基因产物p110a-磷脂酰基醇3激酶(PI3K)催化亚单位的研究已进行15年余。研究表明, PI3K家族尤其是p110α的激酶活性与关键癌基因蛋白密切相关,对肿瘤形成起重要作用[1]。而PIK3常有PIK3CA突变,PIK3扩增等激活[2]。有报道30%的人类实体瘤中存在PIK3CA基因突变,并且靶向PIK3CA的抑制剂如NVP-BKM120、XL147等已开始临床试验[3]。PIK3CA有望成为心新的治疗靶点。本文将对PIK3CA基因突变在人类肿瘤中的突变情况进行综述。
-
首发精神分裂症兴奋攻击行为与血清肌酸激酶活性的关系
精神分裂症患者兴奋攻击行为危害大,有研究认为该类行为与血清肌酸激酶活性有关[1].为此本研究对两者之间的关系进行了探讨.对象与方法一、对象为2003年5月至2004年10月在广州市精神病医院首次住院的患者,符合中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CCMD-3)关于分裂症的诊断,年龄18~60岁,平均年龄(30.7±16.9)岁,首次发病,入组前未服用任何抗精神病药物.
-
040 去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏5'-核苷酸酶的保护作用
目的: 在在体大鼠模型上从生化和酶组化的角度观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心脏的保护作用及5'-核苷酸酶(5'-NT)活性的影响, 以期为一种非创伤性预处理方式提供实验依据并探讨其机制. 方法: 将24只体重200~250 g的雄性SD大鼠分为4组, 即: Ⅰ组, 假手术组; Ⅱ组, 缺血/再灌注组, 左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血30 min后恢复再灌20 min; Ⅲ组, 经典缺血预处理组, 按Murry法进行; Ⅳ组, 去甲肾上腺素预处理组, 在缺血前15 min开始由舌静脉在5 min内缓慢滴入NE 1.6 μg. 再灌结束后, 测血清肌酸激酶活性; 原位观察心肌细胞色素C氧化酶、 5'-核苷酸酶活性. 结果: 经典缺血预处理或去甲肾上腺素预处理后缺血/再灌注心肌心肌细胞色素C氧化酶损伤性反应明显减轻(P<0.05)、血清肌酸激酶漏出减少(P<0.01); 5'-核苷酸酶活性升高(P<0.05). 结论: 去甲肾上腺素预处理及经典缺血预处理均能保护缺血/再灌注大鼠心脏超微结构、减少心肌酶漏出, 具有相似的抗心肌缺血/再灌注损伤作用, 这种作用可能与保护5'-核苷酸酶活性, 使内源性腺苷增多有关.
-
TRPM7通道激酶研究进展
TRPM7(Transient Receptor Potential melastatin 7)是一种具有阳离子通道和激酶活性双重功能的跨膜蛋白.作为非选择性的阳离子通道,其开放后可介导Mg2+、Ca2+、Zn2+等二价阳离子内流以及K+等单价阳离子外流;作为一种丝/苏氨酸激酶,其可磷酸化底物及自身,并可发挥表现遗传因子作用,参与基因表达调控等过程.TRPM7在机体各组织中均有表达,并且参与细胞内Mg2+稳态、细胞迁移与黏附等过程.结构独特、功能广泛、表达丰富等特点,使TRPM7有望成为局部脑缺血、心血管疾病、癌症等重大疾病的新治疗靶点.
-
弓形虫ROP18蛋白激酶在酵母中的表达纯化及激酶活性鉴定
目的 建立利用酵母表达系统获得有较高激酶活性的弓形虫棒状体蛋白(ROP18)激酶的表达纯化方法.方法 利用PCR技术从弓形虫基因组DNA扩增弓形虫ROP18基因,通过Gateway系统将ROP18基因克隆到酵母表达载体pEGH-A中.将表达载体pEGH-A-ROP18转化至Y258酵母菌株中并诱导表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE进行纯度鉴定;后通过激酶活性实验对纯化的重组蛋白进行激酶活性鉴定.结果 构建了弓形虫ROP18激酶重组表达质粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表达系统表达弓形虫ROP18重组蛋白,其分子量约为8.2×104 Mr,SDS-PAGE蛋白电泳显示为单一条带,并具有较高的激酶活性.结论 利用酵母细胞表达系统成功表达并纯化了有激酶活性的弓形虫ROP18蛋白激酶.
-
p38 MAPK在细胞内的定位及其对LPS刺激的反应
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)转导通路调节着生长、分化、凋亡、细胞周期、应激反应等多种细胞过程.p38通路是新近鉴定的一条MAPK信号转导通路,参与了炎症、应激、细胞周期和凋亡等病理生理过程.蛋白激酶特定的细胞内定位及其在特定刺激作用下的移位是细胞信号维持特异性转导的重要机制之一.为了探讨p3 8信号转导的过程及其特异性机制,本研究应用激光共聚焦显微镜对p38 MAPK 4种不同的亚型在单核细胞、平滑肌细胞、心肌细胞和内皮细胞在静息和受到不同刺激的条件下的细胞内定位进行了观察,发现未受刺激的静止单核细胞,p38(α)蛋白激酶处于未激活状态,弥漫性地分布于细胞中;单核细胞、平滑肌细胞、心肌细胞和内皮细胞在受到LPS刺激后,p38( α)由胞浆移位到胞核;LPS 刺激单核细胞15 min后,p38开始出现明显的细胞核移位,于L PS刺激后45 min入核量(核区荧光强度)达到峰值,之后维持于平台期.LPS诱导RAW细胞p 38激酶活性呈一过性增强,在LPS刺激后2 h其活性逐渐恢复到接近基础水平.LPS刺激RAW细胞 p38移位入核明显滞后p38激活过程,提示p38移位后入细胞核依赖于p38磷酸化活化,p38磷酸化活化及由细胞浆移位到细胞核是一系列相继发生的连续事件.用p38-红色荧光蛋白融合表达载体在哺乳动物细胞的转染实验也证实了上述结果.
-
表皮生长因子受体R497K基因多态性是进展期肺癌者有效的预后预测因子
既往研究已经证实,表皮生长因子受体(EGFR)基因R497K多态性在酪氨酸激酶信号通路中有着重要的作用,它可以影响配体的结合、酪氨酸激酶的活性以及刺激生长等.另一方面,EGFR基因激酶活性区域的突变也被证实是预测非小细胞肺癌患者服用吉非替尼或厄洛替尼疗效的有效指标.
-
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子研究进展
细胞周期与细胞癌变的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一.细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态.如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞转化、癌变.参与细胞周期调控的因子主要有:细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(Cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI).Cyclin目前发现有8个成员,分别命名为Cyclin A、B、C、D、E、F、G、H.CDK目前发现7个成员,分别命名为CDK1-7.CKI为新发现的一类蛋白,通过与CDK、cyclin或cyclin-cdk复合物的结合,抑制CDK的激酶活性,从而调节细胞周期正常、有序地进行.目前CKI分为两大家族:①Ink4(Inhibitor of cdk 4):包括P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d,其蛋白质结构与功能具有高度相似性,特异性抑制cdk4·cyclin D1、cdk6·cyclin D1的磷酸化激酶活性.②Kip(Kinase inhibition protein):包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、P57kip2,它们在N-末端具有高度的结构和功能相似性,抑制现已知的大多数cdk、cyclin的磷酶化激酶活性.
-
PKC同工酶研究进展
蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)是早被确认的蛋白激酶之一;Nishizuka等在1977年首先将大鼠脑组织中的蛋白激酶确认为PKC,发现它具有组蛋白激酶活性,并能被限制性蛋白水解酶所激活。随后的研究证明,PKC在神经细胞功能的调节中(如神经递质的释放、突触塑性、神经内分泌、基因表达、细胞变性及凋亡等)起着较为关键的作用。
-
C-Met基因在妇科肿瘤中的研究进展
原癌基因C-Met属于生长因子受体类,编码肝细胞生长因子(HGF)受体,具有络氨酸激酶活性.是细胞内信息传导的重要组成部分.HGF激活的C-Met受体与细胞内的PLCγ、G蛋白及多种癌基因产物直接作用,是细胞生长、分化的重要调节者.具有促进细胞增殖、分化、控制细胞移动、诱导细胞形态变化、细胞毒性等作用.C-Met基因的激活与多种人类肿瘤的发生、发展、预后有关.C-Met基因的深入研究对肿瘤的诊断、治疗、预后有着重要意义.……
-
肺炎链球菌组氨酸激酶VicK的全长表达及其保守性分析
目的 全长表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白并制备其多克隆抗体,对其进行保守性分析和亚细胞定位,为其作为抗菌药物筛选靶点提供实验依据.方法 利用分子生物学技术构建pET-28a(+)-vicK原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达,经Ni-NTA亲和纯化后,通过试剂盒检测其激酶活性.将纯化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,并用ELISA和Western blot方法分别检测其多克隆抗体的效价及特异性.采用流式细胞术对VicK蛋白进行表面定位分析.结果 成功获得VicK全长蛋白,酶活性检测结果提示具有ATP激酶活性.VicK蛋白免疫小鼠获得效价达1:125000以上的多克隆抗体.Western Blot结果显示其能特异地识别1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白.流式结果表明VicK蛋白主要位于胞内.结论 获得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全长蛋白,且该蛋白保守表达于S.pn胞内.
-
肺炎链球菌双组分系统WalK蛋白的截短表达及激酶活性分析
目的 对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae, s. pn)双组分系统WalK蛋白进行截短表达及激酶活性分析.方法 构建重组表达菌株,通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,利用Kinase-Glo()化学发光试剂盒检测蛋白活性,并用ELISA和Westernblot方法鉴定其抗原性和抗体特异性.结果 成功获得高浓度、高纯度、有活性的截短WalK重组蛋白.ELISA与WesternBlot检测结果均表明目的蛋白具有良好免疫原性及抗体特异性.结论 成功获得高表达的S. pnWalK截短蛋白,且该蛋白具有较高的激酶活性、免疫原性及抗体特异性,本研究为后续以该蛋白为靶点的疫苗研发及抗菌药物筛选提供实验基础.
-
大豆异黄酮与皮肤美容
众所周知,大豆是一种营养价值极高的植物性食物,除富含蛋白质、不饱和脂肪酸外,还含有其他许多生物活性成分,大豆异黄酮就是其中的一种.大豆异黄酮具有雌激素样作用,抗氧化、抑制酪氨酸蛋白激酶活性等多种重要药理作用.近年来有关大豆异黄酮在皮肤美容中的应用开始受到人们的关注,本文对此领域的研究概况进行简要综述.