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血管内皮生长因子与肿瘤
研究表明,血管的生成与肿瘤的生长及转移的有着密切的关系[1]。而血管内皮生长因子(VEGF)是迄今为止发现的促进血管生成的强的细胞因子。VEGF是1989年Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的,而后发现它同先前克隆的血管通透因子(vPF)的氨基酸序列一致,故目前将它们合并使用(VEGF/VPF)。本文就血管内皮生长因子与肿瘤的关系做一综述。
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人α-肿瘤坏死因子基因在胆管癌细胞中的表达研究
我们利用阳离子脂质体、逆转录病毒载体介导人TNF-α基因转染进入胆管癌细胞,并实现了表达.1.材料和方法:(1)质粒和主要试剂:重组逆转录病毒huTNF-α质粒由宝生物大连公司提供;人胆管癌细胞按王曙光等[1]方法经胰酶消化、贴壁生长,以10%小牛血清和DMEM培养液中,在体积分数为5% CO2浓度、饱和湿度及37℃条件下培养;Lipofect AMINE reagent ,TransIT-LT1购自日本Mirus公司;G418购自美国GIBCO/BRL公司;huTNFα抗体购自中山公司;其他试剂为分析纯.PCR引物、huTNF-α基因序列测定均由大连TAKARA公司合成.
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环氧合酶-2抑制剂NS398对小鼠前列腺癌抑瘤作用的研究
为探讨环氧合酶(COX)-2选择性抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺( NS398)抗前列腺癌的作用,我们建立了前列腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察NS398在动物体内的抑瘤作用.材料与方法人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3由青岛大学医学院病理生理教研室惠赠.培养于DMEM培养液中,5% CO,、37℃孵箱中扩增,每2~3天换液传代.NS398(美国Sigma公司),鼠抗人血管内皮生长因子(VEGF,美国SANTA CRUZ公司),CD34鼠单克隆抗体、P-V6000免疫组化试剂盒、DAB显色剂、兔抗鼠二抗、ECL发光剂(北京中杉生物技术有限公司).
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人膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91细胞HPV-18感染
为探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV-16/18)与膀胱癌的关系,我们对膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91中的HPV感染情况进行了研究,报告如下。 材料和方法细胞培养:人膀胱移行细胞癌PUMC-91细胞系及宫颈癌HeLa细胞系37 ℃闭式培养于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中。DA的提取:传代培养收集1×106~1×107细胞,常规酚-氯仿抽提DNA,测量吸光度A值,贮存于-2 0 ℃。
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胃液对BIU-87细胞系细胞凋亡的影响
为探讨胃代膀胱术抑制膀胱肿瘤复发的机制,我们采用体外实验方法,观察胃液对膀胱癌细胞系BIU-87细胞凋亡的影响,报告如下。 材料与方法细胞培养及处理:将BIU-87细胞系置于37 ℃、5% CO2、含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养,待细胞生长旺盛、进入指数增殖期时,收获培养瓶中的细胞,调配成2.5×105个/ml细胞悬液,接种至预先置有玻片的24孔培养板和T-75培养瓶,实验各组分别加入胃液(终浓度7.6 μmol/ml)、稀盐酸(终浓度7.6 μmo l/ml)、阿霉素(终浓度2 μg/ml)和无药培养液,继续置于37 ℃、5%CO2条件下培养,24 h后收集细胞进行检测。
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血管内皮生长因子反义寡核苷酸及抗KDR抗体对人肝癌细胞系HHCC的生长抑制作用
本研究采用VEGF反义寡核苷酸(oligodeoxynucleotide, ODN)抑制VEGF分泌及抗KDR抗体封闭KDR的方法,观察它们对体外培养的肝癌细胞系HHCC细胞生长情况的影响,以探讨VEGF及其受体在肝细胞癌中的作用.材料与方法1.细胞株:人肝癌细胞株HHCC由第四军医大学病理学教研室863课题组保存并提供,培养于含100*!ml/L胎牛血清的RPMI-1640培养液中.
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7%CO2对培养液pH值、小鼠骨髓间充质干细胞增殖和OCT4蛋白表达的作用研究
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是组织工程瓣膜理想的种子细胞来源之一.种子细胞的培养通常采取5%CO2(气体浓度为体积分数,下同)、21%O2、100%湿度、37℃及pH值7.2~7.4的环境[1].
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妊娠高血压综合征孕妇血清对培养的内皮细胞的影响
近年来,内皮细胞损伤是妊娠高血压综合征(妊高征)发病中心环节的学说[1]已被公认,但造成内皮细胞损伤的原因目前仍不清楚。本研究通过观察妊高征患者血清对培养的脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨妊高征发病的机理。 一、资料与方法 1.孕妇血清来源:选取正常晚孕妇女4例及妊高征患者13例,其中轻、中、重度妊高征患者各6、2、5例,按全国统编教材《妇产科学》(第4版)[2]中的标准进行诊断和分类。平均孕周为38周,正常晚孕妇女及妊高征患者的年龄、孕龄均无统计学差异。所有孕妇均无心、肝、肾及内分泌病史。未临产时采静脉血,无菌条件下分离血清,-20℃保存待用。 2.细胞培养及分组:脐血管内皮细胞株购自武汉大学典型培养物保藏中心。将细胞加入含10%新生小牛血清的依格尔培养液进行传代培养。实验共分5组,1组加入等量依格尔培养液;2组培养液加入正常晚孕妇女血清;3、4、5组培养液分别加入轻、中、重度妊高征患者血清。2~5组所加孕妇血清体积分数为30%,其他成分与1组相同。 3.观察指标:(1)生长曲线:连续观察7 d,以天数为横轴,以每天所得细胞数为纵轴绘制成图。(2)ICAM-1免疫组织化学染色:免疫组化鼠抗人ICAM-1单克隆抗体购于武汉博士德公司,二氨基联苯胺染色试剂盒购于北京中山生物技术公司。细胞取材后以丙酮固定,依次加入一抗、生物素标记的二抗及辣根酶标记的链霉卵白素,二氨基联苯胺显色封片后镜检。结果按细胞膜或细胞浆染色的深浅来判断:淡棕色为阳性(+)、棕色为中度阳性(+ +)、深棕色为强阳性(+ + +)、无着色的为阴性(-)。(3)内皮细胞凋亡:2、3、4、5组各取培养瓶8个,细胞融合后,换无血清的改良依格尔/F12混合培养基,分别加入各组孕妇血清培养后取材,用碘化丙啶(50 μg/ml,为美国Sigma公司产品)作细胞DNA染色,用流式细胞仪(Facsort,为美国B.D公司产品)检测。分析细胞凋亡:低于G1期DNA含量主峰的记数峰为凋亡峰,以百分比(%)代表细胞凋亡率。 4.统计学方法:采用两样本均数的t检验。
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良恶性脑膜瘤T淋巴细胞Ag-NORs表达活性的研究
一、材料和方法12例健康人为自愿献血,32例脑膜瘤患者为2000年8月~11月间本院神经外科收住病例依据病理诊断和WHO1993年分类标准,其中良性脑膜瘤16例,恶性脑膜瘤16例.均在无菌条件下取静脉血0.5ml,加到rDNA培养瓶中,进行培养、制片、印染和图片分析(2).主要仪器:KL型肿瘤免疫图像分析系统,北京健而康医疗设备有限公司产品.主要试剂:RPMI-1640培养液GIBCO产品;银染液(5%硝酸银)、固定液及其配套试剂由开隆仪器公司提供.统计学方法:采用SAS6.12统计软件包,进行检验F和q检验.
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中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞培养液对正常人真皮成纤维细胞的氧化损害
目的 观察细胞中波紫外线(Ultraviolet b,UVB)诱导的提前衰老成纤维细胞培养液对正常人真皮成纤维细胞的影响.方法 将UVB诱导的提前衰老成纤维细胞培养液孵育正常人真皮成纤维细胞,随后使用CCK-8法检测细胞增殖活性,并利用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞中活性氧及线粒体膜电位的变化.结果 经过UVB诱导的提前衰老成纤维细胞培养液孵育的正常人真皮成纤维细胞活性显著低于对照组,并且细胞中的活性氧及线粒体膜电位荧光强度也均高于对照组.上述现象可被抗氧化剂所逆转.结论 UVB诱导的提前衰老成纤维细胞可通过释放可溶性活性物质,对周围正常成纤维细胞造成氧化损害.
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同化培养液双界面法培养纯化的视网膜神经节细胞
视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)具有高度分化性,生后一般不再进行有丝分裂,RGCs体外培养属于原代培养;RGCs体外混合培养多能存活4周,而纯化培养大多只能存活48 h.我们采用星形胶质细胞同化培养液双界面法培养纯化的RGCs存活时间≥2周,为纯化RGCs提供较好的实验模型.
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人口腔粘膜上皮角朊细胞的体外培养
人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难,其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型,并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1.材料:培养物来源于5个月~10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干,每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2.方法:①酶消化法:用D-Hanks液冲洗粘膜块,剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液(1∶1)5 ml,将粘膜块放入其中,密闭放入4℃冰箱内12~20 h。将表皮从基底撕脱,放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min,终止消化。低速离心5 min,去上清,加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中,制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L,接种于25 ml培养瓶中。②组织块法:将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小,用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转,放入37℃温箱2~4 h,加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液,轻轻翻转培养瓶,使培养液浸没组织块,静置培养,每周换液2次。
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转化生长因子β对白细胞介素1β诱导髁突软骨细胞凋亡的调控作用
关节软骨进行性破坏是骨关节炎(osteoarthoritis,OA)的主要病理改变之一.近来发现OA关节软骨有异常的软骨细胞凋亡,这可能与OA关节软骨的破坏有关.我们就TGF-β在人重组白细胞介素-1β(rhIL-1β)诱导髁突软骨细胞凋亡中的作用进行了研究.1.材料和方法:(1)rhIL-1β诱导软骨细胞凋亡:将髁突软骨细胞接种于培养瓶中,密度为3×104/ml,培养至对数生长期,实验组分别加入含有rhIL-1β(1、10、20 ng/ml)及二甲基亚砜(DMS0,15μl/ml)的DMEM培养液,处理8、16、24 h后收集细胞.分别用流式细胞仪、透射电镜、DNA电泳检测细胞凋亡.对照组不加rhIL-1β.
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人原发性肝癌细胞株QGY-7703的放射敏感性
除外科手术和介入治疗外,近年已尝试采用放射治疗原发性肝癌。为了设计制定合理的放射治疗方案,首先在细胞水平对其放射生物学特性进行研究显得尤为必要。本研究选择人原发性肝癌细胞株作为实验对象,观察其照射后的放射敏感性指标,为临床提供参考。 一、材料和方法 1.细胞来源与培养:人原发性肝癌细胞株QGY-7703来自中国科学院细胞生物研究所,为单层贴壁生长。培养液为RPMI-1640培养基,内含20%牛血清(上海放射医学研究所产品),青霉素1万U/100 ml,链霉素10 mg/100 ml。将细胞置于37℃,体积分数为5%的CO2培养箱内培养至指数生长期进行实验,细胞消化用0.25%胰酶EDTA溶液。
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半合成青霉素的临床应用概况
1 半合成青霉素发展起源1929年Fleming发现污染葡萄球菌平皿上的青霉菌,有拮抗和溶解球菌菌落的现象,此后Fleming从青霉菌培养液中获得一活性物质称之为"青霉素".1940年发明了可供人体注射用的青霉素,但当时收率低,产量少.此后经不断研究和改良,1945年后青霉素终于进入大规模生产阶段,人类生命史上终于进入了崭新的阶段,治愈了以往人们认为无法根治的疾病如结核性脑膜炎、感染性心内膜炎以及鼠疫、炭疽等严重感染,挽救了许多人的生命.可以说青霉素的诞生是人类的福音.1959年分离出青霉素母核(6-APA),这为半合成β内酰胺类抗生素的研究提供了必要的基础,进而开发了一系列半合成新青霉素.至今已有几十种不同类型半合成青霉素用于临床,为感染性疾病的治疗提供了高效、低毒的有力武器.
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霉酚酸酯--硫唑嘌呤的首选替代品
1896年,Gosio从青霉菌培养液中发现霉酚酸(mycophenolic acid,MPA).通过研究,人们开发出MPA的酯类前体药--霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil,MMF),它可溶于乙醇,微溶于水.1995年,MMF被美国FDA批准用于同种异体肾移植急性排斥的预防治疗.
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淫羊藿黄酮苷及其代谢产物调控骨代谢的体外实验研究
为探讨淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对骨形成和骨吸收的调控作用,利用酶水解法和酸水解法分别制备了淫羊藿黄酮苷的2种代谢产物.采用鼠颅盖骨机械法分离和体外培养获得成骨细胞, 采用新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞,采用VD3诱导鼠骨髓的造血干细胞分化成破骨样的多核巨细胞.实验组培养液为10%胎牛血清+α MEM培养液+不同浓度淫羊藿黄酮苷及代谢产物,对照组不加药.分别用四甲基偶氮唑盐和3H-TdR法检测成骨细胞的增生和碱性磷酸酶,用骨钙素衡量成骨细胞的分化状态,用Actin-ring 染色观察破骨细胞形态变化,用图像分析仪分析体外骨吸收陷窝面积,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察OCL的形成,用RT-PCR法检测和破骨样细胞形成有关的分子机制.发现:淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对大鼠成骨细胞的增生有明显的刺激作用,并能够促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶, 但对成骨细胞晚期分化指标骨钙素无显著作用.同时,使破骨细胞Actin-ring回缩,从而使骨吸收陷窝面积减少.此外,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物通过影响成骨细胞中RANKL和OPG的表达而达到抑制破骨样细胞形成.以上结果说明,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物一方面抑制破骨样细胞形成和成熟的破骨细胞对骨基质的吸收,另一方面还能够通过刺激骨形成来调控骨代谢,其中刺激骨形成的效果较强.由此推断淫羊藿黄酮苷可能是淫羊藿抗骨质疏松作用的主要有效成分.
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改进的EBSS培养液与常用商品化试剂对鼠胚体外发育的影响
目的:利用改进后的EBSS(SIGMA)培养液和常用商品化培养液G1/G2(Vitrolife),Quinn's1026/Quinn's1029(SAGE)对昆明系小白鼠胚胎进行体外培养,以对新建IVF实验室进行评估。方法对简单培养液EBSS进行改进,分别制得卵裂培养液和囊胚培养液以构成序贯培养系统。卵裂培养液:EBSS中加入适当浓度的丙酮酸钠,乳酸钠以及5种非必须氨基酸;囊胚培养液:EBSS中加入适当浓度的5种非必须氨基酸及6种必须氨基酸。将胚胎分成4组,A组使用EBSS(Earle's Bal-anced Salt Solution)培养液,B组使用改进后的EBSS培养液,C组使用G1和G2培养液,D组使用Quinn's1026和Quinn's1029培养液,四种培养液均添加10%人血清白蛋白。结果72 h后,鼠胚总体囊胚形成率为70.57%(614/870),其中A组的囊胚形成率为26.21%(27/103),B组为72.22%(143/198),C组为73.81%(155/210),D组为80.50%(289/359)B,C,D 3组的囊胚形成率显著高于A组(P<0.001)。结论通过鼠胚体外培养,对新建试管婴儿实验室进行了较好的质控检测,经改进后的EBSS培养液在鼠胚囊胚形成率上与商品化序贯培养液G1/G2,Quinn's1026/Quinn's1029相近,均远高于简单培养液EBSS,但前者成本较之常用商品化试剂有大幅度的降低,说明改进的EBSS培养液在鼠胚体外培养上具有较好的实用价值。
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诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的 研究和评价转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞(SMCs)向软骨细胞分化的影响.方法 从大白兔的髂骨骨髓液中提取和分离骨髓基质干细胞,将无血清Mc5A培养液分为四组,含有5 ng的TGF-β1和100 ng的IGF-I组为A组、含有TGF-β1为B组、含有IGF-1组为C组及无血清Mc5A培养液为D组作为空白对照,先进行单层细胞培养的10天,再置于松质骨基质明胶(BMG)支架中继续培养10天,然后进行甲苯胺蓝染色、蛋白多糖含量的测定.结果 第5、10天后,各组单层细胞培养的细胞个数均有显著性差异,即A组>B组>C组>D组;第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量检测结果,即A组>C组>B组>D组(P<0.05).结论 早期应用TGF-β1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力,而IGF-I可提高TGF-β1对骨髓基质干细胞软骨分化作用.
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去甲万古霉素致严重剥脱性皮炎一例
去甲万古霉素是由东方链霉素培养液中所得的一种无定性糖肽类抗生素,其抗菌谱广、作用强,可谓抗菌素类之王牌药物,临床应用中未见有引起剥脱性皮炎的报道.近期我们应用去甲万古霉素致全身剥脱性皮炎一例,现报道如下: