中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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胎鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植保护胰岛
背景：胰腺干细胞可在体外维持胰岛的结构，减少胰岛细胞坏死及凋亡，延长胰岛的体外存活时间，保护胰岛的活性。
目的：探索胎鼠胰腺干细胞与胰岛共移植体内保护移植胰岛，提高胰岛移植疗效的可行性。
方法：将成年大鼠35只随机等分为联合移植组、单独胰岛移植组、单纯胰腺干细胞移植组、模型组及对照组，前4组均腹腔注射链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液建立糖尿病模型。联合移植组、单独胰岛移植组、单纯胰腺干细胞大鼠分别在左侧肾包膜下移植分离纯化孕16 d SD大鼠胎鼠胰腺干细胞和/或成年SD大鼠胰岛。
结果与结论：联合移植组大鼠移植后5 d内血糖可降至正常，血浆胰岛素达到正常水平，胰岛存活时间(18.2±2.4) d；单独移植组大鼠血糖可于移植后1周内降至正常，胰岛存活时间(14.4±2.1) d；两组胰岛存活时间比较差异有显著性意义(P <0.05)。而其他组糖尿病大鼠血糖均未能降至正常范围。说明胎鼠胰腺干细胞与胰岛共移植可延长胰岛体内存活时间，保护胰岛功能，提高移植疗效。 -
干细胞移植急性心肌梗死合并心力衰竭患者的心功能变化：2年随访
背景：很多动物实验和临床试验均证实，干细胞移植可改善心脏功能，减少心室扩张及心室重构，在治疗心肌梗死合并心衰方面已经表现出传统治疗方法所无可比拟的优越性。
目的：观察单次自体外周血干细胞移植在急性心肌梗死后心衰患者中的临床疗效。方法：选择2005年8月至2006年9月收治的急性ST段抬高心肌梗死合并心衰患者23例，将入选者分成两组，细胞移植组11例，对照组12例，均急诊行冠状动脉造影及药物洗脱支架置入(PCI)。细胞移植组于支架置入后5 d，采集经粒细胞集落刺激因子动员5 d的外周血干细胞(CD34+细胞，大约1×108)，用冠脉造影注射法注入梗死相关血管。细胞移植后随访2年，观察患者心功能变化及不良反应。
结果与结论：细胞移植组移植前与随访至6个月时相比，心功能明显改善(P <0.05)，左室射血分数提高(6.2±0.2)%，左室舒张末期容积减少(4.7±2.9) mm，而移植后随访至1年、2年时结果并无明显区别(P >0.05)，未发现细胞移植的不良反应。对照组随访至6个月时，左室射血分数下降(0.5±0.1)%，左室舒张末期容积增大(0.4±0.3) mm，并且逐年恶化。证实经皮经冠状动脉内自体外周血干细胞单次移植6个月时，能明显改善急性心肌梗死患者的左室功能，减小左室容量，阻止或延缓左室重构，且安全有效，但随访至2年，心功能没有得到进一步的改善。 -
生长因子可促进自体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死
背景：生长因子是干细胞强有力的动员剂，可以增加注射细胞的黏附力和增殖力，诱导干细胞向梗死区迁移、增殖分化，参与心肌修复。
目的：观察肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子的联合应用在骨髓间充质干细胞自体移植治疗心肌梗死中的作用。
方法：分离培养兔骨髓间充质干细胞，原代培养后采用红光荧光染料 CM-Dil 标记。结扎冠脉前降支制作兔急性心肌梗死模型，然后随机均分为对照组、骨髓间充质干细胞组、肝细胞生长因子+胰岛素样生长因子组和肝细胞生长因子+胰岛素样生长因子+骨髓间充质干细胞组。于心肌梗死区心肌内分4点共注射不同干预试剂。Masson三色法染色检测存活心肌；免疫荧光检测骨髓间充质干细胞分化；心脏超声评价心功能。
结果与结论：建模后4周，肝细胞生长因子+胰岛素样生长因子+骨髓间充质干细胞组 CM-Dil/cTNT+细胞数量明显多于骨髓间充质干细胞组，其存活心肌多，左室射血分数改善明显，左室舒张末径小。肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子联合应用促进自体移植的骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化，增加存活心肌数量，改善心功能，抑制心室重构，可能成为心肌梗死后细胞治疗的有效方法。 -
脐带间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病
背景：脐血间充质干细胞具有很强的增殖能力和分化能力，在趋向分化作用下可以分化成胰岛β细胞，进而起到治疗糖尿病的作用。
目的：观察移植脐带间充质干细胞对大鼠糖尿病的治疗效果。
方法：30只雄性SD大鼠中随机取6只作为对照组，注射生理盐水；其中24只按45 mg/kg的剂量注射链脲霉素建立糖尿病模型后，随机等分为移植组和糖尿病组，移植组大鼠尾静脉注射移植脐带间充质干细胞。
结果与结论：造模后30 d，糖尿病组大鼠空腹血糖维持在较高水平，且高于对照组(P <0.05)。造模后，与糖尿病组相比，移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P <0.05)，体质量显著增加(P <0.01)，45 d时移植组大鼠空腹血糖水平与体质量接近对照组水平(P >0.05)，而糖尿病组大鼠空腹血糖维持较高水平，且体质量持续下降。提示脐带间充质干细胞移植能有效治疗大鼠糖尿病。 -
miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响
背景：研究miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞生长增殖、细胞凋亡等生物学行为的影响，为进一步改善骨髓间充质干细胞在梗死心肌中的生存提供新方法。
目的：观察miR-378转染后的骨髓间充质干细胞耐受缺血缺氧及促进血管形成的能力。
方法：体外培养的骨髓间充质干细胞分为未转染组和转染组，未转染组为未转染miR-378的骨髓间充质干细胞，转染组则采用化学合成的miR-378模拟物转染SD大鼠骨髓间充质干细胞；将两组骨髓间充质干细胞置于缺血缺氧(无血清，体积分数为1%O2、5%CO2，94%N2)环境中培养24 h后，应用锥虫蓝染色计数法、MTS法检测两组细胞在不同时间点的生长及增殖情况，TUNEL法检测细胞凋亡情况；将两组缺血缺氧后的培养基上清液分别刺激人脐静脉内皮细胞，观察血管形成情况。
结果与结论：缺血缺氧干预后48 h和72 h，转染组的骨髓间充质干细胞活细胞数明显高于未转染组(均为P <0.01)；转染组的骨髓间充质干细胞表现出较高的增殖能力，缺血缺氧干预后24 h及48 h细胞增殖升高较未转染组明显，差异有显著性意义(P <0.01，P <0.05)；缺血缺氧后转染组骨髓间充质干细胞的凋亡比例明显下降(P <0.05)。两组细胞均可促进血管腔样结构形成，但转染组血管管腔样结构较未转染组显著增多(P <0.01)。研究结果提示miR-378可促进缺血缺氧后骨髓间充质干细胞的生长增殖并抑制其在缺血缺氧条件下的细胞凋亡，同时可提高其促血管生成的能力。 -
低氧诱导因子1α基因三点突变体体外转染骨髓间充质干细胞
背景：脊髓损伤后只有尽早地在损伤局部构建有效的血管网络，才能为各种细胞的分化提供营养支持和代谢保证，加速损伤局部的愈合。
目的：构建三点突变的低氧诱导因子1α重组腺病毒表达载体，将其转染大鼠骨髓间充质干细胞后检测常氧条件下对脊髓损伤促血管新生的作用。
方法：利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1α编码区的第402，564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1α基因重组入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度，同理包装未突变组和空病毒组；以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验。将病毒液转染入大鼠骨髓间充质干细胞内，通过示踪因子增强型绿色荧光蛋白观察病毒转染效率，通过RT-PCR方法检测4组细胞中低氧诱导因子1α基因mRNA表达情况；进一步通过Western blot方法检测4组细胞中低氧诱导因子1α基因及其下游成血管基因血管内皮细胞生长因子的蛋白表达情况。
结果与结论：编码区第402，564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；3种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。含突变基因病毒液组、含未突变基因病毒液组低氧诱导因子1α mRNA表达量明显高于空病毒液组、空白组(P <0.05)。含突变基因病毒液组细胞低氧诱导因子1α蛋白及血管内皮细胞生长因子蛋白表达量显著高于其他3组(P<0.05)。提示三点突变后低氧诱导因子1α基因不仅能够在常氧条件下大量且高效表达，还同时能够促进其下游血管内皮细胞生长因子基因的高效表达，为脊髓损伤疾病的血管新生治疗提供了一种新的治疗方向。 -
褪黑素通过视黄酸相关孤儿受体α可抑制骨髓间充质干细胞的成脂肪分化
背景：前期研究发现，褪黑素能够抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化，但其作用机制有待进一步研究。
目的：探索褪黑素是否通过核受体视黄酸相关孤儿受体α介导抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的作用机制。
方法：无菌采集骨髓样本，采用密度梯度离心结合贴壁培养分离培养人骨髓间充质干细胞，用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。然后将细胞分为褪黑素组、CGP52608组和对照组，分别以含褪黑素、CGP52608脂肪维持液和正常的脂肪诱导液进行诱导，用荧光定量PCR和Western blot法检测核受体视黄酸相关孤儿受体α在骨髓间充质干细胞以及其成脂肪分化过程中的表达特征。用受体特异性激活剂 CGP52608，考察核受体视黄酸相关孤儿受体α激活状态下，骨髓间充质干细胞成脂肪分化的影响。
结果与结论：原代分离的骨髓间充质干细胞生长旺盛，呈纤维梭状，流式鉴定间充质干细胞表型结果示，CD34和CD45表达阴性，CD29，CD44与CD105表达阳性。荧光定量PCR发现骨髓间充质干细胞高表达褪黑素核受体视黄酸相关孤儿受体α，而且褪黑素能够呈浓度依赖性促进骨髓间充质干细胞表达视黄酸相关孤儿受体α；Western blot检测结果也证实褪黑素呈浓度依赖性促进视黄酸相关孤儿受体α在蛋白水平的表达。在成脂肪分化过程中，褪黑素在早期明显上调视黄酸相关孤儿受体α表达，但在中后期就维持在相对低水平。后，用CGP52608激活视黄酸相关孤儿受体α后，骨髓间充质干细胞成脂肪分化被抑制。因此，褪黑素通过核受体视黄酸相关孤儿受体α抑制骨髓间充质干细胞成脂肪分化，褪黑素在调节脂肪细胞分化过程中发挥重要作用。 -
利用c-kit+骨髓间充质干细胞与心脏脱细胞骨架共培育心肌组织
背景：研究发现c-kit阳性骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞，可能成为理想的种子细胞。
目的：验证利用c-kit+骨髓间充质干细胞及心脏脱细胞骨架培育心肌组织的可行性。
方法：取成年大鼠心脏脱细胞后备用。取大鼠骨髓间充质干细胞，培养至第8代后行c-kit富集，采用5μmol/L的5氮杂胞苷诱导2周后行二氢吡啶受体α2富集，然后继续培养行心肌分化鉴定或种植于心脏脱细胞骨架内行心肌组织培养。6周后，利用心肌细胞特异性蛋白表达及动作电位鉴定心肌细胞分化，利用免疫荧光染色分析新生心肌组织结构。
结果与结论：第2次富集6周后，约60%的骨髓间充质干细胞表达心肌肌钙蛋白T、GATA结合蛋白4、连接蛋白43，电生理分析显示这些细胞可产生心肌细胞样动作电位，证实 c-kit+骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞，种植于脱细胞心脏骨架后可形成排列有序的心肌组织。 -
骨髓间充质干细胞防护肾脏衰老的作用及其机制
背景：骨髓间充质干细胞具有分化成肾小管上皮细胞的功能，故推测，间充质干细胞可能具有治疗慢性肾功能减退的作用。
目的：研究骨髓来源的大鼠间充质干细胞防护肾脏衰老的作用及其可能的机制。
方法：实验建立衰老大鼠模型，尾静脉移植骨髓来源的大鼠间充质干细胞，应用荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记体外培养大鼠骨髓来源的间充质干细胞，将其回输肾脏衰老大鼠体内，应用荧光显微镜下观察间充质干细胞是否能够归巢于肾脏；全自动生化仪测定各组大鼠血清中尿素氮及肌酐水平变化；采用免疫荧光法，利用计算机图像叠加技术，观察蓝色荧光4’，6-二脒基-2-苯基吲哚分别与红色荧光的肾小管上皮细胞特异性蛋白-角蛋白的叠加情况。
结果与结论：骨髓来源的大鼠间充质干细胞能够归巢到衰老大鼠的肾脏。与衰老大鼠模型组相比，经过间充质干细胞生物治疗后的衰老大鼠血清中尿素氮及肌酐水平显著降低(P <0.05)，肾脏组织可见少量4’，6-二脒基-2-苯基吲哚及异硫氰酸荧光素标记的角蛋白双染阳性细胞。结果显示，骨髓来源的大鼠间充质干细胞通过向肾小管上皮分化，这可能是其改善衰老大鼠肾脏的机制之一。 -
钠钙交换体启动子促进诱导多能干细胞向心肌细胞转化
背景：诱导多能干细胞治疗缺血性心脏病被认为是极具前景的方法，但目前仍未找到一种理想的诱导方式。目的：探讨钠钙交换体(NCX1)启动子诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的作用。
方法：构建含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒质粒，使用ViraPowerTM慢病毒包装系统共转染293FT细胞。收集病毒测定病毒滴度后感染小鼠诱导多能干细胞，并使用嘌呤霉素进行筛选。观察胚状体数量以及诱导多能干细胞的分化效率，使用RT-PCR、免疫荧光分析法检测心肌特异标记物。
结果与结论：成功构建了含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒，感染小鼠诱导多能干细胞后使用流式细胞仪分选NCX1+/GFP+细胞。与NCX1-/GFP-细胞相比，NCX1+/GFP+细胞在4 d即出现细胞分化和跳动，NCX1+细胞GATA4/MEF2c/Nkx2.5基因表达分别是NCX1-细胞的4.2，7.5，2.5倍，免疫荧光显示CX43和心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。结果表明，钠钙交换体1启动子可以促进小鼠诱导多能干细胞向心肌细胞分化。 -
骨形态发生蛋白2诱导慢性腱病大鼠肌腱干细胞体外成骨、成软骨分化
背景：目前临床对于慢性腱病缺乏有效的治疗手段，原因在于其发病机制至今尚未阐明。
目的：研究体外骨形态发生蛋白2对胶原酶诱导的大鼠慢性腱病模型髌腱来源肌腱干细胞的成骨、成软骨分化的作用。
方法：从大鼠慢性腱病模型的髌腱中分离培养出原代肌腱干细胞，传代培养至第3代细胞，行成骨、成脂、成软骨诱导分化鉴定其干细胞的特性。将肌腱干细胞(P3)单层培养至细胞融合，用重组人骨形态发生蛋白2干预。7 d后分别行茜素红染色，并行茜素红染色定量分析。将肌腱干细胞体外三维微球培养后分为2组，诱导组用重组人骨形态发生蛋白2干预，对照组不进行干预。21 d后三维微球行苏木精-伊红染色，阿利辛蓝染色以及Sox9和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。
结果与结论：慢性腱病大鼠来源原代肌腱干细胞体外培养呈克隆样集落生长，传代后细胞主要表现为多突的纺锤形和星形的扁平细胞，具有成纤维细胞样的特征。肌腱干细胞(P3)成脂诱导10 d，油红O染色阳性；成骨诱导7 d，茜素红染色阳性；成软骨诱导14 d，苏木精-伊红染色阳性可见软骨样细胞，Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。单层培养的肌腱干细胞用重组人骨形态发生蛋白2诱导7 d茜素红染色阳性，对照组为阴性，茜素红染色定量检测显示差异有显著性意义。重组人骨形态发生蛋白2诱导肌腱干细胞21 d，苏木精-伊红染色可见软骨样细胞形成、阿利辛蓝染色可见细胞内糖胺多糖沉积、Sox9和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性。可见体外重组人骨形态发生蛋白2可以诱导慢性腱病来源的肌腱干细胞成骨、成软骨分化。这为进一步研究慢性腱病的发病机制提供了细胞生物学依据。 -
人胎盘不同组织分离间充质干细胞的生物学特性
背景：胎盘间充质干细胞来源稳定，正逐渐成为广受关注的再生医学种子细胞来源。
目的：比较从胎盘组织绒毛膜与绒毛滋养层分离获取人胎盘间充质干细胞生物学特性的差异。
方法：手术剪剥离人胎盘表面羊膜，分别剪取胎儿侧的绒毛膜与绒毛滋养层组织机械破碎后，分别加含Ⅱ型胶原酶的PBS消化液消化，分离为单个核细胞，用含有体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、体积分数5%CO2、95%饱和湿度下培养，48 h后全量换液，去除非贴壁细胞，添加新鲜培养基，当细胞融合90%左右时，胰酶传代。通过观察原代细胞总数，细胞生长形态，以及间充质干细胞表面标记CD90、CD73、CD105的流式细胞测定结果比较从不同胎盘组织分离获得胎盘间充质干细胞的差异。
结果与结论：流式细胞仪测定结果显示，从绒毛膜与绒毛滋养层中分离得到细胞间充质干细胞表面标记CD90、CD73以及CD105的阳性率都在90%以上，两种来源的细胞生长都呈现典型的成纤维细胞形态，这表明绒毛膜与绒毛滋养层中分离得到细胞都具有间充质干细胞的特性。提示消化时间相同，酶浓度相同，以及摇床转速相同的情况下，可从绒毛膜中可以得到更多的细胞，对于后续培养更易获得较多的细胞。 -
诱导多能干细胞建系及体外造血祖细胞定向分化体系的建立
背景：目前，大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立，但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。
目的：建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。
方法：采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞，获得了诱导多能性干细胞；在诱导分化体系中添加了 Y-27632，克服干细胞扩增中的凋亡现象；运用OP9细胞产生的条件培养液建立诱导多能性干细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。
结果与结论：①前3代细胞克隆传代时，诱导多能性干细胞发生凋亡的现象很多，很难大规模扩增培养。培养基中添加阻断 ROCK活化的抑制剂，能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡。②诱导多能性干细胞在 OP9细胞条件培养液作用下，经过体外诱导分化，形成CD34+造血祖细胞。 -
新生CD-1小鼠雌性生殖干细胞的建系及生物学特征
背景：传统观点认为雌性哺乳动物出生后不再产生新的卵母细胞，近年来多项研究表明出生后哺乳动物卵巢中存在能再生卵子的雌性生殖干细胞。
目的：从新生CD-1小鼠卵巢中分离、纯化雌性生殖干细胞并建系及进行生物学特征研究。
方法：通过两步酶消化法和免疫磁珠分选从新生 CD-1小鼠卵巢中分离与纯化雌性生殖干细胞并体外长期培养，然后通过RT-PCR、细胞免疫荧光化学和核型分析鉴定其生物学特征。
结果与结论：从3-5 d龄CD-1小鼠卵巢中分离出雌性生殖干细胞并建立细胞系，目前已在体外长期培养15个月，共传代70多次。该细胞系表达Mvh，Dazl，Oct-4，Stel a，Blimp1，Fragilis等生殖细胞标志物，同时通过Fragilis和BrdU的双免疫荧光实验证实了其增殖活性和生殖细胞特性；核型分析发现该细胞系也具有正常的二倍体核型。因此CD-1小鼠卵巢中存在具有有丝分裂活性和正常的核型的雌性生殖干细胞。 -
蛛网膜下腔阻滞不影响脐血单个核细胞向神经细胞的分化
背景：有学者认为麻醉状态可提高脐血采集分离质量，目前尚无蛛网膜下腔阻滞对脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞分化影响的研究。
目的：观察蛛网膜下腔阻滞对新生儿脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞方向分化的影响。
方法：选择顺产新生儿及蛛网膜下腔阻滞剖宫产新生儿脐血标本各20份，分别列为对照组及研究组，在胎儿娩出后抽取脐血分离接种脐血单个核细胞，并进行体外培养，每份标本常规培养3 d后分别进行非诱导分化培养和向神经细胞方向诱导分化培养。对培养前后细胞进行神经干细胞、星形胶质细胞标志性Nestin、GFAP抗原免疫组化鉴定。
结果与结论：蛛网膜下腔阻滞剖宫产新生儿脐血单个核细胞诱导分化培养后表达 Nestin、GFAP 抗原阳性细胞，与顺产新生儿比较差异无显著性意义(P >0.05)。结果显示蛛网膜下腔阻滞对新生儿脐血单个核细胞向神经干细胞及星形胶质细胞方向分化没有影响。 -
人脐带间充质干细胞的分离鉴定及多向诱导分化
背景：脐带间充质干细胞取材方便、无创，不受伦理学限制，比一般干细胞原始，免疫原性小，其应用前景广阔，是一种理想的种子细胞。
目的：分离鉴定脐带间充质干细胞，并诱导其向成骨细胞和成脂细胞分化。
方法：组织块贴壁法分离纯化脐带间充质干细胞，取对数生长期的第3代细胞，观察细胞形态、生长方式；流式细胞仪检测干细胞表型CD90、CD105、CD34和CD45的表达情况，并在体外检测能否将其诱导分化为成脂细胞及成骨细胞。
结果与结论：用组织块法成功分离培养出脐带间充质干细胞，流式细胞学鉴定显示细胞强表达 CD90和CD105，不表达 CD34和 CD45；能在体外将其成功诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结果显示组织块贴壁法能够从人脐带中分离出间充质干细胞，该细胞可向成脂细胞及成骨细胞分化。 -
原代人脐带间充质干细胞培养方法的研究
背景：如何获得大量稳定活力好的细胞是人脐带间充质干细胞培养的难点。
目的：通过组织块法、酶消化法和酶解组织块法3种细胞培养方法比较，筛选出佳的人脐带间充质干细胞的培养方式。
方法：分离新鲜脐带10根，分别采用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方式培养人脐带间充质干细胞，比较3种方式原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间、细胞培养成功率、绘制细胞增殖曲线，利用流式细胞仪检测细胞表面标志，并进行多项分化能力检测。
结果与结论：酶解组织块培养法原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间与酶消化法无显著差异，但明显短于组织块法(P <0.01)，原代人脐带间充质干细胞培养成功率显著高于其他两组，人脐带间充质干细胞增殖情况3组无显著性差异，酶解组织块培养法培养的第3代人脐带间充质干细胞其细胞表面标志及多项分化能力符合间充质干细胞的特性。酶解组织块培养法能缩短原代人脐带间充质干细胞爬出时间，显著提高原代人脐带间充质干细胞的成功率。 -
不同代次大鼠脂肪间充质干细胞增殖及成神经球的能力比较
背景：脂肪间充质干细胞是一组具有多向分化潜能的干细胞，体外在一定条件下可分化为神经干细胞。目的：观察不同代次大鼠脂肪间充质干细胞体外培养增殖能力及诱导成神经球的潜力。
方法：取SD大鼠脂肪体外分离培养出脂肪间充质干细胞并传代扩增，分别在P3、P6、P10、P20时观察其形态学变化、测定增殖速度。流式细胞仪检测定不同代次细胞表型及细胞周期。将脂肪间充质干细胞诱导为神经球，计数成神经球率。
结果与结论：脂肪间充质干细胞主要呈长梭形，不同代次的脂肪间充质干细胞均具有很强的体外增殖能力；除P3细胞其他代次细胞均高表达CD29、CD44、CD73，低表达CD45、CD34。细胞周期中G0/G1期细胞所占比例P3为93.4%、P6为92.7%、P10为92.4%、P20为86.0%。P6、P10诱导成神经球率均显著高于P20(P<0.05)，P3细胞较难诱导成神经球。提示以脂肪间充质干细胞作为种子细胞时，应注意选择适宜的扩增代数，以便在获得足够纯度细胞的同时保留细胞佳的分化潜力。 -
人脂肪干细胞促进小鼠随意型皮瓣血管的新生
背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离提取的一种具有多向分化潜能的干细胞，对缺血性疾病的治疗有积极作用。
目的：观察局部移植人来源脂肪干细胞对小鼠随意型皮瓣成活能力及血管新生效应的影响。
方法：体外经分离、培养及传代健康成人脂肪干细胞。于SPF小鼠背部设计蒂在头侧的随意型皮瓣设为实验组，随后于皮瓣蒂部、中部、远端分3次注射脂肪干细胞悬液、并设置以同法注射等量PBS的小鼠作对照组。移植后7 d，计算各组皮瓣成活率。移植后14 d，取皮瓣组织，随机作冰冻切片CD31免疫荧光染色，荧光显微镜下观察皮瓣组织微血管分布情况，并对CM-Dil标记的脂肪干细胞示踪；ELISA法检测皮瓣组织中血管内皮生长因子水平；Western blot法检测皮瓣组织中基质细胞衍生因子1蛋白的表达。
结果与结论：与对照组相比，实验组小鼠背部随意皮瓣成活率明显提高，皮瓣组织中微血管数目明显增多，血管内皮生长因子分泌水平明显升高，基质细胞衍生因子1蛋白表达明显增多(P <0.05)。结果证实，人脂肪干细胞局部移植到随意型皮瓣后，可上调血管内皮生长因子和基质细胞衍生因子1的表达，促进皮瓣的血管新生。 -
C57小鼠脂肪及骨髓间充质干细胞生物学特性的比较
背景：研究发现，脂肪源干细胞具有和骨髓间充质干细胞一样的贴壁和形成成纤维样克隆特性，并具有向骨、脂肪、软骨等多系分化的能力。
目的：比较C57小鼠脂肪源间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物学特点。
方法：在无菌的条件下分别从C57小鼠的脂肪和骨髓中获取脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。体外分离、培养并将脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞传至第3代，进行细胞形态、表面标记、生长动力学分化潜能测定和Notch信号相关基因的检测。
结果与结论：脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞形态学相似，第3代的脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达CD29、CD105、Sca-1，不表达CD34、CD133，但骨髓间充质干细胞还表达CD45；生长曲线和细胞克隆分析显示脂肪间充质干细胞的增殖速度明显比骨髓间充质干细胞快；脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均可向成骨、成脂、成软骨诱导分化，脂肪间充质干细胞更易向成骨诱导；Notch 相关基因检测显示脂肪源干细胞的 Jagged-1表达水平明显比骨髓间充质干细胞低，而 Hes-1的表达水平脂肪源干细胞明显高于骨髓间充质干细胞的表达水平。提示脂肪间充质干细胞比骨髓间充质干细胞扩增能力更强，更易向成骨分化,可能与Hes-1表达水平有关。 -
成人脂肪间充质干细胞的定向成骨诱导
背景：脂肪分离可获得大量的间充质干细胞并成功向骨、软骨、脂肪、心肌等多个方向诱导分化。
目的：建立成人脂肪间充质干细胞体外分离培养、成骨分化方法，并探讨脂肪间充质干细胞作为骨组织工程的种子细胞的前景。
方法：通过胶原酶消化法从成人脂肪中分离间充质干细胞，进行体外培养，流式细胞仪检测细胞表面标记物， CCK8检测细胞活性，成骨诱导液诱导干细胞向骨细胞分化，BCIP/NBT比色法染色检测碱性磷酸酶，茜素红染色检测钙结节形成，RT-PCR检测碱性磷酸酶，骨桥蛋白表达变化。
结果与结论：利用脂肪抽吸液成功培养出脂肪间充质干细胞，且能稳定传代，增殖能力旺盛；流式细胞仪检测证实有特定的间充质干细胞表面标记物表达；成骨诱导脂肪间充质干细胞后呈典型的成骨细胞形态；碱性磷酸酶染色阳性，茜素红染色后可见钙结节形成，成骨诱导培养0，3，7，14，21，28 d，RT-PCR定量检测结果证实碱性磷酸酶、骨桥蛋白阳性表达。说明用酶消化法可以从人脂肪中分离得到脂肪间充质干细胞；脂肪间充质干细胞可向骨细胞诱导分化，阳性表达骨桥蛋白，碱性磷酸酶，是一种优良的骨组织工程的种子细胞。 -
神经生长因子重组反转录病毒载体在神经干细胞中的表达
背景：神经生长因子属于生物大分子，难以透过血脑屏障，而反转录病毒载体能稳定地将外源基因插入并整合到宿主细胞基因组内，适于作为基因治疗的载体。
目的：探讨神经生长因子基因重组反转录病毒表达载体在神经干细胞中的表达情况。
方法：将SD大鼠神经生长因子基因重组反转录病毒表达载体pLEGFP-NGF通过脂质体Lipofectamine 2000转染包装细胞PT67，经G418筛选后，收集阳性克隆病毒上清，用于感染神经干细胞，用ELISA检测神经生长因子基因的表达，并利用 PC12细胞检验神经生长因子的生物学活性，同时观察神经生长因子对神经干细胞存活、分化的影响。
结果与结论：重组了神经生长因子基因的反转录病毒液感染神经干细胞后能表达外源性神经生长因子蛋白，该蛋白能促使PC12细胞数量增多，突起明显变长，并能增加神经干细胞的存活数量，促进神经干细胞分化。结果说明整合了神经生长因子基因的神经干细胞能表达外源性神经生长因子，表达的神经生长因子对神经干细胞的存活及分化均有促进作用。 -
人结直肠癌趋化因子配体生物轴及干细胞标志物基因表达与临床病理
背景：趋化因子配体12/趋化因子受体4生物学轴在肿瘤的特异性转移中有重要作用，而干细胞标志物糖蛋白激素受体5基因的表达对于肿瘤的增殖和侵袭转移发挥重要作用。
目的：观察趋化因子配体12/趋化因子受体4生物轴以及干细胞标志物糖蛋白激素受体5基因在人结直肠癌组织中的表达变化及其与临床中的病理特征的关系。
方法：收集2013年1至6月辽宁省肿瘤医院收治100名结直肠癌患者为实验组，100名健康体检者为对照组，采用免疫组织化学SP法检测两组组织中趋化因子配体12、趋化因子受体4及干细胞标志物糖蛋白激素受体5 mRNA表达情况，并分析趋化因子配体12、趋化因子受体4及干细胞标志物糖蛋白激素受体5 mRNA表达与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小及部位、淋巴转移以及预后等临床病理特征的相关性。
结果与结论：趋化因子受体4、糖蛋白激素受体5 mRNA在结直肠癌组织中均有较高的表达率，但是趋化因子配体12 mRNA表达率降低。趋化因子受体4、干细胞标志物糖蛋白激素受体5 mRNA、趋化因子配体12 mRNA三者与结直肠癌患者的年龄、性别等患者临床特征无相关性，与结直肠癌的发病位置及其大小也无相关性，与结直肠癌组织是否淋巴转移具有相关性关，伴有淋巴转移的结直肠癌组织中干细胞标志物糖蛋白激素受体5 mRNA和趋化因子受体4的表达率更高，而趋化因子配体12 mRNA表达无显著变化；趋化因子受体4表达随肿瘤的恶性程度增高而增高；糖蛋白激素受体5表达于胃肠道肿瘤和脑肿瘤干细胞等表面，其表达随肿瘤的恶性程度增高而增高。提示结直肠癌组织中趋化因子受体4的表达增高，糖蛋白激素受体5基因表达增高，二者增高促进了结直肠癌组织生长及转移，糖蛋白激素受体5以及趋化因子配体12/趋化因子受体4轴的表达的调控，使其或将成为肿瘤诊断及治疗的重要新靶点。 -
角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路
背景：毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用，Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用，但详细机制尚未明确。
目的：探讨在角质细胞生长因子及氯化锂干预下，Wnt/β-catenin信号通路在人毛囊干细胞向毛囊乳突细胞或表皮细胞定向分化中的作用及与其他信号分子的相互关系。
方法：获取毛囊隆突区干细胞进行培养，检测其生长曲线，观察1×106 L-1、1×107 L-1、1×108 L-1和1×109 L-1培养的毛囊干细胞在不同时间点的增殖效应；使用免疫荧光染色法对毛囊干细胞及其分化细胞进行鉴定。分别以0，0.5，1.5，10，25 mmol/L氯化锂及0，10，25，50，100μg/L角质细胞生长因子诱导毛囊干细胞分化，对比各组细胞的增殖效应，探索促毛囊干细胞分化的佳氯化锂及角质细胞生长因子浓度。使用RT-PCR检测未处理对照组、10 mmol/L氯化锂组和10μg/L角质细胞生长因子组干预后3，5，7，9 d细胞的β-catenin、APC、GSK-3β、Axin和Lef1的mRNA转录水平。
结果与结论：分离培养的毛囊干细胞在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能，随氯化锂浓度升高，细胞增殖效应减弱；而随角质细胞生长因子组质量浓度增高细胞增殖能力增强。含有氯化锂的K-SFM条件培养基中毛囊干细胞形态改变明显，各组间有明显差别，氯化锂>10 mmol/L时分化比例高，β-catenin表达量增高；而含有角质细胞生长因子K-SFM条件培养基中毛囊干细胞向表皮细胞分化，β-catenin变化不明显。提示氯化锂在促毛囊干细胞分化中，激活 Wnt/β-catenin 信号通路，抑制降解复合物重要成分GSK-3β的表达下降，促使β-catenin在细胞浆表达增加并转入核内，增加靶基因转录，促使毛囊干细胞向毛囊细胞方向分化。氯化锂>10 mmol/L是促毛囊干细胞分化的佳浓度，但增殖效应减弱。角质细胞生长因子可促进毛囊干细胞向表皮分化，可促进毛囊干细胞增殖和迁移，促进创面再上皮化及创面愈合。氯化锂和角质细胞生长因子促毛囊干细胞定向分化的作用机制可能为激活Wnt/β-catenin信号通路，促使β-catenin表达改变，从而激活Wnt信号通路中Lef介导相关靶基因的转录。 -
维持性血液透析患者血清干细胞因子与皮肤瘙痒的关系
背景：目前慢性肾功能衰竭皮肤损害的发病机制尚未完全阐明。干细胞因子在慢性肾脏病及其并发症的发生、发展过程中可能起至关重要的作用。国内外有关维持性血液透析患者外周血干细胞因子水平的变化及其与皮肤瘙痒的关系鲜有报道。
目的：检测尿毒症维持性血液透析患者外周血干细胞因子水平的变化，并分析其与皮肤瘙痒的关系。
方法：采用ELISA法检测86例维持性血液透析患者外周血干细胞因子水平，采用目测类比评分法对尿毒症皮肤瘙痒程度进行评分，根据分值分为4组，0-2分组23例，3-5分组21例，6-8分组24例，>8分组18例。比较各组间干细胞因子水平的差异，并分析其与血红蛋白、全段血甲状旁腺激素的相关性。
结果与结论：各组患者性别、年龄、体质量指数和血压比较差异均无显著性意义(P >0.05)。随着尿毒症皮肤瘙痒程度的加重，外周血干细胞因子水平逐渐升高(P <0.05)，血红蛋白水平逐渐降低(P <0.05)，全段血甲状旁腺激素逐渐升高(P <0.05)。外周血干细胞因子水平与血红蛋白呈明显负相关(r=-0.60，P <0.01)；与全段血甲状旁腺激素呈明显正相关(r=0.7，P<0.01)。提示外周血干细胞因子可能在尿毒症皮肤瘙痒的发生、发展过程中起重要作用。
