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荧光原位杂交技术在尿路上皮肿瘤诊断中的作用
荧光原位杂交(FISH)技术是一种使用荧光标记的DNA探针评估细胞基因改变的技术,其依据为癌症是一种基因缺陷性疾病,大多数癌症伴有染色体的异常改变,采用FISH技术可检测到这些异常改变.目前美国食品药品管理局(FDA)已批准的通过尿液诊断膀胱癌的技术中,包括BTA、NMP22、ImmunoCyt以及FISH等,灵敏度和特异性高的是FISH.
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针刺对重症肌无力患者血浆雌二醇和睾酮的影响
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是目前比较公认的神经系统自身免疫性疾病.致敏抗原为烟碱型乙酰胆碱受体(n-AChR),约80%左右的患者可检测到抗n-AChR抗体[1].MG患者多见于育龄期女性,约占1/2~2/3[2],女性发生MG危象者亦比男性多,提示女性激素在MG发病机制中有一定作用.我们应用放射免疫法检测针刺治疗MG前后血浆睾酮(Te)和雌二醇(E2)含量的变化,旨在探讨针刺治疗MG获效的机制.
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肿瘤标记的临床应用及思考
肿瘤标记(tumor marker,TM)又称为肿瘤标记物,由于对来自外文的专业名词翻译规范化要求,所以统称为肿瘤标记.TM是指存在于血液、体液和组织中可检测到的与肿瘤的发生与发展有关的物质,其或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织,或在肿瘤组织中的含量极大地超过正常组织,其存在或量变可提示肿瘤的性质,从而了解肿瘤的发生、细胞分化及功能,在肿瘤的诊断、分类、预后判断及指导临床治疗中起辅助作用.TM通常包括蛋白质(上皮黏蛋白、胚胎蛋白、糖蛋白等)、激素、酶、糖决定簇、病毒和肿瘤相关基因等.
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Bobs技术在产前诊断中的初步应用
染色体病会造成严重的出生缺陷。染色体核型分析作为产前诊断的金标准,是有效的出生缺陷干预措施,可检测出染色体数目异常以及大片段的缺失、重复等结构异常,但不能诊断片段大小<5000000 bp并且具有显著临床意义的微缺失综合征。基于液相芯片技术的开发的细菌人工染色体标记-磁珠鉴别/分离技术(BACs-on-BeadsTM,Bobs;Perkin Elmer公司)是一种新的用于快速产前诊断的检测方法,目标疾病是5种非整倍体异常(13、18、21、X和Y染色体)和9种常见的微缺失综合征,包括 Wolf-Hirschhorn、Cri du Chat、Williams-Beuren、Langer-Giedion、Prader-Willi/Angelman、Miller-Dieker、Smith-Magenis 和DiGeorge 综合征。本研究通过回顾性检测10份阳性标本,并对401例孕妇的样本进行前瞻性研究,评估Bobs技术在产前诊断中的应用。
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荧光原位杂交技术在产前诊断及遗传咨询中的应用
荧光原位杂交(FISH)是近年发展起来的一种分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的全新技术,其在基础生物学领域和临床研究中得到广泛应用.FISH作为一种非放射原性杂交法,它利用特殊的荧光素标记DNA探针,与DNA进行杂交,经免疫荧光显色,可检测细胞内DNA或RNA的存在与否,这既可显示染色体中期分裂相,又能显示未培养的间期核.
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原代猪肝细胞PERV检测及其意义
目的:探讨猪肝细胞内源性逆转录病毒(PERV)检测方法及意义.方法:采用体外二步灌流法获取猪肝细胞,使用特异性引物对其前病毒序列进行观察;以未逆转录PCR为对照,采用RT-PCR方法检测原代猪肝细胞PERV携带及释放情况,并用套式RT-PCR对扩增产物进行鉴定.结果:原代猪肝细胞基因组中可检测到PERV前病毒序列,肝细胞中亦可检测到特异性的PERV RNA序列.在缺乏有丝分裂原刺激的情况下,猪肝细胞普通培养的不同时段均可检测到病毒释放,并可持续至细胞死亡.结论:中国实验小型猪肝细胞携带PERV病毒序列,猪肝细胞普通培养时可释放该病毒,其感染性及生物安全性尚需进一步研究.
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丁酸钠联合穿琥宁对人大肠癌细胞HCT-8增生的影响
目的:探讨丁酸钠、穿琥宁体外联合应用对结肠癌细胞的影响.方法:应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、电镜研究丁酸钠、穿琥宁对HCT-8的增生抑制及诱导凋亡作用.结果:丁酸钠对HCT-8细胞有明显抑制作用,48 h后各组抑制率分别为15.7%,20.3%,33.3%(P<0.01),呈现浓度、时间依赖性.电镜下观察可见成熟分化改变及凋亡细胞,流式细胞仪可检测到亚G1峰,细胞周期分析发现其主要阻滞在G1期.穿琥宁与其联合应用,混合组1在24 h,48h凋亡率为23.5%,48.6%,混合组2在2 4h,48 h凋亡率为30.8%,54.2%(P<0.01).结论:丁酸钠抑制HCT-8细胞增生,并诱导其成熟分化、凋亡.穿琥宁与其合用使凋亡率增加.
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HGF和FGF4体外诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞分化的研究
目的:探讨在HGF、FGF4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制.方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD 117-细胞,分别用含有FGF4,HGF,HGF+FGF4或不加生长因子的DMEM培养基进行培养,相应地分为A,B,C,D四组.分别于新分离时和培养7 d,14 d,21 d,28 d时留细胞.备作免疫细胞化学检测AFP,CK18,白蛋白,PAS染色检测糖原等肝系细胞的特征型标志,RT-PCR检测C、D组细胞c-met(HGF受体)和FGFR2(FGF4R)mRNA表达情况.结果:A,B,C三组加生长因子诱导培养后的细胞均可检测到肝系细胞的标志,D组细胞不加生长因子培养后没有检测到肝系细胞的标志.c-met和FGFR2mRNA在新分离的和D组培养7 d,14 d时的细胞均有较弱的表达,而在C组细胞诱导培养7 d,14 d时表达升高.结论:HGF和FGF4可诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞样细胞分化.生长因子诱导分化的作用可能通过与其受体之间的正反馈调节.
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1型糖尿病与免疫耐受
1型糖尿病是一种自身免疫性疾病,免疫系统选择性攻击胰腺中的胰岛β细胞,导致β细胞的损害以及胰岛素的绝对缺乏.虽然临床上1型糖尿病的发病是一个突发事件,但根据对1型糖尿病患者发病的跟踪研究发现,在出现高血糖的几年前就可检测到患者体内存在抗胰岛细胞自身抗体,通常在发病的1 a前,葡萄糖耐量试验也会发生恶化.因此,通过应用1型糖尿病动物模型,研究明显糖尿病出现前机体的异常变化,有助于深入了解糖尿病发病机制,为预防或治疗1型糖尿病提供科学依据.本文主要以NOD小鼠为例,总结了机体免疫耐受在维持自身稳定、调节免疫平衡中的机制和NOD小鼠免疫耐受的缺陷及其对糖尿病发病的影响.
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胃癌组织gp96表达的临床意义
目的:探讨gp96在人胃癌组织及癌旁正常组织中的表达及其临床意义.方法:采用原位杂交技术和SABC免疫组化法,在核酸和蛋白水平检测胃癌组织(n=50)及癌旁正常组织(n=50)gp96的表达.结果:胃癌组织及癌旁正常组织均可检测到gp96的表达,胃癌组织gp96的表达均显著高于其癌旁正常组织(强阳性:18/50 vs 0/50,P<0.01).gp96的表达与组织学类型显著相关(r=0.387,P<0.05),不同分化程度的胃癌组织之间,gp96的表达存在显著差异(P<0.05);与肿瘤分期显著相关(r=0.203,P<0.05),临床Ⅲ,Ⅳ期显著高于Ⅰ,Ⅱ期(强阳性:13/50 vs 5/50,P<0.05);与淋巴结转移显著相关(r=0.391,P<0.05),有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(强阳性:14/50 vs 4/50,P<0.05);而gp96表达与性别、年龄及肿瘤部位无显著相关.结论:gp96的表达与胃癌的发生、发展密切相关,其表达水平可以作为判断胃癌预后的参考指标之一.
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全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定.方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"黏附-洗脱-扩增"的亲和筛选.将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性.结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体.结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
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奥沙利铂综合治疗胃癌的疗效及机制
目的:评价奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人胃癌的疗效,探讨其治疗胃癌的作用机制.方法:Ⅳ期胃癌患者22例接受包含L-OHP的联合化疗方案(L-OHP 85 mg/m2,静脉点滴,1 h,第1 d;四氢叶酸钙200 mg/m2,静脉点滴,1 h,第1-5 d;5-FU 300 mg/m2,静脉注射,第1-2 d,5-FU,持续静脉点滴,48 h;2 wk1疗程)4-6(平均4.6)个疗程.观察有效率,无进展生存时间(progression-free survival,PFS),总体生存时间及毒副作用.体外培养人中分化胃癌细胞株SGC-7901,应用MTT法检测L-OHP对细胞生长的抑制作用,并计算50%抑制浓度(IC50);将不同浓度梯度的L-OHP与细胞株作用后,应用流式细胞仪(ANEXIN-V标记)及TUNEL检测细胞凋亡情况.应用RT-PCR检测caspase-3m-RNA的表达.结果:有效(完全有效及部分有效)9例(40.9%).平均PFS4.2 mo,总体生存时间7.2 mo.蓄积性神经毒性(全部为Ⅰ-Ⅱ级),呕吐及腹泻(1例Ⅲ级腹泻),骨髓抑制发生率分别为93.5%,20%,32.9%.浓度为1 mmol/L的L-OHP与细胞株作用30 min,流式细胞仪即可检测出细胞凋亡水平升高,但无统计学差异(P>0.05),1 mmol/L作用2 d,流式细胞仪及TUNEL均可检测到细胞凋亡水平显著性升高(P<0.05).L-OHP作用后的细胞caspase-3 m-RNA表达升高,并与药物诱导的凋亡相关.结论:L-OHP治疗进展期胃癌安全有效.L-OHP在体外可明显抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长,诱导细胞caspase-3m-RNA表达及凋亡.
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多嘧啶序列结合蛋白与丙型肝炎病毒的关系
0 引言多嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract bindingprotein,PTB),在大多数哺乳动物细胞及人类原始肝细胞的胞核及胞质中均可检测到,其分子量约为57kD,故也有人称之为p57.PTB在稳态时定位于核内[1],且可通过能量依赖机制快速穿梭于细胞的胞质及胞核.
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定量聚合酶链反应技术研究进展
自Mullis等于1985年创建了聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术以来,该技术经过十几年的发展与完善,已在基础研究领域得到了广泛的应用,并在临床疾病的诊断方面进行了一些探索性研究。根据PCR扩增策略和检测产物手段的不同,可分为定性PCR(qualitative PCR,以下简称PCR)和定量PCR(quantitative PCR,Q-PCR)。 一、PCR在结核分支杆菌检测中的研究现状 1989年Hance等[1]将PCR用于结核分支杆菌的检测,1990年我国引进该项技术,从而在我国开辟了以PCR为代表的分子生物学技术检测结核分支杆菌阶段。该方法的敏感性和特异性与扩增系统中的引物、模板DNA的提取及纯化等多种因素有关,其中很大程度上决定于扩增的引物,因此,检测结核分支杆菌时各家采用过多种不同引物。PCR具有很高的敏感性,一般可检测出1~100 fg纯化结核分支杆菌DNA[2,3],相当于1~20个结核分支杆菌。随着研究技术的不断深入,为了进一步提高PCR的敏感性,有些学者对PCR技术进行了发展,如将Southern blot与PCR结合起来的PCR-Southern blot、巢式PCR(nested PCR)技术等。
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实验室新技术用于耐药结核病诊断流程的建议
2007年以前,全球使用固体培养和药敏试验技术(传统药敏试验)进行实验室MTB耐药诊断,传统药敏试验可检测一线抗结核药物(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素)和二线抗结核药物(卡那霉素、氧氟沙星等)的耐药情况,结果较可靠,价格便宜,但所需时间较长,约2~3个月[1-2]。为了提高耐药诊断速度,世界卫生组织2007—2010年陆续推荐了多种新技术,如液体培养和药敏试验技术(液体药敏试验)、分子生物学快速耐药检测技术[包括线性探针( LPA)、自动化Gene-Xpert等技术]。液体药敏试验将耐药诊断时间缩短至1个月,可检测一线抗结核药物和二线抗结核药物的耐药情况,结果较可靠,但价格较贵,且容易污染[3]。线性探针技术检测耐药需6 h,适用于涂阳痰标本和培养菌株,适合地市及以上级别实验室使用,但价格较贵,仅能用于异烟肼和利福平的耐药性检测[2,4]。自动化Gene-Xpert 技术检测耐药需90 min,操作简便,可在县级实验室使用,适用于涂阳和涂阴痰标本(目前国内注册仅对涂阳肺结核进行耐药检测),但价格较贵,仅能检测利福平耐药[5-6]。总之,不同的耐药检测技术各有优缺点,且不能相互替代。
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老年原发性肺癌患者血浆中血管内皮生长因子测定的临床意义
免疫组化研究表明,肺癌组织中存在血管内皮细胞生长因子(VEGF)的过度表达,VEGF能促进血管的生长及增加血管的通透性,在癌细胞培养液中可检测到VEGF的存在[1].我们于1999年2月至2002年6月测定老年人各期原发性肺癌患者血浆中VEGF水平及其治疗前后的变化,并与老年健康人及肺良性疾病患者进行比较,旨在探讨其在老年人原发性肺癌诊断、监测预后中的意义.
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CYP2D6基因B突变与肌萎缩侧索硬化遗传易感性的关系
肌萎缩侧索硬化(ALS)是一种选择性侵犯上、下运动神经元的中枢神经系统变性病.15%~20%的家族性ALS及2%~7%的散发性ALS患者可检测到铜/锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变[1].我们对汉族人细胞色素P450 2D6(CYP2D6)基因B突变与散发性ALS发病的关系进行了初步研究.
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早期抗逆转录病毒治疗改善无症状HIV-1感染者预后
一、概述抗逆转录病毒治疗(ART)的启动时机是治疗HIV-1(若无特殊说明,以下HIV指HIV-1)感染的核心问题之一,长期处于争论状态.1987年引入耐受性较差的齐多夫定后,相继出现了支持早期与推迟使用齐多夫定的临床试验[1-2].1996年出现的联合抗逆转录病毒治疗(cART)方案使得人们再次重视早期治疗,1997年国际AIDS协会指南推荐所有可检测到血浆HIV RNA的无症状感染者接受治疗[3].
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自身免疫性肝炎的诊断和治疗研究进展
自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一组不明原因、伴血清自身抗体、高丙种球蛋白血症和肝脏慢性炎症及纤维化组织学改变的反应性肝病。临床上以血清氨基转移酶增高、高免疫球蛋白(IgG)血症、血清中可检测到非器官特异性和肝脏特异性的自身抗体为特征。此病女性多见,任何年龄均可发病。典型病理组织学特征为界面性肝炎,如未给予有效治疗,可逐渐发展为肝硬化,终导致肝功能失代偿引起死亡或需要进行肝脏移植[1],本文就自身免疫性肝炎的临床特征与治疗进展论述如下。
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瞬时弹性超声预测肝切除安全性的临床研究
肝切除是治疗肝脏外科疾病的重要方法,而术后肝功能衰竭则是其严重的并发症,也是导致患者死亡的重要原因[1]。术前肝脏储备功能的准确评估是决定手术安全的重要保障。常用的评估方法虽然各有优势,但仍存在较多不足。既往研究表明肝脏瞬时弹性超声( liver stiffness meas-urement,LSM)可检测肝脏的基础病变程度[2-3]。本研究探讨了LSM预测肝切除手术风险的价值,以提高肝切除手术的安全性。