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长期服用西酞普兰通过增加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶活性及活性氧簇的产生抑制一氧化氮生物活性而导致勃起功能障碍
西酞普兰是常见的选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)，被广泛用于抑郁症及焦虑症的治疗。该药用于早泄病人治疗时被发现可使精液质量下降。作者为探究长期服用西酞普兰对勃起功能的影响在大鼠上进行了实验。实验组大鼠持续四周每天经饮水摄入0.286mg/kg西酞普兰，停药48小时后测定勃起功能、血管反应性及血管内皮功能相关指标。
西酞普兰是常见的选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)，被广泛用于抑郁症及焦虑症的治疗。该药用于早泄病人治疗时被发现可使精液质量下降。作者为探究长期服用西酞普兰对勃起功能的影响在大鼠上进行了实验。实验组大鼠持续四周每天经饮水摄入0.286mg/kg西酞普兰，停药48小时后测定勃起功能、血管反应性及血管内皮功能相关指标。 -
芳香酶抑制剂的药理与临床疗效
芳香酶(雌激素合成酶)是一种由细胞色素P450(CYP)同种蛋白和黄素蛋白组成的与膜结合的复合酶,是还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸盐(NADPH)-细胞色素P450还原酶.此酶催化雄激素转化为雌激素(如:雄甾烯二酮转化为雌酮).由于雌激素与肿瘤进展有关,而芳香酶在雌激素生物合成中起终的限速催化作用,因此,可以通过抑制芳香酶来对抗乳腺肿瘤部位的雌激素.
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胆汁酸代谢替代途径关键酶的调节
在哺乳动物体内，肝脏的胆汁酸代谢在维持机体的胆固醇稳态中起了重要作用。胆汁酸的代谢有经典(中性)和替代(酸性)两条途径，至少有15种酶和4个不同的细胞器参与了这两条代谢途径[1]。替代途径在整个胆汁酸代谢中的作用已经越来越受到人们的重视[2]，同时也有越来越多的研究者把胆汁酸研究的重点放在替代途径关键酶--甾醇27－羟化酶(CYP27)和氧化甾醇7α－羟化酶(CYP7B)的调节上。本文将对CYP27和CYP7B活性的调节及其可能的机理进行探讨。 甾醇27－羟化酶调节 甾醇27－羟化酶(CYP27)是细胞色素P450酶系中的一员，以前曾被命名为甾醇26羟化酶，催化经典途径中侧链氧化剪切的起始反应和替代途径起始步骤。与肝脏胆固醇7α－羟化酶(CYP7A)不同的是，它为线粒体内酶，存在于除肝脏以外的多种组织和细胞，有着广泛的底物活性[3]，除了催化胆固醇和胆汁酸中间产物外，它还具有对维生素D3和25－羟化维生素D3羟化的活性。编码CYP27的基因已在大鼠、兔和人体身上被克隆和测序，人类CYP27基因位于染色体2q33－q10。CYP27基因含9个外显子和8个内含子，长约18．9kb。该酶发挥活性需要铁氧化还原蛋白和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)的参与。 CYP27曾被认为是一个稳定而不容易受调节的酶，然而随着对替代途径和CYP27研究的深入，越来越多的研究者已改变了这种观点，认为替代途径中任何代谢中间物都有可能调节CYP27的活性[4]。另一些研究表明，CYP27的调节和CYP7A的调节有相似性，只是同一种调节因子对CYP27的作用要小于对CYP7A的作用[5，6]。
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对布比卡因所致神经细胞毒性的影响
目的 明确布比卡因是否导致SH-SY5Y细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)水平降低,以及NAD水平降低是否与布比卡因神经细胞毒性有关.方法 以1 mmol/L布比卡因培养液处理SH-SY5Y细胞30 min～7 h,检测细胞内NAD含量及细胞活性;以1～10 mmol/L布比卡因处理细胞30 min,检测细胞内NAD含量及细胞活性;于5 mmol/L布比卡因处理细胞30 min前后,以不同NAD培养液预处理、后处理SH-SY5Y细胞30 min,检测细胞内NAD水平的变化及细胞活性.结果 1 mmol/L布比卡因处理后3h,细胞内NAD水平开始下降,至处理7h,细胞内NAD水平降至处理前的(28±8)％;2、5、10 mmol/L布比卡因处理30 min后,细胞内NAD水平分别降至对照组的(22±3)％、(26±7)％及(16±14)％,明显低于对照组(P＜0.05).1 mmol/L布比卡因处理后各时点细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05);1～10 mmol/L布比卡因处理后,细胞存活率随着布比卡因浓度的增高而降低,2、5、10 mmol/L布比卡因组细胞存活率分别降至对照组的(49±9)％、(36±16)％及(26±-4)％(P＜0.05).以2.50、5.00、10.00 mmol/L NAD预处理的细胞,其细胞内NAD水平分别达到对照组的(86±12)％、(89±12)％及(105±59)％,明显高于单独以布比卡因处理的细胞(P＜0.05).以不同浓度NAD预处理或后处理干预后,细胞存活率明显高于单独以5 mmol/L布比卡因处理的细胞,且预处理效果好于后处理(P＜0.05).结论 布比卡因引起神经细胞毒性与NAD水平下降有关,外源性NAD能提升细胞内NAD水平,且能减轻布比卡因的细胞毒性.
关键词： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 布比卡因 神经毒性 -
ADH对抗X射线照射后L02肝细胞损伤作用
目的研究抗氧化剂烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)对抗辐射照射后正常细胞损伤.方法 L02正常肝细胞在2.5 Gy、5.0 Gy、7.5 Gy X射线照射后立即加入NADH培养24 h,检测细胞生存率、细胞内H2O2水平、bcl-2和Bax阳性细胞百分率.结果 NADH能够对抗X射线对L02细胞的生长抑制,减少辐射后细胞内H2O2水平,并且能够增加受照L02细胞bcl-2蛋白阳性细胞百分率和减少Bax阳性细胞表达率,差异均有显著性(P<0.05).结论 NADH能够对抗X射线对L02肝细胞生长抑制作用,其作用与减少细胞内H2O2水平,增加bcl-2和减少Bax阳性细胞百分数有关,但其作用机制还需进一步研究.
关键词： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 辐射防护 氧活性中间体 -
NAD-Sepharose 6MB亲和胶的制备及在2,5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶纯化中的应用
目的:制备NAD亲和胶,用于分离纯化2,5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶.方法:将NAD通过丁二酸二酰肼与溴化氰活化的Sepharose6MB胶联结,制得NAD亲和胶.从棒杆菌细胞中提取的2,5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶粗酶液用NAD亲和胶进行亲和层析纯化.结果:NAD的结合率为71.67%;亲和层析回收率为77.27%;酶的比活提高了1.1倍.结论:以NAD为配基的亲和胶用于纯化以NADPH为辅酶的2,5-DKG还原酶行之有效.
关键词： 色谱法 亲和 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 2 5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶 -
NAD对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响
目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的作用.方法 提取新生Wistar大乳鼠原代心肌成纤维细胞,传代培养,采用2～4代细胞.实验分为空白对照组,AngⅡ(0.01、0.1、1μmol/L)组,NAD(250 μmol/L)组,AngⅡ(1 μmol/L)+NAD (250 μmol/L)组,FAM组,Sirt1-siRNA+AngⅡ(1μmol/L)组,Sirt1-siRNA组,Sirt1-siRNA+NAD(250 μmol/L)组,Sirt1-siRNA十Ang Ⅱ(1 mol/L)+ NAD(250 μmol/L)组.刺激24h后,提取总RNA,Real time RT-PCR法分别检测SIRT1和Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果 心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA的表达随着AngⅡ浓度升高明显增加(P＜0.05),呈浓度依赖性.与空白对照组比较,NAD(250 μmol/L)组SIRT1 mRNA表达增高(P＜0.05).与AngⅡ(1μmol/L)组比较,AngⅡ(1μmol/L)+NAD(250μmol/L)组Ⅰ型胶原mRNA的表达明显减少(P＜0.01).相对于FAM组,Sirt1-siRNA转染后各组SIRT1 mRNA的表达减少(P＜0.05),而心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达增多(P＜0.05).结论 NAD可以抑制心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA的表达,SIRT1影响Ⅰ型胶原mRNA的表达,它们对Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化有保护作用.
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NAD延缓背根神经节轴突变性的实验研究
目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对神经轴突变性的保护作用.方法 用长春新碱处理原代培养的背根神经节细胞,建立轴突变性细胞模型,然后加入不同浓度的NAD,观察神经轴突生长状况,MTT检测背根神经节细胞的生长活性,行神经丝蛋白(NF)免疫组化染色观察神经轴突的变化.结果 损伤组加入长春新碱8h后,轴突远端发生典型的轴突变性,12h后轴突肿胀,断裂,24h后见不到完整的轴突结构.保护组加入NAD后可明显延缓轴突变性,在12h后仍能保持比较完整轴突结构,24h后远端发生轻微变性.MTT结果显示:NAD保护组可提高细胞存活率(P<0.01).轴突计数显示:NAD保护组在加入长春新碱后12h,只有35%左右的轴突发生变性,而损伤组却高达60%的轴突发生了变性(P<0.01).结论 NAD对轴突变性具有明显的保护作用,可延缓轴突变性.
关键词： 轴突 背根神经节 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 大鼠 Wistar -
SIRT1与代谢及肿瘤的关系
沉默信息调节因子1(SIRT1)是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的去乙酰化酶,它在正常的胚胎发育、分化及维持自身平衡中是必不可少的.SIRT1在维持健康及疾病中发挥着很多重要的作用,包括SIRT1在基因组稳定性中的作用[1],在时钟调节下的基因组重构及昼夜节律控制中的作用[2],以及神经元基因和阿尔茨海默病之间关系的调节作用[3].之前也有很多有关健康及疾病中SIRT1的综述[4,5].作为sirtuin家族中一员,SIRT1表现出了对氧化还原代谢物NAD+先天的辅酶需求.这与SIRT1控制关键代谢调节的能力一起,证明了SIRT1在哺乳动物代谢中即是一个感受器,又是一个调节器.SIRT1的大多数功能是通过对基因表达过程中起关键作用的调节蛋白针对性的去乙酰化实现的.SIRT1的作用靶点包括转录因子及代谢调节中的辅酶因子.我们对SIRT1活性与代谢稳态关系的新研究进展作一综述,并且基于细胞生存中SIRT1的作用,我们研究了相应的治疗方法.
关键词： 沉默信息调节因子1 去乙酰化酶 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 哺乳动物代谢调节 靶向治疗 -
射频凝固肝组织的酶组织化学研究
目的 比较分析研究NADH(nicotinamide adenine dinucleotide)和HE(hematoxylin and eosin)染色评价射频治疗后即刻肝组织损伤.方法 应用RF2000型射频治疗仪及LeVeen电极针,对5只实验猪肝脏进行射频消融,治疗后即刻取肝脏,分别行NADH和HE染色,评价肝组织坏死程度.结果 HE染色射频消融中央区表现为核浓缩、胞浆红染,而核碎裂、核消失少见,肝细胞索完整,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变.周边带表现为肝窦充血、出血.消融中央区、周边出血带和正常区之间界限模糊,难以准确评价射频消融的组织坏死程度,而NADH染色见消融中央区肝细胞完全失去活力,周边充血出血带肝细胞尚有活力,与正常区呈色截然不同,境界清晰,可准确、快速地对射频消融的肝组织坏死程度作出判断.结论 射频是一种有效的肝癌治疗方法,HE染色不能准确评价射频消融对肝组织的即刻灭活效应,酶组织化学NADH染色判定细胞活力简易、直观、准确.
关键词： 射频 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 肝细胞活力 -
去乙酰化酶SIRT1抗衰老研究进展对防治老年性聋的启示
沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,Sir2)相关酶1(SlRT1)是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotin-amide adenine dinucleotide,NAD)的去乙酰化酶~([1])(histone deacetylase,HDAC),到目前为止,SIRT1是研究较为深入的一个成员.去乙酰化酶SIRT1是Sir2的同源物,以许多非组蛋白和组蛋白为底物,它与多种细胞生物学功能如基因转录沉默、细胞生长周期调节、能垦代谢包括糖异生和脂质累积、胰岛素分泌、血管生成、神经保护、病毒感染以及细胞衰老有着密切关联,所以SIRT1可作为治疗不同疾病的靶点逐渐被人们所重视.
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血红素加氧酶：一种血红素代谢酶及其近况
血红素加氧酶(HO)是胆红素形成过程中的第一种酶，也是一种限速酶，这种酶可使血红蛋白或其它含有血红素的蛋白质中的血红素降解形成胆绿素。这是一种需能过程，因为在降解过程中卟啉环中的铁离子的游离、一氧化碳(CO)的释放和胆绿素的生成，均需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)通过细胞色素C P450系统提供电子，并需要消耗分子氧(图1)。在微粒体酶－胆绿素还原酶的作用下，胆绿素还原形成胆红素。肝细胞微粒体分析证实，在反应底物－氯化血红素的存在时，HO的活性增加［1］，其它化合物，如氯化钴和各种重金属，均能使HO的活性上调［1，2］。Maines［3］在研究中发现了血红素代谢酶的一种发展形式，由此可以解释新生儿黄疸中胆红素过多生成的原因。另外，已经发现纯化和特性更好的32 kd的HO-1蛋白。随着金属卟啉的合成，HO的活性被抑制，从而可以更进一步了解HO活性的细胞结果，并可改进防止新生儿高胆红素血症的措施。20世纪80年代，发现了血红素加氧酶HO-2的组成形式［4］。20世纪80年代末期，发现了调控HO-1的基因调节。Shibahara等［5］在转录水平证实了进行HO-1的诱导。随着在这项领域的研究进展，人们已经注意到HO-1的基因诱导是氧应激的一种普遍标记［6］。目前，HO-1诱导反应的普遍性已经更清楚。随着分子生物学和分子遗传学技术的不断进步，HO的生化特性、作用和调节机制将越来越清楚。
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NADH对辐射后正常肝细胞株L02内ROS、Ca2+和pH水平的影响
目的：探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）对正常肝细胞L02辐射后细胞内活性氧簇（ROS）、Ca2+和pH的影响。方法采用体外培养的正常肝细胞L02为研究对象，并将其分为处理组、辐射组和对照组。处理组和辐射组细胞均给予5.0 Gy X射线辐射，随后分别在加/不加NADH（400μg·mL-1）的培养液中培养24 h，对照组仅给予RPMI 1640完全培养基培养24 h。采用PI/Annexin V双标染色法检测细胞凋亡率，共聚焦显微镜检测细胞内ROS、Ca2+和pH值。结果处理组和辐射组的细胞凋亡率分别为（8.25±1.64）％和（28.16±2.46）％，辐射组显著高于处理组，差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，辐射组细胞内ROS、Ca2+和pH值明显升高（P<0.05），而处理组较辐射组显著下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 NADH能够抑制辐射诱导L02肝细胞凋亡，其作用机制可能与下调细胞内ROS、Ca2+和pH有关。
关键词： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 辐射 凋亡 肝细胞 活性氧簇 -
SIRT1对高糖刺激肾小球系膜细胞叉头转录因子1和p27~(kip)表达的影响
SIRT1是酵母染色沉默信息调节因子2的哺乳动物同源体,是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白去乙酰化酶活性的多功能转录调节因子,在体内参与调控哺乳动物细胞寿命的不同信号通路及糖代谢、胰岛素分泌等多条代谢途径.
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内脂素的炎症作用研究进展
内脂素(visfatin)作为一个新的脂肪因子在改善糖耐量及肥胖相关的胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生方面起重要作用,同时其还可催化哺乳动物细胞氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)合成补救途径的限速步骤,烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)有两种形式:细胞内Nampt和细胞外,二者分别调节细胞内外烟酰胺合成NAD,因而涉及许多细胞的调节过程[1].Visfatin/ PBEF/ Nampt编码的基因于1994年首次在人外周淋巴细胞cDNA文库中发现,2005年日本学者FUKUHARA等[2]在脂肪组织中分离到这一脂肪因子且证实内脏脂肪产生的内脂素高于皮下脂肪.
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Nampt 与消化系统肿瘤关系的研究进展
尼克酰胺磷酸核糖转移酶（ nicotinamide phosphoribosyl－transferase，Nampt）初称为前B细胞克隆增强因子（ pre－B－cell colony－enhancing factor，PBEF），是从激活的人外周血淋巴细胞的cDNA基因库中用简并寡核苷酸探针克隆出的一编码基因，在干细胞因子和白细胞介素7辅助参与时能够使前 B 细胞更加顺利的分化与成熟［1］。随后 Fukuhara等［2］在筛选人体皮下脂肪和内脏脂肪的cDNA的PCR产物时发现了一个测序结果与PBEF基因序列相同的特异性高表达mRNA，并且该片段基因为具有胰岛素样作用的脂肪因子，与此同时Steppan等［3］的研究也发现两者蛋白结构具有一致性，因此又称为内脏脂肪素（ visfatin ）。2004年Revollo等［4］研究发现Nampt在细胞内具有烟酰胺磷酸核糖转移酶的活性，参与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD＋）的生物合成而在细胞氧化还原反应中起重要作用，故将其命名为 Nampt。随后在2007年他发现Nampt可促进葡萄糖刺激体外培养的胰腺β细胞分泌胰岛素，Nampt在蛋白质结构上与之前学者研究的PBEF和visfatin是具有相同结构的同一蛋白质分子，所以将Nampt、PBEF和visfatin统一称为Nampt［5］，随后也有其他学者的研究同样证实了三者结构的同一性［6－7］。所以，人类基因组组织命名委员会和小鼠基因组命名委员会将Nampt作为其蛋白和基因的官方命名，因此本文所述也采用官方命名的Nampt。
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SIRT1与代谢相关疾病的研究进展
哺乳动物Sirtuins家族是酵母沉默信息调节因子2(SIR2)的同源蛋白质的统称，属于一类组蛋白/非组蛋白去乙酰化酶，组成成分为SIRT1~SIRT7，依赖主体为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)。Sirtuins家族可作用一系列底物，参与多种细胞生物学功能，对细胞的生存、衰老、凋亡等生理活动有着重要的调节作用，并且与代谢综合征、肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等疾病的发生密切相关，其中，沉默调节蛋白1(SIRT1)与SIR2的同源性高，也是近年来Sirtuins家族成员中得到深入研究的一项。本研究现就SIRT1与代谢相关疾病的研究进展作如下综述。
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乳酸脱氢酶催化活性浓度测量的不确定度评定
目的：评定在乳酸脱氢酶（LDH）催化活性浓度测量中不同厂家或批号试剂的不确定度。方法配制不同厂家或批号LDH试剂，用国际临床化学联合会（IFCC）参考方法分别检测中值和高值两个浓度的混合血清，对所得数据进行配对 t检验，计算不同厂家或批号试剂间的不确定度。结果 P＜0．05表示对不同厂家或批号LDH试剂，所测LDH催化活性浓度结果差异有统计学意义。不同试剂批号对中值和高值混合血清的扩展不确定度U分别为6．52％（k＝2）和6．78％（k＝2）。结论不同厂家或批号试剂对LDH催化活性测量有影响，因此，在进行不确定度评定时，应考虑不同厂家或批号试剂的影响。
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白黎芦醇调节SIRT1表达研究的新进展
SIRT1是依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的脱乙酰基酶,在低等动物中延长寿命,预防与年龄相关的疾病,包括代谢紊乱.激活SIRT1能增强线粒体的功能、氧化代谢和抵消肥胖.白黎芦醇是非黄酮类多酚类,属于对苯代乙烯组,是一些植物为了应对伤害和真菌攻击自然产生的.因此,白黎芦醇激活SIRT1对与年龄相关的疾病和生理代谢有重要的意义.
关键词： 白黎芦醇 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 SIRT1 -
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1及其介导的活性氧在创伤修复细胞中的作用研究进展
活性氧是一类含有未配对电子的氧原子或氧原子团，主要由超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基等组成，具有信号转导、免疫调节和激素合成等生物学功能。活性氧被认为是细胞增殖和分化过程中信号级联反应的第二信使，参与基因表达、细胞生长和细胞凋亡等生物学效应的信号转导。信号级联反应过程中的活性氧大多来源于质膜氧化酶，主要是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)氧化酶(Nox)。Nox1是Nox蛋白家族的重要成员之一，其产生的活性氧作为信号分子，在创面修复中起重要作用。本文主要就Nox1及其介导的活性氧在表皮细胞、Fb和内皮细胞等创伤修复细胞中的作用进行综述。
