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介绍一种制备培养细胞电镜标本的方法
在培养细胞电镜标本制备方法中,对样品的收集往往要求生活状态较好的贴壁细胞(悬浮培养细胞例外).但对目前研究较多的凋亡细胞来讲,若按常规方法收集制备样品,往往不能达到满意的结果.因为凋亡细胞或凋亡小体主要漂浮在培养液中,如果在收集样品过程中将培养液全部弃掉,仅仅保留贴壁细胞,那么在电镜下凋亡细胞的数量将大打折扣或很难找到理想的凋亡细胞亦或不能观察到凋亡细胞的一系列变化过程.因此,我们在实际工作中针对不同的实验情况和要求对常规的培养细胞电镜制备方法进行了改进,均获得了较为满意的结果.
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双向流动片层透析式空间细胞培养及其地基模拟装置
在微重力环境下的细胞培养方法不同于传统的地面上的细胞培养技术.它必须解决以下问题:(1)微重力环境下,重力对流趋于消失.单靠扩散难以维持细胞正常生长所必须的化学微环境的稳态.故必须从传统的静态培养发展为动态(流动式)培养;(2)培养液流动引起的应力必然会影响细胞的结构和功能;(3)微重力环境下不允许气/液自由界面存在,故气体交换和供应和传统培养方法截然不同.为了适应微重力下细胞培养的要求,我们设计了双向流动片层透析式空间细胞培养装置.
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介绍一种制备血浆鱼精蛋白副凝固试验阳性标本的方法
血浆鱼精蛋白副凝固试验(简称3P试验)因方法简便、灵敏度较高、费用低,仍是目前临床诊断DIC常用的确诊试验之一.但3P试验阳性标本不易得到,给医学检验专业学生实验教学带来一定的困难,并在临床应用中缺少阳性对照.作者曾用金黄色葡萄球菌的肉汤培养液制备3P试验阳性标本取得较满意的效果(具体参见<中华医学检验杂志>1991;14∶100),但操作相对较繁锁.本文报道一种更为简便的制备方法.
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超速玻璃化法冻存小鼠肝细胞球形聚集体的初步研究
现有的肝细胞冻存法是将分散的肝细胞用于冻存.从肝组织消化分离的肝细胞,其细胞完整性和功能都会受影响.有报道用肝细胞球形聚集体培养,效果优于用分散肝细胞培养[1].玻璃化法冻存细胞组织,由于不形成冰晶,对细胞损伤较小,已成功用于冻存胚胎、卵巢、胎肝组织和脑细胞[2-5].本研究将小鼠肝细胞预培养成球形聚集肝细胞,用改进的超速玻璃化法冻存,解冻后与含胶原培养液混合、培养,通过检测培养上清液中ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)浓度判断肝细胞受损漏出情况,检测白蛋白( Alb)浓度判断肝细胞合成功能.对照组用单层贴壁培养分散肝细胞做同样冻存和检测.
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中空纤维反应器管外腔胶原凝胶混合肝细胞培养
早期的生物人工肝是将培养液混悬肝细胞灌入中空纤维反应器管外腔,一般效果不好.后改将培养液混悬肝细胞或微载体肝细胞灌入中空纤维管内腔或先用胶原液在中空纤维管内腔壁涂层,再将培养液混悬肝细胞灌入中空纤维管内腔;使患者血(血浆)流过管外腔,通过中空纤维膜上的微孔,管内腔和管外腔发生物质交换,使血中的毒物被肝细胞解毒[1-2].近年来Excorp Medical公司推出将胶原凝胶混合肝细胞灌注中空纤维管外腔的生物人工肝反应器,效果尚待验证[3].本研究将胶原凝胶混合肝细胞灌注中空纤维反应器管外腔培养(凝胶混合法),与将培养液混悬肝细胞灌注腔壁涂有胶原层的中空纤维管外腔培养(单层凝胶法)对照,验证肝细胞功能.
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旋毛虫培养液对人白血病细胞K562凋亡和坏死的影响
在对旋毛虫的研究过程中,有研究者曾对旋毛虫与肿瘤的关系进行了探讨.
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促疟原虫配子发育因素的体外观察
宿主血液中的疟原虫配子体是通过蚊体内发育再传染.蚊虫吸血数秒钟后,被摄人蚊胃内的配子体即开始向配子发育.体外实验证实,在室温20℃条件下,增高培养液的pH可促使配子形成[1].体内实验表明,在埃及伊蚊(Aedes aegypti)的胃和头部及斯氏按蚊(Anopheles stephensi)的头部和肛部提取物中存在促配子形成的物质[2-4],Billker等[5]在蚊的头部发现能促疟原虫配子体在蚊体内形成配子的物质--黄尿烯酸.
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补肾益精方对ODF、OPG、RANK mRNA表达水平的影响
以往研究表明,补肾益精方可抑制体外培养破骨细胞的骨吸收功能[1],本研究进一步探讨这一作用可能的分子机制.一、材料和方法1.主要试剂与仪器:Medium 199培养基、胎牛血清、TRIzol、逆转录酶为Gibco BRL产品,Taq DNA聚合酶为PE公司产品.9600型PCR扩增仪,MTDS-B显微影像分析系统.2.含药血清和象牙薄片制备:方法同文献[1].3.细胞分离与培养:取4周龄C57BL/6J小鼠,18只,雌雄各半.细胞分离与培养方法同文献[1].于第4天换为含不同组别含药血清的培养液,每组4孔,24h后终止培养.
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二甲双胍改善糖脂毒性致胰岛β细胞胰岛素抵抗作用的初探
一、二甲双胍对胰岛β细胞糖脂毒性的保护作用研究目的:通过观察二甲双胍(MF)对慢性暴露于高糖及高游离脂肪酸(FFA)中的离体大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌功能的影响,以验证MF对β细胞糖脂毒性的保护作用.对象与方法:将Wistar雄性大鼠离体胰岛细胞暴露于含有5.5~16.7 mmol/L葡萄糖及0.5 mmol/L软脂酸的培养液中培养48 h后,再加入不同浓度MF(0、0.5、2.5、5μg/ml)培养24h.
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细胞周期素E在幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠胃癌前状态中的表达
哺乳动物的细胞周期受控于一组称之为细胞周期素(cyclin)的蛋白质,而细胞周期失控是许多肿瘤发生、发展的基础,故cyclin与肿瘤的关系受到广泛关注.本研究,旨在探讨cyclin E在幽门螺杆菌(Hp)长期感染蒙古沙土鼠,致胃癌前病变发展过程中的表达及其意义.材料和方法一、材料沙土鼠,SPF级,4周龄,雄性,体重20~30 g.Hp使用标准菌株NCTC 11637,培养液采用空肠弯曲菌培养液的琼脂基础,添加5%的冻融羊血.在一定湿度、微需氧、37℃条件下孵育72 h进行增菌培养,Hp的鉴定包括菌落形态、尿素酶实验、涂片观察等.
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幽门螺杆菌诱导大鼠胃黏膜细胞分泌胃蛋白酶原
本研究应用新的大鼠胃黏膜细胞系(OUMS-37),研究幽门螺杆菌(Hp)提取物对胃蛋白酶原合成与分泌的影响[1].材料与方法一、Hp菌株及细胞提取物Hp菌株Sydney SS-1由日本冈山大学医学部细菌科横田副教授惠赠,Hela细胞空泡试验证实为VacA阳性.Hp在布氏培养液中增菌培养7 d收获,以6 000 r/min离心30min,弃上清,用20 ml冰PBS(pH7.4)洗涤细菌2次,将其置超声粉碎仪中破碎细菌20 min,4℃ 20 000 r/min离心20min,收集上清,0.4 μm滤纸过滤,-70℃冰冻.
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人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件
目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件.方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用.结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液.可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体(T cell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性.这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上.结论:可溶性anti-TCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好.
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人牙周膜干细胞条件培养液对舌癌Tca-8113细胞增殖及迁移能力的影响
目的:探讨人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)条件培养液(conditioned medium,CM)对舌癌Tca-8113细胞增殖及迁移能力的影响.方法:从健康成人牙周膜组织中分离并培养hPDLSCs.第3代hPDLSCs融合达80%时更换为无血清培养液,继续培养24 h后收集上清液,即获得hPDLSCs-CM.舌癌Tca-8113细胞分别在常规培养液(对照组)和含50% hPDLSCs-CM的培养液(CM处理组)中培养,然后采用MTT法检测细胞增殖活性,FCM法分析细胞周期变化,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化.结果:分离培养的hPDLSCs表达干细胞标志蛋白Stro-1和CD146,且具有明显的克隆形成及多向分化能力.将hPDLSCs-CM与舌癌Tca-8113细胞共培养至第3、5和7天时,CM处理组的细胞增殖活性均高于未处理对照组(P<0.01).培养至第4天时,CM处理组的细胞增殖指数(proliferative index,PI)较对照组明显升高(P<0.01).培养24 h后,CM处理组穿膜细胞数明显高于对照组(P<0.01).结论:hPDLSCs-CM可以促进舌癌Tca-8113细胞增殖,并增强该细胞的迁移能力.
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长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性
目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性.方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力.FCM法检测CD44~+/CD24~(-/low)细胞的含量.结果: 接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞.随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化.CD44~+/CD24~(-/low)细胞仅存在于基底样乳腺癌标本.来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异.结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变.
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匹多莫德联合布地奈德治疗MPP的疗效及对Th1/Th2平衡的影响
支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)是儿童时期急性重症之一.近年来研究表明,Th1/Th2细胞平衡紊乱是其重要的发病机制[1-2].本文采用匹多莫德联合布地奈德治疗MPP患儿,通过观察MPP患儿治疗前后外周抗凝血分离单个核细胞(PBMC)培养液中自介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)的含量变化,探讨匹多莫德联合布地奈德治疗MPP的临床疗效,及其对MPP患儿Th1/Th2平衡的影响,现报道如下.
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血管内皮抑素的临床应用进展(文献综述)
内皮抑素(endostatin,ES)是一种能特异性作用于内皮细胞,并能抑制血管生成的内源性血管生长调节因子.自1997年美国哈佛大学O'Reilly从鼠血管内皮细胞瘤株的培养液中分离出内皮抑素,经纯化和氨基酸测序后,发现它是胶原蛋白的ⅩⅤⅢ的一个片段,并证实它是一种潜在的内源性抗血管新生因子.经多个实验证实,ES能有效抑制多达60种以上不同种类肿瘤,并能调节12%的人类基因组表达,从而下调病理性血管发生而没有毒副作用,也无耐药性,是迄今发现的好的血管生成抑制因子之一[1].现将ES在临床上的研究和应用进展简要综述如下.
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新型免疫抑制剂--咪唑立宾
咪唑立宾(mizoribine,MZR)是1971年从霉菌E-upenicillum brefeldianum的培养液中分离而得的一种咪唑类核苷,其化学名为5-羟基-1-β-D-呋喃糖基-1H咪唑-4-羧酰胺,为白色或微带黄色的结晶粉末,无臭,在水或二甲亚砜中易溶,在甲醇、乙醇或氯仿中几乎不溶,分子式为C9H13N3O6,熔点约为198℃.
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草履虫培养液的筛选研究
草履虫(Paramecium)是单细胞原生动物典型的代表〔1〕。它具有抗污性高,净化污水,吞噬细菌和单细胞藻类的习性。在水污染的生物净化和防治中起到一定的作用,还可以在水污染治理和毒性检测中作为指示生物;另外,它与同为膜口目的四膜虫(Tetrahymena pyriformis)同样具有刺泡结构,已有研究报告利用这种遇外界刺激发射的特性运用于对水环境污染进行生物监测〔1~4〕。可见,原生物动作为独特的单细胞生物在环保研究中的作用已日渐受到重视;同时,作为单细胞动物细胞——草履虫还是生物学家研究动物细胞生理、生化和遗传学的模型动物,已成为教学及科研必备的单细胞实验动物〔2〕。至今草履虫传统的繁殖培养液配方仍以稻秸杆为材料,有人试图用其他禾本科植物秸杆为材料进行筛选,但其效果并不令人满意,我们试图从城市日常生活中常见的瓜果皮为材料进行筛选〔5〕。其目的是为培养研究草履虫提供一个更好更方便又经济的选择,同时,又为城市生活有机垃圾的生物治理变废为宝提供一种新的途径。
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骨髓间充质干细胞培养液对牙周组织再生的影响
目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)培养液对牙周组织再生的影响.方法 原代培养SD大鼠BMMSCs,取细胞培养液(conditioned media,CM).采用ELISA检测培养液里与成骨相关的IGF-1、VEGF、PDGF-BB、BMP-2的含量;利用BMMSCs培养液对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)进行培养后,RT-PCR法检测PDLCs矿化相关基因核心结合因子2(Runx2)、骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)的变化;Western印迹法检测Runx2、OPN、OCN蛋白的表达变化.将BMMSCs培养液及种子细胞分别制备成凝胶,在大鼠左下第一磨牙颊侧及根分叉处制备牙周缺损,放入制备好的凝胶.分别在术后第4、8周,处死大鼠,取出左侧下颌骨,进行Micro-CT扫描及组织学分析.结果 BMMSCs培养液中含有大量IGF-1和VEGF;RT-PCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞OPN、OCN、Runx2的表达,且利用BMMSCs培养液培养的PDLCs表达高于常规培养的PDLCs(P<0.05).8周时,BMMSCs培养液凝胶组相比于对照组生成了更多的牙槽骨(P<0.05).结论 同等条件下,BMMSCs培养液比种子细胞能更好地修复缺失的牙周组织.
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低氧暴露下血管内皮生长因子高表达与血脑屏障通透性改变的关系
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是1989年Ferrara等在牛垂体星形胶质细胞体外培养液中首先分离并纯化出的一种糖蛋白.由于它具有很强的促血管内皮细胞分裂增殖能力,并能增强毛细血管的通透性,故又称为血管通透因子(vascular permeability factor,VPF).多