中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脂肪干细胞和生物支架应用于牙槽骨修复
背景：各种生理或病理因素导致的牙槽骨的吸收、缺损是口腔临床医学中的常见问题，但目前较常用的修复缺损牙槽骨的方法不能完全满足临床需要。骨组织工程的出现成为修复骨缺损的研究热点。
目的：就脂肪干细胞的来源和应用价值、生物支架的种类及特性、生物支架对种子细胞的影响及脂肪干细胞复合支架用于动物实验的研究等方面作一总结。
方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1995年1月至2013年4月关于脂肪干细胞、生物支架及骨修复的文章，在标题和中以“脂肪干细胞，分化、增殖和成骨生物支架，牙槽骨，骨组织工程”或“Adipose stem cel s，Differentiation、proliferation and Osteogenesis，Biological scaffold，alveolar bone，bone tissue engineering”为检索词进行检索。选择文章内容与脂肪干细胞和生物支架应用于修复骨缺损有关者，同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到163篇文献，根据纳入标准选择关于脂肪干细胞和生物支架应用于修复骨缺损的40篇文献进行综述。
结果与结论：脂肪干细胞具有与骨髓基质干细胞相似的分化潜能，因其来源广、易采集、易培养低衰老，成骨分化好和风险小等特点被广泛关注，尤其和生物支架应用于骨修复表现出更好的成骨效果。随着有关各科学的发展牙槽骨缺损的修复有关问题都可以解决，脂肪干细胞和生物支架构建工程骨将是实现真正意义上牙槽骨再生的发展趋势且具有良好的发展前景。 -
诱导性多潜能干细胞的研究进展及应用前景
背景：由于诱导性多潜能干细胞可以从患者的诸多细胞进行诱导，避开了干细胞研究的免疫排斥和伦理道德问题，且具有类似于胚胎干细胞的特征。
目的：综述诱导性多潜能干细胞研究进展及应用前景，并提出目前诱导性多潜能干细胞在诱导方法及效率、安全性、应用等方面许多亟待解决的问题。
方法：以“induced pluripotent stem cel s,efficiency，disease model，clinical application”为英文检索词，应用计算机检索Kjmed数据库中2003年1月至2013年6月发表的相关文章。纳入与诱导性多潜能干细胞研究相关的文献，排除重复性研究。
结果与结论：共检索到112篇，排除无关重复的文献，保留32篇进行综述。通过导入特定的转录因子可将成体细胞重编程为诱导性多能干细胞，转染效率低是诱导性多潜能干细胞技术的一个主要障碍。诱导性多潜能干细胞在建立疾病模型、研究疾病发病机制以及新药物的筛选和新治疗方法的探索方面有着巨大的应用前景，且诱导性多潜能干细胞也有较高的临床应用价值，但是，在诱导性多潜能干细胞应用于临床这条道路的探索过程中，还有许多亟待解决和深入探究的问题。 -
现代吸脂技术采集脂肪混合物在脂肪干细胞制备领域中的应用
背景：目前用于整容的吸脂术发展很快，但为了脂肪干细胞应用而进行的综合吸脂术研究和比较尚未见报道。
目的：对比目前各种类型脂肪抽取技术的特点以及对基质血管层、脂肪细胞、脂肪干细胞的数量和存活率等指标的影响，评价出细胞活性高、适合进行脂肪干细胞制备、储存及临床科学研究的吸脂技术。
方法：作者分别采用检索关键词“adipose-derived stem cel s，ADSCs, liposuction，SAL，UAL，PAL，WAL”和“脂肪干细胞、脂肪抽取术、负压吸脂术、超声辅助吸脂术、震动辅助吸脂术、水动力辅助吸脂术”检索了PubMed数据库、中国知网全文期刊数据库和美国NIH 临床试验数据库，排除与研究目的无关和内容重复者，保留50篇文献进行进一步分析。
结果与结论：目前可应用于脂肪间充质干细胞采集的现代吸脂技术主要有负压吸脂、超声辅助吸脂、震动辅助吸脂、水动力辅助吸脂。其中负压吸脂、超声辅助吸脂技术、水动力辅助吸脂技术3类技术采集的脂肪混合物中可以分离出脂肪干细胞且具有较高的活性，可以用作自体细胞辅助移植技术和再生疗法。这4类技术虽然各有特点，有必要进一步研究这些吸脂技术获得的脂肪干细胞的活性、遗传性状稳定性、分化能力等系统性对比数据，为未来的再生医学工程提供更准确完善的支持。 -
中药制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化
背景：中药具有临床应用安全性高等特点，目前已有很多研究应用中药或单体成分体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。
目的：总结、分析中药诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究进展，并展望其应用前景。
方法：应用计算机检索CNKI数据库中2001年1月至2013年1月关于中药诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的文章，以“中药；骨髓间充质干细胞；心肌细胞”或“bone marrow mesenchymal stem cel s，myocardial cel s”为检索词进行检索，排除陈旧及重复实验文章，重点对36篇文献进行分析。
结果与结论：经三七总皂苷、丹酚酸 B、加味丹参饮、淫羊藿苷、黄芪甲苷等不同的中药诱导制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化，诱导后细胞免疫组化和RT-PCR检测结果显示肌细胞纤维蛋白、心肌肌钙蛋白I和主要组织相容性复合体表达均呈阳性，阳性细胞呈梭形和成纤维细胞样形态，即表明有促进增殖分化的作用。结果显示中药诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞已成为国内外该领域的研究热点，为临床治疗心肌梗死等缺血性心脏病提供理论基础。 -
心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移的作用
背景：心肌梗死后间充质干细胞定向心肌迁移的机制尚不甚明了。
目的：探讨基质细胞衍化因子1和趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移中的作用。
方法：分离培养SD乳鼠心肌细胞及SD大鼠间充质干细胞。12只SD大鼠其中6只建立心肌梗死模型，6只行假手术处理，分离循环血单个核细胞，采用三室共培养模型，分别将 DAPI 标记的间充质干细胞、心肌细胞和单个核细胞培养于三室模型的上、中、下室内，设立心肌梗死组、趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100组、假手术组和空白对照组。培养48 h后，荧光显微镜下观察并比较迁移细胞数目，免疫细胞化学和免疫荧光染色分别检测心肌细胞基质细胞衍化因子1和迁移细胞趋化因子受体4的表达。
结果与结论：除空白对照组外，各组中室内均可见迁移细胞，迁移细胞阳性表达趋化因子受体4，心肌梗死组迁移细胞数目显著高于其他各组，加入肿瘤坏死因子α中和抗体和趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100后，迁移细胞数目明显减少(P<0.05)。各组心肌细胞阳性表达基质细胞衍化因子1，心肌梗死组及AMD3100组心肌细胞基质细胞衍化因子1表达灰度值显著高于假手术组及空白对照组(P<0.05)。表明基质细胞衍化因子1/趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后大鼠单个核细胞促间充质干细胞向心肌细胞迁移中发挥了一定作用。 -
骨髓间充质干细胞移植小鼠免疫系统CD4+T细胞亚群的变化
背景：研究表明，间充质干细胞是重要的免疫调节细胞，在自身免疫病的治疗中有潜在的应用前景。
目的：探讨间充质干细胞移植在治疗多发性硬化症等自身免疫性疾病中的机制。
方法：用小鼠制备间充质干细胞，并通过静脉将间充质干细胞输入同基因、异基因小鼠体内，观察间充质干细胞对小鼠中枢免疫器官(胸腺)、外周免疫器官(脾脏)中调节T细胞(Treg)的百分比、Foxp3及白细胞介素10和转化生长因子β1的mRNA的表达。
结果与结论：同基因及异基因间充质干细胞移植均能促进小鼠脾脏、胸腺及淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达水平显著增高，促进小鼠脾脏、胸腺及淋巴结中Foxp3、白细胞介素10和转化生长因子β1的mRNA表达水平显著增高。提示间充质干细胞移植具有治疗自身免疫性疾病的作用，该作用可能是由CD4+CD25+Foxp3+T细胞、白细胞介素10、转化生长因子β1及Foxp3的高表达所介导。 -
胚胎干细胞移植对转化生长因子β1和髓鞘碱性蛋白影响
背景：多项研究证实胚胎干细胞诱导的神经前体细胞能够促进脊髓损伤大鼠功能的恢复。
目的：观察胚胎干细胞经体外诱导培养的神经前体细胞在脊髓损伤大鼠中的作用。
方法：144只大鼠随机分为3组，实验组和对照组建立大鼠脊髓全横断模型，实验组造模后在椎管内损伤区上下两端注射胚胎干细胞衍生细胞；对照组于相同部位注射PBS；假手术组仅行椎板切除，不损伤脊髓，不做其他处理。
结果与结论：对照组和实验组大鼠造模后21 d后，对照组脊髓损伤区域转化生长因子β1表达显著高于实验组(P <0.05)。各时间点实验组大鼠脊髓中髓鞘碱性蛋白表达量显著高于对照组(P <0.05)。细胞移植后各时间点实验组BBB评分明显优于对照组(P <0.05)。提示胚胎干细胞培养诱导分化为神经前体细胞移植后期可降低转化生长因子β1的表达，并可以提高髓鞘碱性蛋白的表达变化，有助于大鼠全横断脊髓损伤的恢复。 -
自体外周血单个核细胞移植老年急性心肌梗死：5年心功能评价
背景：心肌梗死患者出现心室重构及心功能不全是其常见的并发症，老年患者因其自身生理特点上述情况发生可能性更高。近年来干细胞移植治疗急性心肌梗死及心力衰竭成为研究热点，其可行性及安全性已得到证实，但其对于老年患者长期效果尚未明确。
目的：评价自体外周血单个核细胞移植对老年急性心肌梗死患者左室重构和心功能的长期影响。
方法：自2003年8月至2006年8月共入选老年急性心肌梗死患者(年龄≥60岁)30例，分为2组，移植组在常规治疗(药物与介入)基础上经冠状动脉输注自体外周血单个核细胞；对照组经常规方法(药物与介入)治疗。在外周血单个核细胞动员、采集及经冠状动脉回输过程中观察其不良反应。在治疗前及治疗后6，12，24，60个月应用超声心动图评价左室形态及心功能变化。
结果与结论：治疗前两组左室容量及心功能指标比较差异无显著性意义。与治疗前比较，治疗后6，12，24，60个月移植组左室舒张末容积、左室收缩末容积显著降低，左室射血分数显著增高。与治疗前比较，治疗后6，12，24，60个月对照组左室舒张末容积、左室收缩末容积、左室射血分数差异均无显著性意义。与对照组相比较，各个时间点移植组左室舒张末容积、左室收缩末容积均显著降低，左室射血分数增高。随访期间均未发现移植相关不良反应及心血管事件。结果可见自体外周血单个核细胞移植可显著、长期改善老年急性心肌梗死患者的左室重构及心功能情况，且安全性良好。 -
低氧诱导因子1α慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞的成骨基因表达
背景：成骨作用和血管发生在骨的形成和修复过程中紧密结合，而低氧诱导因子1α被认为是促血管新生相关基因调控中重要的核心转录因子，其可促进缺氧部位血管的形成，进而促进骨的形成。
目的：构建野生型和点突变型两个低氧诱导因子1α慢病毒真核表达载体 Lenti-HIF1α-IRES-EGFP，并比较其对兔骨髓间充质干细胞成骨基因表达的影响。
方法：首先根据野生型人源低氧诱导因子1α基因序列信息和确定酶切位点的点突变型序列信息构建低氧诱导因子1α基因野生型和点突变型两个慢病毒真核表达载体；然后采用制备的病毒液转染兔骨髓间充质干细胞。
结果与结论：免疫荧光显微镜观察显示，转染7 d后野生型组和点突变型组细胞均未见明显荧光，转染14 d后两组细胞均呈现明显的绿色荧光；qPCR定量分析结果表明，转染7 d后即有低氧诱导因子1α和骨形态发生蛋白2基因的显著表达，转染14 d后，两基因仍然显示较高的表达水平。说明实验成功构建野生型和点突变型低氧诱导因子1α基因慢病毒真核表达载体，转染后可以促进兔骨髓间充质干细胞成骨基因的表达。 -
骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模型中活化转录因子4基因的表达
背景：研究发现活化转录因子4为近调控成骨细胞分化和功能的活化因子，在成骨细胞分化过程中起着至关重要的作用。
目的：探索SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中活化转录因子4基因的表达变化及其意义。
方法：以全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，传代至第3代细胞时加入成骨诱导剂，在诱导的第0，1，4，7，10，13，16，19天分别采用PT-PCR，Western blot动态监测活化转录因子4基因及蛋白的表达变化，以未进行成骨诱导细胞做对照。
结果与结论：RT-PCR结果显示，活化转录因子4 mRNA的表达随着细胞成骨分化程度加剧而升高，16 d达到峰值。Western blot分析结果显示，活化转录因子4蛋白表达量随着骨髓间充质干细胞骨化程度加剧，表达水平亦呈上升趋势，于16 d达到高峰，19 d维持在高水平状态。实验组各时间点活化转录因子4 mRNA和活化转录因子4蛋白表达与对照组相比差异有均有显著性意义(P<0.05)。结果表明诱导成骨细胞中活化转录因子4表达增强，提示活化转录因子4的增强与骨髓间充质干细胞成骨分化能力呈正相关。 -
全骨髓法培养C57小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性
背景：饲养层细胞多数利用丝裂霉素C来处理，虽丝裂霉素C抑制了细胞增殖，但是细胞仍处于有分泌功能的活性状态，能够分泌不同的细胞因子。而骨髓中的非间充质骨髓细胞和血浆中的各种分泌因子，保持间充质细胞生长的微环境，提高间充质干细胞的产量。
目的：探究全骨髓培养法分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。
方法：采用全骨髓贴壁法纯化扩增C57小鼠的骨髓间充质干细胞，检测细胞增殖的动力学变化、细胞表面的免疫标志物、多向分化的潜能及细胞周期的变化。
结果与结论：全骨髓培养法获得的小鼠骨髓间充质干细胞具有黏附于塑料培养器皿的能力，流式细胞仪检测表达CD45，CD105和Sca-1，不表达CD34，CD133和C-kit等间充质干细胞的表面标记特征；细胞倍增时间(57.11±1.5) h；诱导后具有向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化的能力；细胞周期分析表明64%的细胞处于G 0-G 1期。提示全骨髓培养法获取的C57小鼠骨髓间充质细胞具有间充质干细胞的生物学特征。 -
全骨髓贴壁接触培养SD大鼠骨髓间充质干细胞
背景：体外分离培养出生长状态好、高纯度、增殖能力强和数量充足的大鼠骨髓间充质干细胞，是将其作为种子细胞用于组织和细胞移植的重要前提。
目的：建立简便、快速、有效的SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养方法，并观察其生物学特性。
方法：采用全骨髓法将 SD 大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞进行体外分离培养，贴壁接种法进行细胞纯化、传代。观察细胞生长形态及特征，绘制细胞生长曲线，检测细胞表面标记物，采用体外诱导剂诱导细胞分别向成骨、成软骨、成脂方向分化。
结果与结论：全骨髓贴壁接种法分离培养的骨髓间充质干细胞生长旺盛、纯度高，细胞生长形态呈长梭形，极性排列，细胞生长呈S形生长曲线，群体倍增时间为29 h，细胞在连续传10代后仍具有较强的增殖能力。第3代骨髓间充质干细胞的表面标记物CD44、CD29、CD90均呈阳性表达，CD45、CD34、CD11b则呈阴性表达。第3代骨髓间充质干细胞分别经成骨、成软骨、成脂诱导剂诱导后，茜素红染色、碱性磷酸酶染色、von-kossa矿化结节染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色均呈阳性。结果验证全骨髓贴壁接种法是一种简便可靠的体外分离培养方法，能获得纯度较高的骨髓间充质干细胞，经实验鉴定第3代骨髓间充质干细胞生物活性佳，且具有多向诱导分化能力，适合作为后续实验的种子细胞。 -
系统性红斑狼疮小鼠骨髓间充质干细胞的成骨、成脂分化能力下降
背景：系统性红斑狼疮患者的骨髓间充质干细胞与正常人相比是否有不同，相关报道较少。
目的：对比系统性红斑狼疮模型小鼠与正常小鼠的骨髓间充质干细胞多向分化能力的差别。
方法：分离培养系统性红斑狼疮模型小鼠与C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞(对照组)，分别进行成骨、成脂诱导分化，观察两种小鼠的骨髓间充质干细胞的分化能力。
结果与结论：C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞经传代后，为长梭形，呈均匀分布生长；系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞表现为生长缓慢，细胞相对C57BL小鼠要少一些。经过成骨诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的钙结节和钙盐明显少于对照组，PCR检测成骨基因Runx2，碱性磷酸酶,骨钙素表达也明显下降。经过成脂诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的脂滴明显少于对照组，PCR检测成脂基因PPARγ2，脂蛋白酯酶表达也明显下降。说明系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞成骨与成脂能力都低于C57BL小鼠，系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞的多向分化能力受损。 -
骨髓间充质干细胞修复椎动脉型颈椎病的血管损伤
背景：炎症刺激是椎动脉型颈椎病发病的重要因素，骨髓间充质干细胞具有很强的免疫调节作用，能有效抑制炎症，具有治疗椎动脉型颈椎病的潜能。
目的：探讨椎动脉型颈椎病血管损伤机制及骨髓间充质干细胞的治疗作用。
方法：40只日本大耳兔随机分为4组：空白组不作任何处理；模型组、丹参酮组、干细胞组采用硬化剂注射法制作椎动脉型颈椎病模型。造模24 h后，空白组，模型组不进行干预，丹参酮组和干细胞组经耳缘静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠溶液10 mL和骨髓间充质干细胞混悬液10 mL，干预2周后取材。
结果与结论：与模型组相比，干细胞组管壁中膜平滑肌细胞肥大增生明显受到抑制，血管内皮皱折较匀称；干细胞组与丹参酮组比较无明显差别。与模型组相比，干细胞组椎动脉血管cathepsin B、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达显著下降，差异有显著性意义(P <0.05)；模型组与丹参酮组比较差异无显著性意义(P >0.05)。结果可见炎症反应可能是椎动脉血管受到损伤的机制之一；骨髓间充质干细胞能有效抑制椎动脉血管炎症反应，修复受损椎动脉血管。 -
骨髓间充质干细胞增殖能力与皮质类固醇性骨坏死
背景：皮质类固醇激素性骨坏死是造成髋关节功能丧失的主要病因之一。近年研究表明，激素性股骨头坏死可能与激素引起的骨髓间充质干细胞增殖能力有关。
目的：检测皮质类固醇性骨坏死患者骨髓间充质干细胞的增殖活性，为建立自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死的合理性寻求证据。
方法：选取皮质类固醇性股骨头坏死病例设为股骨头坏死组，按取材部位不同再分为股骨头坏死股骨头组、股骨头坏死髂骨组，同时选取无股骨头坏死、无激素应用的拟行人工关节置换的股骨颈骨折患者设为对照组。用密度梯度离心法分离各组骨髓间充质干细胞，再经贴壁筛选法筛选，选取第3代细胞进行实验。
结果与结论：MTT结果显示，股骨头坏死股骨头组增殖能力明显弱于其他2组，其骨髓间充质干细胞在培养后1-7d为生长滞留期，第8天达到对数生长期，以后进入到平台期，而其他2组较病例组生长曲线明显前移，并且峰值增高。流式细胞仪测定的细胞周期结果显示，股骨头坏死股骨头组中G0/G1细胞比例明显增高，而S+G2/M期细胞比例降低，细胞增殖指数较其他2组降低(P <0.05)，而股骨头坏死髂骨组的细胞增殖活性强。结果证实，皮质类固醇性骨坏死患者股骨头来源的骨髓间充质干细胞增殖活性较低，髂骨来源的骨髓间充质干细胞活性增殖活性较高。 -
骨髓间充质干细胞对肾病综合征大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响
背景：CD4+CD25+调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是肾病综合征患儿免疫失调的重要表现。骨髓间充质干细胞具有免疫调节功能，可上调CD4+CD25+调节性T细胞，抑制淋巴细胞增殖，并已在许多免疫性疾病方面成功应用。
目的：观察骨髓间充质干细胞移植对原发性肾病综合征大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响。
方法：自SD大鼠分离骨髓间充质干细胞，经体外传代培养及鉴定后制备细胞悬液。30只SD大鼠随机均分为3组，生理盐水组和干细胞移植组尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型，干细胞移植组注射阿霉素当日尾静脉射干细胞1×107；正常组不做处理。
结果与结论：①与正常组比较，生理盐水组大鼠均出现肾病综合征表现，以腹水、大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症为特征；干细胞移植组较生理盐水移植组则有明显改善(P<0.05)。②造模第28天，干细胞移植组和生理盐水组大鼠造模后外周血CD4+ CD25+Treg/ CD4+ Treg均明显高于正常组(P <0.05)；干细胞移植组与生理盐水组比较差异无显著性意义(P>0.05)。③造模第28天，干细胞移植组大鼠外周血单个核细胞FoxP3mRNA的表达显著高于生理盐水组和正常组(P <0.05)。提示骨髓间充质干细胞移植对阿霉素肾病综合征模型有一定的治疗作用，其机制可能与上调FoxP3在组织局部的表达而诱导CD4+CD25+Treg产生有关。 -
大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养与CM-DiI荧光标记
背景：目前，对骨髓间充质干细胞的分离、纯化和扩增还没有统一的、标准化的方法。CM-DiI作为荧光标记物稳定、可靠、标记率高、标记简便。
目的：建立SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及标记的方法。
方法：取2只体质量50-100 g雄性SD大鼠，无菌条件下采集双侧股骨、胫骨骨髓，用全骨髓贴壁分离法和密度梯度离心法培养出原代骨髓间充质干细胞，通过及时、反复传代对细胞进行扩增纯化，在体外用荧光活性染料CM-DiI标记第3代骨髓间充质干细胞后作为供体细胞来源。
结果与结论：用全骨髓贴壁分离法和密度梯度离心法两种方法均能成功体外分离培养骨髓间充质干细胞，经流式细胞仪分析，培养出的细胞CD34阳性率为17.5%，CD44阳性率为97.9%、CD90阳性率为91%，与骨髓间充质干细胞表面抗原一致。但培养出的细胞数量全骨髓贴壁分离法明显多于密度梯度离心法，两种方法培养骨髓间充质干细胞的细胞活力和增殖能力无明显差异。CM-DiI能够成功荧光标记骨髓间充质干细胞， CM-DiI作为荧光标记物稳定、可靠、标记率高、标记简便。 -
缺氧和无血清培养对骨髓间充质干细胞内源性硫化氢生成的影响
背景：大鼠骨髓间充干细胞移植后的低存活率多与缺血微环境相关，而硫化氢可以对抗多种细胞与组织的凋亡和损伤模型。
目的：检测大鼠骨髓间充质干细胞在不同缺氧和无血清培养时间后的细胞凋亡、细胞活力、硫化氢含量及其合成酶体系的变化情况。
方法：取第3代大鼠骨髓间充质干细胞，设立5个(0，3，6，12和24 h)不同的缺氧和无血清培养时间点。用SubG1法检测细胞的凋亡率，用CCK-8法检测细胞的活力，并检测细胞培养基中硫化氢的含量以及细胞中硫化氢合成酶体系的表达变化情况。
结果与结论：与正常培养组相比，缺氧和无血清培养不同时间后，细胞的凋亡率显著增高，细胞活力明显下降。缺氧和无血清时间越长，细胞凋亡越多，活力越低，并且细胞培养基中硫化氢含量和细胞中硫化氢合成酶体系的表达也越低，差异有显著性意义。表明缺氧和无血清培养可以抑制大鼠骨髓间充质干细胞中硫化氢及其合成酶体系的生成和表达。 -
软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞微团培养成软骨
背景：滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力，有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞，在其向软骨细胞分化过程中，合适的生长因子起了重要作用。
目的：利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化，并对其鉴定。
方法：采用消化法分别获得 SD 大鼠滑膜间充质干细胞、软骨细胞。收集软骨细胞上清液离心、过滤冻存备用。培养滑膜间充质干细胞至第3代后离心成微团，并用软骨细胞上清液进行成软骨诱导分化，通过形态学观察、免疫组织化学法、RT-PCR检测进行鉴定。
结果与结论：滑膜间充质干细胞使用软骨细胞上清液成软骨诱导21 d后，微团可见似软骨样组织。免疫组化法进行Ⅱ型胶原鉴定，基质能被Ⅱ型胶原染色，细胞染色呈现棕黄色。RT-PCR 结果显示诱导后的微团表达软骨特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。证实软骨细胞分泌的可溶性因子可以诱导大鼠滑膜间充质干细胞向软骨方向分化。 -
活体及体外条件下对角膜上皮干细胞的定位
背景：眼表存在两种形式的上皮干细胞即角膜上皮干细胞和结膜上皮干细胞，角膜上皮干细胞在角膜上皮细胞更新和角膜透明的维持方面起着重要作用。
目的：采用活体激光扫描角膜共焦显微镜和免疫荧光染色技术相结合的方法，从活体和体外层面上对角膜上皮干细胞进行定位研究。
方法：收集2009年9月至2012年9月来河南省眼科研究所就诊的单侧角膜缘干细胞缺乏患者，使用活体激光扫描角膜共焦显微镜检查患者双眼，健侧眼为对照。扫描方位依次为中央角膜及上、下、左、右方的角膜缘，记录扫描图像并分析。眼球材料来自于河南省眼库，切取角膜中央和角膜缘组织，组织包埋剂包被、冰冻切片，切片厚度5-7μm；免疫荧光染色技术检测p63、ABCG2、K3和Connexin 43在角膜中央及角膜缘上皮层的表达。
结果与结论：共有24例患者确诊为单侧角膜缘干细胞缺乏，活体激光扫描角膜共焦显微镜下患侧眼角膜病变区可见结膜细胞及杯状细胞；角膜缘区域Vogt栅栏状结构消失，色素细胞消失，取而代之的是大量纤维瘢痕化组织。免疫荧光染色示表达ABCG2和p63的细胞主要在角膜缘上皮基底层，尤其在近结膜侧的角膜缘及角膜缘中间部表达相对较高，而中央角膜上皮层细胞不表达；K3及Connexin43在角膜缘上皮基底细胞层不表达，中央角膜上皮全层表达。通过活体激光扫描角膜共焦显微镜观察及干细胞标记物检测显示角膜上皮干细胞主要存在于角膜缘外2/3区域的Vogt栅栏基底部及钉突结构中。 -
体外诱导人脐带间充质干细胞向神经干细胞的分化
背景：人脐带间充质干细胞较骨髓、脂肪等来源的间充质干细胞易取材、更为原始，并不受伦理、法律的限制，是中枢神经系统损伤修复具治疗潜力的细胞来源之一。
目的：探讨重组人碱性成纤维生长因子、重组人表皮生长因子定向诱导人脐带间充质干细胞分化为神经干细胞的潜能。
方法：采用碱性成纤维生长因子、表皮生长因子作为诱导剂，体外诱导人脐带间充质干细胞；在倒置显微镜下动态观察细胞形态学变化，并用免疫荧光法检测人脐带间充质干细胞向神经干细胞分化的情况，实时荧光定量PCR技术检测诱导前后神经干细胞标记蛋白巢蛋白在mRNA水平的相对表达量。
结果与结论：形态学观察经诱导后的人脐带间充质干细胞呈神经干细胞球改变；免疫荧光法及实时荧光定量PCR技术均可检测到神经干细胞标记物巢蛋白，并可进一步分化表达神经元标志蛋白神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2以及神经胶质细胞蛋白、神经胶质原纤维酸性蛋白。碱性成纤维生长因子、表皮生长因子可定向诱导人脐带间充质干细胞向神经干细胞及神经元、神经胶质细胞分化。 -
脐带间充质干细胞移植可延缓大鼠失神经肌肉的萎缩
背景：周围神经断伤后生长缓慢，失神经支配的肌肉萎缩及运动终板纤维化，导致肢体功能不可逆障碍。脐带间充质干细胞已经广泛应用于多学科研究，但应用于周围神经损伤中延缓大鼠失神经肌肉萎缩鲜有报道。目的：观察异种异基因脐带间充干细胞移植于大鼠离断坐骨神经断端，延缓失神经肌肉萎缩的效果。
方法：新鲜脐带采集于健康足月产妇，分离鉴定脐带间充质干细胞。制备大鼠坐骨神经SunderlandⅣ度损伤模型，去神经束5 mm，神经外膜修复，5 mm小间隙移植脐带间充质干细胞模型，对照组仅在小间隙内注入同体积生理盐水。测定大鼠坐骨神经功能指数，小腿三头肌湿质量，坐骨神经干潜伏期、动作电位传导速度、波幅，以及骨骼肌纤维横截面积维持率。
结果与结论：造模后4，8及12周，脐带间充质干细胞组大鼠坐骨神经功能指数、右侧小腿三头肌湿质量及骨骼肌纤维横截面积维持率均显著高于对照组(P <0.05)。造模后12周肌电图显示，脐带间充质干细胞组大鼠坐骨神经干潜伏期显著低于对照组，动作电位传导速度及波幅显著高于生理盐水对照组(P <0.001)。提示脐带间充质干细胞移植于大鼠离断的坐骨神经断端，可促进神经生长，延缓失神经肌肉萎缩，维持失神经肌肉形态及功能。 -
低剂量还原型谷胱甘肽可促进人脐血干细胞增殖
背景：获得足够数量的细胞是细胞移植治疗中面临的一个关键问题，有研究表明可以通过合理的刺激促进干细胞增殖。
目的：观察还原型谷胱甘肽对人脐血间充质干细胞的生物学特性的影响。
方法：实验分为两组，对照组为正常人脐血间充质干细胞，实验组为使用0.15 g/L质量浓度的还原型谷胱甘肽处理的人脐血间充质干细胞。
结果与结论：MTT实验结果显示，干预后第5，7，9天，实验组细胞的吸光度值明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞术显示，实验组还原型谷胱甘肽对人脐血间充质干细胞的表面标志分子 CD29\CD44\CD45\CD105的表达无影响。实时 PCR 结果显示，还原型谷胱甘肽可以促进人脐血间充质干细胞中细胞外信号调节激酶mRNA的表达(P<0.05)。结果证实，质量浓度0.15 g/L的还原型谷胱甘肽可促进人脐血干细胞增殖。 -
低氧时脂肪间充质干细胞如何向跟腱细胞分化
背景：脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视，研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数)尤为必要。
目的：将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养，比较氧体积分数对脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化能力的影响。
方法：无菌条件下获取SD大鼠跟腱细胞。SD大鼠脂肪间充质干细胞直接购买，经培养传至第1代后，与跟腱细胞一起在常氧(体积分数20%)和低氧(体积分数2%)条件下经Transwel 间接共培养体系共培养。在培养7，14和21 d ，实时荧光定量 PCR 检测跟腱细胞的特异指标胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ， Tenomodulin ， Thrombospondin-4，Scleraxis 基因相对表达量，免疫荧光染色法检测胶原蛋白Ⅰ和Thrombospondin-4蛋白表达量。
结果与结论：脂肪间充质干细胞与跟腱细胞经间接共培养后，低氧组检测到的跟腱细胞的相关特异指标在基因和蛋白水平上表达水平均高于常氧组。提示氧体积分数可显著影响脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的潜能，低氧是脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的有利条件之一。 -
组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞
背景：研究显示兔脂肪干细胞的体外分离方法大多数为Ⅰ型胶原酶消化法，采用组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞尚不多见。
目的：采用组织块贴壁法从兔脂肪组织中分离培养兔脂肪干细胞，并进行成脂、成骨的诱导分化。
方法：采用组织块贴壁法分离出兔脂肪干细胞，进行体外培养，观察其形态特征。取对数生长期的第3代细胞，用MTT法绘制其生长曲线；流式细胞仪检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况；分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞和成骨细胞分化，油红O、茜素红染色定性鉴定。
结果与结论：体外培养的兔脂肪干细胞呈梭形纤维样细胞形态，生长力旺盛。流式细胞术分析结果显示，第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD29，CD44，阴性表达CD45。兔脂肪干细胞经成脂诱导14 d后，油红O染色阳性；成骨诱导培养14 d后，茜素红染色阳性。提示组织块贴壁法可以分离培养出兔脂肪干细胞。
