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COX-2选择性抑制剂西乐葆对IL-1β诱导下A549细胞COX-2表达的影响
目的研究西乐葆对A549细胞COX-2表达的影响.方法分别使用5、10和15μmol/mL的西乐葆对IL-1 β诱导下A549细胞COX-2的表达进行干预,收集上清-20℃冻存用于检测PGE2,细胞用PBS洗两次提取RNA.不加西乐葆为对照组.实验重复4次.结果5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组COX-2 OD值/β-actin OD值分别为(1.4362±0.1061),(1.0142±0.079),(0.6896±0.097)与空白组(1.8058±0.132)相比较有明显降低,差异有显著性(P<0.05).5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05);5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组PGE2分别为(17.25±0.98)×10-6mg/L,(11.33±1.49)X10-6mg/L和(10.23±2.00)×10-6mg/L较空白对照组(22.36±1.49)×10-6mg/L明显降低,差异有显著性(P<0.05).5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05).结论西乐葆抑制人肺上皮细胞COX-2表达,其对IL-1 β诱导下人肺上皮细胞COX-2mRNA表达和PGE2的分泌的影响是浓度依赖性的
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肺炎衣原体感染通过促进VE-钙黏素磷酸化、增加内皮细胞通透性而诱导单核细胞跨内皮迁移
目的:从血管内皮细胞( VEC)通透性角度探讨肺炎衣原体( C.pn)感染促进单核细胞跨内皮迁移的机制。方法及结果:单核细胞跨内皮迁移实验和TEER结果表明,C.pn感染可促进单核细胞跨内皮迁移,且这种作用可能与C.pn感染增加VEC通透性有关;免疫荧光结果显示,C.pn感染后,细胞膜上的VE-钙黏素向胞浆转移,并使细胞间连接处出现缝隙;Western blot实验结果进一步证实C.pn感染可促使VE-钙黏素(Y658)发生酪氨酸磷酸化。液闪计数仪检测结果显示,C.pn感染可使Src激酶的活性明显增强。 Src激酶选择性抑制剂PP2可抑制C.pn感染诱导的VE-钙黏素( Y658)酪氨酸磷酸化,减少感染引起的VE-钙黏素由胞膜向胞浆转移,并使细胞间连接处的缝隙减小,进而降低C.pn感染增加VEC通透性的作用,终削弱感染对单核细胞跨内皮迁移的促进作用。结论:C.pn感染可能通过激活Src激酶促使VE-钙黏素( Y658)发生酪氨酸磷酸化以增加VEC通透性,进而诱导单核细胞跨内皮迁移。
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蛋白激酶C在调节血管内皮细胞通透性中的作用
蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是一种钙或/和磷脂依赖性蛋白磷酸化酶,广泛存在于人体的各种组织细胞中.它能被细胞外生物活性因素(生长因素、神经递质、细胞因子等)激活,完成靶细胞蛋白的磷酸化,通过蛋白磷酸化后生物活性的改变而完成细胞外源性信号的应答,构成细胞内重要的信号转导系统.许多实验证明蛋白激酶C的激活在血管内皮细胞屏障功能和血管通透性的变化调节中起着重要的作用.本实验从组织、细胞和分子水平对PKC在血管通透性调节中的作用进行了系统的研究.目的和方法:1.采用游离灌注的猪冠状微静脉模型,在严格控制生理环境的条件下,通过荧光倒置显微镜,利用荧光比率测定技术,测定了游离猪冠状微静脉的通透性,并观察蛋白激酶C的激活与抑制对微静脉通透性的影响.2.培养单层脐静脉内皮细胞株ECV-304,用同位素标记和液体闪烁计数法检测细胞浆和细胞膜的PKC活性,观察PKC在热损伤刺激后激活和移位的情况.3.应用免疫荧光技术,观察PKC激活和热损伤刺激对人脐静脉内皮细胞株ECV304的F-actin 的细胞定位和结构变化的影响,从形态学的角度证明PKC对内皮细胞的作用.结果:1.利用PKC的特异性激动剂佛波酯醇(PMA)激活PKC可显著增加血管通透性约至300%.PKC 的特异选择性抑制剂bisindolylmaleimide(BIM)阻断了PMA增加通透性的作用;在单纯PMA 刺激下,Pa值是对照组的290.94%±78.13%(n=7, 血管平均口径D=63.86±3.14 μm), 而在BIM的影响下, PMA只使Pa值升高到对照的139.97%±20.82%(n=7, D=43.25±3 .08 μm).2.用PKC特异性激动剂PMA和热损伤刺激都可以导致ECV-304细胞浆中的PKC的激活和向胞膜移位.未受刺激的ECV-304细胞,胞浆中的PKC活性是43.47 fmol*mg-1*min-1 .明显高于胞膜的 23.12 fmol*mg-1*min-1,提示此时PKC主要位于胞浆.用佛波脂醇(PMA) 刺激可引起胞膜中P KC活性迅速增高,高达48.43 fmol*mg-1*min-1,相应胞浆中的PKC活性则明显下降.用PKC的特异性抑制肽PKC(19-36)可以阻止这种变化.3.PKC激动剂PMA和热损伤作用可使原来主要分布于细胞周边的F-actin激活呈极向排列,形成应力纤维,并在包膜部位形成板状突起.细胞间出现明显缝隙.用PKC的抑制肽PKC(19 -36)可以抑制上述变化.结论:结果提示,蛋白激酶C的激活和移位可以通过直接或间接地作用于内皮细胞骨架蛋白 ,导致内皮细胞骨架重排,引起血管通透性的升高.热损伤刺激可引起PKC的激活和细胞骨架的重排,提示PKC激活在热损伤介导的内皮细胞功能变化中起重要的信号转导的作用.
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p12-LOX抑制剂黄芩素抑制胃癌细胞MKN-28的增殖和迁移
目的:检测血小板型12-脂氧合酶( platelet-type 12-lipoxygenase, p12-LOX)在野生型和胃癌模型小鼠胃组织、原代培养细胞及人胃癌细胞MKN-28中的表达,并探讨p12-LOX的选择性抑制剂黄芩素( baicalein, BAI)对MKN-28细胞增殖和迁移的影响。方法:RT-PCR法检测小鼠胃组织、原代培养细胞及胃癌细胞中p12-LOX表达;MTT法检测BAI对MKN-28细胞增殖的影响;划痕实验检测BAI对MKN-28细胞迁移的影响。结果:小鼠胃癌组织和原代培养细胞中p12-LOX mRNA表达量明显高于野生型,MKN-28细胞中p12-LOX mRNA表达量也显著高于正常胃黏膜GES-1细胞;BAI呈时间和剂量依赖性抑制MKN-28细胞的增殖,并明显抑制胃癌MKN-28细胞的迁移修复。结论:胃癌组织和细胞中 p12-LOX mRNA均呈高表达,BAI显著抑制MKN-28细胞的增殖和迁移。
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新型抗凝药——安卓
磺达肝癸钠(商品名:安卓)是葛兰素史克公司研发的第一个Xa因子抑制剂的化合专利药物,开创了抗凝药物的新一代.安卓是一种人工合成的、活化因子X的选择性抑制剂.其抗血栓活性是抗凝血酶III(ATIII)介导的对因子Xa选择性抑制的结果.通过选择性结合于ATIII,磺达肝癸钠增强了(大约300倍)ATIII对因子Xa原来的中和活性.而对因子Xa的中和作用阻断了凝血级联反应,并抑制了凝血酶的形成和血栓的增大.
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p38促丝裂原活化蛋白激酶对疾病调控作用的研究进展
近来研究发现,p38促丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在疾病的发生、发展过程中具有明显的调控作用.特别是在介导炎症、应激等细胞反应方面,其特异性和选择性抑制剂亦已被广泛应用到各类疾病的研究中来.本文结合近年国内、外相关文献,对p38MAPK的结构特征、家族成员、激活与效应在疾病中的调控作用及研究中存在的问题等进行综述,旨在为今后p38MAPK的研究提供参考.
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COX-2选择性抑制剂的抗肿瘤作用研究进展
在2005年我国卫生部的新统计中,恶性肿瘤所致的死亡率占据各种死亡原因的首位,其中胃、肝、肺、食道4种恶性肿瘤的死亡数占全部恶性肿瘤死亡数的75.0%(男80.7%、女51.8%)[1],即在今后相当长的时期内这4种恶性肿瘤的防治与治疗将是我国肿瘤研究的重点,故寻找有效的化学药物成为抗肿瘤研究的热点.
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新型非甾体抗炎药 COX- 2选择性抑制剂的研究及应用进展
环加氧酶( Cyclooxygenase,COX)是前列腺素( Prostagla_ ndins,PGs)生物合成的关键酶,在膜磷脂的代谢中起重要作用。 PGs与炎症的发生发展有密切的关系,以阿司匹林为代表的非甾体抗炎药( Nonsteroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs),即解热镇痛抗炎药,能够降低 PGs的生物合成,在关节炎症和肌肉骨骼损伤的治疗中得到了广泛的应用。早在 1971年, Vane即提出 NSAIDs是通过抑制 COX来减少 PGs生物合成的。
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THP-1细胞中p2x7R对ISG20的调节作用
目的 探讨脂多糖诱导的THP-1源性巨噬细胞中,嘌呤能受体2x7 (p2x7R)对IFN-α诱导干扰素刺激基因20(ISG20)的影响及其可能的机制.方法 THP-1源性巨噬细胞经LPS诱导4h后分别加入p2x7R非特异性抑制剂苏拉明(Suramin)、磷酸吡哆醛(PPADS),p2x7R特异性抑制剂oxidized ATP(O-ATP)、亮蓝G(BBG)、以及p2x7R特异性激动剂苯甲酰苯甲酸ATP(BzATP)作用1h后,联合IFN-α培养24 h.监测细胞内ISG20 mRNA、蛋白的表达差异及上清液中IL-1β的含量.BzATP组中,观察不同浓度BzATP以及caspase-1抑制剂预处理1h后BzATP、IFN-α对ISG20的调节作用.结果 RT-PCR及Western blot结果显示,p2x受体广谱抑制剂与p2x7R的特异性抑制剂具有抑制IFN-α对ISG20的诱导作用,IFN-α联用抑制剂组与IFN-α联用激动剂BzATP组中ISG20 mRNA较IFN-α组差异有统计学意义(P<0.05).浓度梯度实验中,上清液中IL-1β的含量在加入BzATP、BBG后发生改变.另外,BzATP直接诱导的ISG20可被caspase-1抑制剂抑制,上清液中IL-1β同样受到抑制.结论 在THP-1细胞中,BzATP对ISG20的诱导作用不同于IFN-α途径直接诱导ISG20的生成.这为将来探索新的抗病毒治疗提供了新的思路.
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西拉普利治疗高血压:对血管结构与功能的改善和临床疗效
动脉压持续升高引起阻力血管的增厚和狭窄,这种适应性变化的重要的后果即是全身血管阻力的增加,这也是高血压病主要的血液动力学改变,血管内皮结构和功能也发生改变;它在促进动脉粥样硬化和血栓形成上起重要作用。 血管壁的这种适应性改变开始只是局部适度的,以后则逐步成为病理性的,而压力增加-适应性反应-进一步压力增加更多适应反应,则形成恶性循环,终导致病理性改变和靶器官的损害和衰竭。因此,高血压病治疗的重要目的应是预防和/或逆转血管结构和功能的改变。现在已清楚血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在全身,尤其是在局部组织——血管壁引起的这些变化中起了重要的作用。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI),特别是血管紧张素转换酶(ACE)的高度选择性抑制剂Cilazaprll(西拉普利;抑平舒;cila)有助于达到此目的。以下就cila对血管结构与功能的改善和临床疗效作一综述。
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新型降脂药依折麦布评价
第一个肠道胆固醇吸收的选择性抑制剂依折麦布(商品名益适纯,EZETROL),是一种口服、强效的降脂药物,其作用机制与其它降脂药物不同(如:他汀类、胆酸螯合剂、苯氧酸衍生物和植物性固醇酯化物),可单独或与HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类)联合应用于治疗原发性(杂合子家族性或非家族性)高胆固醇血症、纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)、纯合子谷甾醇血症(或植物甾醇血症).
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COX-2选择性抑制剂用于围术期镇痛的现状及前景
围术期有效镇痛改善手术病人的预后,这一观点已得到麻醉科医师和外科医师的认同.有效的围术期镇痛可使病人的器官生理功能快速恢复正常[1].临床上围术期镇痛的常用药物是阿片类药.然而,其众所周知的副作用(如,恶心、呕吐、呼吸抑制、过度镇静及延迟肛门排气)使其使用受到限制,也造成外科医生和病人的忧虑.
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1,5-二芳基吡唑类环加氧酶-2选择性抑制剂的定量构效关系
目的: 探讨1,5-二芳基吡唑类环加氧酶-2选择性抑制剂分子结构与活性定量关系,建立反映该类化合物构效关系的数学模型,为进一步药物设计提供理论依据. 方法: 按类型衍化出的先导化合物,采用多元回归分析方法,将22个5-取代吡唑化合物的环加氧酶-1抑制活性,环加氧酶-2抑制活性和抑制选择性与化合物疏水性参数logP, 取代基电性参数ó,立体参数MR进行相关及定量构效分析. 结果: 得到3个反映该类抑制剂活性及选择性的定量构效关系(QSAR)方程:PIC50,COX-1=8.789838(1.7681)-0.4075925(0.1839)logP; PIC50,COX-2=6.437434(0.2322)+0.8844070(0.3487)logP-1.693330(0.5003)Σó; Ps=-61.18379(26.1091)+13.26386(5.56937)logP-0.6875092(0.29647)(logP)2. 结论: 环加氧酶抑制选择性与疏水性呈抛物线关系;5位苯环3,4位引入推电子基团或疏水性取代基,有利于提高该类化合物环加氧酶-2抑制活性. 所得QSAR方程可较好地预测该类化合物选择性抑制环加氧酶-2的活性.
关键词: 前列腺素内过氧化物合酶 选择性抑制剂 吡唑类 定量构效关系 -
塞来昔布放射增敏作用的研究现状
单独的放疗只对部分辐射敏感的肿瘤有较好的疗效,但是大部分肿瘤对辐射并不敏感,肿瘤的放射敏感性在很大程度上影响了放疗的效果,很多学者想通过放射增敏作用的设想,寻找某些具有放射增敏的药物与放疗结合来达到更好的效果。塞来昔布是环氧化酶2(COX-2)选择性抑制剂,其在肿瘤治疗中的应用是近年非常热门的课题,其放射增敏作用近来国内外已进行大量研究,文献报道塞来昔布有较好的放射增敏作用[1]。作者现将目前塞来昔布的放射增敏作用的基础、可能的增敏机制、已研究明确有增敏作用的肿瘤、临床应用现状等研究现状归纳如下,供同行参考。
1塞来昔布放射增敏的基础
环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是花生四烯酸转化成为前列腺素的限速酶之一,前列腺素促进肿瘤的形成、炎性反应、肿瘤血管的形成,阻遏细胞凋亡。近年来对COX-2的研究表明,在上皮组织癌(包括胃癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、皮肤的鳞状上皮细胞癌等)中普遍存在COX-2过度表达。它参与了肿瘤细胞的转化、生长、凋亡过程,同时也参与细胞的运动、转移、肿瘤新生血管的形成。 COX-2的高表达,必将导致前列腺素E2(PGE2)生成的增多,而PGE2具有放射保护作用。放射治疗是COX-2表达的刺激因素,放疗在杀灭肿瘤细胞的同时诱导肿瘤细胞高表达COX-2。塞来昔布(Celecoxib)是由美国辉瑞公司生产的一种高效低毒的高选择性的COX-2抑制剂,其主要成份是4-[5-(4-甲苯基)-3-(三氟甲基)-1氢-1-吡唑-1-基]苯磺酰胺,分子量:381.38。大量实验表明,塞来昔布可能通过抑制肿瘤细胞放射损伤的修复,改变肿瘤细胞周期分布,抑制肿瘤血管生成,诱导细胞凋亡等方式增强肿瘤细胞对放射的敏感性。因此,放疗联合塞来昔布可提高放疗敏感性。 -
毛细管电泳法拆分盐酸安非他酮
目的:建立一种用毛细管电泳拆分盐酸安非他酮对映异构体的色谱方法.方法:以60 cm×75 μm石英毛细管柱为分离通道,通过考察影响拆分的因素,如手性选择剂的种类、浓度,缓冲溶液的pH,分离电压和柱温,确定佳拆分条件.结果:安非他酮拆分的优条件为浓度15 mmol · L-1羟丙基-β-环糊精作手性添加剂,50 mmol·L-1的磷酸盐(pH 3.5)背景缓冲液,工作电压20 kV,柱温25℃.确定毛细管电泳中先出峰的是S-盐酸安非他酮.结论:该方法试样用量少、高效、快速、操作简单,环境污染少,可用于盐酸安非他酮的拆分,并为盐酸安非他酮的含量测定和单一对映体药理作用的研究奠定基础.
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发现杀伤结直肠癌细胞制剂
中科院合肥物质科学院4日对外发布,该院科研人员与美国哈佛大学医院课题组针对多种癌症中表现异常的激酶研究发现可显著杀伤结直肠癌细胞的选择性抑制剂。