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抗氧化性丝素蛋白水解产物的生产工艺及其改善过氧化氢所致HepG2细胞损伤机制
目的:抗氧化性丝素蛋白(SF)胰酶水解工艺的优化.研究水解物对过氧化氢(H2O2)造成人肝癌HepG2细胞损伤的改善作用,对其机制进行初步探讨.方法:以超氧自由基清除率为指标,设计正交试验考察丝素蛋白胰酶水解过程中反应时间、pH、温度、底物浓度、酶浓度对水解工艺的影响.测定水解产物的分子量分布及其对羟基自由基清除率和H2O2诱导的红细胞氧化溶血抑制率.用不同浓度H2O2处理细胞24 h,测定细胞活性,选择合适浓度的H2O2损伤细胞.然后再将细胞分为空白组(不加药物处理),H2O2损伤组,H2O2损伤+5 mmol·L-1N-乙酰半胱胺酸(NAC)治疗组,H2O2损伤+10,20,30,50 g·L-1 SF治疗组.观察细胞活性,丙二醛(MDA)含量,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化.结果:佳水解工艺是酶浓度6%,反应时间160 min,底物质量浓度20 g·L-1,pH 8,温度38℃,此水解条件下所得水解液对超氧自由基清除率为72.73%,水解物分子量在10 kDa以下,对羟基自由基清除率和红细胞氧化溶血抑制率均提高.H2O2损伤细胞后细胞活性降低并且细胞中MDA含量增加(P<0.05).与H2O2损伤组比较SF治疗组中细胞活性升高,MDA的含量也降低(P<0.05).H2O2损伤细胞后,TNF-α含量上升,SOD,CAT的活性和T-AOC能力均下降(P<0.05),SF治疗能降低TNF-α含量,提高SOD,CAT分泌量和增强T-AOC能力(P<0.05).结论:抗氧化性丝素蛋白永解物对过氧化氢致HepG2细胞损伤有改善作用,机制是通过降低TNF-α含量,提高细胞活力和增加细胞中抗氧化酶活性.
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HPLC测定罗布麻叶中总黄酮的含量
目的:建立罗布麻叶中总黄酮的HPLC含量测定方法.方法:药材经提取水解后用HPLC通过测定其槲皮素和山奈酚的含量来确定总黄酮的含量,采用岛津C 18色谱柱;甲醇-0.4%磷酸溶液(45:40)为流动相;流速1.0 mL·min(-1);检测波长为360 nm;柱温为30 9℃;结果:槲皮素在5.52~55.2 mg· L(-1)线性关系良好,r=0.999 9(n=6),平均回收率为98.76%,RSD为1.01%(n=6);山奈酚在3.505~35.05 mg·L(-1)线性关系良好,r=0.999 9(n=6),平均回收率为98.62%,RSD为1.14%(n =6);3批样品中总黄酮含量为17.08,16.54,16.81 mg·g(-1).结论:该方法准确可靠,重复性好,可以作为罗布麻叶总黄酮的含量测定方法.为完善罗布麻叶质量标准提供依据,同时为罗布麻叶的进一步研究奠定基础.
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高效液相色谱-质谱联用结合量子化学计算发现乌头碱一新水解产物
目的:高效液相色谱-质谱/质谱( HPLC-MSn)结合量子化学计算发现乌头碱的新水解产物.方法:HPLC-MSn方法采用梯度洗脱,质谱用正离子模式.采用密度泛函方法,在B3LYP/6-31 G(d)水平上,对可能的产物结构进行计算.结果:通过HPLC-MSn的检测发现乌头碱水解产生分子离子峰为482的化合物,推测结构为脱水乌头原碱,量子化学计算结果只有C8位和C15位发生消除反的产物得到了低能量构象,分析推测分子离子峰为482的化合物为C15位羰基的脱水乌头原碱.结论:首次发现乌头碱加热水解生成脱水乌头原碱,推测了乌头碱水解的两条新水解途径.
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《中国中药杂志》现状简介正交试验优选佛波醇酯的水解工艺
目的:筛选巴豆油中佛波醇酯的水解工艺.方法:采用正交试验法,以水解时间、碱性甲醇用量、水解次数、温度为考察因素,佛波醇产率作为评价指标.采用Diamonsil C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(10:90);检测波长234nm;流速1 mL·min-1;柱温25℃;进样量20μL,测定佛波醇含量.结果:佳水解时间10 h、碱性甲醇用量6倍量、水解次数1次及温度25℃.佛波醇在4.28~107 mg·L-1与峰面积间的线性关系良好,r=0.999 9,回收率为97.89%,RSD0.78%.结论:工艺稳定,结果准确,重复性好,可为佛波醇的进一步研究提供参考.
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磨除酸蚀法在氟斑牙修复中的应用
氟斑牙是牙齿发育时期人体摄入氟元素量过高引起的特殊性牙釉质发育不全,是一种要引起牙齿变色,牙实质缺损的地方性疾病.其发病机理是碱性磷酸酶可以水解多种磷酸脂,在骨、牙代谢中提供充分无机磷,作为骨盐形成的原因.
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肿瘤相关胰蛋白酶原-2的研究进展
胰蛋白酶原-2(trypsinogen-2,T-2)是一种丝氨酸蛋白酶,由于它和肿瘤有密切关系,故又称为肿瘤相关胰蛋白酶原-2(TAT-2).TAT-2特征:(1)很多肿瘤细胞株和人体肿瘤均表达TAT-2,在临床上有辅助诊断的意义;(2)它与肿瘤的侵袭和播散机制有关,因为TAT-2可直接或间接地引起肿瘤周围基质蛋白的水解而形成肿瘤的侵袭;(3)TAT-2抑制剂(TATI)可抑制肿瘤侵袭;(4)TAT-2多产生于胰腺外的器官或组织.另外,T-2为急性胰腺炎的诊断指标,临床上应意鉴别.
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2.129瑞复啉(盐酸伊托必利)基础研究及临床应用
目的1.通过动物实验了解药物特性:瑞复啉具有双重机制,通过拮抗多巴胺D2受体刺激内源性乙酰胆碱的释放,另一方面通过抗胆碱脂酶来抑制乙酰胆碱的水解,增强了胃的内源性乙酰胆碱.所以不仅显著增强胃和十二指肠的运动,而且还具有中等强度的抗呕吐作用.2.动物实验和临床应用均未发现对神经系统,心血管系统及呼吸系统有明显影响.
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BCRP/ABCG2的结构功能及相关抑制剂研究
化学治疗是临床上治疗癌症的一种主要方式.研究发现多重耐药菌(multi-drug resistance,MDR)主要是由一类被称为ABC转运蛋白超家族(ATP binding cassette transporters)的膜蛋白所引起的,它们能够利用ATP水解提供的能量将化学治疗药物排出细胞外,导致肿瘤细胞呈现抗药性.BCRP/ABCG2 (breast cancer resistant protein)属于ABC转运蛋白超家族G亚族的第二位成员,是造成多种癌细胞产生MDR的主要原因之一.
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一种利用微晶纤维素分离纯化β葡糖苷酶的方法
β葡糖苷酶 (EC3.2.1.21) 存在于许多植物、昆虫、酵母、霉菌及细菌体内,它参与生物体的糖代谢,能够水解结合于底物末端的非还原性β-D-葡糖苷键,释放出β-D-葡萄糖和相应的配基[1].在医药工业中,利用β葡糖苷酶的这种生物转化功能,可将某些广泛存在的天然产物转化为在自然界稀有甚至不存在的药物[2].
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铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究
铜绿假单胞菌是引起医院内感染的主要病原菌.亚胺培南(IMP)作为革兰阴性菌的有效的抗生素,随着青霉烯类抗生素的广泛应用,铜绿假单胞菌的耐药菌株逐渐增多,给临床治疗带来困难.这与铜绿假单胞菌的主动外排机制以及特异性膜蛋白OprD2的缺失有关,能够水解碳青霉烯类抗生素的新β-内酰胺酶--金属酶的产生, 对碳青霉烯类抗生素的使用造成了更大威胁.本研究分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌产生金属酶合并外膜蛋白OprD2的缺失.
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有机磷中毒救治与预防的重大进步--PON1研究进展
人类对有机磷杀虫剂[毒死蜱(CPS)、对氧磷和二嗪农]和神经性毒物(梭曼和沙林)的易感性,在很大程度上受到遗传因素和后天环境因素的影响.肝脏的细胞色素P450系统能将许多有机磷杀虫剂转化为活性氧化代谢物,这些活性代谢物能使血液、肌肉和其它组织的胆碱酯酶失活.如果能够在胆碱酯酶失活前破坏这些代谢物或其它在体内未经转化的毒素,就能有效预防有机磷中毒.当前的研究表明,这种保护作用主要通过肝脏和血浆中的芳香烷基磷酸酯酶(paraoxonase,PON1)对有机磷杀虫剂,以及神经毒性物质的水解而发挥作用.很多有机磷杀虫剂的解毒都会经过下列两个步骤:(1)肝脏细胞色素P450系统激活母体化合物,(2)血清PON1和肝脏PON1水解其氧化物[1].
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对氧磷酶在有机磷中毒中的防治作用及研究进展
(paraoxonase,PON)于1953年被发现,因其能水解对氧磷而得名对氧磷酶.PON存在于多种微生物、昆虫、爬行动物、鸟类及哺乳动物体内,以兔血清PON活性高.PON主要由肝脏分泌,广泛存在于肝、肾、脑、血液等器官中,以肝和血液中的PON活力高.肝脏中的PON全部存在于线粒体中,血液中的PON主要与高密度脂蛋白(HDL)结合[1].
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对氧磷酶与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究
PON是一类芳香酯酶,它能催化磷酸酯键的水解,降解有机磷酸、芳香羧基酸酯及氨基甲酸酯.由于目前用于检测该酶活性的常用的底物是对氧磷(parason),故该酶命名为对PON.近年的研究表明,PON除能解除有机磷化合物的毒性外,还参与抗脂质过氧化,在一些氧化应激性疾病的发展中起着重要的作用.本文就对氧磷酶基因家族及其活性以及与动脉硬化性脑梗死关系的研究作一综述.
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4例食用蟾蜍中毒患者的抢救与护理
蟾蜍俗称癞蛤蟆,其毒液存在皮疣及腮腺内.蟾蜍毒素水解成蟾蜍配基,它的基本结构与强心疳原相似.如煮食蟾蜍,吃下它的有毒部分可引起中毒.若不及时抢救,可导致死亡.我院急诊科曾抢救过4例食用蟾蜍中毒的病例,现将抢救与护理体会报告如下.
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运动对肌内三酰甘油代谢的影响
糖原和脂肪是机体运动的重要能源物质.运动时,肌肉和肝脏中的糖原水解供能;脂肪则以游离脂肪酸的形式供能.游离脂肪酸主要来源于血中的载脂蛋白和肌细胞中的三酰甘油(intramuscular triacylglyerol,IMTG).本文通过不同检测方法对肌内三酰甘油的测量结果,阐明运动对肌内三酰甘油的影响.
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Klotho在CKD-MBD及急性肾损伤中的新认识
Klotho基因是Kuro[1]等于1997年发现的与衰老有关的新基因,并用古希腊神话中纺织生命之线女神的名字命名.Klotho基因被敲除的小鼠(kl-/-小鼠)可出现类似人类衰老的各种表型,如寿命缩短、听力下降、不育症、动脉硬化、软组织钙化、皮肤萎缩、骨质疏松、肺气肿等.1 klotho基因及蛋白Klotho基因长50kb,由5个外显子和4个内含子组成.其表达的蛋白在人和小鼠中均有膜结合型和分泌型两种形式,分泌型的量明显高于膜结合型,但在大鼠中尚未发现有分泌型klotho蛋白的基因结构.klotho基因5个外显子全部表达则产生由1,012个氨基酸(小鼠)或1,014个氨基酸(人和大鼠)组成的膜结合型klotho蛋白[2].膜结合型klotho蛋白的特点是:胞外段较长、胞内段和跨膜区较短.klotho蛋白胞外区可被解聚素-金属蛋白酶(a disintegrin and metal]oproteinase,ADAM)水解.分泌型蛋白含有549个氨基酸,不含kl 2胞外区、跨膜区和胞内区.循环中的klotho蛋白可以来源于klotho基因选择性转录、mRNA选择性剪切而生成的可溶性型klotho,也可来源于被ADAM水解脱落的膜型klotho蛋白的胞外部分[3].
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CD39与调节性T细胞的研究进展
调节性T细胞(CD4+Treg)作为独立功能的T细胞群无可置疑,它具有抑制自身反应性T细胞的功能,是参与维持外周耐受的重要细胞群.大量报道证实转录因子Foxp3可作为CD4+Treg细胞的特异性分子标记,但其定位于细胞内限制了其在CD4+Treg细胞研究中的应用[1].CD4+Treg细胞的免疫抑制机制尚不十分明确,以往公认的机制主要有三种:细胞-细胞直接接触抑制、抑制性细胞因子的分泌、白细胞介素-2的清除[2].新近发现CD4+Treg细胞的胞外三磷酸核苷双磷酸水解酶CD39调控ATP产生的腺苷具有免疫抑制功能,腺苷通过与细胞表面腺苷1型嘌呤G蛋白偶联受体结合而发挥免疫抑制效应[3].CD39于1982年由Rowe等发现,在EB病毒感染的B淋巴细胞表面存在一种特殊的分子标记物,之后被命名为CD39[4].CD39是钙镁依赖的细胞外HTP双磷酸酶,能将ATP和ADP水解为单磷酸腺苷,目前研究发现CD39在抑制炎症反应、抵抗血小板聚集、免疫反应、细胞增殖等过程中发挥重要作用.在小鼠调节性T细胞上,CD39几乎表达在所有Foxp3+的调节性T细胞,而在人类,CD39主要表达在具有记忆活化的调节性T细胞中.
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河南发现产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌
KPC酶是一种新的碳青霉烯酶,属于A类酶,水解所有的β内酰胺类抗生素,能被克拉维酸抑制[1]。它不仅存在于肠杆菌科的细菌中[2],也存在于铜绿假单胞菌等非发酵菌中[3]。自2001年Yigit等[1]在美国报道KPC-1之后,法国、希腊、中国等国家[4-8]也发现了KPC酶。我国浙江地区曾报道了KPC酶[7-8]。我们在临床分离到1株亚胺培南中敏的肺炎克雷伯菌,研究发现其产生KPC-2型碳青霉烯酶。
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革兰阴性菌β-内酰胺酶的耐药性问题
近年来,革兰阴性细菌由β-内酰胺酶(β-lactamase,BLA)介导的耐药性问题十分突出.由于能水解新的β-内酰胺底物的BLA不断出现;对酶抑制剂敏感性下降的BLA的出现;以及在同一细菌体内有几种BLA型别同时出现,使一些临床常见的革兰阴性病原细菌获得更强的针对β-内酰胺抗生素的耐药能力,导致治疗失败,给临床诊断和控制感染带来巨大的挑战.一、β-内酰胺酶分类
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阿德福韦酯(代丁)治疗中国HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效和安全性研究
阿德福韦酯是腺嘌呤磷酸酯化合物阿德福韦的前药,口服后可迅速水解为阿德福韦而发挥抗病毒作用.大规模临床研究证实,阿德福韦酯对HBeAg阳性或HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者均有很好的疗效和安全性.我国第一个研制成功的阿德福韦酯--代丁,已经于2003年8月-2004年10月在6个研究中心完成了治疗慢性乙型肝炎的临床研究.现将结果报道如下.