首页 > 文献资料
-
体外诱导单核细胞分化为肝样细胞的研究
我们通过建立人为细胞诱导分化体系在体外诱导人外周血单核细胞分化为肝样细胞,旨在为肝组织工程研究及临床应用提供新的细胞来源.一、材料与方法1.材料:外周血由山东省立医院肝胆外科患者知情同意并志愿提供,由山东省立医院伦理委员会批准;RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco公司);粒细胞刺激因子(齐鲁制药公司),肝细胞生长因子( HGF)、成纤维细胞生长因子4(FGF-4,Peprotech公司);鼠抗人CK19单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(Abcom公司);FITC标记山羊抗鼠IgG、TRITC标记山羊抗鼠IgG(北京中杉公司);4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、抗荧光淬灭封片剂(碧云天公司);淋巴细胞分离液、β-巯基乙醇( Sig-ma公司).
-
骨髓基质细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区血运重建的作用
作为较理想的细胞移植治疗的种子细胞来源,骨髓基质细胞(BMSC)日益受到重视.有研究证实给大鼠心肌缺血区进行自体骨髓细胞移植能促进新生血管的形成[1].本研究初步观察了经颈动脉移植的BMSC在脑缺血区中的分布及对缺血区新生血管形成的影响.
-
原发性脑非何杰金淋巴瘤1例
患者男,45,因头痛,喷射性呕吐3月,脑CT提示右顶枕叶占位病变于1992年9月行开颅探查加右顶枕叶肿瘤局部切除术,术后病理报告为:非何杰金淋巴瘤,弥漫型,B细胞来源.
-
腰椎管内血管内皮细胞肉瘤一例
血管内皮肉瘤(hemangioendotheliosarcoma)是血管内皮或向血管内皮方向分化的间叶细胞来源的一种少见恶性肿瘤.好发于头颅、面部、乳腺和深部软组织等处[1],而发生于椎管内硬膜外者尚未见报道.笔者遇见1例,经手术病理证实,报道如下.
-
胃非何杰金淋巴瘤术后12年合并肾盂癌一例
患者男,63岁.1984年因上腹疼痛3月余就诊.钡餐造影见胃底部大小不等的息肉样充盈缺损,胃壁柔软(图1).在我院行全胃切除术,病理诊断为非何杰金淋巴瘤(NHL),弥漫性浆细胞样淋巴细胞型,B细胞来源,区域淋巴结受侵(Ⅱ期).术后2年间接受COP方案化疗2周期,CO平P*方案化疗8周期,以后每2年来我院复查直到1992年7月,均未发现异常.1996年2月(胃术后12年)出现左上腹间歇性胀痛,B超、CT扫描提示脾脏、腹腔和腹膜后淋巴结受侵(图2).1个月后在我院行剖腹探查术,因局部广泛粘连融合无法切除,取淋巴结活检,病理诊断为NHL.又行CHOP方案化疗4周期,复查B超、CT示脾脏、腹腔和腹膜后病变较前好转.8个月后出现无痛性肉眼血尿,静脉尿路造影见右侧上肾盏内充盈缺损,大小为2.0cm×2.5cm(图3),CT扫描见右肾盏内软组织影(图4).行右肾切除术,病理诊断为肾盂移行细胞癌Ⅱ~Ⅲ级.
-
树突状细胞用于肿瘤免疫基因治疗的研究进展
自20世纪70年代Steinman和Cohn首先报道DC以来,人们对DC的认识不断深入,目前认为DC是体内功能强的抗原提呈细胞(APC),是机体免疫应答的始动者,特别在抗肿瘤免疫中具有核心地位.由于DC必须在激活或成熟后才能发挥作用,且DC的数量、功能及状态的激活都影响其抗肿瘤免疫的效果.因此,寻找合适的DC前体细胞来源,在体内外通过简便而有效的方法刺激扩增和激活DC,制备更具特异性和显效的DC疫苗,提高DC的抗原提呈功能,以诱导特异性的细胞免疫反应等一系列以DC为手段的抗肿瘤免疫基因治疗成为近年来的一大研究热点.本文就此方面的现状作一简要综述.
-
“DC细胞工厂”--脐带血CD34+造血干细胞来源的DC的大量制备
背景:树突状细胞(Dendritic Cell,DC)充当着免疫系统中的“警察”角色,它能够识别体内异常抗原信息并通过激活初始T细胞而诱导特异性的免疫应答。以DC为基础制备的肿瘤疫苗能有效的构筑抗肿瘤免疫屏障,因此DC被认为是充满前景的免疫治疗工具。作为原料细胞,大量成熟,功能均一的DC 细胞是制备DC疫苗的必须条件,而临床上广泛应用的DC细胞来自于自体外周血,数量在106~108之间,无法充分满足临床应用。因此,探索新的大量制备DC的方法成为临床上迫切的需求。目的:本实验旨在探索新的由CD34+造血干细胞大量诱导DC细胞生成的方法,并通过体外实验证实这种CD34-DC肿瘤疫苗相比外周血单核细胞来源的DC疫苗(PBMC-DC)具有类似的或者更好的诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:分离脐带血CD34+造血干细胞并利用GM-CSF/SCF进行连续30 d的扩增培养,期间通过贴壁持续收获DC。外周血单核细胞诱导的DC作为对照。对比两种来源的DC形态,表型和包括抗原吞噬,混合淋巴增殖,细胞因子分泌,趋化能力的功能特征。分别将其制备成肿瘤DC疫苗,并对比体外诱导的CTL IFN-γ分泌能力和针对肿瘤靶细胞的细胞毒性。结果:1) GM-CSF/SCF细胞因子组合连续培养CD34+细胞30 d后,共收获~1010总细胞量和~109的DC。与PBMC-DC相比,具有类似的形态特征;2)成熟状态时, CD34-DC与PBMC-DC具有类似的细胞表型(CD80, CD83,CD86,HLA-DR),而未成熟时CD34-DC表型好于PBMC-DC,尤其是CD80表达较早上调;3)无论是新鲜的还是冻存后复苏的,CD34-DC和PMBC-DC在GM-CSF/IL-4培养的第5天吞噬功能强,是抗原负载的佳时间窗;4)鸡尾酒式细胞因子作用下, CD34-DC较PBMC-DC具有更强的IL-12p70和IL-10的分泌能力,且前者诱导的CTL IFN-γ分泌水平更高,同时5)其表现出了更强的细胞毒作用;6)正常健康孕妇脐带血中CD34+造血干细胞具有稳定的增殖和向DC分化的潜能。结论:我们建立了一套由脐带血造血干细胞诱导大量DC生成的方法并称之为“DC工厂”。由其制备的DC抗肿瘤疫苗是将来能够用于临床的充满前景的免疫刺激剂。
-
造血干细胞和单核细胞来源的树突状细胞在形态、表型及功能的对照实验研究
背景:来自外周血单核细胞的自体DC疫苗作为一种很有前途的抗肿瘤免疫疗法,其面临的局限性包括细胞数量不足和功能缺陷。CD34+造血干细胞则是另一个理想的DC来源,已经有多种扩增CD34-DC的方法报道,都可以得到大量的细胞数和各种功能不同的DC。目的:本实验旨在探讨脐带血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞(CD34-DC)与外周血单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DC)在细胞形态、细胞表型、诱导生成的CTL细胞毒性方面的差异,并探讨不同来源的DC超微结构的变化与其抗原处理与抗原提呈功能之间的相关性,以期制备功能更加强大的DC疫苗。方法:取健康成人外周血,采用密度梯度离心法获取单核细胞后诱导生成DC(Mo-DC);取健康足月产孕妇脐带血,采用磁珠分选法分离纯化CD34+造血干细胞,并培养于含粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)/干细胞因子(SCF)的培养基诱导CD34+造血干细胞扩增及DC前体细胞的生成,GM-CSF/白细胞介素-4(IL-4)培养基进一步诱导前体细胞向DC细胞的分化(CD34-DC)。电镜下观察CD34-DC及Mo-DC的形态,比较其细胞突起数量、细胞核大小及内体小泡数量;流式细胞术检测不同培养时间(d1、d3、d5、d7)的CD34-DC及Mo-DC表面分子表达,并给予FITC-OVA257–264冲击,培养24 h后检测其抗原提呈能力;取培养至d5的CD34-DC及Mo-DC均负载CEA蛋白并加入肿瘤坏死因子(TNF-α)制备成CEA特异性的CD34-mDC、Mo-mDC(即DC疫苗),分别体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成,并利用MTS法检测其各自对CEA高表达的肿瘤细胞系Ls174-T的细胞毒性,以检测其激活T细胞的功能。结果:1)经过细胞因子和肿瘤抗原刺激之后的DC,悬浮生长而失去树突状外观,表现为类圆形,细胞膜清晰且光滑。2)与抗原提呈能力密切相关的内体小泡数量在CD34-DC中多于Mo-DC(P<0.05)。3)Mo-DC与CD34-DC经抗原及细胞因子刺激生成的Mo-mDC与CD34-mDC均可成熟(P>0.05)。4)CD34-DC比Mo-DC具有更强的抗原提呈能力(P<0.05)。5)CD34-DC与Mo-DC在刺激同种异体T淋巴细胞的增殖能力方面无差异(P>0.05)。6)CC-CTLs及CM-CTLs都可以杀伤CEA高表达的肿瘤细胞Ls174-T,但CC-CTLs比CM-CTLs有更高的杀伤率(P<0.05)。结论:1)经GM-CSF/SCF培养基可诱导脐带血CD34+造血干细胞扩增及生成DC前体细胞,并在培养d8开始贴壁生长,每3 d可收获一批DC前体细胞,用GM-CSF/IL-4培养基可进一步诱导生成CD34-DC,其表型与Mo-DC无差异。2)脐血造血干细胞来源的CD34-DC具有更强的抗原提呈、促淋巴细胞增殖及诱导激活CTL的能力。3)电镜下树突状突起数量、细胞核大小及内体小泡数量的变化是评估DCs功能差异的微观机制。4)脐带血来源的CD34-DC有望成为制备DC疫苗新的、理想的原料细胞。
-
PDGF-B链基因表达的调控及其在常见心血管疾病中的意义
血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是机体普遍存在的促分裂剂,系由两种肽链(A链、B链)组成的同型或异型二聚体.依不同的细胞来源,有3种形式:PDGF-AA,PDGF-AB和PDGF-BB.PDGF-A链和-B链分别由PDGF-A链基因和-B链基因编码.PDGF-B链主要由内皮细胞和巨噬细胞产生,其基因表达调控异常与常见心血管疾病的发生发展存在着密切关系,内皮细胞功能紊乱日益受到重视,而内皮细胞仅表达B链,本文就其表达调控,尤其是转录调控的研究进展和应用作一概述.
-
骨髓神经嵴源细胞对受损周围神经的修复作用
目的:探究成体大鼠骨髓中神经嵴源细胞的获取,及对受损周围神经的修复作用。方法:富集骨髓神经嵴源细胞间充质球,分离单克隆球,检测长期增殖能力和神经嵴标志的表达,检测向施旺细胞定向分化的能力和体外成髓鞘潜能。体外构建骨髓神经嵴源细胞为支持细胞的组织工程化神经移植物,桥接大鼠10 mm坐骨神经缺损,12周后进行行为学分析、电生理检测、荧光金逆行示踪试验、肌肉和神经的组织学观察。体外收集骨髓神经嵴源细胞的条件培养基,处理氧糖剥夺损伤的大鼠背根节神经元,检测神经元突起的生长变化和细胞活力改变。结果:骨髓神经嵴源细胞组织工程化神经移植物具有良好的神经修复作用,其条件培养基可改善受损背根节神经元的活力和突起生长。结论:神经嵴源细胞可从骨髓获取并应用于修复周围神经损伤,是潜在的自体细胞来源。
-
心脏干细胞来源的exosomes通过传递miR-21抗心肌细胞凋亡
目的:心脏干细胞移植治疗急性心梗的机制不明,而新研究发现外泌体( exosomes )是干细胞与心肌细胞信号交流的重要媒介。本研究通过解析心脏干细胞分泌外泌体的成分,阐明其中参与心肌保护作用的物质以及调控机制。方法:采用体外分离成年小鼠心脏的Sca-1+心脏干细胞( Sca-1+CPCs ),从Sca-1+CPCs的培养上清中分离提取其分泌的exosomes ,用Nano-sight、投射电镜、Western blot等对exosomes进行鉴定,qPCR解析exosomes中的内容物,找出关键调控的miRNA,并且通过转染以及萤光素酶报告基因的实验证实其调控的靶基因;后,细胞加入exosomes预保护后,检测其关键miRNA及其靶蛋白的表达,流式细胞术检测凋亡细胞比例的变化。结果:Sca-1+CPCs细胞上清中提取的物质是直径在80 nm左右的双分子层囊泡,且表达CD9、CD63和Alix 3种exosome标志蛋白。氧化应激可以促进CPCs分泌exosomes,这种exosomes中miR-21表达明显增加,并且被心肌细胞摄取,miR-21通过与PDCD4靶向结合抑制心肌细胞在氧化应激损伤下的凋亡,加入exosomes对细胞进行保护后,在同样环境下可明显上调细胞内miR-21,且发现PDCD4及cleaved caspase-3的表达明显下调,凋亡细胞的比例明显减少。结论:心脏干细胞通过分泌的exosomes,将其包裹的miR-21进入到心肌细胞中抑制PDCD4的表达,从而抗心肌细胞凋亡。本研究为阐明干细胞治疗心肌梗死的作用机制提供了新的视野。
-
LSD1调控hiPSCs高效定向分化为IPCs的作用及机制研究
目的:通过抑制或沉默人皮肤成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞( hiPSCs )内赖氨酸特异性去甲基化酶1( LSD1)基因的表达,建立一种hiPSCs高效、定向分化为胰岛素分泌细胞( IPCs)的方案,并初步探讨其调控分化机制。方法:采用shRNA或LSD1抑制剂,沉默或抑制hiPSCs内LSD1基因表达,筛选出利于hiPSCs向定型内胚层分化的LSD1活性;利用四步法将hiPSCs诱导分化为IPCs,并对IPCs分化效率及成熟度进行检测;将IPCs移植到糖尿病模型免疫缺陷小鼠肾包膜下,评估其体内降糖疗效;ChIP-qPCR检测抑制LSD1前后hiPSCs细胞核内相应组蛋白水平的变化情况。结果:抑制LSD1可促使hiPSCs提前进入定型内胚层分化,终IPCs的效率由21.52%提高至39.32%;体外胰岛素分泌量由1/8提高到1/6;移植的IPCs可在1周内使糖尿病小鼠血糖恢复至正常水平;ChIP-PCR结果显示hiPSCs的分化基因启动子区域H3K4me2/me3和H3K9act水平提高,H3K9/H3K27me3和HDAC1水平下降,而多潜能基因表达情况相反。结论:适当抑制LSD1活性可显著提高hiPSCs向IPCs的分化效率和成熟度,并在体内发挥有效降糖作用;LSD1通过调控hiPSCs多能性基因和分化基因启动子区域组蛋甲基化、乙酰化修饰水平来影响IPCs分化效率。
-
40例原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤临床特征、细胞来源与预后分析
背景与目的:原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(primary gastrointestinal diffuse large B-cell lymphoma.PGI-DLBCL)的发病部位及其临床表现与胃肠道其它肿瘤性疾病难以鉴别,误诊率较高,且其标准治疗的方法仍未确定.本研究旨在分析PGI-DLBCL的临床特征、肿瘤细胞来源及预后,并探讨有效的联合治疗方法.方法:分析我院1998~2007年诊治的40例PGI-DLBCL,应用Kaplan-Meier法、log-rank检验和Cox回归模型对其临床资料和实验室检测结果进行生存分析及单因素和多因素预后分析.通过免疫组化染色分析34例患者的肿瘤细胞来源.治疗方法包括联合化疗、手术+联合化疗及放疗、单纯手术等,联合化疗方案为CHOP及CHOP样方案.结果:40例PGI-DLBCL患者中,年龄10~89岁中位年龄56.5岁.男女比例1.86:1,胃与肠道的发病比率为1.05:1.预后分析可追访病例38例中,死亡12例(31.6%),3年和5年生存率均为64.7%.9例多部位发病的患者中,8例(88.9%)在3年内死亡.9例(26.5%)肿瘤细胞来源于生发中心(germinal center,GC),25例(73.5%)来源于非生发中心(non-germinal center,non-GC).单因素预后分析发现肿瘤细胞来源、国际预后指数(international prognosis index,IPI)、B症状对生存率的影响有显著性(P
-
扩大造血干细胞来源,根治更多的血液肿瘤患者
造血干细胞移植(HSCT)对大部分恶性血液肿瘤是能彻底根治的主要方法.异基因造血干细胞移植由于患者能接受超大剂量的化疗/放疗,而且无需肿瘤细胞净化,移植后可以产生移植物抗肿瘤的过继性肿瘤免疫作用,而得到广泛的应用.
-
全球干细胞治疗市场发展趋势
1968年,Gatti应用骨髓移植(BMT)成功治疗了一例重症联合免疫缺陷患者,从而开启了干细胞(SCs)在医学上的应用之门.直到今天,骨髓移植仍然用于治疗癌症和遗传性血液疾病,只是采集造血干细胞的来源越来越多地集中在外周血造血干细胞和脐带血干细胞,使用骨髓干细胞移植的比例在不断下降.目前,全球每年大约有6万例骨髓移植手术(其中大约3.5万例使用自体造血干细胞,剩下的大约2.5万例使用异基因造血干细胞进行移植).除骨髓移植外,近期期望高的干细胞疗法来自多能间充质干细胞(MSCs),长远期望来自于多能胚胎干细胞(ESCs)和诱导性多能干细胞(iPSCs).目前市面上使用的和在研的大多数干细胞产品的细胞来源为多能MSCs.
-
体外诱导骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法学研究进展
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)由于取材容易,增殖能力强,具有多向分化潜能,且免疫原性弱,移植后无致瘤性,有望成为体外诱导分化成胰岛细胞的首选种子细胞,为细胞移植治疗糖尿病提供较好的干细胞来源.近年来,国内外对于体外诱导BMSCs分化为胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)治疗糖尿病的研究已取得一定进展.许多研究者尝试利用各种不同的方法,使BMSCs定向分化为IPCs.目前,体外诱导BMSCs分化为IPCs趋于寻找快速、高效的方法以获取足够量的胰岛素.本文就体外诱导BMSCs分化为IPCs的方法学研究进展作一综述.
-
原发性胃弥漫大B细胞淋巴瘤82例预后分析
目的:探讨原发性胃弥漫大B细胞淋巴瘤(primary gastric diffuse large B-cell lymphoma,PGDLBCL)的临床特征、肿瘤细胞来源与预后的关系.方法:回顾性分析82例PG-DLBCL患者的临床资料,分析其临床特点、细胞来源等对患者预后相关因素的影响.结果:82例PG-DLBCL患者中,年龄18~80岁,中位年龄54岁,可追访72例患者的3年和5年生存率均分别为64.2%和59.3%.单因素预后分析发现国际预后指数(IPI)、B症状和β2-微球蛋白(β2-MG)对生存率的影响有显著性(P<0.05).Cox多因素分析显示初诊时血清LDH水平与临床分期是影响本组患者预后的独立因素.结论:PG-DLBCL发病以中年男性为主.IPI、B症状及β2-MG对预测患者生存和指导治疗有重要作用,其中初诊时血清LDH水平与临床分期是本组患者的独立预后因素.术后化疗或术后放化疗组的疗效与化疗或放化疗组相比基本相同.
-
以心包、胸腔积液为首发症状的淋巴瘤合并急性单核细胞性白血病1例
患者女,22岁,因咳嗽、胸闷、气促 1月余入院.该患者 1个多月前曾因发热伴咳嗽、乏力、胸痛在当地医院就诊,X线检查发现双侧胸腔积液,B超提示双侧胸腔积液及心包积液,纤支镜检查示:支气管内膜炎症,纵隔占位病变可能,胸部 CT检查见前上纵隔占位病变,考虑:(1)生殖细胞来源的肿瘤可能性大;(2)恶性淋巴瘤;(3)侵袭性胸腺瘤.曾多次胸水检查均未发现抗酸杆菌及肿瘤细胞.后拟"结核性心包炎"予诊断性治疗 1个月,症状无改善,胸腔、心包积液无明显吸收,为进一步诊疗转入我院.
-
毛母质癌9例分析
毛母质癌(pilomatrix carcinoma)是属毛球的毛母质细胞来源的一种毛源性恶性肿瘤.临床上罕见,极易误诊或漏诊[1~3].为提高对本病的认识,特将收治的9例作一报道.
-
Th17/Treg在慢性乙型肝炎抗病毒治疗过程中的变化及作用
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是全球的公共健康问题,我国为 HBV 感染的高发区,其中慢性HBV 感染者约9300万,而2000万是慢性乙型肝炎(CHB)患者[1]。若未得到积极有效的治疗,可向肝硬化和肝细胞癌发展而严重影响患者的生命和生存质量。 Th17和Treg 细胞来源于相同的幼稚 T 细胞,分别起着促炎和抗炎的作用,近年来越来越多的研究表明CHB 的发展和转归与Th17/Treg 的失衡有关,本文就Th17/Treg 的相互关系及其与CHB治疗前后的作用作一综述和展望。