首页 > 文献资料
-
噬菌体裂解系统及其相关蛋白的研究进展
1896年,Hankin描述了一种可以限制霍乱流行、传播并有抗菌活性的物质-抗霍乱弧菌素,随后Gamaleya在枯草杆菌中发现了类似现象[1].噬菌体分别由Twort于1915年和Felix d'Herelle于1917年独立发现[2].噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的特异性病毒,即具有不同特性的、显示出长时期多种变异、适应和分化特征的超微生物.其中95%是双链DNA有尾噬菌体;其他少数噬菌体的颗粒大小、蛋白外壳和生活周期等差别很大.大多数噬菌体导致宿主细胞裂解,丝状噬菌体f1和M13等并不裂菌.噬菌体对其宿主的破坏作用很早就用于杀灭致病菌的研究.随着细菌耐药性的出现,对多种耐药性病原菌进行了很多探索性噬菌体治疗研究,现已有数百例关于噬菌体成功治疗人体感染的文献报道[3].噬菌体活体治疗存在很大的局限性,为寻找安全可靠的替代治疗方案,噬菌体裂解机制的研究越来越受到关注.
-
潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素lukF-PV基因的克隆及原核表达
潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素(PVL)是金黄色葡萄球菌所产生的一种毒素蛋白,由lukF-PV和lukS-PV蛋白组成,编码基因分别为lukF-PV和lukS-PV,双组分在PML形成聚合体,通过细胞打孔机制引发白细胞裂解和凋亡 [1].PVL近年来在世界范围内呈上升趋势,1999年美国CDC报道4例儿童患者死于PVL阳性的金黄色葡萄球菌引起的脓毒症,其中3例合并坏死性肺炎和(或)脓胸,由此引起临床高度重视 [2].有报道提示,PVL阳性金黄色葡萄球菌肺炎患者在住院48 h内死亡率为37%,终死亡率高达75% [3].目前检测PVL主要依靠分子生物学方法 [4-5],但此类方法 程序繁琐,且成本较高,故探讨建立操作简单易行的免疫学方法 显得尤为重要.本研究旨在通过分子生物技术,克隆并表达lukF-PV蛋白,为建立PVL的免疫检测方法 奠定基础.
-
清除乙型肝炎病毒的非细胞裂解机制
乙型肝炎病毒(HBV)的感染过程,也是机体清除HBV的过程,两者密不可分.近年来的研究表明,除了细胞裂解并清除HBV感染的机制以外,还存在清除HBV的非细胞裂解机制,而后者更具有实际应用价值,因为在达到清除HBV的目的同时,还能不损伤HBV感染的肝细胞,或者只有很轻程度的肝细胞损害.研究中发现干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、一氧化氮以及一些未知蛋白质因子的参与,是清除HBV的非细胞裂解机制的重要因素.研究清除HBV的非细胞裂解机制,具有十分重要的实际应用前景.
-
对C-肽生理作用的新认识与临床应用前景
C-肽(C-P)是胰岛素合成过程中,由胰岛素原(proinsulin)在β-细胞裂解与胰岛素等分子分泌进入门脉循环,1967年发现之初曾认为具有胰岛素类似的生理作用,但随后研究没有证明其对糖、脂代谢的作用,而被认为是胰岛素分泌过程产生的"废物",20世纪70年代中期被临床用为监测糖尿患者β-细胞残余功能的标志物.
-
ZD1839对免疫效应细胞裂解人肺腺癌A549细胞作用的影响
ZD1839(IressaTM)是选择性表皮生长因子(EGF)受体酪氨酸激酶抑制剂,能阻断参与细胞增殖的信号转导通路,是目前实体瘤靶向治疗的重要药物[1].试验证明,ZD1839可以抑制肺腺癌的增殖[2-4].2003年ZD1839被美国FDA批准为铂类和紫杉类药物化疗失败,局部进展或者转移的非小细胞肺癌(NSCLC)的单方治疗药物[5].ZD1839抑制肺腺癌增殖的效果较好,其机制可能与上述各环节有关;但是,它能否通过影响机体免疫系统,尤其免疫效应细胞发挥抗癌作用尚不清楚.所以,我们以表达EGF受体的人肺腺癌A549细胞为研究对象,研究ZD1839对自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)裂解A549细胞作用的影响.
-
利用丙氨酸突变探究PSMα4结构与功能的关系
目的 探究金黄色葡萄球菌酚可溶性调控蛋白α4(PSMα4)氨基酸残基发生突变后,对其细胞毒、趋化等功能的影响.方法 利用人工合成将多肽PSMα4中的非丙氨酸残基进行丙氨酸扫描定点突变,比色法测定溶血活性,LDH试剂盒测定细胞HCMEC/D3和PMN裂解程度,圆二色性(CD)检测以比较其结构上的改变,荧光标记法检测PMN的趋化强度,后利用同源模拟初步预测了PSMα4的三维立体结构.结果与结论 PSMα4的I3、V4、I15、I17位氨基酸残基替换为丙氨酸后其细胞毒作用有所增强,结合CD的结果发现,细胞毒作用与其α螺旋程度呈正相关;PSMα4的第I7、I8、F18位氨基酸残基是影响其趋化作用的关键位点.
关键词: 金黄色葡萄球菌 酚可溶性调控蛋白α4 细胞裂解 趋化 -
溶瘤病毒治疗肿瘤的研究进展
癌症为威胁人民健康和生命的重大疾病之一.我国目前有癌症患者约450万人,每年的死亡率在30%以上,每年新增患者约200万人[1].治疗癌症的方法主要是手术切除、放疗和化疗,放、化疗同时给人体正常细胞也带来了严重的损伤.因此,肿瘤的生物治疗及靶向治疗正成为有前景和活跃的领域.天然病毒多具有感染、复制和(或)杀伤细胞的能力.一些天然病毒和经过某些人工改造的病毒对正常细胞和肿瘤细胞的感染、复制和杀伤细胞的能力有较大的差异,即在正常细胞内无复制或杀伤作用,而在同一机体内的肿瘤细胞中则能选择性复制和溶解肿瘤细胞,细胞裂解后释放的病毒颗粒又会感染其它肿瘤细胞,如此不断循环反复增殖从而达到杀灭大量癌细胞作用,这类病毒统称为溶瘤病毒(oncolysis virus).
-
HLA-G与类风湿性关节炎相关关系的研究进展与趋势
人类白细胞抗原G(human leukocyte antigenG,HLA - G)属于非经典HLA Ⅰ类抗原,早发现表达于母胎界面的绒毛外滋养层细胞,在胎儿逃避母体异体识别过程中发挥重要作用.HLA -G具有抑制免疫细胞的功能,如抑制自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的细胞裂解、抑制T细胞增殖,进一步研究发现它还能调节Th0细胞分化转向Th2细胞、产生Treg细胞.类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以滑膜组织炎性增生、关节进行性破坏为特征的慢性炎症自身免疫性疾病.其病因尚不明确,近研究发现,除各种炎症细胞逃避死亡,异常增生的滑膜组织类似于局限性侵袭生长的肿瘤外,还有Th1/Th2细胞失衡、Treg细胞减少,造成关节的破坏.本文探讨它们之间的相关关系.
-
高通量检测蛋白磷酸化技术研究
目的 研究常规细胞裂解法与AlphaScreen技术结合检测细胞内蛋白磷酸化水平的可行性. 方法 使用常规配制的细胞裂解缓冲液裂解细胞,分别用传统的Western blot方法和AlphaScreen技术检测在表皮生长因子(EGF)刺激下乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞内AKT磷酸化(p-AKT)水平的变化. 结果 使用AlphaScreen技术检测到的p-AKT变化趋势和幅度与使用传统Western blot方法检测所得结果一致,同时AlphaScreen技术所得结果更快速. 结论 常规细胞裂解法所得细胞裂解液可用于AlphaScreen技术检测细胞内蛋白磷酸化水平,该方法使AlphaScreen技术成为一种可以替代Western blot法检测组织和细胞内蛋白激酶活性的高效和灵敏的手段.
关键词: 细胞裂解 AlphaScreen技术 蛋白磷酸化 -
抗肿瘤免疫研究的体外检测指标
随着分子生物学及相关技术的发展,肿瘤的免疫治疗已成为当前令人关注的研究领域.在机体抗肿瘤免疫中,各种淋巴细胞都有可能发挥作用,但大量研究表明,T细胞扮演着重要的角色,尤其是CD8+细胞毒性T细胞(CTLs)和CD4+辅助T细胞(Th),前者可识别肿瘤细胞表面被MHC Ⅰ类分子递呈的抗原多肽,导致肿瘤细胞裂解;后者可使CTL前体细胞增殖,产生大量效应细胞.所以在肿瘤免疫治疗中,检测CD8+CTL反应和Th1型CD4+T细胞的数目和功能是评价疗效的关键.
-
抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因
HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属,其基因组由松弛环状、部分双链DNA(rcDNA)组成.负链较长,约为3 200个核苷酸(nt),其5'端共价结合病毒多聚酶;正链较短,长度可变,为1 700~2800nt,在其5'端有寡聚核糖核苷酸帽.HBV基因组具有4个开放读码框(ORF),通过不同的起始密码子(ATG)编码至少7个蛋白,包括3个表面抗原:包膜蛋白前-S1、前-S2、S,HBcAg,HBeAg,病毒多聚酶(P)及X蛋白(HBxAg).包膜蛋白的作用主要是允许病毒核壳体进、出宿主肝细胞而不引起细胞裂解.前-S1蛋白由前-S1基因编码,前-S1基因区的长度在不同亚型问有所差别,在324~357 nt.前-S1蛋白在HBV生物学中具有双重作用,它既是病毒包膜装配过程中与核心颗粒结合的配体,也是在病毒感染过程中与一个尚未鉴定出的宿主细胞受体相互作用的底物.许多研究表明,HBV前-S1蛋白具有反式激活作用[1-4].
-
细菌溶血素毒性和致病机制研究进展
许多病原菌能产生溶血素溶解红细胞,但近年发现细菌溶血素还能损伤或致死多种有核细胞和血小板.根据分子结构、结合细胞方式、膜孔道形成机制等不同,可将大多数细菌溶血素分类为重复子毒素家族(repeats in toxin family,RTX)和胆固醇依赖细胞溶素家族(cholesterol-dependent cytolysin family,CDC)毒素.细菌溶血素可通过膜损伤、细胞溶解或裂解、离子失衡相关病变、细胞凋亡或坏死性凋亡以及TLR2/4介导的NF-κB、p38MAPK、JNK信号传导通路和NLRs介导的NLRP3炎症小体引发强烈的炎症反应并导致炎症性组织损伤,从而在细菌感染过程中发挥重要致病作用.
-
核电工作者和其他健康人群血小板数量的比较
血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解、胞质脱落而成血液中体积小的血细胞.辐射对整体动物血小板的作用表现为外周血内血小板数目的减少,这是早已为人们熟知的事实[1].有研究证实,血小板生成量与照射剂量有一定相关[1].
-
核酸疫苗大规模质粒纯化研究进展
DNA疫苗又称基因疫苗,是指将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注射到动物体内[1],使外源基因在活体内表达,产生抗原激活机体的免疫反应,从而诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,具有预防和治疗疾病的作用.核酸疫苗具有减毒疫苗的优点,同时基本不存在逆转的危险[2],因此被认为是继传统疫苗、基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗.随着DNA疫苗从实验室进入临床研究和批准上市[3],必须开发质粒DNA的大规模生产技术[4].因此,我们对近年来国内外大规模提取质粒的各项方法进行了总结和对比.现综述如下.
-
槲皮素对NIH-3T3细胞氧化损伤的保护作用
目的探讨槲皮素对NIH-3T3细胞氧化损伤的保护作用.方法取处于对数生长期的3T3细胞,平均分为以下四个实验组.槲皮素前保护组(Q1组):先加含有50μmol/L槲皮素培养液培养24h,再换含有0.5mmol/L H2O2的培养液培养30min.槲皮素后保护组(Q2组):先加含有0.5mmol/L H2O2的培养液培养30min;再换含有50μmol/L槲皮素培养液培养24h;H2O2损伤组(H2组):先加含有0.5mmol/L H2O2的培养液培养30min,再换仅含有10%的胎牛血清的培养液培养24h.对照组(C组):仅加10%胎牛血清的DMEM培养液培养24h.收集并裂解各组细胞,检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、NOS、NO、MDA的变化,应用MTT实验检测3T3细胞的生存率.结果 Q1与Q2、H2组相比,Q1组细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH均有增加,NOS、NO无明显改变,MDA减少,细胞存活率明显增加.结论槲皮素可能是通过上调抗氧化酶系活性对3T3细胞的氧化损伤产生保护作用.
-
条件复制腺病毒Ad-MK联合丝裂霉素对膀胱癌细胞的作用
条件复制腺病毒指在正常细胞内无复制或杀伤作用,而在同一机体内的肿瘤细胞中可选择性复制和溶解之,细胞裂解后释放的子代病毒颗粒又感染邻近的肿瘤细胞,如此不断循环反复增殖从而达到杀灭癌细胞的肿瘤特异性增殖型病毒[1].
-
葡萄糖诱导的体外培养人脐静脉内皮细胞膜中葡糖基磷脂酰肌醇锚式补体活化膜调节物(CD59,CD55)的下调
研究表明糖尿病血管病变发生的主要原因是内皮细胞功能异常,高血糖又是加速内皮功能紊乱的重要原因之一.糖尿病患者中还可发现补体系统活性增加,导致糖尿病患者肾脏血管壁、肾小球及系膜区补体分子沉积;血浆中可溶性非细胞裂解的C5b-9的浓度及代表内皮功能紊乱的von Willebrand因子浓度增加.补体介导的自体细胞损伤有以下几种调节因子:衰败加速因子(DAF、CD55)、膜共因子蛋白(MCP、CD46)、C3b受体、唾液酸和膜溶解反应抑制物(MIRL、CD59)等. 本研究中,我们报道体外用高浓度D-葡萄糖培养的人脐静脉内皮细胞下调表达与GPI锚接的 CD55和CD59,而对跨膜分子CD46表达没有影响,同时我们也显示与D-葡萄糖一起培养的内皮细胞在加入从糖尿病患者血浆中纯化的抗内皮细胞抗体(AECA)和新鲜人补体后易于产生 C5b-9沉积.