酶消化及差速贴壁法原代培养新生C57小鼠耳蜗膜蜗管外侧壁成纤维细胞

背景:目前对耳蜗膜蜗管外侧壁成纤维细胞的培养没有特定的方法.目的:采用酶消化与差速贴壁相结合的方法,原代培养新生C57小鼠膜蜗管外侧壁成纤维细胞,提供良好的体外细胞模型.方法:显微解剖分离新生C57小鼠膜蜗管外侧壁组织,对膜蜗管外侧壁组织进行胰蛋白酶消化与差速贴壁相结合的方法培养成纤维细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,苏木精-伊红染色,绘制细胞生长曲线,免疫组织化学染色鉴别细胞来源.结果与结论:膜蜗管外侧壁组织来源传代纯化的成纤维细胞呈梭形和三角形,生长曲线成S形,免疫组织化学检测波形蛋白,细胞胞浆中呈棕黄色阳性反应.结果证实培养出小鼠膜蜗管外侧壁成纤维细胞.

妊娠相关骨盆痛患者的行走步态与运动协调

背景:妊娠相关骨盆痛患者常常有不同程度的行走功能障碍,但具体发病机制尚未阐明.目的:通过了解妊娠相关骨盆痛患者步行速度、步态与胸廓、骨盆和腰椎的运动协调的变化,探讨妊娠相关骨盆痛运动病理机制.方法:比较12名健康孕妇和12名患有妊娠相关骨盆痛孕妇的步态运动,计算其胸廓、骨盆和腰椎在水平面上节段性旋转的幅度、各个节段旋转的时间差和节段间的相对相以及脊柱整体旋转的幅度.结果与结论:妊娠相关骨盆痛患者的步行速度较对照组慢,并且与运动恐惧感呈负性相关.患者胸廓、骨盆和腰椎的旋转幅度较大,而且有较大的个体间差异.脊柱的旋转在两组间没有差别.患者快速步行时胸廓旋转的峰值出现在步态周期的早期而相对相却较小,也许这可以避免骶髂关节和脊柱过度旋转的转矩.

失神经骨骼肌萎缩中泛素蛋白连接酶Murf1和核转录因子NF—κB表达与被动运动干预

背景:蛋白质分解是延缓肌萎缩发生的关键环节,在慢性病性、制动性肌萎缩中泛素蛋白连接酶Murf1和核转录因子NF-κB的表达增加,被动运动已被证实可以有效抑制肌萎缩的发生.目的:探讨泛素蛋白连接酶Murf1和核转录因子NF-κB在大鼠失神经肌萎缩中不同时段的表达,以及被动运动对失神经骨骼肌Murf1和NF-κB表达的影响.方法:假手术组大鼠不切断右下肢坐骨神经,失神经组、失神经被动运动组大鼠切断右下肢坐骨神经.术后1 d起,将失神经被动运动组大鼠置于自制的网夹内,拉出右后肢,抓住趾部,与脊柱呈45°向后外方牵拉,至右后肢完全伸直,再将右后肢推向身体,使之完全屈曲紧贴身体,每天训练2次,每次屈伸运动300下,3min/次,直至切取标本之日.干预2,14,28 d后,采用RT-PCR与Western Blot技术分别检测Murf1,NF-κB mRNA和蛋白质的表达.结果与结论:与假手术组比较,各时间点失神经组Murf1,NF-κBmRNA及蛋白的表达均明显增加(P<0.05);与失神经组比较,各时间点失神经被动运动组Murf1及NF-κB mRNA的表达均显著降低(P<0.01).失神经支配后肌湿质量比明显下降,被动运动14 d时肌湿质量比明显高于失神经组(P<0.05).失神经腓肠肌中Muff1,NF-κB mRNA和蛋白的表达与肌湿质量呈负相关(r=-0.795,P<0.01;r=-0.834,P<0.01),提示被动运动可能通过降低Murf1和NF-κB的表达发挥肌萎缩防治作用.

犬黑皮质素受体3原核表达载体的构建与表达

背景:近年黑皮质素受体家族在体内能量平衡中的作用越来越受到重视.黑皮质素受体3基因突变是引起体质量增加的重要因素之一,但是目前对黑皮质素受体3的深入研究很少,且未见在蛋白水平上检测其表达的单克隆抗体.目的:构建犬黑皮质素受体3基因编码区的原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达.方法:以Beagle犬基因组DNA为模板,设计特异性引物,经PCR技术扩增目的片段后,克隆到pMD18-T载体上,双酶切鉴定以后将目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coli DH5α,筛选阳性克隆,DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,利用Western blot检测犬黑皮质素受体3融合蛋白的表达.结果及结论:成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R,经DNA测序证实插入序列与Genebank上公布的序列一致.此重组体经诱导后能在E. coli BL21内表达犬黑皮质素受体3融合蛋白,为进一步获取犬黑皮质素受体3的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究大黑皮质素受体3蛋白的结构和生理功能提供帮助.

遗传性乳光牙与正常恒牙牙本质表面形貌及元素分布和显微硬度的差异

背景:目前国内外对遗传性乳光牙本质的研究主要集中于牙本质发育异常家系调查和表型分析,对遗传性乳光牙本质的物理性能的研究鲜有报道.目的:对比研究遗传性乳光牙与正常恒牙的牙本质的表面形貌,元素分布以及显微硬度的差异.方法:收集3例遗传性乳光牙本质患者需要拔除的牙齿,共5颗.选择年龄、性别相匹配的无龋坏的正畸牙作为对照的正常恒牙.采用扫描电镜,X射线能量色谱仪,纳米压痕仪对遗传性乳光牙和正常恒牙的牙本质进行表面形貌观察,元素分布以及显微硬度进行测试.结果与结论:遗传性乳光牙的牙本质结构松散,牙本质小管结构改变;遗传性乳光牙的牙本质中钠、锌、硫、钙含量显著高于正常恒牙,而镁、磷、氯降低正常恒牙(P< 0.01);遗传性乳光牙的牙本质中钙/磷比值为1.76,明显高于正常恒牙(P<0.01).遗传性乳光牙的牙本质的显微硬度是(1.18±0.18)GPa,明显低于正常恒牙牙本质的显微硬度(1.72±0.48)GPa(P<0.01).因此,说明遗传性乳光牙本质小管结构发生改变,其硬度低于正常恒牙牙本质的硬度,这可能与遗传性乳光牙本质元素分布有关.

建立人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳的分离体系

背景:双向电泳分离技术是蛋白质组学研究的核心技术之一,但蛋白质样品的分离效果受各种实验条件的影响较大.因此,针对不同来源的蛋白样品进行实验条件的优化可获得具有较高分辨率的双向电泳图谱.目的:拟建立优化的人肾小管上皮细胞株蛋白质组双向电泳分离体系.方法:常规培养人肾小管上皮细胞株HK-2细胞并裂解提取全蛋白,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行优化.等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整.改良硝酸银法进行蛋白质斑点染色.采集电泳图谱并分析双向电泳图谱中蛋白斑点的数量、图像分辨率及背景条纹的变化.结果与结论:通过对实验条件的筛选和优化,成功建立了具有较高的分辨率和重复性的人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳分离体系.其中,优化后的裂解液配方成分为1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/L Tris,8mol/L尿素,2 mol/L硫脲:采用pH 4～7的IPG胶条;上样方式选择被动的水化上样.等电聚焦过程中使用预设的缓慢升压模式,充分聚焦后选用合适的电压模式进行SDS-PAGE电泳,然后采用改良硝酸银法进行染色,终获得了满意的蛋白质组双向电泳图谱.

冷保存方法构建的大鼠肝移植模型

背景:肝移植是终末期肝病为有效的治疗手段,移植后胆病是制约肝移植发展的主要障碍之一.目的:建立稳定的大鼠冷保存肝移植模型,探讨冷保存对肝移植后肝脏胆管的影响.方法:120只雄性SD大鼠随机分为4组,按照组内随机配对的原则,体质量相对较轻的大鼠做为供体,供肝置于4℃ UW液中分别保存2,8,16 h后行原位肝移植.在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立动脉化大鼠原位肝移植模型,供受体肝总动脉采用改良"支架法"进行端端吻合,重建肝动脉血供.记录移植手术时间及移植成功率,并分别于移植后3,7 d检测血清转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶水平,同时观察组织病理学改变.结果与结论:实验共完成55例次大鼠原位肝移植手术,手术成功率为93%.冷保存2,8,16 h组术后7 d存活率分别为100%(9/9),83%(10/12),73%(8/11).随着冷保存时间的延长,肝功能及肝内胆管损伤加重,胆管组织病理学评分显示各组间差异有显著性意义(P<0.05).其中供肝冷保存16 h大鼠肝移植模型既有较高的手术存活率又有严重的胆管损伤,是研究冷保存对肝移植胆管病影响的较好模型.

蛋白酶体抑制剂MG-132作用下失神经骨骼肌myf-5的表达

背景:MG-132是蛋白酶体抑制剂的一种,有报道显示其对失神经骨骼肌萎缩有延缓作用.目的:进一步验证蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠骨骼肌成肌调节因子myf-5基因表达的影响.方法:SD大鼠随机被分成3组,空白对照组不切断坐骨神经,仅做假手术,去神经组和去神经MG-132干预组切断坐骨神经1 cm以上,制作失神经骨骼肌动物模型,去神经MG-132干预组肌肉内注射MG-132.分别于去神经第2,7,28 d处死大鼠.用反转录聚合酶链式反应技术检测myf-5 mRNA表达情况,Western-blot检测myf-5蛋白表达的变化.结果及结论:在去神经支配后第2,7,28天,与空白对照组比较,去神经组、去神经MG-132干预组myf-5mRNA和蛋白质均表达上调(P<0.01);去神经MG-132干预组myf-5mRNA和蛋白表达较去神经组均明显上调(P<0.01).结果提示蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过抑制泛素-蛋白酶体途径来上调myf-5的表达,从而起到延缓骨骼肌萎缩的作用.

跌创散促进兔实验性骨折愈合的作用

背景:跌创散有活血祛瘀,消肿止痛之功,对软组织损伤疗效显著.骨折与软组织损伤同属中医"筋伤"的范畴.目的:观察跌创散对实验性骨折愈合作用的影响.方法:取兔龄为6个月左右的雄性新西兰大耳白兔36只,造成双侧桡骨中段约3 mm骨缺损模型,造模成功后随机分为模型组和跌创散组.模型组仅给予绷带包扎,跌创散组给予跌创散外敷,每2 d更换1次包扎物,分别于造模后2,4,6周观察新西兰大耳白兔桡骨骨折愈合过程中血清碱性磷酸酶、钙、磷浓度变化,骨痂病理组织学改变及不同时期X射线的变化.结果与结论:跌创散组骨缺损填充快,骨折愈合早,前4周血清碱性磷酸酶、钙、磷浓度较高(P<0.05,P<0.01),可以促进钙盐在骨折断端的沉积,对骨折愈合有明显的促进作用,血管较模型组数量多且内径大,骨化中心出现早.因此,推测跌创散可能通过影响血清碱性磷酸酶、钙、磷的浓度变化及促进骨折区域血液循环改善等方面而促进骨痂生长,进而达到促进骨折愈合的目的.

β2-肾上腺素能受体过表达后成年犬心肌细胞收缩功能的改变及机制

背景:在转基因小鼠、大鼠等小动物实验中发现,心肌细胞特异性过表达β-肾上腺素受体可以改善其收缩功能,但目前尚缺乏在大型哺乳动物进行的有关实验报道.目的:探讨犬心肌细胞过表达β2-肾上腺素受体后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制.方法:采用胶原酶消化法分离培养犬心肌细胞,用携带β2-肾上腺素受体目的基因的重组腺病毒转染心肌细胞.转染48 h后观察心肌细胞β2-肾上腺索受体蛋白表达及在基础状态和大收缩状态下(以异丙肾上腺素10-6 mol/L刺激)心肌细胞cAMP水平及收缩功能的变化.结果与结论:转染β2-肾上腺索受体的心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及胞内cAMP水平明显增多(P<0.05),基础状态下收缩功能明显增强,但不改变大收缩幅度百分比.说明β2-肾上腺素受体的过表达可能通过增加心肌细胞内cAMP水平改善心肌细胞的收缩功能.

caspase-3/8 mRNA在增殖期病理性瘢痕组织中的表达

背景:细胞凋亡参与了肉芽组织向瘢痕组织转化过程中多种细胞成分大量减少的动态过程,而Caspase家族介导的细胞凋亡是细胞凋亡的主要途径.目的:从基因水平探讨caspase-3 mRNA及caspase-8 mRNA在增生性瘢痕组织中的作用.方法:实验所用病理性瘢痕组织及正常皮肤组织均取自本院烧伤整形外科住院、伤口愈合6个月以后的增殖期病理性瘢痕组织18例.以正常皮肤组织18例做对照.利用RT-PCT技术分别检测半年以上增生性瘢痕组织中成纤维细胞caspase-3mRNA及caspase-8 mRNA的表达情况.结果与结论:在增生性瘢痕组织中,caspase-3mRNA及caspase-8mRNA表达的相对值分别为8.31±1.47和7.12±1.24,均明显低于正常皮肤组织(P<0.05).提示caspase-3/8在瘢痕形成过程中起着得要的作用,增生性瘢痕的形成可能与组织中caspase-3/8表达低下有关.

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究.选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题.目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法.方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增.结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P<0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P>0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当.结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法.

选择性结扎节段动脉致局灶性脊髓缺血损伤动物模型的建立

背景:以往研究表明采用腹膜后入路结扎兔所有腰动脉的方法能够建立稳定的脊髓缺血损伤动物模型,但动脉的具体结扎部位尚不明确.目的:采用选择性节段动脉结扎方法建立局灶性脊髓缺血动物模型.方法:将成年新西兰大白兔16只随机分为对照组和模型组,8只,组.模型组采用腹膜后入路结扎L1-3双侧腰动脉,对照组不结扎血管.建模后第3天,用改良Tanov评分法评价两组兔神经功能,取结扎血管所对应的脊髓组织并进行苏木精-伊红染色,观察其组织学改变.结果与结论:模型组后肢出现功能障碍,Tanov评分低于对照组(P<0.05).脊髓组织出现急性炎性改变及神经细胞坏死等脊髓缺血现象.实验结果表明采用腹膜后入路结扎L1～3双侧腰动脉能够建立较稳定的局灶性脊髓缺血损伤模型.

人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定

背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法.目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定.方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010 ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体.

替米沙坦对体外培养脂肪细胞脂联素表达的影响

背景:脂联素对胰岛素抵抗、代谢综合征有着重要的调节作用,其合成受过氧化物酶体增殖物活化受体γ活性的调节,研究表明部分血管紧张素受体拮抗剂可通过激活过氧化物酶体增殖物活化受体γ影响脂联素代谢,但具体机制尚不清楚.目的:探讨替米沙坦对脂肪细胞脂联素表达和分泌的影响,并与坎地沙坦进行比较.方法:体外培养、诱导分化3T3-L1脂肪细胞,分别用空白培养液、坎地沙坦(10 μmol/L)和替米沙坦(10 μmol/L)干预3T3-L1脂肪细胞,采用RT-PCR法、Western blot法和ELISA法检测脂肪细胞脂联素mRNA和蛋白表达及培养液中脂联素的分泌水平.结果与结论:与空白组和坎地沙坦组相比,替米沙坦组脂肪细胞脂联素的mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05或P<0.01),但各组间脂肪细胞培养液中脂联素的分泌水平差异无显著性意义(P>0.05).说明替米沙坦可以明显增加脂肪细胞脂联素的表达,但并不增加脂联素的分泌水平,其促进脂联素表达的作用优于坎地沙坦.

流式细胞仪实时监测细胞内Ca2+浓度变化

背景:多种信号转导途径可影响细胞内Ca2+浓度的变化,因而对细胞内钙离子变化的检测,有助于了解细胞功能的启动、加强或抑制.目的:利用流式细胞术实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化.方法:选取健康人新鲜全血,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载淋巴细胞,加入CD3单克隆抗体和CD28单克隆抗体刺激淋巴细胞活化,以流式细胞仪动态监测活化淋巴细胞内Ca2+的浓度变化.结果与结论:T淋巴细胞在静息状态时,钙离子的荧光值平稳,显示为基线;加入抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体后,T淋巴细胞被活化,钙离子的浓度迅速升高,持续大约两三分钟后下降,逐渐趋向平缓.结果提示采用钙离子指示剂Fluo-3负载细胞与流式细胞术分析可以跟踪细胞内钙离子的动态变化,成为钙离子动态变化监测的有效方法.

利用Gateway技术构建重组腺病毒载体pAd-LMP-1

背景:目前大多采用Adeasy系统来构建和包装腺病毒载体,整个过程需要多次酶切,连接和转化筛选,并且在BJ183菌中的重组阳性率很低,还可能存在假阳性的可能,整个过程耗时、繁琐.目的:应用Gateway技术较快速构建大鼠LIM矿化蛋白1基因重组腺病毒载体.方法:从SD大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1,转化TOP10细菌后挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1,转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用Pac Ⅰ内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体.将目的基因与Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)一致性BLAST比较,并观察重组腺病毒载体pAd-LMP-1的表达.结果与结论:总RNA后电泳结果显示所提RNA完整,RNA纯度符合要求.成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序证明,目的基因Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)作BLAST比较,发现系列一致,没有突变.构建出来的腺病毒载体载体能在293A细胞中包装成功.提示利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单、快捷地获得pAd-LMP-1.

动脉粥样硬化模型动物脑血管的拉伸力学特性

背景:脑动脉粥样硬化和脑出血的防治有必要了解正常和动脑粥样硬化模型大鼠大脑中动脉的力学特性,但以往的研究对象多为正常人尸体与正常动物脑动脉的力学特性.目的:比较正常和动脉粥样硬化动物模型大脑中动脉的拉伸力学特性.方法:SD大鼠随机分为正常对照组和模型组.模型组大鼠建立动脉粥样硬化模型.取2组大鼠的大脑中动脉以电子万能试验机对其进行5 mm/min拉伸载荷实验,观察2组大鼠脑动脉大载荷、大位移、大应力以及大应变差异及血管应力-应变关系.结果与结论:动脉粥样硬化大鼠脑动脉血管拉伸大载荷、大应力、大位移及大应变均较正常大鼠明显降低(P<0.05),大鼠脑动脉血管应力-应变曲线是以指数关系变化的.因此,说明动脉粥样硬化模型大鼠大脑中动脉和正常对照组大鼠大脑中动脉具有不同的拉伸力学特性,脑动脉粥样硬化大鼠动脉血管不能像正常大鼠脑血管一样再作较大的伸展.

双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2的构建及鉴定

背景:骨形态发生蛋白等因子及以其为中心构建的支架或载体已经广泛应用于实验研究中,并逐渐应用于临床,然而,治疗效果的示踪方法为实验提出了挑战.增强型绿色荧光蛋白基因的发现和应用解决了这一难题.目的:构建双顺反子真核表达载体PIRES2-增强型绿色荧光蛋白-人骨形态发生蛋白2,检测其表达情况.方法:利用RT-PCR方法从人骨肉瘤组织中提取人骨形态发生蛋白2基因,使之与PMD18-T载体连接,经酶切回收后,与目的载体pIRES2-增强型绿色荧光蛋白连接.用PCR技术及基因测序鉴定构建结果.然后将构建好的载体转染人胚肾293细胞,通过荧光显微镜及Western blot技术观测其表达.结果与结论:实验成功扩增了人骨形态发生蛋白2基因并构建了pIRES2-增强型绿色荧光蛋白-人骨形态发生蛋白2载体,将pIRES2-EGFP-hBMP-2用脂质体转染入人胚肾293细胞后48 h,荧光显微镜观察约30%细胞发出绿色荧光,Western blot结果发现在Mr46×106处有一特异性骨形态发生蛋白条带,表明所构建载体中靶基因能成功表达.

改良激素性股骨头坏死动物模型的建立与评价

背景:在股骨头坏死发病机制的研究中,目前仍缺乏有效的动物模型,各种股骨头坏死治疗新方法的发展需要能够模拟人股骨头坏死自然病程动物模型的基础实验.目的:通过联合应用马血清和低剂量甲基强的松龙建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型.方法:20只健康日本大耳白兔随机分成2组.实验组动物注入马血清,间隔2周后,再次注入马血清,第1次注射马血清后24 h肌肉注射甲基强的松龙,每隔1周注射1次,共8周.对照组动物单纯注射同等量的生理盐水.于第1次注射马血清前、注射甲基强的松龙后2,4,8周行血液学检查.并分别于注射甲基强的松龙后4,8周行MRI检查、苏木精-伊红染色和电镜观察股骨头缺血坏死情况.结果与结论:与对照组比较,2,4,8周实验组三酰甘油、胆固醇均明显上升(P<0.05);激活部分凝血酶时间则明显下降(P<0.05).4周实验组MRI显示部分动物可见局部信号改变,8周时可见皮质下出血;对照组比较,4,8周实验组骨髓周围有坏死的骨髓细胞碎片存在,空骨陷窝率逐渐增加(P< 0.01);4周时实验组个别骨细胞结构模糊不清,或有大空泡;8周时部分骨细胞核破裂、核溶解,凋亡细胞大量出现,骨胶原结构排列紊乱.结果证实联合运用激素和马血清明显提高股骨头缺血性坏死的发生率,能够较好地建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型.

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景:在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用.目的:观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响.方法:取新生48 h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养.采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4 mol/L17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达.结果与结论:RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降.提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性.

体外冲击波对大鼠成骨细胞增殖、分化、黏附及迁移的影响

背景:体外冲击波是治疗骨折延迟愈合或不愈合的一种有效方法,成骨细胞在此过程中发挥着重要的作用.目的:研究成骨细胞在体外冲击波促进骨折愈合过程中的作用,为提高冲击波治疗效果提供理论支持.方法:将原代培养的SD大鼠成骨细胞随机分成冲击波组和对照组,应用不同能量的冲击波进行处理后接种于96孔培养板,根据细胞存活率和细胞增殖情况确定适宜的冲击波能量值.钙钴法染色观察成骨细胞碱性磷酸酶,CCK-8试剂盒检测细胞存活,AKP试剂盒检测AKP表达,茜素红染色观察矿化结节,流式细胞仪检测整合素β1及RT-PCR检测整合素β1 mRNA表达,伤口愈合试验观察成骨细胞的迁移率.结果与结论:冲击波处理体外原代培养成骨细胞的适宜能量为10 kV(500脉冲),冲击波组细胞增殖速度快,细胞分泌碱性磷酸酶水平高,矿化结节面积大,细胞黏附率高,整合素β1及其mRNA的表达均高于对照组(P<0.01),且冲击波组细胞迁移的平均距离大于对照组(P<0.05),提示适宜能量冲击波可促进成骨细胞的增殖、分化、黏附及迁移,同时,整合素β1在细胞黏附及迁移过程中可能扮演了重要的角色.

雌孕激素联合对去卵巢大鼠骨密度和骨形态计量学的影响

背景:雌孕激素联合治疗绝经后骨质疏松症不仅能减轻雌激素的不良反应,而且能增强疗效,越来越引起关注.目的:验证雌孕激素联合对去卵巢雌性SD大鼠骨密度和骨组织形态计量学的作用.方法:雌性SD大鼠随机分为5组.假手术组仅行开关术;其余各组大鼠双侧卵巢切除.雌二醇组和雌二醇+左炔诺孕酮组术后给予17β-雌二醇10 μg/(kg·d)灌饲,左炔诺孕酮组和雌二醇+左炔诺孕酮组术后给予18-甲左炔诺孕酮60 μg/(kg·d)灌饲,假手术组和卵巢切除组予等量生理盐水灌饲.实验12周后处死大鼠.采用DEXA骨密度仪测定全身骨密度,截取第4腰椎进行骨形态计量学静态参数和动态参数的测量,测定骨代谢生化指标.结果与结论:卵巢切除组和左炔诺孕酮组全身骨密度、股骨质量低于假手术组、雌二醇组和雌二醇+左炔诺孕酮组(P<0.05),雌二醇+左炔诺孕酮组和雌二醇组差异无显著性意义(P>0.05).与假手术组比较,卵巢切除组和左炔诺孕酮组骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量下降(P< 0.05),骨小梁分离度增加(P<0.05),骨矿化沉积率、骨表面积骨形成率、骨体积骨形成率和骨组织体积骨形成率增加(P<0.05).与卵巢切除组相比,雌二醇组和雌二醇+左炔诺孕酮组骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量上升(P<0.05),骨小梁分离度降低(P<0.05),骨表面积骨形成率和骨体积骨形成率降低(P<0.05).雌二醇+左炔诺孕酮组和雌二醇组上述指标比较,均差异无显著性意义(P>0.05).结果证实,17β-雌二醇和左炔诺孕酮联合应用可增加骨密度,降低骨转换率,且无明显抑制骨形成作用.

人正常椎间盘髓核细胞体外不同培养代次的生物学性状分析:适应于组织工程椎间盘种子细胞的选择

背景:目前用作组织工程椎间盘研究的种子细胞主要来源于体外培养的髓核细胞,而体外培养的髓核细胞传至一定代次后即出现老化现象,老化的细胞失去生长能力不适于组织工程研究.目的:比较不同代次正常髓核细胞的形态学、增殖特性以及细胞的主要细胞外基质成分基因表达情况.方法:以酶消化法分离、培养人正常椎间盘髓核细胞,对不同代次髓核细胞采用光镜、电镜等形态学方法进行大体形态和超微结构观察,采用XTT实验检测不同代次细胞间的生长动力学差异,测定髓核细胞的活力和细胞Ⅱ型胶原及糖胺多糖mRNA表达.结果与结论:传3代之前细胞形态饱满,胞浆丰富,细胞呈多角形、短梭形,细胞内细胞器丰富,形态正常,线粒体含量少,核糖体含量多,说明细胞代谢旺盛,增殖能力强,生长曲线和XTT实验也提示传3代之前髓核细胞活性高,增殖能力强,细胞活力高,细胞外基质分泌旺盛.从传4代起,部分细胞形态逐渐向长梭形演化,逐渐表现为成纤维细胞的形态,说明细胞开始出现"返祖"现象,也称为老化现象,细胞的生长趋缓,传六七代后细胞均表现为长梭形,粗面内质网扩张,线粒体增多,细胞活力降低,细胞外基质明显减少,生长处于停滞状态.实验结果提示,体外培养条件下,人髓核细胞前3代细胞形态良好,增殖能力强,适合作为组织工程椎间盘的种子细胞,而细胞传4代后增殖能力逐渐减弱,不宜作为组织工程椎间盘的种子细胞.

大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

背景:国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究,需要用不同的染色方法对研究结果进行分析,但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少.目的:探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点.方法:取正常大鼠膝关节软骨,行苏木精-伊红、番红O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色,观察软骨结构. 结果与结论:苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线,分别为蓝色、红色和蓝色,番红O和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强,番红O染色对潮线的观察优于其他染色方法.苏木精-伊红染色关节软骨4层结构清晰,软骨细胞呈柱状排列,基质呈均匀呈嗜碱性染色.番红O染色显示4层结构层次清楚,基质深层染色红.阿尔辛蓝染色显示,pH 1.0时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色,pH 2.5时阿尔辛蓝染色较深.甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色.番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色,深层颜色较深,软骨细胞周围蓝染;番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明.提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构,但以番红O染色显示软骨各层和潮线结构佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚.

基因及转基因技术在慢性创面修复中的应用

背景:目前难愈创面是外科救治中的难点,传统的治疗方法效果不佳.有文献表明生长因子在创面愈合中起着重要作用,而转基因疗法是近几年兴起的一种新的治疗方式.目的:通过对近期基因治疗进展的文献综合分析,对近年难愈创面基因治疗的研究现状与进展作一综述.方法:由第一作者检索Pubmed数据库,检索时间范围为1999-01/2008-12,检索英文关键词为"gene therapy,Burns;Chronic wounds".纳入文章所述内容应与难愈创面、创面基因治疗有关,共保留33篇英文文献进行分析.结果与结论:转基因技术根据转染细胞的来源可以分为体内基因转染和体外基因转染两大类,体内转基因方法具有其难以比拟的优势.转基因方法虽然目前无法在临床中推广,但其拥有广阔的前景.

关节软骨中基本的解剖功能结构:软骨单位

背景:关节软骨单位作为近年来才逐渐被重视的关节软骨功能结构,大量研究证实其在关节软骨代谢、力学传导及退变过程中发挥着重要作用,其明确的功能及作用机制问题尚需进一步深入研究.目的:对关节软骨基本解剖功能结构-软骨单位的组织形态、功能、体外消化分离及退变的相关研究进行综述.方法:计算机检索PubMed数据库2009-07前的相关研究论文进行综述,其中包括本实验室一些软骨细胞及软骨单位的相关前期研究数据和图片资料.结果与结论:与周围基质相比,细胞周基质的特异性成分为Ⅵ型胶原,新生期该成分广泛存在于细胞外基质中,随着年龄增长,Ⅵ型胶原等成分逐渐浓缩于细胞周围狭窄区域.近期,有学者利用激光共聚焦显微镜对软骨细胞及软骨单位的体内原位形态学进行定量检测,利用微管吸吮和原子力显微镜等新技术对软骨细胞及细胞周基质的生物力学特性进行检测.更多研究发现,细胞周基质的存在明显改变了软骨细胞相关基因表达.同时,在骨关节炎软骨退变时,软骨单位及细胞周基质同样发生了相应的退行性改变.目前,尽管细胞周基质的具体功能不是很明确,但越来越多的体内外研究证实,细胞周基质的存在调整了软骨细胞的代谢及力学微环境,软骨单位为关节软骨中基本的解剖功能结构.

关节软骨的损伤及其修复现状

背景:关节软骨一旦损伤,则遗留永久性病变,且软骨组织自愈能力非常有限,治疗比较困难.目的:综述国内外关于关节软骨损伤及其修复现状的研究概况.方法:计算机检索中国生物医学文献数据库、中文科技期刊全文数据库、中文学术期刊全文数据库及PubMed、EMbase数据1990-01/2009-09期间的相关文章,检索词为"关节软骨损伤,关节软骨损伤,arthroidal cartilage injury,arthroidal cartilage repair.此外还手工查阅相关专著数部.纳入关节软骨结构的研究、关节软骨损伤机制的研究、关节软骨细胞移植修复的研究、关节软骨组织工程修复的研究类文章.结果与结论:传统的软骨修复方法主要包括软骨下钻孔术、磨削术和微骨折术等,其目的是动员具有成软骨潜能的各类细胞增殖分化,从而达到修复重建的目的.但因修复的组织往往为纤维软骨,而非透明软骨,且存在进一步退化及二期骨化等问题,故总体效果不佳.近年来,随着材料学、细胞生物学、工程学以及相关物理、化学学科的发展和交叉,如软骨移植、组织细胞工程以及基因治疗等各种新的关节软骨缺损修复方法逐渐被研发应用.

衰老骨骼肌中的兴奋—收缩偶联与MG29蛋白

背景:"兴奋-收缩偶联"是神经-肌肉功能的基本功能特点,在衰老过程中肌肉功能的衰退与肌细胞中的兴奋-收缩解偶联存在密切关系.近年来针对衰老肌细胞功能退化的研究有了许多新进展.目的:综述有关衰老肌细胞钙离子变化的机制以及MG29蛋白在钙离子及与兴奋-收缩偶联过程中的作用的有关文献,为进一步了解衰老骨骼肌功能退化的机制提供理论参考.方法:应用计算机检索CNKI期刊全文数据库(2000-01/2009-11)和PubMed数据库(2009-01/2009-12)与衰老肌细胞钙离子变化的机制以及MG29蛋白及兴奋-收缩偶联相关的文献,检索词分别为"兴奋-收缩偶联:肌组织;肌细胞;衰老;抗阻训练;MG29"和"excitation-contraction;muscle;muscle cell;senescence;resistance traininq;MG29".纳入和衰老肌细胞钙离子、兴奋-收缩偶联及MG29蛋白相关的研究,排除陈旧的、重复的以及缺乏可信度的文献.结果与结论:初步检索到中英文文献共43篇,根据本研究的纳入排除标准,排除9篇不符合标准的文献,终纳入34篇文献进行分析.结果发现,许多研究已经证明MG29蛋白在肌细胞兴奋-收缩偶联中起着重要的作用,而随增龄MG29会出现明显减少的规律,推断其在肌组织衰老中可能扮演重要角色.更为重要的是,新近有研究者发现适宜的抗阻训练可以使肌组织中MG29表达量增加.

骨骼肌生长与适应的机械信号与途径

背景:骨骼肌作为一种机械组织,具有机械收缩的功能,但外界力学机械信号如何转变成生物体的化学信号,从而影响肌肉的生长和代谢仍不是很明确.目的;了解机械刺激与骨骼肌适应的信号途径,为摸索改善骨骼肌质量与适应提供理论依据及实验方案.方法:应用计算机检索Pubmed数据库和中国期刊网1980-01/2008-12相关文献.英文检索词为"skeletal muscle、mechanical stimulation、signal transduction";中文检索词为"骨骼肌,运动,信号传导".纳入标准:①具有原创性,论点论据可靠的实验性文章.②与骨骼肌肥大相关内容的文章.③观点明确,分析全面的文章.排除标准:与文章目的无关的内容和重复性研究.结果与结论:骨骼肌作为一种机械组织,具有机械收缩的功能,但外界力学机械信号如何转变成生物体的的化学信号,从而影响肌肉的生长和代谢仍不是很明确.研究表明,机械刺激通过诱导Akt/mTOR途径,从而促进骨骼肌生长与适应的机制;骨骼肌纤维在机械运动刺激作用下,神经冲动的传递,随后开放Ca2+及相关离子通道,引起胞浆中的钙离子增加,使钙调神经磷酸酶的活性上升,催化NFAT去磷酸化,激活的NFAT进入肌细胞核,作用于相应的靶基因,终使骨骼肌产生运动适应性变化.结果表明,肌肉机械信号刺激促进胰岛素样生长因子1的释放,进而通过生物信号传导通路来实现.机械刺激促进离子浓度的改变,从而影响钙调磷酸酶/对核因子活化T细胞途径以增加肌肉质量.对于机械运动的物理信号与生物体的化学信号通路的机制研究还有待继续深入探索.

针刀治疗软组织疾病的理论依据及其效应

通过对相关领域现有研究成果进行总结,重新表述针刀治疗的理论依据和治疗作用.人体软组织具有重要地位,软组织纤维化和增生、肥厚等多种原因能够使软组织发生相对运动障碍、张力增高、长度缩短、腔隙内压增高等改变.这些改变既可加剧软组织本身病变,又可直接或者间接作用于骨关节、神经、血管或者其他组织器官,参与众多疾病的发病过程.针刀治疗作用主要为软组织松解减压和损毁作用.针刀治疗的实质是经皮微创的软组织松解术,主要通过对软组织的穿刺、小范围切开和小范围钝性分离,解除病变软组织对神经、血管、骨关节的影响,达到治病目的.针刀治疗除了具有软组织松解作用之外,还有类似毫针的针刺效应.毫针针刺能够通过人体神经-内分泌-免疫系统双向调节人体各个器官的功能,属于整体调节.

原位杂交技术在组织工程研究中的应用

背景:通过原位杂交技术对修复组织进行检测,是目前分析组织再生和修复状况的重要方法之一.目的:综述国内外关于原位杂交技术在组织工程应用中的研究概况.方法:应用计算机检索PubMed 1980-01/2009-07期间的相关文章,检索词为"In situ hybridization,Tissue engineering,Insulin-like growthfactor-Ⅰ(IGF-Ⅰ)",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库1995-01/2009-07期间的相关文章,检索词为"原位杂交,组织工程,胰岛素样生长因子1",并限定文章语言种类为中文.此外还手工查阅相关专著数部.纳入原位杂交技术基本原理及原位杂交技术在组织工程中相关应用的文章.结果与结论:原位杂交技术包括分子生物学、细胞遗传学和组织化学等方面的技术,是一种核酸定位和检测基因表达的有效方法.原位杂交技术尤其是荧光原位杂交技术,可对修复的组织进行准确有效的检测,在骨、软骨等组织工程实验研究中有广泛应用,已成为目前分析组织再生和修复状况的重要方法之一.近年来国内外对原位杂交技术在组织工程中的应用研究主要从生物医学和临床医学两方面着手,都获得了众多研究成果.此外,对与组织生长发育密切相关的生长因子胰岛素样生长因子1的原位检测也很有效,三维支架中胰岛素样生长因子1的原位检测是今后工作的重点.

生物力学测量与传统测量的比较

背景:生物力学的不断发展使生物力学测量技术也逐渐独立于传统测量方法,在生物力学各个领域都有与传统测量不同的性质与应用.目的:综述国内外关于生物力学测量的新研究以及与传统测量的比较研究.方法:应用计算机检索Science Direct数据库、Ei数据库1960-01/2009-10期间的相关文章,检索词为"biomechanics measurement",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库等1994-01/2009-10期间的相关文章,检索词为"生物力学测量",并限定文章语言种类为中文.此外还手工查阅相关专著数部.纳入生物力学测量、运动生物力学、生物力学的发展状况、运动生物力学测量方法的研究.结果与结论:在对比生物力学测量方法与传统测量方法的基础上,各自分析了两者的突出特点,并进行了差异性的研究.生物力学测量技术具有主动性、实时性以及局限性等不同的特点.生物力学的测试过程很多与医学、生物学密切相关,并提出传统测量、测试有利因素为生物力学各个数据的测量工作提供了借鉴意义,为更好地进行生物力学的研究工作提供了理论指导.

转化生长因子β1基因509C/T多态性与腰椎间盘突出症血瘀证及椎间盘退变程度的关联研究

背景:腰椎间盘突出症在中医临床以血瘀证多见,但目前仍缺少理想的防治手段.既往研究已报道了转化生长因子β1基因509C/T多态性可能与椎间盘退变的发生和发展相关.目的:探讨广西地区汉族人腰椎间盘突出症血瘀证及椎间盘退变与转化生长因子β1基因509C/T多态性的关联性.方法:纳入2008-01/2009-12在广西中医学院第一附属医院骨科临床确诊为腰椎间盘突出症患者,其中中医辨证为血瘀证的共60例,同期相匹配的非血瘀证患者60例,均进行转化生长因子β1基因509C/T多态性检测,并观测患者的椎间盘退变等指标.采用非条件Logistic回归Forward(LR)法分析椎间盘退变和转化生长因子β1基因509C/T多态性的交互作用与腰椎间盘突出症中医证型的关联性.腰椎椎间盘退行性变的程度根据磁共振成像检测结果分为轻度、中度及重度.结果与结论:腰椎间盘突出症转化生长因子β1基因509C/T基因型者的腰椎间盘的退变程度较CC和TT基因型高,血瘀证组患者椎间盘退变程度比非血瘀证患者更严重(P< 0.05).重度椎间盘退变者患腰椎间盘突出症血瘀证的风险是轻中度椎间盘退变者的1.818倍(OR=1.818,95%C/:1.275～2.931,P<0.05).转化生长因子β1基因509C/T多态性与重度椎间盘退变的累积暴露发生腰椎间盘突出症血瘀证的风险是其中某单一因素的2.038倍(OR=2.038,95%C/1.379～3.423,P<0.05).实验结果提示重度椎间盘退变很可能是广西壮族自治区汉族人腰椎间盘突出症血瘀证的潜在危险因素之一,携带转化生长因子β1基因CT基因型的患者在引发椎间盘退变加重相关因素的作用下,患血瘀型腰椎间盘突出症的可能性更大.

北京市城乡高血压前期流行情况及其危险因素

背景:为早期预防高血压、减少和延缓高血压的发生人数,高血压前期的调查十分重要,但目前国内大规模人群调查中,有关对高血压前期的研究报道较少.目的:对比北京城市和农村高血压前期的流行情况及其危险因素,探讨城市化对高血压前期的影响,为预防和控制提供依据.方法:采用整群抽样的方法于2005年春秋两季对北京市城市和农村的40～65岁人群中进行横断面调查.采集受试者的基本信息和血压情况,诊断标准依据2005年中国高血压防治指南.采用Logistic回归方法进行多因素分析.结果与结论:完成问卷和体检的3 268人中,城市受试者高血压前期的患病率低于农村受试者(P<0.05).男性腰臀比每增加0.1个单位,高血压前期的风险增加1.411(95% CI:1.031～1.931)倍,现在饮酒的人为高血压前期的风险是从不饮酒的0.648(95% CI:0.437～0.961)倍.女性腰臀比每增加0.1个单位,高血压前期的风险增加1.489(95%C/:1.006～2.203)倍,而三酰甘油每增加1个单位,高血压前期的风险增加1.194(95% CI:1.000～1.426)倍.因此说明肥胖是高血压前期重要的危险因素.

山东东营地区汉族成人脑力劳动者525名体型特征

背景:中国在综合评价人体体型方面的研究起步较晚,资料相对较少,特别是对于特定职业群体的研究资料尚未见报道.目的:了解山东东营地区汉族脑力劳动者体型特征、体型三因子的变化趋势及其性别、年龄差异.方法:应用Heath-Carter体型评价法对525名东营市汉族脑力劳动者人员(男264名,女261名)体型指标进行测量.按性别、年龄进行了分组和体型计算,对不同组别体型特征进行比较,应用t检验和方差分析对不同组别的体型均值和体型特点进行分析.结果与结论:山东东营地区汉族男性脑力劳动者体型三因子值分别为5.3-4.3-1.7,身高体质量比为41.25,体脂率为20.41%;女性脑力劳动者体型三因子值分别为6.4-3.7-1.1,身高体质量比为40.12,体脂率为28.75%.两性总体相比,在外因子、HWR方面两性之间无差别(P>0.05);男性中因子值均高于女性,女性内因子值均高于男性(P<0.01).男性在中因子方面占优势,表现为骨骼、肌肉的发达及体格的健壮;女性在内因子方面占优胜,表现为身体的比较丰满,皮下脂肪较厚和体脂率高.提示东营地区男性脑力劳动者体型类型偏中胚层,女性偏内胚层.体型类型及体型三因子存在性别及年龄差异.该地区汉族脑力劳动者的内因子值明显较高.

维生素D受体多态性与肠道CYP3A4表达:维生素D受体基因突变在人群中分布有差异吗?

背景:研究表明,维生素D受体可以诱导肠道中CYP3A4的转录表达,维生素D受体基因的突变将涉及到它自身所翻译的蛋白改变,而其相应的下游靶基因的转录表达或功能亦可能会发生改变.目的:确定HT-29肠细胞中维生素D受体Fokl突变在对其下游靶基因CYP3A4转录的影响.方法:取肝胆管结石患者术中切除的肝脏组织,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)B-myc/his h维生素D受体(野生型和Fok1突变型),利用瞬时转染技术和双荧光素酶报告基因分析系统在体外HT-29细胞中检测转染不同载体后的细胞在给予不同浓度(1,10,100 nmol/L)的药物1,25(OH)2VD3(维生素D受体的天然配体)处理后,CYP3A4的转录表达情况.结果与结论:将野生型和突变型维生素D受体质粒共转染于HT-29细胞中,在1,25(OH)2VD3孵育24 h后,3个浓度代表CYP3A4mRNA转录水平的荧光素酶活性数值分别与溶煤对照组和空载体对照组相比差异具有显著性意义(P<0.05),且转染Fok1突变型的细胞荧光素酶活性数值稍大于转染野生型的细胞荧光素酶活性数值,但两者间差异无显著性意义(P>0.05).维生素D受体Fok Ⅰ突变体对其下游靶基因的转录表达与维生素D受体野生型没有差异.提示在肠细胞中,维生素D通过维生素D受体诱导CYP3A4转录表达,但是维生素D受体Fokl突变体对CYP3A4的转录与野生型相比差异无显著性意义.

中国优秀跳远运动员身体成分的分析

背景:近年来,很多研究报道了中国某些运动项目优秀运动员身体成分特征,但对中国优秀跳远运动员身体成分的研究少见报道.目的:通过高精度多频率生物阻抗分析技术测试身体成分,探讨中国不同运动水平跳远运动员身体成分组成及分布特征.方法:选择参加2005年全国田径锦标赛和2004年全国大学生田径运动会的跳远男女运动员67人,采取随机抽样的方法选取广州体育学院02和03级田径专选班学生60人以及广州大学学生30人.采用"Bios pace"身体成分分析仪八电极法测定纳入对象的身体成分.主要的测试指标为体脂率、瘦体质量、基础代谢率及总含水量等.通过统计分析对不同运动水平跳远运动员年龄、性别、形态指标及身体成分进行比较.结果与结论:中国优秀跳远运动员体成分的特征:脂肪百分比不高,体质量、去脂体质量也不宜过多;体脂百分比和去脂体质量随着运动水平的提高,体脂百分比逐渐减少,瘦体质量逐渐增多;男女跳远运动员之间身体成分差异非常显著(P<0.01);瘦体质量、瘦体质量/身高与肺活量、立定跳远、立定三级跳远、深蹲和专项成绩呈正相关,与30 m跑呈负相关.男女运动员相比,男子与瘦体质量的相关系数均高于女子.研究所得结果与专项成绩结果的差距相吻合,为运动员的选择和训练提供了依据.

中国组织工程心脏瓣膜研究领域——著名专家介绍