两亲性嵌段共聚物普朗尼克的细胞毒性及细胞摄取

目的:考察不同型号、混合普朗尼克对MCF-7及耐药MCF-7的细胞毒性和细胞摄取,筛选出可供后续胶束研究的混合普朗尼克优配比.方法:选取Pluronic F68、F127、P85、P105、P123,按HLB值分为2组,以一定比例交叉混合,采用CCK-8法和高效液相色谱法,测定普朗尼克、混合普朗尼克对MCF-7及耐药MCF-7的细胞毒性和细胞摄取量.结果:试验结果表明,F68、F127对细胞的毒性较小,而P85、P105、P123对细胞的毒性相对较大;当2种普朗尼克配比使用的质量浓度小于100μg· mL-1时,MCD-7及耐药MCF-7 2种细胞的存活率均大于70％.随着混合普朗尼克的浓度增加,细胞毒性均逐渐增强;F68与P85配比使用时,细胞毒性大,且配比浓度为1∶4时的细胞毒性大于1∶2.Pluronic P85、P105、P123均可促进肿瘤细胞的药物摄取,Pluronic F68、F127基本不促进药物的摄取.F127-P123较其他混合普朗尼克表现出更强的摄取能力.结论:随着HLB值的降低及浓度的增大,普朗尼克对MCF-7及耐药MCF-7细胞的毒性增加.混合普朗尼克可以促进肿瘤细胞对于化疗药物的摄取.

正电化修饰的HPMA聚合物-阿霉素接合物的制备表征及对肿瘤细胞摄取的影响

目的:制备2种正电化修饰的N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)聚合物-阿霉素接合物并表征,分别考察2种接合物的正电基团含量对肿瘤细胞摄取的影响.方法:制备侧链带伯胺基的HPMA聚合物-阿霉素接合物(pHPMA-DOX-AP-MA)和侧链带胍基的HPMA聚合物-阿霉素接合物(pHPMA-DOX-GPMA),对其药剂学性质如正电基团含量,载药量,Zeta电位和分子量进行表征,进一步考察不同正电基团含量的接合物对MCF-7细胞摄取和毒性的影响.结果:通过自由基聚合反应,2种接合物成功合成.其中pHPMA-DOX-APMA伯胺基含量为0.44～1.57 mmol·g-1,载药量为7.15％～9.25％;pHP-MA-DOX-GPMA胍基含量为0.11～0.54 mmol·g-1,载药量为7.55％～9.07％;相对分子质量分别为33～38 kDa和32～37kDa.通过BCA法和MTT法研究分别发现在pHPMA-DOX-APMA中的伯胺基团含量为1.570 mmol·g-1及pHPMA-DOX-GPMA中的胍基含量为0.260 mmol·g-1时,肿瘤细胞对阿霉素的摄取量显著增加,二者的IG50与pHPMA-DOX相比显著降低(P＜0.05).结论:成功制备了2种正电化修饰的HPMA聚合物-阿霉素接合物;适当的正电化修饰对阿霉素的肿瘤细胞摄取有促进作用.

无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒制备及体外评价

目的:制备无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒,研究其理化性质及细胞毒和细胞摄取特性.方法:以聚乳酸-羟基醋酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用无稳定剂修饰的纳米沉淀法制备汉防己甲素纳米粒;通过单因素试验考察不同制备工艺对纳米粒理化性质的影响;通过载药量、包封率、累积释药量等指标考察其载药特性;采用MTT比色法检测其对人肺腺癌细胞株A549的细胞毒性;采用共聚焦显微镜技术考察其细胞摄取特性.结果:无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒平均粒径169.3 nm,与有稳定剂的汉防己甲素PLGA纳米粒相比外观无明显改变.在一定范围内,随着PLGA用量的增加,纳米粒的粒径呈上升趋势;随着投药量的增加,纳米粒的载药量显著增加,包封率下降.在pH7.4的释放介质中,纳米粒释慢释药,96 h累积释药率60.44％.细胞毒试验显示,当培养时间为8h时,汉防己甲素组的细胞毒性大于汉防己甲素纳米粒组;当培养时间延长至24 h时,汉防己甲素纳米粒组的细胞活性明显低于纯药物组;高剂量的空白纳米粒组始终表现较低的细胞毒性.激光共聚焦电镜断层扫描显示汉防己甲素纳米粒能够较好的被细胞摄取.结论:制备的无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒大小均一,包封率高,体外释药表现出较好的缓释效果,易被细胞摄取,对A549细胞的增殖有明显的抑制作用.

不同粒径胶体金纳米粒子的制备及在A549细胞中的摄取效率及动力学过程

目的:探讨粒径因素对金纳米粒子在人肺泡基底上皮细胞(A549细胞)中的摄取效率及摄取动力学的影响.方法:采用Frens法及种子生长法分别制备了粒径为15,30 nm的水溶性金纳米粒子;利用金纳米粒子特有的多光子吸收诱导冷光性质,采用一种新颖的“多光子共聚焦图像分析法”对两种粒径的金纳米粒子的入胞摄取效率及摄取动力学进行了定量考察.结果:A549细胞对金纳米粒子的摄取量随孵育时间的延长而递增,并在24 h达到大值,未发现摄取平台期或摄取饱和现象;24 h内,30 nm的金纳米粒子的细胞摄取总量大于15 nm金纳米粒子,后者在前12h的入胞速率显著快于前者.结论:金纳米粒子的细胞摄取行为呈粒径、时间依赖性,不同粒径的纳米粒子具有不同的摄取效率及摄取动力学.

心脏干细胞来源的exosomes通过传递miR－21抗心肌细胞凋亡

目的：心脏干细胞移植治疗急性心梗的机制不明，而新研究发现外泌体（ exosomes ）是干细胞与心肌细胞信号交流的重要媒介。本研究通过解析心脏干细胞分泌外泌体的成分，阐明其中参与心肌保护作用的物质以及调控机制。方法：采用体外分离成年小鼠心脏的Sca－1＋心脏干细胞（ Sca－1＋CPCs ），从Sca－1＋CPCs的培养上清中分离提取其分泌的exosomes ，用Nano－sight、投射电镜、Western blot等对exosomes进行鉴定，qPCR解析exosomes中的内容物，找出关键调控的miRNA，并且通过转染以及萤光素酶报告基因的实验证实其调控的靶基因；后，细胞加入exosomes预保护后，检测其关键miRNA及其靶蛋白的表达，流式细胞术检测凋亡细胞比例的变化。结果：Sca－1＋CPCs细胞上清中提取的物质是直径在80 nm左右的双分子层囊泡，且表达CD9、CD63和Alix 3种exosome标志蛋白。氧化应激可以促进CPCs分泌exosomes，这种exosomes中miR－21表达明显增加，并且被心肌细胞摄取，miR－21通过与PDCD4靶向结合抑制心肌细胞在氧化应激损伤下的凋亡，加入exosomes对细胞进行保护后，在同样环境下可明显上调细胞内miR－21，且发现PDCD4及cleaved caspase－3的表达明显下调，凋亡细胞的比例明显减少。结论：心脏干细胞通过分泌的exosomes，将其包裹的miR－21进入到心肌细胞中抑制PDCD4的表达，从而抗心肌细胞凋亡。本研究为阐明干细胞治疗心肌梗死的作用机制提供了新的视野。

神经母细胞瘤细胞摄取Beta淀粉样蛋白形态学观察

目的 观察人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)对细胞外β-淀粉样蛋白(Aβ)摄取作用和在亚细胞结构定位.方法 接种培养SH-SY5Y细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)直接观察SH-SY5Y对细胞外Aβ1-42-fluo摄取的时程变化;用图像分析技术比较24 h时SH-SY5Y对细胞外三种不同浓度Aβ1-42-fluo摄取的差异,同时采用免疫荧光多重染色分析SH-SY5Y摄入Aβ1-42-fluo的哑细胞结构定位.结果 SH-SY5Y与200 nmol/L Aβ1-42-fluo共孵育1 h后就开始摄取Aβ,Aβ被摄入的量随着时间的增加而增加:细胞外Aβ1-42-fluo浓度愈高,被摄入到细胞内Aβ1-42-fluo量也愈多,不同浓度各组间相比具有统计学差异(P<0.01或P<0.05);免疫荧光染色显示部分被内吞Aβ荧光颗粒与溶酶体标记物Lamp-1共定位.结论 SH-SY5Y通过摄人Aβ机制以清除Aβ,呈时间和浓度依赖关系;被摄入的Aβ部分定位于溶酶体.

组织工程角膜支架材料

组织工程学是一门新兴交叉学科,组织工程的核心是建立细胞与生物支架复合体,在生物支架所形成的三维空间中,细胞摄取营养,交换气体,排泄废物,在新陈代谢活动中,支架逐渐降解,细胞分泌基质,形成组织.

钆喷酸葡胺长循环脂质体的制备及其肿瘤细胞摄取能力研究

目的:制备用聚乙烯100硬脂基醚(Brij700)修饰的长循环钆喷酸葡胺脂质体,研究其被肿瘤细胞摄取的情况.方法:利用逆向蒸发法制备钆喷酸葡胺普通脂质体和长循环脂质体并进行质量检测;用磁共振造影仪(MRI)检测前列腺癌细胞(PC3)中摄取的钆喷酸葡胺的浓度,以SE-T1W信号值为指标比较肿瘤细胞对2种脂质体的摄取能力.结果:制备的钆喷酸葡胺普通脂质体和长循环脂质体平均粒径分别为824、363 nm,包封率分别为63.16%、61.15%;PC3对2种脂质体摄取后的SE-T1W信号值分别为362、299;平均每个细胞的摄取数分别为2.12×10~(-4)、2.70X 10~(-4).结论:与钆喷酸葡胺普通脂质体比较,其长循环脂质体更利于肿瘤细胞的摄取.

脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒的体外细胞摄取及毒性研究

目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)体外被人肝癌HepG2细胞、小鼠腹水型高淋巴道转移肿瘤HCa-F细胞的摄取情况和对HepG2细胞的毒性.方法:制备包载RBG和荧光标记物香豆素6的PLGA-TPGS纳米粒(RCPTN),荧光倒置显微镜观察HepG2、HCa-F细胞对RCPTN的体外摄取情况.将试验分为阴性对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、RBG溶液(RS)组、RBG/PLGA纳米粒(RPN)组、RPTN组,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同终质量浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后HepG2细胞在450 nm波长下的光密度,计算细胞存活率(CV)和半数抑制浓度(IC50).结果:RCPTN分布在HepG2、HCa-F细胞的细胞核周围.RPN组和RPTN组细胞的CV随RBG浓度增加而减小,随作用时间延长而减小;与FS组比较,RPTN组细胞的CV均减小(P<0.05或P<0.01).FS、RS、RPN和RPTN作用于HepG2细胞的IC50随时间的延长而减小,且IC50的大小依次为RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC50明显小于FS与RS(P<0.05或P<0.01).结论:RPTN可将RBG带入HepG2、HCa-F细胞内部,其对HepG2细胞具有抑制作用,且作用强于RPN、RS和FS.

T7肽修饰的硫酸长春新碱脱铁铁蛋白纳米粒制备及其对胶质瘤细胞的体外靶向性研究

目的:制备T7肽修饰的硫酸长春新碱(VCR)-脱铁铁蛋白(APO)纳米粒,并研究其对胶质瘤细胞的体外靶向性.方法:采用解离-重组法制备VCR-APO纳米粒,以靶头(T7肽)修饰后制成T7-VCR-APO纳米粒.采用质谱分析和紫外-可见分光光度法评价靶头连接效率,并对所制纳米粒进行形态、粒径、Zeta电位、包封率等进行表征.以胶质瘤C6细胞为模型,考察T7-VCR-APO纳米粒对C6细胞及肿瘤球的靶向作用,并以低温条件和4种细胞内吞抑制剂考察C6细胞对T7-VCR-APO纳米粒的摄取机制.结果:经质谱检测证明T7肽已连接在纳米粒上,连接率为68.39％;所制得的T7-VCR-APO纳米粒形态圆整、均一,粒径为(31.14±1.26)nm,Zeta电位为(-23.30±0.42)mV,包封率为(39.49±2.84)％.体外靶向性研究显示,T7-VCR-APO纳米粒可有效地被C6细胞及肿瘤球摄取,并可到达肿瘤球核心位置;C6细胞对纳米粒的摄取是多通路共同作用的结果,主要是通过小窝蛋白介导的内吞并伴随巨胞饮途径.结论:本研究成功制得T7-VCR-APO纳米粒,其能够对胶质瘤C6细胞实现体外靶向递送药物,入胞效率大大提高.

替诺福韦阳离子脂质体的制备及其对人体肝细胞SMMC-7721摄取和细胞毒性研究

目的:研究替诺福韦阳离子脂质体的制备及其促进肝实质细胞摄取的情况和细胞毒性作用.方法:采用叔丁醇冻干法制备替诺福韦阳离子脂质体,测定其包封率及理化性质;以SMMC-7721细胞为模型,研究脂质体对肝实质细胞摄取替诺福韦的促进作用,MTT法检测不同条件下载药脂质体对细胞的毒性情况.结果:制备的脂质体包封率为(88.3±1.6)%,粒径为(278.4±67.6)nm,Zeta电势为(31±5)mV经半乳糖基及PEG修饰的脂质体较游离药物进入肝实质细胞的浓度明显升高,且时间延长;当替诺福韦脂质体、脂质浓度分别为7.5、30μg·mL-1时,细胞存活率在80%以上,毒性较小.结论:所制备的阳离子脂质体具有显著增加细胞摄取替诺福韦和保护替诺福韦的作用,有望成为抗病毒药物如替诺福韦等的高效传递系统.

DNA疫苗的发展现状及前景

DNA疫苗(DNA vaccine),又称"裸"DNA疫苗(naked DNA vaccine)、基因疫苗(genetic vaccine),是将编码特异性抗原多肽或蛋白的基因构建在表达性DNA质粒中,经一定途径进入机体内,被宿主细胞摄取后转录和翻译表达出目的抗原多肽或蛋白,诱导机体产生针对目的蛋白的特异性的免疫应答从而起到免疫保护作用[1].它既具有亚单位疫苗或灭活疫苗的安全性,同时具有如减毒疫苗或重组疫苗等,可诱导持久而特异的细胞及体液免疫应答的特点,同时还具有广谱、简便、廉价等特点,因此是未来新型疫苗的重点发展方向之一,在病毒性疾病以及肿瘤等的防治中有广阔的应用前景[2].

大黄素抗肿瘤作用及相关机制

大黄素(emodin)分子式C15H10O5,化学名为:1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌.临床上用作抗菌、抗肿瘤以及治疗便秘等.文献报道大黄素能够抑制肿瘤细胞增生、诱导凋亡、防止肿瘤细胞向远处转移,而且还能有效地抑制肿瘤细胞摄取葡萄糖,导致细胞膜相关功能的改变,终导致细胞死亡.

罗格列酮改善胰岛素抵抗细胞摄取葡萄糖的途径研究

286例心血管疾病患者氧化低密度脂蛋白测定分析

近年研究表明,内皮细胞损伤和功能失调是冠状动脉粥样硬化发生的始动因素,低密度脂蛋白发生氧化修饰形成的氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)是致动脉粥样硬化的关键步骤.OX-LDL可被内皮下巨噬细胞摄取,转化为脂质泡沫细胞,逐渐形成动脉壁粥样斑块.因此,OX-LDL测定在心血管疾病防治中愈显其重要性.两年多来,我们分别检测了86例冠心病患者、100例高血压患者、100例高脂血症患者及50例非以上疾患对照病例血浆OX-LDL浓度,以探讨其在心血管疾病防治中的意义.

氨基葡萄糖功能化量子点的制备与表征

目的 制备氨基葡萄糖修饰的量子点(QDs-GlcN),并初步考察其体外性质.方法 利用氨基葡萄糖的氨基与量子点表面的羧基酰化反应制备QDs-GlcN,考察其电位、粒径、荧光发射和紫外吸收光谱、细胞的毒性及细胞摄取情况.结果 QDs和QDs-GlcN的Zeta电位分别为-30.4、-26.2 mV;QDs和QDs-GlcN呈类球形,粒径的分布均一,平均粒径约10 nm;QDs和QDs-GlcN的紫外吸收光谱和荧光发射光谱无显著性差异;0～4 nmol·L-1的QDs和QDs-GlcN对大鼠肾小管上皮细胞NRK52E未见明显毒性,且QDs-GlcN在NRK52E细胞的摄取效率显著高于QDs.结论 QDs-GlcN细胞的相容性良好,氨基葡萄糖的修饰可显著提高靶细胞对量子点的摄取效率,可为肾病的靶向诊断及治疗提供参考.

外排体载体给药系统的制备和体外性质的初步研究

目的 从小鼠树突状细胞(DC2.4)中提取外排体并载入盐酸阿霉素,研究外排体的细胞摄取能力与肿瘤细胞杀伤效率.方法 使用超速离心的方法从DC2.4细胞的培养基上清液中提取外排体,并通过透射电子显微镜验证提取结果;通过电穿孔法载入盐酸阿霉素并测定其粒径和Zeta电位;用超速离心法进行纯化,测定其载药量及包封率;选用小鼠乳腺癌细胞(4T1)为细胞模型,考察制剂的摄取能力和杀伤力.结果 成功制备了以内源性物质外排体为载体的给药系统,相比于传统给药系统脂质体,在4T1细胞中的入胞能力以及杀伤力都有显著性增加.结论 以外排体为载体的新型给药系统在未来的抗肿瘤治疗领域具有巨大的潜力.

卵清蛋白纳米结构脂质载体的制备及理化性质的研究

目的 制备并优化卵清蛋白纳米结构脂质载体(Ova-NLC)的处方,并考察其理化性质和在体外细胞上的摄取能力.方法 采用复乳法制备Ova-NLC,以粒径、多分散指数(PDI)和Zeta电位为考察指标,采用单因素实验优化处方;用超滤法测定制剂的包封率和载药量;并考察Ova-NLC的体外释放和在DC2.4细胞上的摄取能力.结果 Ova-NLC的平均粒径为181.77 ±5.13 nm,PDI为0.15 ±0.03,Zeta电位为-22.3 ±0.62 mV.超滤法测得的包封率为86.54％ ±2.13％,载药量为18.03％±1.65％.体外释放72 h药物的累积释放量为85.77％±3.43％,在DC2.4细胞上无血无抗摄取1h的摄取率为90.80％±4.72％.结论 复乳法制备Ova-NLC的方法可行,体外具有一定的缓释作用且有较高的细胞摄取能力.

阳离子超支化缩水甘油醚衍生物对提高腺病毒载体基因表达率的体外研究

目的 制备阳离子超支化缩水甘油醚衍生物HPG-AGE-cys (HPAC),将其包裹在腺病毒(rAd)表面形成复合物,探究其提高腺病毒基因表达效率的能力.方法 采用阴离子开环聚合反应制备超支化缩水甘油醚,并进一步阳离子衍生化得到HPAC,其结构经核磁确证;通过静电复合作用制备材料-腺病毒复合物,并测定其粒径和Zeta电位,用透射电镜观察其表面形态;考察了复合物被A549细胞、CHO细胞和MDCK细胞摄取的能力和细胞转导的能力.结果 成功合成了阳离子超支化缩水甘油醚衍生物HPAC,制备了HPAC-rAd复合物.其平均粒径为128.8 ±3.8 nm,Zeta电位为29.8 ±5.2 mV;与裸病毒rAd比较,复合物被细胞摄取的能力和细胞转导的能力均有显著提高.结论 阳离子超支化缩水甘油醚衍生物材料合成方法简单易行,制备的HPAC-rAd复合物能够显著提高病毒的基因效率,在腺病毒的基因传递方面具有广阔的应用前景.

可断裂PEG修饰紫杉醇脂质体的制备和体外性质的初步研究

目的 制备可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,探究其被细胞摄取及杀伤肿瘤细胞的能力.方法 采用薄膜超声分散法制备可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,测定其粒径和Zeta电位;用G-50凝胶过滤法进行纯化,并测定其包封率与载药量;以人纤维肉瘤细胞(HT-1080)为细胞模型,考察其摄取能力与杀伤性.结果 成功制备了可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,与不可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体相比,被HT-1080细胞摄取的能力和对细胞的杀伤性都有显著提高.结论 可断裂PEG修饰紫杉醇脂质体的制备和纯化工艺简便,其在肿瘤治疗方面的应用具有广阔的前景.