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原代小型猪肝细胞的分离培养及其功能
目的:研究原代小型猪肝细胞的分离、培养及肝细胞的形态学变化及其功能特性.方法:用体外灌流装置,DTA和胶原酶两步灌流法消化分离小型猪肝细胞.在含100 ml/L小牛血清及其附助因子的RPMI 1640培养基中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察.同时测定不同培养时期肝细胞生化合成及生物转化功能.结果:(1)肝细胞产量为6.0×109~8.2×109(7.0 × 109±0.79×109)/每只猪肝;(2)肝细胞活率为90.0~99%(94.4±3.07%);(3)肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;(4)接种培养后肝细胞增生生长旺盛;(5)接种后20 h内每107个肝细胞尿素及白蛋白的合成量分别为1.21~1.50 mmol/L及0.58~0.80 g/L;(6)肝细胞数在1.25×107个~1.60×107个时,利多卡因的转化率在24 h时均在80%以上,随着时间的延长及肝细胞数的增多,利多卡因的转化率逐渐增加.结论:本方法分离获取的肝细胞产率高、活性高、增生生长旺盛、具有良好的生物合成及生物转化功能,可作为生物人工肝较为理想的细胞来源.
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TGF-β1与肝纤维化
肝纤维化是各种致病因子持续作用于肝脏,导致慢性肝损伤后的共同结果,多种细胞因子参与肝纤维化的发生,其中,转化生长因子β1(trarisforming growth factorβ1,TGF-β1)起关键性的作用.TGF-β1是具有多种生物学功能的细胞因子,可调节细胞的生长、分化、基质产生和凋亡;在胚胎生长发育过程中,对模型形成和组织特异性分化起重要作用;在成人,与组织修复和免疫系统调节过程有关.TGF-β1可以存在于所有的组织中,但在骨、肺、肾及胎盘组织中比较丰富.TGF-β1大多由实质细胞产生,亦可由浸润细胞,如淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞和血小板产生及释放.TGF-β1的信号转导由细胞膜上的是跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体介导,在胞质内信号由递质Smads介导转导至细胞核,影响特异性基因表达.本文从TGF-β1的细胞来源、信号转导、激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、促进细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)沉积和活性调节方面对其在肝纤维化的发生机制中的重要作用作一综述.
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肝干细胞研究现状
肝干细胞具有双分化潜能,可向肝细胞和胆管上皮细胞分化发育;胚胎期肝干细胞来源于肝始基,成年期肝干细胞可能来源于Hering管细胞和骨髓造血干细胞;细胞间作用和细胞基质间作用对于肝干细胞的分化成熟起重要作用;肝干细胞在肝脏疾病的基础研究和临床治疗方面具有广阔的应用前景.
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培养猪肝细胞型生物人工肝的研究进展
生物人工肝研究的主要细胞材料是人肝细胞、肝肿瘤细胞株和猪肝细胞,但由于人肝细胞来源匮乏以及肿瘤细胞株潜在的不安全性,培养猪肝细胞型生物人工肝已经逐步成为人工肝研究和临床应用的主要对象.文章主要介绍了培养猪肝细胞型生物人工肝的动物实验、临床应用以及其生物安全性,同时探讨了该型生物人工肝存在的问题和应用前景.
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生物人工肝细胞材料研究进展
肝细胞是生物人工肝(bioartificial liver,BAL)中的核心生物成分,其研究颇受国内外学者的重视.猪肝细胞具有类似人肝细胞的高代谢功能,在BAL中可作为人肝细胞的替代品.重组具有氨清除等功效的人肝细胞系在BAL中取得了较好成效,具有一定的应用前景.为了探索一种永生化的、无致瘤性的、有分化功能的人肝细胞系,作为BAL生物成分的理想细胞来源,国外学者研究设计了一种可回复性永生化程序,为解决细胞材料问题提供了新的思路和手段.肝非实质细胞及某些种类细胞,对维持肝细胞的三维结构的生存环境,改善肝细胞的代谢活性和存活起重要作用,与肝细胞混合培养后明显促进肝细胞的增生和分化,其在BAL系统中的潜在价值已逐渐引起注意.然而,肝细胞的增生、长期培养、功能维持及人源肝细胞的严重短缺等都是亟待解决的问题.
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实验性肝纤维化形成过程中几种基质金属蛋白酶表达的研究
目的:研究基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶抑制因子在大鼠实验性肝纤维化形成过程中的作用及表达.方法:应用免疫组织化学和核酸原位杂交法研究MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白及其mRNA和MT1-MMP mRNA在四氯化碳实验性大鼠肝纤维化形成过程中的表达变化.结果:在肝脏间质细胞和部分肝细胞中表达.在纤维化形成过程中MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白及其mRNA和MT1-MMP mRNA的表达程度与肝纤维化程度密切相关.结论:肝脏间质细胞是MMPs及TIMPs主要细胞来源,部分肝细胞也有表达.MMPs及TIMPs在肝纤维化形成过程中共同发挥作用.
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骨髓是各种组织器官再生修复的共同干细胞库
再生成年组织细胞的干细胞来源存在争论.成人组织干细胞的"跨系分化"或"可塑性"受到质疑.目前认为骨髓是储存各种原始组织干细胞的仓库:骨髓干细胞在各种细胞因子的作用下,不断通过毛细血管网进入各种组织,并在局部组织分化为原始组织干细胞;原始组织干细胞再生增殖组织特异性细胞以补充衰老损伤的细胞.由于骨髓干细胞能够自我更新,容易从骨髓及外周血获取,故对组织再生修复有着令人鼓舞的临床应用潜力.
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调控自噬对晚期泡沫细胞凋亡的影响
目的:阐明调控自噬对晚期泡沫细胞凋亡的影响。
方法:将人THP-1细胞来源的巨噬细胞(THP-M)分别与50μg/ml ox-LDL孵育6 h、12 h和24 h;油红O染色观察细胞内脂质蓄积的变化,酶荧光法试剂盒检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量变化,免疫印迹法检测细胞内LC3II和P62的表达水平;然后分别利用不同浓度自噬激动剂雷帕霉素和抑制剂3-MA预处理THP-M或ATG5特异性siRNA转染的THP-M细胞对自噬进行调节,观察细胞内脂含量的变化。 -
去糖基化提高脑钠肽的诊断及预后价值
目前临床上常以心肌细胞来源的脑钠肽(BNP)以及脑钠肽前体N末端序列(NT-proBNP)作为急性呼吸困难患者诊断心衰和评估预后的指标。虽然应用广泛,但仍有将近15%的急性呼吸困难患者无法做出心衰诊断。因此,提升这些生物标志物的诊断和预后准确性的改进措施是十分有必要的。
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人脐带间充质干细胞的研究进展及在心脏疾病中的应用
近年来人们饮食及生活方式发生了巨大变化,特别是人口老龄化的加速,我国面临心脏疾病发病率和死亡率快速增长的严峻形势。心肌细胞是不可再生细胞,常规药物治疗、血运重建、冠状动脉旁路移植等均不能使心肌细胞再生,寻找能够弥补心肌缺失的方法显得极为迫切。间充质干细胞(MSCs)具有自我更新、不断增殖、多向分化和免疫调节等能力,已成为再生医学的研究焦点。1970年, Friedenstein等首次在骨髓中发现并提取到骨髓间充质干细胞(BMMSCs)[1]。但从骨髓中提取BMMSCs的过程复杂,并对捐献者造成损伤。胚胎干细胞(ESCs)能分化成体内所有的细胞,是多能性干细胞的典型代表。近年研究发现诱导多能干细胞(iPSCs)具有与ESCs相似的多能性[2]。多能性是指这些细胞移植到免疫缺陷小鼠时可分化成三胚层(外胚层、中胚层及内胚层)的任意细胞的能力。但是胚胎干细胞的应用会产生严重的伦理问题。而iPSCs可能存在如c-myc的融合致癌基因、插入突变、抑癌基因破坏等情况[3],其临床应用受到批评与限制。寻找新的干细胞来源成为当务之急。
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特发性肺纤维化中成纤维细胞灶的研究进展
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是常见的一种间质性肺疾病,目前其发病机制仍不十分明确,病理特征是各种原因所导致的肺泡上皮细胞损伤和不正常的组织修复,从而导致肺部正常组织结构的破坏,代之以异常增生的成纤维细胞及肌成纤维细胞,即形成所谓的成纤维细胞灶(fibroblast foci)[1],这些细胞分泌大量细胞外基质及合成胶原纤维,终导致肺纤维化的形成[2].成纤维细胞灶是IPF的重要病理特征,成纤维细胞灶数的增加是IPF进展和预后不良的重要因素[3].因此,近年来关于成纤维细胞灶的功能、细胞来源、调控因素等逐渐成为研究的热点.现将成纤维细胞灶的研究进展进行综述.
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肿瘤坏死因子-α对A549肺腺癌细胞外来体诱导抗肿瘤作用的影响
肺癌的发病率及病死率较高,传统的治疗方法如手术、放疗及化疗等毒性及不良反应大,疗效不满意,生物免疫疗法是肺癌治疗的重要手段之一.肿瘤细胞来源的外来体含有肿瘤抗原和共刺激分子,能诱导抗肿瘤免疫反应,但其抗肿瘤疗效有待进一步提高.研究结果显示多种细胞因子能调节外来体的分泌和功能,肿瘤坏死因子( tumor necrosisfactor,TNF)-α是多效性的细胞因子,能抑制肺癌、肾癌及黑色素瘤等多种肿瘤[1],但TNF-α对肺癌细胞外来体有无影响尚不明确.我们研究TNF-α对肺癌细胞来源的外来体诱导抗肿瘤作用的影响,为TNF-α联合外来体疫苗抗肿瘤治疗提供理论基础.
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施普善对慢性脑缺血大鼠行为学及海马诱导型一氧化氮合酶表达的影响
有研究观察到脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性升高,特别是海马部位持续性增高,表明它在中枢神经损伤过程中起重要作用,而在慢性脑缺血过程中,iNOS是否持续表达,其细胞来源如何,及其在缺血损伤中的作用有待进一步研究.
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非霍奇金淋巴瘤侵犯心脏致Ⅲ度房室传导阻滞一例
患者男性,60岁.因癫痫发作于2003年3月1日就诊于外院.头部CT示右额颞占位性病变,拟行手术.3月13日出现胸闷、憋气,心电图提示Ⅱ度Ⅱ型房室传导阻滞,药物治疗后症状仍持续加重.3月15日转入我院,心电图提示Ⅲ度房室传导阻滞,心率30~40次/min,急诊安装临时起搏器,患者渐出现烦躁不安、意识欠清,导致起搏器电极脱落.查体:一般情况可.神志欠清,查体欠合作.双肺清,心率40次/min.颈抵抗明显,克氏征阳性.患者既往体健,无冠心病、高血压及糖尿病病史.考虑其颅内占位病变有发展,遂再次行临时起搏器置入术,并于3月17日行右颞顶开颅肿瘤切除术.术后病理报告:右额颞顶部非霍奇金淋巴瘤,中分化,B细胞来源.术后患者心电监测仍提示为间发Ⅲ度房室传导阻滞,于2003年3月20日行永久起搏器安装术.
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树突状细胞介导的T细胞抗多发性骨髓瘤细胞活性的研究
多发性骨髓瘤(MM)是B细胞来源的恶性肿瘤.化疗和造血干细胞移植等综合治疗,可获得较高的缓解率,但微小残留病的存在,使骨髓瘤易复发.树突状细胞(DC)为基础的免疫治疗是近几年来治疗MM的热点之一.国外报道[1]用凋亡的骨髓瘤细胞或分泌的异常单克隆Ig,即M蛋白脉冲DC,得到DC瘤苗,再回输体内,可以观察到骨髓瘤特异的抗瘤效应.本实验体外诱导培养DC,负载骨髓瘤细胞全抗原或分泌的M蛋白,探讨负载抗原的DC对淋巴细胞的活化作用及活化的淋巴细胞对自体、异体骨髓瘤细胞的杀伤活性.
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自身免疫性溶血性贫血患者外周血树突状细胞数量及协同刺激分子表达
树突状细胞(DC)根据细胞来源、表型特点和功能可分为髓样DC(mDC)和浆细胞样DC(pDC)[1],mDC表型为CD11c+ CD123-,pDC表型为CD11c- CD123+.在不同部位、不同微环境和不同细胞因子的刺激下可以发挥不同的功能特征.
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肠道L细胞的研究进展
L细胞作为肠道内分泌细胞的一种,零散分布于胃肠道,分泌胰高血糖素样肽-1( GLP-1)、胰高血糖素样肽-2( GLP-2)、多肽YY( PYY)等多种重要的肽类激素,可以促进胰岛素分泌、控制食欲,有利于控制血糖和体质量.近年研究显示,2型糖尿病患者存在GLP-1分泌受损,以GLP-1为基础的药物已应用于2型糖尿病的临床治疗.本文着重介绍有关L细胞的研究进展.一、L细胞的来源、形态学特征和分布规律研究显示,包括肠道内分泌细胞在内的四种肠道上皮细胞均由小肠隐窝内的多潜能干细胞分化而来[1].一些生理和药理物质(福斯高林、伊屋诺霉素等)均可刺激隐窝细胞分泌GLP-1和PYY,提示L细胞来源于肠道隐窝细胞[2].人L细胞分布在整个肠道,数量从小肠近端向大肠远端逐渐增加.疾病状态下,L细胞的形态、分化过程和分布规律有何变化尚待研究.
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肥胖2型糖尿病患者血液循环及单核细胞来源的树突状细胞特征分析
树突状细胞(DCs)可能参与动脉粥样硬化的形成,但其作用仍不清楚.本实验的目的是研究肥胖2型糖尿病(T2DM)患者血液循环中IDCs和单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DCs)与冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)的相互作用.研究人员将伴或不伴胰岛素抵抗的绝经期后肥胖女性患者纳入实验组,将年龄与之相匹配的健康女性纳入对照组.结果显示,与健康志愿者相比,T2DM患者骨髓中DCs显著增加,类浆细胞样DCs小幅增加.与对照组相比,T2DM伴肥胖者成熟Mo-DCs显著减少,对于CASMCs的黏附能力较对照组和非T2DM伴肥胖组显著增加.
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骨髓单个核细胞来源内皮细胞种植支架的实验研究
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干细胞的一种新来源--尿液
干细胞( stem cells )是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,可以分化成多种功能细胞。诱导多潜能性干细胞(induced pluripotent stem cells , iPSC)为干细胞的一种特殊类型,可以不断自我更新且具有多向分化潜能。目前,多潜能干细胞来源问题一直是生物医学领域的研究热点。新研究发现,尿液是一种完全无创的细胞来源,主要用于疾病辅助诊断和检测疾病的相关标记物。1972年,人们首次从新生儿的尿液标本中成功分离出存活的脱落细胞(以下称尿液细胞)[1],为尿液衍生干细胞( urine-derived stem cells)[2],尤其是尿液来源的诱导多潜能干细胞( urine induced pluripotent stem cells , UiPSC)[3-5]的成功诱导,提供了重要的基础。因此,尿液细胞为进一步研究干细胞提供了一种理想的来源,在再生医学、组织工程和药物发现与评价等方面颇有应用价值。