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胰腺移植物ICAM-1的表达及信号转导的因素
目的:探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂对细胞间黏附因子-l(ICAM-1)在大鼠胰腺移植物的表达及转导信号的影响.方法:采用大鼠胰十二指肠移植模型,实验组给予NE抑制剂(ONO-5046,10 mg/kg).体外实验检测NE及多种相关试剂对大鼠内皮细胞ICAM-lmRNA表达的影响及基因转导信号的调控作用.结果:对照组胰腺移植物中ICAM-]mRNA呈高水平表达,而实验组经ONO-5046处理后明显下调其表达,有显著性差异.NE刺激大鼠内皮细胞上调ICAM-lmRNA表达水平,而ONO-5046则明显抑制其表达;特异性钙离子载体增强该细胞的ICAM-1mRNA表达,相反,磷脂酶C抑制剂、钙离子螯合剂及核因子κB抑制因子则下调NE诱导的ICAM-lmRNA表达水平.结论:NE增强ICAM-l在胰腺移植物的表达与细胞钙离子内流及磷脂酶C的信号转导有关.
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DPC4基因转染对结肠癌细胞生物学行为的影响
目的:研究DPC4基因转染对结肠癌细胞生物学行为的影响,探讨DPC4在结肠癌的发生和发展中的作用.方法:利用基因重组技术构建PcDNA3.1-DPC4质粒;利用脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620(PcDNA3.1-DPC4转染的SW620高转移性结肠癌细胞株)细胞模型;采用免疫组化S-P法和Western blot检测细胞中Smad4的表达;生长曲线和平板克隆形成实验检测其生物学行为的改变采用流式细胞术检测其s期细胞百分数(s%)和凋亡率.结果:成功构建了PcDNA3.1-DPC4质粒;DPC4+-SW620细胞的Smad4蛋白表达于细胞质及细胞核,以细胞质为主,且smad4蛋白表达水平明显高于SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞(PcDNA3.1转染的SW620细胞);DPC4+-SW620细胞的倍增时间为116h,较SW620细胞(31h,P<0.01)及PcDNA3.i-SW620细胞(29h,P<0.01)明显延长;DPC4+-SW620细胞的克隆形成率为(12%),明显低于SW620细胞(69%,P<0.01)及PcDNA3.1-SW620细胞(67%,P<0.01)的克隆形成率;与SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞相比较,DPC4+-SW620细胞Go-G1期细胞百分数增多,s期细胞百分数明显减少(P<0.05);与SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞相比较,DPC4+-SW620细胞的凋亡率较高.结论:成功地构建了质粒PcDNA3.1-DPC4,并转染SW620细胞株,得到稳定且表达Smad4蛋白明显增强的细胞模型;DPc4对结肠癌细胞增生的调控可能是通过DPc4抑制细胞生长和诱导细胞凋亡两方面作用实现的.
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抗人大肠癌单链抗体-胞嘧啶脱氨酶融合基因的构建及表达
目的:构建抗人大肠癌重组单链抗体ND-lscFv与酵母胞嘧啶脱氨酶CD的融合基因,并在大肠杆菌中表达.方法:采用基因重组技术借助GSGGSG Linker序列将酵母胞嘧啶脱氨酶基因融合于ND-lscFv基因的3'端,构建pET-28a(+)ND-lscFv-CD载体,转化E.coli BL21,经IPTG诱导,表达二者的融合蛋白.表达产物用Ni-NTAresin亲和层析方法纯化,并采用ELISA检测其免疫活性,MTF法测定由ND-lscFv-CD/5FC构成的ADEPT系统对大肠癌细胞的体外杀伤作用.结果:序列测定表明:ND-lscFv-CD基因全长l 269 bp,包含了732 bp的scFv基因和477 bp的CD基因.SDS-PAGE检测显示,融合蛋白相对分子质量47 KDa,与预测值一致.光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体蛋白总量的27%,ELISA检测证实,ND-lscFv-CD保留了与ND-1scFv相近的免疫活性.MTT实验检测结果显示,由scFv-CD/5FC构成的ADEPT体系对大肠癌细胞具靶向杀伤作用.结论:成功地构建了抗人大肠癌单链抗体ND-lscFv与酵母胞嘧啶脱氨酶CD的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达.融合蛋白具有良好的免疫活性和一定的酶活性.
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瘦素及瘦素受体在大鼠胰腺纤维化组织中表达的变化
瘦素(leptin)是一个具有多项功能的细胞因子,与机体的许多生理功能及疾病的发生关系密切.瘦素的生物学效应是由瘦素受体(leptin receptor,ob-R)介导的.ob-R为单跨膜细胞表面受体,目前已发现的有全长型(ob-Rb)及不同剪接型(ob-Ra、c、d、f、e)等至少6种形式,其中ob-Rb是主要的功能性受体.瘦素参与肝纤维化[1-2]、肾脏纤维化[3]、心肌纤维化[4]的过程.目前研究显示,瘦素及ob-Rb在胰腺组织中表达[5-6].为此,本实验检测胰腺纤维化大鼠胰腺组织中瘦素及ob-Rb的表达,探讨两者的关系.
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P选择素在急性坏死性胰腺炎大鼠血小板中的表达
胰腺炎的发病机制有胰腺自身消化学说、自由基的破坏学说、胰腺的微循环紊乱学说、胰腺腺泡内钙超载学说、白细胞内皮细胞相互作用学说、炎症介质学说,但均无法单独地解释胰腺炎复杂的发病过程及临床表现.本实验检测急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠血小板表面P-选择素的表达,探讨其在重症急性胰腺炎(SAP)发病中的作用.
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结缔组织生长因子和缺氧诱导因子 1 α在胰腺癌组织中的表达及意义
结缔组织生长因子(CTGF)属于一种即刻早基因CCN家族成员之一,位于人染色体6q23.1[1],广泛存在于人类多种组织器官中,在介导细胞的增殖、迁移、分化、生存及血管生成中起重要作用[2-3 ].缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是一个在缺氧状态下发挥活性的核转录因子,在多种肿瘤组织中高表达,在肿瘤的生长及浸润转移中具有重要意义.本实验检测胰腺癌的CTGF、HIF-1α蛋白表达,探讨二者在胰腺癌中的作用和相互关系.
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血小板糖蛋白受体IaC807T基因多态性与心肌梗塞的关系(摘要)
近年来研究发现,血小板糖蛋白(GP)受体基因多态性可能在冠状动脉疾病,尤其是心肌梗塞的发生中具有重要作用.本实验检测中国人群血小板GPIaC807T基因多态性,并探讨其与心肌梗塞发病之间的关系.1资料与方法选择2000年1月至2001年1月间住院男性心肌梗塞患者(心肌梗塞组)72例(包括急性、亚急性及陈旧性心肌梗塞),年龄小于60岁,均符合WHO心肌梗塞诊断标准;对照组70例,为本院体检者中与病例组年龄相匹配的非冠心病者.自全血中提取人基因组DNA.采用引物序列特异性多聚酶链反应(PCR)方法检测血小板GPIaC807T基因多态性.正义引物为5'-GACA~CATTAATAAATGTCTCCTCTG-3',序列特异性反义引物为5'-CCTTGCATATTGAATTGCTACA-807-3'及5'-CCTTGGATATTGAATTGCTACG-807-3'.2结果心肌梗塞组与对照组的平均年龄、高血压与糖尿病患者数、吸烟者数、体重指数、空腹血糖与血脂水平的差异均无显著性.
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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究
目的:探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移的机制。
方法:利用D-4F预孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs),而后给予氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导;采用CCK8细胞活力试剂盒检测VSMCs的增殖;利用transwell迁移小室和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移;采用活性氧探针测定活性氧簇(ROS)的释放;利用western blot检测PI3K/Akt信号通路的激活和血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达。使用PI3K/Akt抑制剂、HO-1抑制剂及RNAi下调HO-1的表达,检测D-4F拮抗ox-LDL诱导VSMCs增殖和迁移的机制。 -
GCS、P-gp和MRP在胰腺癌中表达及其临床意义
目前胰腺癌化疗效果不尽人意,引起化疗失败的原因主要是多药耐药(multidrug resistance,MDR).为明确耐药基因蛋白的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系,本实验检测糖基化神经酰胺合成酶(GCS)、P-糖蛋白(P-gp)和MDR相关蛋白(MRP)在胰腺癌中的表达并分析其与临床病理学特征的关系.
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肝海绵状血管瘤内皮细胞PCNA、AgNOR测定分析
肝海绵状血管瘤(Cavernous hemangioma of the liver , CHL)的组织来源及增长方式存有争议。有人认为 CHL是真性肿瘤,其增长是新血管瘤组织的形成〔1〕;有人认为是血管畸形,其增长是血窦在血流作用下扩张〔2〕。本实验检测 CHL内皮细胞PCNA表达及 AgNOR平均计数,了解CHL内皮细胞有无异常增殖,旨在探讨其增长方式,推测其是否是真性肿瘤。 材料与方法:标本:收集手术切除的 19位病人21个 CHL标本,男 8例,女 11例。年龄 34~55岁。瘤体直径小于 4 cm者 3个, 4~10 cm者 14个,大于 10 cm者 4个。 对照组:10例血管瘤旁正常肝组织和 3例其它病人正常肝组织汇管区血管。
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勃起功能国际指数5与夜间阴茎勃起实验在诊断勃起功能障碍中的应用
2001年9月至2003年6月,我们采用勃起功能国际指数5(IIEF-5)与NEVA夜间阴茎勃起实验检测(NPT)在勃起功能障碍(ED)诊断中的应用进行了研究.
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PPARs、NF-κB及SOD在梗阻性黄疸大鼠肝脏损害中的作用
本实验检测梗阻性黄疸大鼠肝脏中PPARs、NF-κB及SOD的表达,明确它们在梗阻性黄疸肝脏损害中的作用及意义.
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原发性肝癌患者外周血中期因子水平与肝癌临床病理特征及预后的关系
我们采用酶联免疫吸附实验检测肝癌患者外周血中中期因子(midkine,MK)水平,探讨与肝癌临床病理特征及预后的关系.
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膀胱癌化疗中纤维连接蛋白介导的药物耐受研究
纤维连接蛋白(FN)与肿瘤的浸润、生长、转移有密切的关系.Damiano等[1]发现,多发性骨髓瘤细胞粘附于包被FN的培养板后,对化疗药物的敏感性降低,将其称为细胞粘附介导的药物耐受(CAM-DR).我们的实验检测了膀胱肿瘤细胞与FN粘附后对化疗药物敏感性的变化.
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小儿铁缺乏症研究回顾与瞻望
缺铁性贫血是小儿营养性贫血中为常见的一种,尤其在发展中国家更为高发,即在发达国家非贫血型的铁缺乏症亦属屡见不鲜.在二十世纪全球比较广泛地关注铁缺乏症的贫血型,直至70年代在实验检测铁指标不断拓展从储存铁、循环铁、细胞内铁等,以及铁代谢和(其吸收、输送运转、利用等)在机体内代谢过程中的二价、三价的转变,既有其特异规律性又呈现综合整体个体差异性.
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评价螺旋体乳胶快速反应实验检测梅毒血清的特异性和敏感性
梅毒的诊断依靠临床及实验室检查.目前实验室常规进行快速血浆反应素环状卡片试验(RPR),是一种筛查试验;用死的或活的梅毒螺旋体来检测抗梅毒螺旋体抗体,包括荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA),这两者是确诊试验.
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用微核和hprt基因突变实验检测癌症病人放疗期间的遗传损伤效应
放疗可以大大提高病人的存活率,但也伴随各种急慢性副反应,人们对于这些副反应的了解并不多[1].不同病人之间对放疗的反应也是不尽相同的.这可能跟病人的形体大小、射线的剂量分布等因素有关,但影响病人间放疗副反应差异的主要因素可能还是个体对射线的敏感性[2].因此,如果能够快速有效地评价机体对放疗的反应,将为临床医师制定个体化的放疗方案提供依据[3].本研究用微核和hprt基因突变实验来检测癌症病人放疗期间的遗传损伤效应.
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FHIT基因在原发性支气管肺癌中的缺失与人乳头状瘤病毒感染的研究
原发性支气管肺癌(肺癌)是常见的恶性肿瘤,其发病率在世界各地呈上升趋势,其发病机制目前仍在探讨中.Ohta于1996年首次发现一种新的候选肿瘤抑制FHIT基因在机体许多部位的肿瘤中均有失活,很可能是一种在肿瘤发生中起重要作用的肿瘤抑制基因.本文采用RT-PCR方法检测原发性支气管肺癌中FHIT基因的缺失情况,初步探讨了FHIT基因的改变与肺癌的相互关系.此外,病毒致癌已成为新的研究热点,人们对人类乳头状瘤(HPV)的致癌作用的认识越来越深入.本实验检测了肺癌中的HPV感染情况,初步分析了HPV感染与肺癌发生的可能关系,以及与FHIT基因缺失的关系.
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ACL200全自动血凝仪质控样品测定值超标问题的查找及解决
1999年我院购进一台美国贝克曼库尔特公司生产的ACL200全自动血凝仪,该仪器以其准确、灵敏、重复性好的特点为临床出血性疾病、血栓性疾病的诊断治疗,为抗凝溶栓治疗的实验检测以及一些特殊检查前的凝血功能检测带来了极大方便.
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一起酒店诺如病毒引起感染性腹泻的流行病学调查
目的 分析一起酒店聚餐引发的感染性腹泻暴发的原因及疫情的流行病学特征,为今后预防和控制此类事件的发生提供科学依据.方法 以现场流行病学调查为依托,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术开展诺如病毒核酸检测.结果 该起感染性腹泻事件发病人数82人,罹患率为0.82%.采集腹泻患者粪便样本24份,RT-PCR核酸检测阳性7份;酒店剩余食物及环境相关样本21份均为阴性.结论 经过现场流行病学调查及实验室检测结果,该事件为一起诺如病毒感染引起的腹泻暴发.