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白细胞去除术配合联合化疗治疗儿童高白细胞白血病一例
患儿男,4岁.主因面色苍白、乏力伴间断发热1个月,齿龈渗血4 d于1998年7月7日入院.体检:中度贫血貌,颌下、颈部及腋下浅表淋巴结均肿大,胸骨压痛(+),肝脏于肋下6 cm、脾脏于肋下4 cm可触及,质中等硬度,有压痛.血常规:HB 90 g/L,WBC 764×109/L,BPC 78×109/L.末梢血分类:原幼淋巴细胞占0.92.骨髓象:增生极度活跃,原幼淋巴细胞占0.86.查血尿酸654.8 μmol/L(正常值<416 μmol/L).诊断为:急性淋巴细胞白血病(L2型);继发性高尿酸血症.入院后患儿有胸闷、气短及口唇紫绀,结合其白细胞明显增高,血尿酸升高等表现,首先行白细胞去除术.应用COBE Spectra血细胞分离机,取单个核细胞分离程序去除白细胞.为避免开始阶段患儿出现低血容量,先予同型新鲜血200 ml预充离心机管道.治疗过程中密切观察患儿血压及心率改变,采血速度为18~25 ml/min,去除白细胞速度为2~3 ml/min,循环血量为4 850 ml,共去除白血病细胞悬液480 ml,检测去除的白细胞计数为2 130×109/L,去除量为1 022.4×109.操作完成后患儿无不适反应,复查血常规:Hb 85 g/L,WBC 160×109/L,BPC 58×109/L.随后给予VDCP(长春新碱、柔红霉素、环磷酰胺、泼尼松)方案化疗及碱化尿液及强迫利尿等处理.2 d后复查血常规示WBC 2.3×109/L,复查血尿酸141 μmol/L,患儿胸闷及呼吸困难等症状完全消失.2周后复查骨髓象达到完全缓解,之后予VDCP及HD-MTX(大剂量氨甲喋呤)方案各1疗程,并与腰穿鞘内注药预防脑膜白血病.随访至今仍处于完全缓解中.
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细胞悬液法和组织块植入法制作兔VX2骨肿瘤模型研究
目的 目前兔骨肿瘤模型的制作主要通过细胞悬液法或组织块植入法,但是哪种方法在制作肿瘤模型方面更为理想鲜见报道.本实验通过对比细胞悬液法及组织块植入法制作兔VX2骨肿瘤模型,旨在选择较为合理的造模方法.方法 取传代VX2肿瘤荷瘤兔,将肿瘤制备成肿瘤组织块及细胞悬液,将瘤块植入20只新西兰兔左胫骨髓腔内,将肿瘤细胞悬液注入此20只家兔右胫骨内制备VX2骨肿瘤模型.于模型制备后第7、14和21天行双侧胫骨X射线检查,观察肿瘤生长速度和形态;模型制备后第21天处死动物,取肿瘤,观察其形态并取穿刺骨孔周围软组织行病理检查,明确有无肿瘤细胞转移.结果 2种方法建模成功率均为100%.建模后第7、14和21天X射线示瘤块植入组肿瘤生长迅速,形态较规整,而细胞悬液组肿瘤生长较慢.模型制备后21 d,瘤决组发现穿刺孔周围软组织有肿瘤细胞浸润3只,而细胞悬液组有9只,瘤块植入组外渗率为15%,与细胞悬液植入组外渗率45%比较,差异有统计学意义,x2=4.28,P<0.05.结论 瘤块植入法较细胞悬液法制作骨肿瘤模型更为方便,肿瘤生长快,发生肿瘤细胞外渗概率小,是一种理想的骨肿瘤模型制备方式.
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人口腔粘膜上皮角朊细胞的体外培养
人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难,其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型,并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1.材料:培养物来源于5个月~10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干,每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2.方法:①酶消化法:用D-Hanks液冲洗粘膜块,剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液(1∶1)5 ml,将粘膜块放入其中,密闭放入4℃冰箱内12~20 h。将表皮从基底撕脱,放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min,终止消化。低速离心5 min,去上清,加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中,制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L,接种于25 ml培养瓶中。②组织块法:将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小,用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转,放入37℃温箱2~4 h,加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液,轻轻翻转培养瓶,使培养液浸没组织块,静置培养,每周换液2次。
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肿瘤患者围手术期输血浆与术后感染的相关性研究
术后感染可影响预后和增加病死率[1].近几年输血相关免疫功能抑制引起人们高度重视.对于血液中白细胞引起的免疫功能障碍已有共识,研究表明,肿瘤手术患者输注去白细胞悬液可降低术后感染发生率[2],而对围手术期输血浆引起免疫功能抑制与术后感染的相关性目前临床报道较少,我们对2006年1月至2007年12月在我院普外科、胸外科、妇科住院的147例择期手术患者的l临床资料进行分析,以探讨肿瘤患者围手术期输血浆与术后感染的相关性,报告如下.
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体外培养小鼠睾丸间质细胞的形态学特征
本研究初步观察了睾丸间质细胞体外培养的形态学特征,以期为深入研究其分泌睾酮的影响因素奠定基础.方法为无菌取成年雄性昆明小白鼠的双侧睾丸,置于盛有适量PBS的培养皿中;用尖镊撕去附睾及白膜,用吸管吹打至曲细精管与间质组织分散;加入10倍体积的胶原酶,37℃下消化10~15 min后移入10 mL离心管,待曲细精管及间质组织沉降后移出上层细胞悬液;取一滴细胞悬液,加入适量台盼蓝混匀后用红细胞记数板计算细胞数目,调整细胞密度至3×105个/mL;将细胞接种在直径35 mm的塑料培养皿中,常规条件下培养;当细胞开始贴壁时,小心吸去旧液,加入新鲜培养液(D-MEM+10%小牛血清+1%双抗+1%谷氨酰胺)培养,定时观察;当培养细胞80%汇合时,弃去培养液,用PBS缓冲4%多聚甲醛室温固定1 h,PBS洗2次;用异丙醇油红法略加改进后进行脂质染色,苏木精复染;另用95%乙醇和PBS缓冲4%多聚甲醛(9∶1)室温下固定细胞40 min,PBS洗2次,1.4%甲基蓝染色后进行观察.本实验每次所获细胞悬液量均为3 mL,细胞密度为1.76×106个/mL,平均每侧睾丸可获间质细胞5.28×106个,其中活细胞、死细胞的平均百分比分别为88.94%、12.06%.在体外,间质细胞贴壁性状良好,不需特殊粘附分子.接种后一般8~10 h后即发生极化,胞质铺展,伸出突起.培养约14~15 h后即开始贴壁.镜见贴壁细胞透明,基本无颗粒,轮廊不清,增殖的细胞相互连接成单层膜状.细胞化学:甲基蓝染色显示,间质细胞核呈圆形或卵圆形,嗜碱性,位于胞质中央;核仁1~2个,清晰可见,一般位于核的边缘部;其胞质轮廊为多角形,一般有3~4个突起,遥抟中可见有多量大小不一的空泡状结构.油红O脂质染色显示,这些空泡状结构为脂质小滴,呈红色或红褐色,大小不一,圆形悬浮状存在,聚集于胞质两极或散布于核的四周.本实验结果表明,间质细胞胞质中存在大量脂滴,推测这些脂质是为其雄激素分泌功能提供必备前体物质而存在的.
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采用视频系统的细胞原位计数法
在体外细胞培养过程中,细胞生长曲线是反映细胞生物学特性十分重要的指标.传统细胞生长曲线的绘制方法,是通过胰酶消化后制成细胞悬液,显微镜下计数,然后计算出细胞总数[1].这种方法不能在不同时相或用药前后进行自身对照观察,因此我们在实验中采用定位微量细胞培养技术及细胞原位计数法[2],并将视频系统引入该方法中,现简介如下.1 仪器及设备选用菲利浦VR-HD 1000录像机、松下TC-2140监视器、奥林巴斯IX 70倒置显微镜、细胞培养容器(丹麦NUNC 6孔板、12孔板或培养皿)、小玻璃管(外径为6 mm,长为3.5 cm,一端为盲端)、血盖片或普通盖片、投影胶片(非复印型)等.
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白细胞悬液治疗安痛定引起粒细胞缺乏症1例
1 临床资料患者,女,30岁,因持续高热而入院,半日前因受凉,鼻塞,流涕,体温38℃~39℃,在当地医院就诊,查白细胞4.1×109/L,并肌注安痛定3次,共6支,次日仍高热,体温达40℃~41℃,查白细胞0.5×109/L,嗜中性零,嗜睡无力,咽痛,治疗5d,仍持续高热而转入本院入院查T39℃,P130次/min,R24次/min,BP100/60mmHg,神志清,急性病容,周身皮肤粘膜无黄染及出血点,浅表淋巴结不大,口腔粘膜无溃疡,咽充血,有两处麦粒大溃疡,双肺呼吸音粗,无湿性罗音,心率130次/min,律齐,无杂音,腹软,肝脾不大,查血象白细胞0.35×109/L,嗜中性粒细胞绝对值零,血小板98×109/L,骨髓呈成熟障碍,粒系严重受抑,原始及早幼粒占5%,后期不见,红系未见异常,淋巴及网状细胞相对增生占79%,浆细胞占2%,巨核系增生良好,血小板多见.
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胎儿胸腺细胞悬液输注治疗妇女更年期综合症36例疗效观察
笔者近几年用胎儿胸腺细胞悬液输注治疗妇女更年期综合症36例取得较好疗效.现总结报告如下.
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8岁男童捐髓救父
2013年12月29日和30日,年仅8岁的男孩小峰,接受两天的造血干细胞采集,也就是俗称的捐骨髓.他身体里的355毫升,相当于一可乐瓶的干细胞悬液,在12月30日全部输入到身患血液病的爸爸体内.他是目前为止,浙江省年龄小的造血干细胞捐献者.
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蜚蠊过敏原对血细胞的影响
蜚蠊的躯体、粪便和卵荚对人体具有较强的过敏性,我们研究其过敏原对血细胞的影响以揭示昆虫过敏原引起哮喘的机理. 材料和方法(1)制备细胞悬液:抽取正常人静脉血4ml,制成中性粒细胞悬液和血清;
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磁场对荷瘤小鼠免疫功能的影响
我们用SP2/0骨髓瘤细胞致瘤的小鼠作为实验模型,研究了磁场对荷瘤小鼠NK细胞及巨噬细胞表达IL-1的影响。材料和方法 取BALB/C小鼠24只,体重18~22 g,雌雄各半,随机分成3组,每组8只。背部脱毛,取SP2/0细胞3×106个接种于背部皮下(脾区),接种24 h后分组处理。对照组不进行磁疗;旋磁组采用RMT3磁疗机,磁头磁片4片,直径为1.3 cm的永久磁铁,异名极排列,磁头紧贴小鼠脾区(距鼠颈1.5 cm,脊椎左侧0.1 cm),磁感强度在转速2 000 r/min为0.2 T,每天1次,20 min,连续10次;静磁组的磁感强度为0.09 T,磁作用部位、时间及次数同旋磁组。 细胞活性检测:分别取靶细胞(浓度为1×105个/ml K562细胞)及效应细胞(浓度为1×106个/ml 脾细胞)各100 μl 加入96孔板,加MTT 10 μl(5 mg/ml)后置37℃ 5% CO2培养箱4 h,离心,弃上清,各孔加入二甲基亚砜150 μl,震荡10 min,测570 nm A值。 小鼠腹腔巨噬细胞制备:将小鼠处死,无菌操作取腹腔液,离心弃上清,制成细胞悬液浓度为2×106个/ml,加LPS至浓度为10 mg/ml,取1 ml加于96孔板,诱导36 h(置于5% CO2培养箱),上清含IL-1。
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狂犬病毒.CTN-1株在Vero细胞上的适感染量
我们对狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞上的适感染量进行了试验[3],现将结果报道如下。 将已知病毒数量的狂犬病毒CTN-1株与精确计数的Ve-ro细胞充分混匀,放37℃温室吸附0.5h后,用细胞生长液稀至0.01MOI、O.1MOI、1.0MOI、10.0MOI四种病毒感染量。不同感染量的细胞悬液分别放入3立转瓶,置37℃恒温室旋转培养。72h待细胞长成片后浸泡6h洗换,置33℃恒温室继续旋转培养7d、11d、14d连续收2~3次,分别进行毒力滴定。再将不同MOI的收获液分别合并,用30万相对分子质量滤板超滤浓缩30~40倍,加入终浓度为0.025%β丙内酯灭活,经柱层析纯化制得4批疫苗,待检效力。 0.01、O.1、1.0MOI三种感染量的细胞培养瓶细胞生长卅以上都是100%,10.0MOI的细胞培养瓶细胞生长卅以上占50%,后者与前三者比较差异有显著意义
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脾细胞悬液的制备与输注方法
研究表明,脾脏除有造血、破血、滤血等功能外,还有抗感染免疫、抗肿瘤免疫和储存血友病甲球蛋白(AHG)的功能.脾移植对血友病甲和晚期肝癌不失为一种有效的治疗措施.我所自1985年来除脾移植外,另施行脾细胞移植(输注)60例75次,分别治疗血友病甲和晚期肝癌患者.其中晚期肝癌患者33例,血友病甲患者27例15次,均获得满意效果.血友病甲患者出血症状减轻,Ⅷ因子水平不同程度的有所提高.肝癌患者则α-FP水平降低,食欲增加,自觉症状缓解,患者生命质量提高和延长生存时间.长1例为一血友病甲患者,有效功能为9个月,本文主要介绍脾细胞的制作和输注方法.
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一种显示尼氏体的简单方法
我们在科研工作中摸索出一种显示尼氏体的简单方法,对采用4%多聚甲醛(用10%甲醛或95%乙醇固定均可)固定的鸡胚背根节细胞悬液的涂片,用苏木精染色,清晰地显示了神经细胞浆内的嗜碱性物质-尼氏体.
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动物组织细胞分离纯化方法学
要了解某种特定细胞的结构、功能或表面标志等特征,就必须将其在体外培养增殖获得足够的数量以供研究,这首先就必须获取种子细胞.从血液、淋巴液等液体中分离细胞时,可直接进行纯化,从心脏、肝脏等器官分离细胞时,一般的方法是先获得细胞悬液,再对其进行分离纯化.近年来细胞分离纯化技术发展较迅速,它们主要依据两类原则:(1)各种细胞不同的物理性状,如:大小、密度、表面电荷及黏附能力等;(2)各种细胞表面受体或抗原的差异.本研究对其中一些方法在比较的基础上进行综述.
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利用流式细胞术分离大鼠肝脏库普弗细胞
库普弗细胞是定居于肝脏的吞噬细胞,占机体单核-巨噬细胞系统的80%~90%,在免疫调节及肝移植后的免疫耐受诱导中占有重要地位[1].为在体外有效地探讨库普弗细胞的作用,目前已建立多种分离纯化库普弗细胞的方法,如酶消化法、Percoll密度梯度离心法、非实质细胞贴壁培养法及联合多种分离纯化法等[2,3],流式细胞术(flow cytometry)是一种快速分析大量特定材料的技术,当液体介质流经激光源时,可迅速、敏感、准确及高质量的分析细胞悬液中特定细胞群,成为研究细胞功能及纯化细胞群强有力的手段.本研究通过流式细胞术分离纯化大鼠肝脏库普弗细胞,建立一种简便、快速、敏感、高效的分离纯化库普弗细胞的新方法.
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氢化可的松对淋巴细胞转化的抑制作用及意义
目的:研究不同浓度GC对淋转的抑制作用,及GC的竞争性拮抗剂RU38486对其的影响.方法:取献血员的静脉血淋巴细胞悬液,分别与不同浓度的皮质醇(F)及RU38486孵育,测定淋转率(用3H-TdR掺入法).结果:当加入0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L F时,淋转率(%)分别为60±5、62±4、53±5、51±4、48±5、45±4、44±5,抑制率(%)分别为0、12±3、15±3、20±2、25±3、26.6±3;加入GC 0、10-9、10-8、10-6、10-5 mol/L RU38486后,10-8 mol/L F的淋转抑制率(%)分别为15±3、12±2、8±2、5±2、3±1,10-6 mol/L F的淋转抑制率(%)分别为25±3、20±4、13±3、10±3、7±2.结论:F对淋转有明显的抑制作用,其特点为:(1)生理浓度10-9 mol/L即有明显抑制作用;(2)抑制作用具有剂量-效应关系;(3)抑制作用有饱和性;(4)GC的竞争性抑制剂RU38486可逆转其抑制效应.以上几点表明F对淋转有抑制作用,且是由GR介导的.
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免疫抑制剂对白细胞糖皮质激素受体的调节作用
1 材料和方法1.1 材料取女性献血员静脉血200 ml,肝素抗凝,弃血浆,加2倍体积的PBS、1.5倍体积的DextranT500混匀静置15 min,上清液2 000 r/min离心5 min,取沉渣加Tris-NH4Cl溶液37℃温育10 min,使残余的红细胞破裂,2 000 r/min离心5 min,取沉淀物,用PBS洗2次,即可得到白细胞悬液.1.2 方法 Dex、CTX、CsA均设有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 mg/ml共6种浓度,选择三药单用及三药合用,分别加入上述白细胞悬液中作用一定时间后进行白细胞GR特异结合测定,采用放射配体结合法,3H-Dex(1.78 TBq/mmol,英国放化中心产品)浓度为15 nmol/L,用一点分析法.
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白癜风外科治疗新进展——毛囊外根鞘细胞悬液移植
白癜风是一种皮肤色素异常性疾病,表现为慢性局限性的皮肤色素脱失斑,表皮黑素细胞功能进行性丢失,如果出现毛发变白则提示预后较差.白癜风的外科疗法即手术治疗,适用于对光疗或药物治疗无效的稳定期白癜风患者,对非手术疗法不敏感的皮损,如唇部、手足、手指及生殖器等部位也可采用外科疗法.除了常见的白体表皮移植和白体黑素细胞移植,近年来采用毛囊单位提取法获取毛囊外毛根鞘细胞悬液移植作为一种新的外科手段,逐渐显现出其在白癜风治疗中的优势.该文就该方法在白癜风中的应用作一综述.
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自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死三例
例1,男性,60岁.因反复发作活动后胸骨后疼痛3年,加重3 h于2003年8月18日入院.查体:P 70次/分,BP110/70mmHg,颈静脉不充盈,双肺呼吸音清,心界向左下扩大,心率70次/分,律齐,心音S1低钝,心尖部闻及2/6级吹风样SM,双下肢无水肿.心电图Ⅱ、Ⅲ、aVF导联ST水平型或下斜型压低0.2~0.4 mV.血CK-MB106 U/L.诊断:急性下壁非Q波心肌梗死.予常规药物治疗.第7d用超声心动图评估患者左室收缩功能(国际通用16节段半定量法),左室壁节段运动指数(WMSI=各节段积分之和)总积分11.髂骨抽取骨髓约50 ml,密度梯度离心法提取骨髓基质细胞(MSC).行冠脉造影示右冠两处病变(近中段80%狭窄、后降支90%狭窄),送入球囊导管,准确定位于右冠近中段狭窄处,予球囊扩张,同时经球囊导管高压注入8 ml细胞悬液.术后6周复查心电图显示Ⅱ、Ⅲ、aVF导联压低的ST恢复至基线水平,超声心动图测定WMSI为9.