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联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体的制备及体外评价
目的 制备联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体并进行体外评价.方法 采用薄膜分散法制备载阿霉素阳离子脂质体(doxorubicin cationic liposomes,DCL),与siRNA静电复合得联合载药阳离子脂质体(liposome complexes,lipoplexes);动态激光散射法测定lipoplexes的粒径和zeta电位;透射电镜观察lipoplexes形态;超滤离心法测定lipoplexes中阿霉素和siRNA的包封率;琼脂糖凝胶阻滞实验考察lipoplexes中siRNA的结合能力;荧光显微镜观察MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取情况.结果 所制备的lipoplexes外形圆整、分散均匀,当(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵与siRNA质量比为20时,其平均粒径为(125.7±2.7)nm,zeta电位为 (45.8±1.5)mV,阿霉素包封率为(52.3±2.6)%,siRNA包封率为(88.1±1.8)%,且lipoplexes中siRNA可以紧密结合.与游离siRNA相比,lipoplexes可显著增加MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取.结论 联合包载阿霉素和siRNA阳离子脂质体体外性质良好,能增加MCF-7/ADR细胞对siRNA的摄取,可用于小分子化疗药物和siRNA的共输送.
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拟低密度脂蛋白脂质核心的制备及性质考察
目的 制备拟低密度脂蛋白纳米脂质载体(recombinant low density lipoprotein,rLDL)的脂质核心部分并考察其制剂学和生物学性质.方法 采用乳化-超声法制备脂质核心,以粒径大小为指标优化制备工艺及处方.在获得制剂学优处方基础上以细胞摄取率为指标,使用星点设计法优化生物学处方,并比较两种处方的制剂学性质.结果 所制备的脂质核心溶液每毫升中含胆固醇0.25 mg、胆固醇油酸酯6.00 mg、磷脂4.50 mg、三油酸甘油酯1.50 mg为较优的制剂学处方,其细胞摄取率约为21.22%;每毫升制剂中含胆固醇0.32 mg、胆固醇油酸酯7.80 mg、磷脂3.86 mg、三油酸甘油酯1.52 mg为较优的生物学处方,摄取率约为34.17%.制得的两种脂质核心粒径分别为(180±23)nm和(200±27)nm,4℃静置15d外观均无明显变化.结论 纳米脂质核心生物学优处方制备工艺简单、粒径小、稳定性好、细胞摄取率高.
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白蛋白包覆纳米脂质载体的制备与评价
目的 制备白蛋白包覆纳米脂质载体,考察其理化性质及生物学性质.方法 采用乳化超声-低温固化法制备白蛋白包覆纳米脂质载体.在前期单因素考察结果的基础上,利用三因素三水平Box-Behnken效应面法筛选佳处方,并对其外观形态、粒径分布、zeta电位及体外释放等理化性质进行考察.通过细胞摄取实验考察载体在不同时间及不同质量浓度条件下,在MCF-7细胞中的摄取情况.结果 优处方为固液脂质质量比为2.01,大豆卵磷脂与硬脂酸聚氧乙烯(40)酯质量比为8.55,牛血清白蛋白的质量浓度为2.13 g·L-1.包载香豆素-6的载体外观多呈圆形,粒径分布均匀,平均粒径为(209.31±5.20) nm,zeta电位为-(46.5±20) μⅤ,48 h累计释放49.36%.MCF-7细胞对40 μg· L-1的载体4h的摄取量达到饱和.结论 Box-Behnken效应面法可用于预测和优化白蛋白包覆纳米脂质载体的处方;载体体外释放符合缓释制剂的要求;MCF-7细胞对载体的摄取具有时间质量浓度依赖性.
关键词: 牛血清白蛋白 纳米脂质载体 Box-Behnken效应面法 理化性质 细胞摄取 -
载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒的细胞毒性及细胞摄取
目的 制备载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒(mesoporous silica nanoparticles,MSN),对其理 化性质及细胞摄取行为进行初步研究.方法 通过聚合法制备MSN,透射电镜表征纳米粒的形态,动态光散射粒径测定仪测定粒子的平均粒径及分布.紫外分光光度计测定阿霉素的负载行为,MTT比色分析法研究粒子的细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察其人乳腺癌MCF-7细胞对载药粒子的摄取.结果 纳米粒分布均一,平均粒径约70 nm(PDI<0.1),载药量质量分数达到20%.MCF-7细胞对载药粒子的摄取较快,空白纳米粒具有较低的细胞毒性.结论 介孔二氧化硅纳米粒具有较高的药物载药量和良好的生物相容性,能较快地被对人乳腺癌MCF-7细胞摄取,有望成为一种新型的药物化疗载体.
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pH敏感聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖-阿霉素共聚物胶束的制备及性质考察
目的 合成pH敏感两亲性接枝共聚物聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖-阿霉素(PEOz-g-CS-Hyz-DOX),采用透析法制备阿霉素pH敏感两亲性共聚物胶束并对其相关的制剂学性质、细胞抑制及细胞摄取行为进行考察.方法 分别利用透射电镜(TEM)、动态光散射法(DLS)和zeta电位分析仪对胶束的形态、粒径和表面电位进行表征;采用透析法考察载药聚合物胶束的体外释放行为;采用MTT法考察聚合物胶束的细胞抑制作用.结果 反应产物使用红外及核磁表征,确定为目标产物;PEOz-g-CS-Hyz-DOX聚合物胶束载药量为4.2%.采用透析法制备的载阿霉素聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖丁二酸单甲酯胶束(PEOz-g-CSMS/DOX)载药量可达5.62%,包封率为59.35%;两种胶束的粒径均较小且粒径分布很窄,胶束粒子为类球形且分散良好;两种胶束释药行为体现pH敏感性;PEOz-g-CS-Hyz-DOX聚合物胶束体外细胞毒作用及细胞摄取均优于PEOz-g-CSMS/DOX胶束和阿霉素溶液.结论 以壳聚糖为载体的化学腙键释药胶束作为抗肿瘤药物的药物传递系统具有可行性及良好的应用前景.
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替尼泊苷多层包衣白蛋白纳米粒的制备工艺及体外抗肿瘤活性
目的 以人血清白蛋白为载体包载替尼泊苷,经过包衣修饰后制备包载替尼泊苷的多层包衣纳米粒(teniposide-encapsulated multilayer nanoparticles,P-CS-NP),以期降低药物的不良反应并改善其体外抗肿瘤活性.方法 以粒径、多分散指数和载药率为评价指标,采用单一因素法筛选出替尼泊苷白蛋白纳米粒的优处方工艺,通过加入壳聚糖和聚谷氨酸聚乙二醇共聚物进一步制备多层包衣白蛋白纳米粒,筛选得到优包衣量.以游离的替尼泊苷作为参比,用MTT法测定纳米粒对人肺癌A549细胞的体外细胞毒性,并用流式细胞仪和共聚焦显微镜测定和观察多层包衣纳米粒的细胞摄取率和细胞摄取行为.结果 确定了多层包衣纳米粒的处方及制备工艺.多层包衣纳米粒的体外细胞毒性比游离的替尼泊苷小,摄取具有时间依赖性,与壳聚糖共孵育的纳米粒的细胞摄取量增加,入胞后纳米粒主要分布在细胞质.结论 白蛋白纳米粒能被壳聚糖和聚谷氨酸聚乙二醇共聚物包衣修饰,多层包衣纳米粒可以作为替尼泊苷的药物递送载体,其体外细胞毒性降低.
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水通道蛋白在女性生殖系统中的研究进展
水是构成所有活细胞主要的成分,细胞摄取和排出水分是生命基本的活动之一.水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是特异转运水的蛋白家族,能显著增加细胞膜水的通透性,参与水的分泌、吸收及细胞内外水平衡的调节,它的发现在分子水平揭示了水跨膜转运调节的基本机制.
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纳米二氧化硅颗粒对HL-7702细胞黏附和迁移能力的影响
目的:探讨纳米二氧化硅颗粒对HL-7702细胞黏附迁移能力的影响,为其安全性评价提供实验依据.方法:体外培养的人正常肝细胞株HL-7702随机分为对照组和纳米二氧化硅颗粒暴露组,暴露浓度分别为12.5、25.0、50.0和100.0 mg·L-1.采用透射电子显微镜(TEM)及动态光散射粒度分析仪(DLS)对纳米二氧化硅颗粒进行观察.细胞处理24 h后,细胞黏附实验检测细胞黏附能力;划痕修复实验检测细胞迁移能力,TEM观察细胞对纳米二氧化硅颗粒的摄取及颗粒在细胞内的分布.结果:TEM观察,纳米二氧化硅呈圆形,颗粒大小均匀一致,分散性良好,颗粒平均粒径为(67.42±5.69) nm.DLS法检测,纳米二氧化硅颗粒在无血清RPMI-1640培养液中水合粒径为(134.13±2.78) nm,而在含1%、5%和10%血清的RPMI-1640培养液中的水合粒径明显增大.细胞黏附实验及划痕修复实验,与对照组比较,在无毒剂量下,纳米二氧化硅颗粒暴露组细胞的相对黏附率和损伤修复率明显下调(P<0.05),且随着作用浓度的升高下调作用愈加明显.与对照组比较,在无毒剂量作用下,纳米二氧化硅暴露组大量的纳米二氧化硅颗粒已被细胞摄取,颗粒主要以成簇的形式分布于内吞小泡中或散在分布于胞质中,可见细胞膜凹陷、包裹吞噬纳米颗粒的过程.结论:纳米二氧化硅颗粒能够抑制HL-7702细胞的黏附和迁移能力,并呈一定的浓度依赖效应.
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初步评价99mTc-MIBI在诊断重度淤胆型婴儿肝炎综合征中的价值
99mTc-EHIDA肝胆显像在鉴别诊断婴儿肝炎综合征及先天性胆道闭锁方面的价值已得到业内公认,其对先天性胆道闭锁的诊断灵敏度可达100%[1].但由于EHIDA本身的药物结构,肝细胞摄取显像剂的多少与血液内胆红素含量呈负相关.对于那些重度淤胆型的新生儿来说,血液内胆红素含量很高,肝细胞功能受损,传统的99mTc-EHIDA肝胆显像常常会出现假阳性的结果[2].而99mTc-MIBI作为传统心肌灌注显像剂,其经肝胆排泄也为大家熟知.如何将二者联合,取长补短,我们进行了初步探讨,现总结如下.1资料和方法1.1实验材料取实验用新西兰兔2只,雌雄各一,体重约100克,由厦门大学动物实验中心提供.采用静脉注射氯氨酮与氯丙嗪复合麻醉.麻醉满意后由耳缘静脉注射99mTc-MIBI mCi,用平行孔准直器即时采集动态图像,1min/帧,共60帧[3].隔日对同一实验兔行上腹部正中切口,探查胆总管下段并用丝线结扎之,缝合切口,形成胆总管闭锁动物模型.其余注射及显像条件完全等同未结扎胆总管时.
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近红外标记的维甲酸类造影剂用于骨肉瘤成像的研究
目的:开发一种具有"找寻、治疗、可视"功能的生物造影剂.方法:采用化学合成的方法得到近红外标记的维甲酸类造影剂,并进行骨肉瘤细胞的体外结合试验;皮下接种裸鼠,构建骨肉瘤的异种移植模型,持续10d对裸鼠进行体内光学成像,观察药物在体内的重新分布,并终用免疫组织化学法对成像结果进行验证.结果:体外细胞结合试验证明,合成的维甲酸造影剂可以很好的与人的骨肉瘤细胞相结合,进而内化.近红外光学成像表明,该造影剂可用于骨肉瘤的早期和晚期诊断.全身成像显示了在肿瘤和肝脏的高信号强度.正电子发射断层显像(PET)显示肿瘤部位具有较高水平的18F-FDG代谢.剂量增加反应和毒性试验表明,高剂量的维甲酸造影剂必然与其全身毒性息息相关.免疫组化染色显示,发光组织中肿瘤细胞呈阳性.结论:合成的近红外标记的维甲酸造影剂可以用于检测人类骨肿瘤的异种移植.实现个体化分子诊疗的同时减少全身毒性.
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液体酶法高密度脂蛋白胆固醇试剂盒的研制和临床应用
高密脂蛋白胆固醇(HDL)具有抗动脉硬化的作用,特别是HDL-C能清除外围组织的胆固醇.HDL中的胆固醇浓度比其它脂蛋白都低,这就形成胆固醇向HDL分子流动的浓度梯度,HDL-C还能抑制动脉壁平滑肌细胞摄取LHDL,防止胆固醇在细胞内过多堆集.由此可见,血清HDL-C测定是动脉粥样硬化性冠心病的重要指标之一.
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磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体体外抗肿瘤作用的影响
目的 比较3种不同磷脂,其组成为大豆磷脂(SPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、复合磷脂(SPC∶ HSPC为3∶1,摩尔比)马钱子总生物碱隐形脂质体的体外肝癌细胞SMM7721的摄取特性与抗肿瘤作用.方法 硫酸铵梯度法制备马钱子总生物碱隐形脂质体并考察其基本药剂学性质,MTT法比较马钱子总生物碱溶液和3种不同磷脂组成隐形脂质体的抗肿瘤效果,流式细胞仪技术测定肝癌细胞对香豆素-6标记的3种不同磷脂组成隐形脂质体的摄取率.结果 不同磷脂组成马钱子总生物碱隐形脂质体的体外抗肿瘤效果与SMMC-7721细胞摄取量均具有显著差异,马钱子总生物碱溶液、复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的IC50分为64.4、17.8、29.6、40.9μg/mL,肝癌细胞对香豆素-6标记的复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的转染率分别为92.1%、86.2%、18.6%.结论 复合磷脂脂质体作为马钱子总生物碱的载体,能显著提高药物进入肝癌细胞的摄取量,增强体外抗肿瘤效果,为临床用药提供了理论依据.
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胆红素在肝脏的代谢及调节机制研究进展
胆红素是血红素的代谢产物,主要来源于红细胞血红蛋白的分解代谢,其他来源于肌红蛋白,细胞色素等的破坏降解.胆红素的清除在肝脏完成.在临床上,利用重氮法将人体内胆红素分成两种形式:直接胆红素和间接胆红素.然而,利用高效液相色谱分析,可将胆红素细分为4个组分:(1)α胆红素,即非结合胆红素.(2)β胆红素,即单葡萄糖醛酸胆红素;(3)γ胆红素,即双葡萄糖醛酸胆红素;(4)δ胆红素(Bδ),该胆红素与血清白蛋白结合,不能被肝细胞摄取,循环于血清中,在血浆中与清蛋白共价结合.它也是一种结合胆红素,但它不同于正常条件下,游离胆红素与血液中清蛋白松散结合后运输至肝脏时的形式,它是各种原因导致的结合胆红素反泵入血液循环,超过肾阂值,在非酶促条件下与白蛋白结合形成的.未进入肝细胞进行葡糖醛酸化的胆红素是非结合胆红素( unconjugated bilirubin,UCB),在血清里大多数与白蛋白结合而降低毒性;进入肝细胞经过生物转化的葡糖醛酸胆红素又名结合胆红素,具有亲水性[1].
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有机溶质转运体α-β在胆汁酸代谢及胆汁淤积症中的作用
过去20多年的研究发现了数个在胆汁酸肠肝循环中重要的转运体,包括肝细胞摄取胆汁酸的钠离子牛磺胆酸共转运多肽(Na-Taurocholate Co-transporting Polypeptide,NTCP),肝细胞输出胆汁酸的胆盐输出泵(Bile Salt Export Pump,BSEP)及回肠顶端膜刷状缘吸收胆汁酸的顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(Apical Sodium-dependent Bile acid Transporter,ASBT).但是,肠上皮细胞基侧膜控制胆汁酸分泌至门静脉血流的转运体近才被发现,被命名为有机溶质转运体α-β(Organic Solute Transporter alfa-beta,OSTα-OSTp).随后的研究对OSTα-OSTβ的分子学特点、组织细胞分布、转运功能、表达的调控,以及在胆汁淤积状态下的适应性改变等有了进一步了解,为将来深入研究打下了基础.
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老年静脉疾病的诊断与治疗
下肢静脉疾病是老年人的常见病和多发病.在下肢静脉系统患病时,静脉的血液动力学发生变化.下肢静脉系统压力增高,是引起下肢疾病临床症状的主要原因.下肢静脉高压使浅静脉扩张,毛细血管床扩大和毛细血管内皮细胞孔隙增大.血液中的大分子物质,如纤维蛋白原、红细胞等逸入组织间隙.同时,血液与组织的纤溶活性不足,纤维蛋白原不能分解蓄积、聚合成不能溶解的纤维蛋白复合物.这些复合物沉积在毛细血管周围,形成阻碍皮肤和皮下组织细胞摄取氧气和其他物质的屏障,红细胞瓦解则形成色素沉着.
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肿瘤坏死因子α对3T3-L1脂肪细胞摄取葡萄糖影响的研究
胰岛素抵抗(IR)在2型糖尿病的发生、发展及并发症的形成中起着非常重要的作用.肥胖是产生IR的一个重要原因,但其致病机制比较复杂.国外研究报道脂肪组织来源的TNFα过度表达影响胰岛素的生物学作用.为此,我们研究TNFα对脂肪细胞(3T3-L1)葡萄糖摄取的影响.
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HA RIA在慢性肾功能衰竭中的应用
透明质酸(hyaluronic acid,HA)是由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖为双糖单位组成的直链高分子多糖.由各组织间质细胞合成,经淋巴通路入血液,由肝脏内皮细胞摄取降解[1],小分子HA主要由肾脏滤过排出[2].很多研究表明,HA是反映肝脏内皮细胞功能和肝硬化的实用指标[3],对肝纤维化的诊断和预后有很大的临床作用,但HA在肾病的检测中应用较少.本文选取了80例肾功能衰竭患者,分别检测血清HA,尿液HA水平及其血清肌酐含量,研究其相关性,探讨HA的检测在慢性肾衰中的应用价值.
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HA RIA在肝病诊断中的应用价值
透明质酸(hyaluronic acid, HA)是一种氨基多糖,由机体各组织的间质细胞合成,经肝内质细胞摄取分解.肝病患者由于肝细胞受损,血中HA浓度显著增高[1].本文采用RIA对557例肝病患者血清HA含量进行了检测,以观察在肝硬化、肝癌、肝炎诊断中的临床价值.现将结果报告如下.
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DM2患者治疗前后的血脂、β2-m、尿酸和TNF-α测定的分析
2型糖尿病(DM2)是一种全身代谢性疾病,脂质代谢紊乱,促进动脉平滑肌细胞摄取胆固醇的增加,β2-m是DM2肾脏早期损伤的敏感指标.高尿酸血症是DM2心脑血管疾病形成的高危因素,TNF-α具有广泛的生物活性,也是重要的炎性因子.糖尿病早期胰岛β细胞的功能损害是可逆的,而后期可导致β细胞不可逆的功能损害.为此,我们进行了DM2患者治疗前后血脂、血清β2-m、尿酸(SUA)和TNF-α测定的临床分析.现将结果报道如下.
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药源性高钾血症
某些药物用于有潜在肾衰或其它钾内环境紊乱的病人,可致高钾血症.高危人群包括中、重度慢性肾衰、醛固酮减少症以及对醛固酮钾分泌作用反应低下等相关疾病的病人.住院病人高钾血症发生率按所用定义不同,据报道在13%(血清钾>6.0mEq/L)到10%(> 5.3mEq/L).35%到75%住院病人的高钾血症为药物引起.此外,营养和草药补充剂、胃肠外营养、食盐替代品和低钠罐头食品也可引起.本文高钾血症指血清或血浆钾水平>5.3mEq/L.调节钾处置的细胞机制(Na-K-ATPase泵活性、钠通道和钾通道功能)受药物干扰会引起高钾血症.产生高钾血症一般有三个主要原因:钾摄入过量、细胞摄取钾障碍或肾排泄钾减弱.